hbeag是用什麼方法檢測

Ⅰ 檢測乙肝表面抗原的方法都有什麼具體一點點

去醫院化驗。有專門的一項叫乙肝抗體
然後抗原抗體都查了
僅僅抗體陽性不能確診乙肝
如果抗原抗體都陽的話才行

Ⅱ 如何檢測體內是否存在抗體拜託了各位 謝謝

1. HBsAg (乙肝表面抗原) 原理：採用ELISA 雙抗體夾心法。雙抗體夾心法用於檢測相對分子質量較大的蛋白質抗原。先將已知特異性抗體包被於固相載體上，加待測樣本，若 其中有相應的抗原，則抗原和抗體特異性結合洗板後加入酶標記特異性抗體，使在固相上形成包被抗原抗體復合物洗板:加酶底物及色原呈色。雙抗原夾心法則是利用包被抗原和標記抗原檢測樣本中的特異性抗體。抗原或抗 體水平與所測吸光度(A) 值呈正相關。 將純化的抗HBs包被固相載體，加入待測樣品，括其中含有HBsAg ，則與載體上的抗HBs 結合，再加入辣根過氧化物酶( HRP) 標記的抗HBs 抗體，加酶底物/色原顯色。顯色程度與 HBsAg 含量成正比。 2.HBsAb （乙肝表面抗體） 原理：採用ELISA 雙抗原夾心法。反應板上包被純化HBsAg ，待測樣品中抗HBs與之反應，再加HRP-HBsAg 形成夾心，加酶底物/色原悔液顯色。 3.HBeAg 和HbeAb 原理：檢測HBeAg 和抗HBe 分別用ELISA 雙抗體夾心法和Elisa競爭法。 4.HbcAb 原理：Elisa競爭法。用於檢測待檢樣本中未知抗原或抗體。測抗原時用已知抗體包被固相載體，然後同步加入含有待測抗原的樣本和酶標記抗原，使待測抗原與酶標記抗原競爭結合在固相載體上的抗體；洗板加酶底物及色原!讓包。待iYlIJ 悔液抗原量越多，則被結合的酶標記抗原量越少，呈色越淺。呈色深淺與待測抗原的量成反比。測未知抗體時用已知抗原包被固相載體，同步加入含有待測抗體的標本和酶標記特異抗體，二者競爭結合固相載體t 的抗原.待測抗體量越多，酶標記抗體與固相抗原結合的最就越少，呈色就越淺。待測抗體的水平與呈色程度成反比。

Ⅲ 臨床執業醫師備考知識：肝炎病毒

第一節 甲型肝炎病毒

一、生物學性狀

甲型肝炎病毒(HAV)屬於小RNA病毒科，嗜肝RNA病毒。直徑約為27nm，呈20面體立體對稱，無包膜。本病毒比腸道病毒更耐熱，60℃l小時不被滅活。病毒核酸為單正股RNA。HAV只有一個血清型。黑猩猩和狨猴對HAV敏感。HAV可在培養細胞上進行培養，但增殖非常緩慢，不引起細胞裂解，且病毒釋放亦十分緩慢。

二、致病性與免疫性

(一)傳染源與傳播途徑，HAV主要通過糞一口途徑傳播，傳染源多為患者。甲型肝炎的潛伏期為l5—50天，病毒常在患者轉氨酶升高前5—6天就存在於患者的血液和糞便中。發病後2周開始，糞便中不再排出病毒。HAV隨患者糞便排出體外，通過污染水源、食物、海產品、食具等傳播而造成散發流行或大流行。

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(二)致病機制與免疫HAV經口侵入人體，但如何經消化道後最終在肝細胞中增殖，則尚未闡明。由於病毒在組織培養細胞中增殖緩慢並不直接造成細胞損害，推測致病機制除病毒的直接作用外，機體的免疫應答可能在引起肝組織損害上起一定作用。

在甲型肝炎的顯性感染或隱性感染中，機體都可產生抗一HAV的IgM和IgG抗體。前者在急性期和恢復期早期出現，後者在恢復期後期出現，並可維持多年，對病毒的再感染有免疫力。甲型肝炎患者預後良好。不會轉變為慢性，亦無病毒攜帶者。

三、微生物學檢查和防治原則

一般不進行病原學檢查，但為與其他型肝炎鑒別，可檢測抗HAV IgM。流行病學調查特別是檢測群體中抗HAV陽性率，了解人群的免疫力，以預測發生甲型肝炎的可能性，則需檢測抗HAVIgG。

甲型肝炎的預防有滅活疫苗和減毒活疫苗。

第二節 乙型肝炎病毒

一、生物學性狀

(一)形態與結構乙型肝炎病毒(HBV)屬嗜肝DNA病毒科。完整的HBV顆粒首先由Dane在乙型肝炎病毒感染者的血清中發現，故稱為Dane顆粒。Dane顆粒呈球形，直徑為42nm，具有雙層衣殼。病毒的外衣殼，相當於一般病毒的包膜，HBV的表面抗原(HBsAg)即鑲嵌於包膜的脂質雙層中，內部為一電子密度較大的核心結構，呈20面體立體對稱，直徑約為27nm，其表面即為病毒的內衣殼，內衣殼蛋白也具有抗原性，為HBV的核心抗原(HBcAg)。其在酶或去垢劑作用後，暴露出具有不同抗原性的e抗原(HBeAg)。

HBeAg在體內可被分泌而存在於血清中，而HBcAg則僅存在於感染的'肝細胞核內，一般很少存在於血循環中。HBV核心結構的內部，含有病毒的DNA和DNA多聚酶。DNA為不完全環狀雙股，其中有一段為單股，單股區的長短在各病毒體可不等，但均不超過全長基因的一半。病毒DNA的長股為負股。而較短的一股為正股，病毒體具有特殊的DNA多聚酶，既有能以RNA為模板轉錄DNA的逆轉錄酶功能，又有合成DNA的功能。

(二)抗原組成

1.表面抗原(HBsAg) 在患者血清中HBsAg可以三種不同的形式存在：

(1)小球形顆粒：直徑約22nm，是最多見的形式，主要由HBsAg組成，一般很少有heSl或PreS2抗原。

(2)管形顆粒：直徑同小球形顆粒，長短不等，實際是一串聚合的小球型顆粒。

(3)Dane顆粒的表面，為外衣殼的成分。 HBsAg有四個基本亞型：adr，adw，ayr，ayw，各亞型均有共同抗原決定簇a，此外還有二組互相排斥的亞型抗原決定簇(d/y和w/r)。HBsAg亞型的分布，有明顯的地區差異並與種族有關。我國漢族以adr多見，少數民族多為ayw。

HBsAg大量存在於感染者血中，是檢查受HBV感染的主要標志。具有抗原性，可引起機體產生特異性有保護性的抗一HBs抗體，是制備疫苗的最主要成分。

2.核心抗原(HBcAg) 存在於Dane顆粒核心部位的表面，為內衣殼成分。因其外表為HBsAg所覆蓋，故不易在血循環中檢測到。 HBcAg抗原性強，能刺激機體產生抗HBc抗體。

HBcAg可在感染的肝細胞表面表達，是殺傷性T細胞識別並清除HBV感染細胞的靶抗原之一。 抗一HBc IsG在血清中持續時間較長，而抗HBc—IgM則常提示HBV處於復制狀態。

3.e抗原(HBeAg) 是由PreC及C基因編碼，整體轉錄及翻譯後成為e抗原(如僅由C基因轉錄及翻譯則為HBcAg)。為可溶性蛋白質，可自感染肝細胞游離存在於血清中。因HBeAg的消長與病毒體及DNA多聚酶的消長基本一致，故HBeAg可作為體內有HBV復制及血清具有強感染性的一個標志。

HBeAg可刺激機體產生抗一HBe抗體，此抗體對HBV感染有一定的保護作用。

(三)動物模型與細胞培養 黑猩猩是對HBV最敏感的動物。HBV尚不能在細胞培養中分離及培養，目前採用的細胞培養系統是病毒DNA轉染系統。

(四)抵抗力HBV對外界的抵抗力較強，不被70%乙醇滅活。高壓滅菌法或l00℃加熱l0分鍾等可滅活HBV。

二、致病性與免疫性

(一)傳染源HBV主要的傳染源是患者和無症狀的HBsAg攜帶者。

(二)傳播途徑

1。通過血液、血製品等傳播人對HBV極易感。極小量污染血液進入人體後，即可致感染。輸血、注射、外科及牙科手術、針刺，共用剃刀或牙刷，皮膚粘膜微小損傷，性行為等均可傳播。

2.母嬰傳播主要是圍生期感染，即分娩時嬰兒經產道通過嬰兒的微小傷口受母體的病毒感染所致。哺乳也被認為是傳播HBV的途徑，嬰兒在母體子宮內被感染，表現為出生時已為HBsAg陽性。

(三)致病性與免疫性乙型肝炎的臨床表現呈多樣性，有無症狀帶毒者、急性肝炎、慢性肝炎、重症肝炎等。病毒在肝細胞中增殖，為非殺細胞型病毒，對肝細胞無明顯損害作用，病毒感染引起的病理損害是致病的主要因素。

1.病毒致機體免疫應答低下HBV感染後誘生的干擾素低下，使靶細胞HLA—I類抗原表達低下導致細胞毒性T細胞(CTL)作用減弱。幼齡感染HBV後，因免疫系統發育尚未成熟，對病毒未能作為“非己”而產生免疫應答，對病毒形成免疫耐受，從而不出現或僅出現低度的抗病毒體液與細胞免疫。病毒亦可長期存在於體內。

2.病毒發生變異HBV的Pre C基因變異使不能翻譯出HBeAg，病毒可逃逸機體原已形成的對HBeAg的抗體與細胞免疫。

3.細胞介導的免疫病理損害HBV侵入肝細胞內增殖可使感染細胞膜表面表達HB-sAg，HBeAg或HBeAg，能為機體免疫系統所識別，引起一系列的免疫應答。病毒抗原致敏的T細胞對胞膜表面帶有病毒抗原的靶細胞可進行殺傷以清除病毒，同時也造成肝細胞的損傷。有人認為細胞免疫的應答與臨床過程的輕重及轉歸有密切關系。

如病毒感染波及的肝細胞數量不多，免疫應答處於正常范圍，特異性CTL可摧毀病毒感染的細胞，損傷細胞釋放的HBV則可被抗體中和而被清除。臨床表現為急性肝炎，並可以恢復而痊癒。相反，若受病毒感染的細胞為數眾多，機體的細胞免疫應答超過正常范圍，迅速引起大量細胞壞死，肝功能衰竭，可表現為重症肝炎。如機體免疫功能低下，病毒在感染細胞內復制，受到功能低下的CTL的部分殺傷作用，病毒可不斷釋放，又無有效的抗體中和病毒，病毒則持續存在並再感染其他肝細胞，構成慢性肝炎。慢性肝炎造成的肝病變又可促進成纖維細胞的增生，引起肝硬化。

4.免疫復合物引起的病理損傷在部分乙型肝炎患者中，可檢出HBsAg及抗一HBs的免疫復合物。免疫復合物可沉積於腎小球基底膜，關節滑液囊，激活補體，導致Ⅲ型變態反應。近年還發現由HBeAg與免疫球蛋白組成的免疫復合物引起膜性腎小球腎炎。免疫復合物大量沉積於肝內，可使肝毛細管栓塞，並可使腫瘤壞死因子(TNF)增多導致急性肝壞死，臨床表現為重症肝炎。

5.自身免疫反應所引起的病理損害HBV感染肝細胞後，還會引起肝細胞表面自身抗原發生變化，暴露出肝特異性脂蛋白抗原(LSP)，誘導機體產生對肝細胞成分的自身免疫反應。

此外，HBV可能與原發性肝細胞癌有關。

三、微生物學檢查和防治原則

目前主要用血清學方法檢測HBsAg，抗一HBs，HBeAg，抗一HBe及抗一HBc。

(一)乙型肝炎抗原抗體檢測結果的分析見表5—28一l。

HBsAg陽性見於急性肝炎，慢性肝炎或無症狀攜帶者。急性肝炎如恢復後，一般在1—4個月HBsAg即消失。若持續6個月以上則認為已向慢性肝炎轉化。無症狀HBsAg攜帶者是指肝功能正常者，攜帶者可長期為HBsAg陽性。

抗一HBs的出現常顯示患者已恢復或痊癒。抗HBs——保護性抗體

HBeAg陽性提示體內HBV在復制，如轉為陰性，表示病毒停止復制。抗一HBe陽性，表示機體已獲得一定的免疫力。

抗一HBc IgM陽性，提示仍有病毒復制。

(二)血清HBV DNA檢測

(三)預防除加強對供血員篩選外，注射乙型肝炎疫苗是最有效的預防乙肝的方法，主要用於新生兒，可有效阻斷母嬰傳播。此外還可用於高危人群，如血液透析和腎移植單位以及傳染病院等單位人員。第一代疫苗是人血漿來源的HBsAg乙肝疫苗，第二代為基因工程HBsAg疫苗。用含有高效價抗一HBs制備的人免疫球蛋白(HBIg)可用於緊急預防，一般在一周內注射有預防效果。亦可與乙肝疫苗聯合應用，以獲得被動一主動免疫效應。

第三節 丙型肝炎病毒

丙型肝炎病毒(HCV)過去被稱為腸道外傳播的非甲非乙型肝炎病毒。1991年被歸屬於黃病毒科。

一、生物學性狀

HCV大小為30—60nm，有包膜。HCV基因組為一單正鏈RNA，長度約9.5kb，由9個基因區組成，自5’端開始，依次為5’端非編碼區，核心衣殼蛋白區(c區)，包膜蛋白.l區(E1)，包膜蛋白一2區/非結構蛋白一l區(E2/NSl)，NS2區，NS3區，Ns4區，NS5區和3’端非編碼區。5’端非編碼區核苷酸保守性強，在各株病毒問很少變異，可用於診斷。

其中E1，E2/NSl區易發生變異，致包膜蛋白的抗原性變異而不被原有的抗包膜抗體所識別，病毒得以持續存在。這可能是HCV引起的丙型肝炎易發展為慢性肝炎的原因之一。

根據世界各地分離的HCV毒株，可將HCV分為6種基因型，我國以Ⅱ型為主。目前認為1型HCV復制產生的病毒量多，較難治療。

NS3，NS4及NS5區基因可分別表達蛋白質，其中NS4表達的蛋白(C100—3)和NS3表達的C33c可作為抗原用於檢測患者血清。

二、致病性和免疫性

經輸血、血製品或污染注射器而傳播。大多數丙型肝炎患者不出現症狀，發病時已成慢性過程。慢性肝炎的表現亦輕重不一，約20%可發展為肝硬化。並可導致肝癌，我國肝癌患者中約10%有抗一HCV抗體。

丙型肝炎患者恢復後，僅有低度免疫力，且免疫力不牢固。感染HCV後，機體可依次出現抗一C33c，抗一C及抗一Cl00—3，可用於診斷;還可用套式RT—PCR檢測HCV RNA。

第四節 丁型肝炎病毒

丁型肝炎病毒(HDV)為球形，直徑35—37nm，核心為單負鏈RNA基因組，僅有l.7kb長，是已知動物病毒中最小的基因組。病毒不能獨立進行復制，必須隨HBV或其他嗜肝DNA病毒共同增殖，獲得包膜。HDV RNA可編碼抗原HDA9，可刺激機體產生抗體。

HDV感染常可導致乙肝病毒感染者的症狀加重與惡化，故在重症肝炎時應注意是否有HDV的重疊感染。此外還有聯合感染，即同時發生急性乙肝和急性丁肝。

HDV與HBV有相同的傳播途徑。預防乙肝的措施同樣適用於丁肝。，由於HDV是缺陷病毒，如能抑制乙肝病毒，則HDV亦不能復制。

第四節 戊型肝炎病毒

戊型肝炎病毒(HEV)是經消化道傳播的一種肝炎病毒。病毒體直徑27—34nm，無包膜。核酸單正鏈RNA，屬杯狀病毒科，迄今，尚未能在細胞培養中使HEV復制。目前HEV有2個基因型，緬甸毒株與墨西哥毒株。

HEV感染後，可表現臨床型和亞臨床型，成人中多見臨床型。潛伏期為2-9周，多數患者於發病後6周即好轉並痊癒，不發展為慢性肝炎。少數患者可表現為重症肝炎，甚至可導致死亡。孕婦感染HEV，發病率高。病情嚴重，尤其以懷孕6-9個月最為嚴重，常發生流產或死亡。孕婦的病死率可達l0%-20%。

目前，HEV臨床診斷常用方法是檢查血清中的抗一HEV IgM或IgG。急性肝炎患者在排除甲、乙、丙之後，如抗一HEV IgM或IgG陽性均可診斷為HEV急性感染。

Ⅳ 請教請教

HBV是乙型肝炎病毒的英文縮寫。HBV的抗原組成包括HBsAg,HBcAg,HBeAg等。
HBsAg可刺激機體產生相應抗體，是一種中和抗體，對機體有保護作用。血清中出現HBsAg是HBV感染的標志，反之，血清中出現抗HBs則可視為乙肝恢復的標志。
關於HBcAg，未檢測出抗HBc-IgM也可排除急性乙肝。
HBeAg又稱e抗原，是病毒在體內復制及血清有強傳染性的一個指標。抗HBe對乙肝感染有一定保護作用，但是進來發現HBV有突變，突變株不能產生HBeAg，也就無法被抗HBe清除，因此對抗HBe陽性患者，應同時檢測其血清中的病毒DNA，以全面了解病情作出判斷。

由於HBsAg僅存在於肝細胞內，外周血將HBV大球型顆粒脫去外衣殼才能查到，方法煩瑣，故一般不查HBsAg。目前臨床上主要用血清學方法檢測HBsAg，抗HBs，抗HBe和抗HBc，俗稱「兩對半」。
HBsAg HBeAg 抗HBc陽性，效價高——可診斷為乙肝
血清型中出現HBsAg HBeAg 抗HBc-IgM陽性——表示具有傳染性
HBsAg HBeAg 抗HBc-IgM高效價陽性持續六個月以上——應考慮乙肝由急性轉入慢性

除乙肝抗原抗體系統檢測外，還可進行血清HBV DNA檢測和血清DNA多聚酶檢測。血清HBV DNA和血清DNA多聚酶有平行關系，是病毒復制的指標。近年血清DNA多聚酶檢測已被血清HBV DNA檢測所取代。

解答有一些專業術語，不過大體上就是這樣，希望能幫到你啦~

Ⅳ HBV抗原、抗體檢測五項指標分別是() ()() () (),常用的檢測方法是()

乙肝五項分別為HBsAg，HBsAb，HBeAg，HBeAb，HBcAb。常用檢測方法ELISA。其次為化學發光法

Ⅵ 簡述分別用ELISA的哪種方法檢測乙肝兩對半

表面抗原和E抗原採用的是雙抗體夾心法。

表面抗體是雙抗原夾心法。

E抗體和核心抗體是競爭抑製法或間接法。

乙肝兩對半：檢測血清中有無乙肝病毒5種抗原、抗體的簡稱，也叫乙肝五項，共為兩對半,即乙肝病毒表面抗原(HBsAg,舊稱澳抗)、表面抗體(抗-HBs或HBsAb)為一對、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、e抗體(抗-HBe或HBeAb)為一對,另一項只檢測乙肝病毒核心抗體(抗-HBc或HBcAb)。

(6)hbeag是用什麼方法檢測擴展閱讀：

在乙肝兩對半定性檢查中，項目順序如下：乙肝病毒表面抗原HBsAg、乙肝病毒表面抗體HBsAb、乙肝病毒e抗原HBeAg、乙肝病毒e抗體HBeAb、乙肝病毒核心抗體HBcAb，「-」表示陰性，「+」表示陽性。

在乙肝兩對半定量檢查中，乙肝兩對半正常值為：

①HBsAg：<0.5ng/ml(毫微克/毫升)

②HBsAb：<=10MIU/ml

③HBeAg<=0.5PEI U/ml

④HBeAb：當HBeAb定量<=0.2PEI U/ml

⑤HBcAb：<=0.9PEI U/ml。

Ⅶ 酶聯免疫法的檢測方法

雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下：
一、將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質。
二、加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。
三、加酶標抗體：使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。
四、加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。
根據同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。
在臨床檢驗中，此法適用於檢驗各種蛋白質等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用於包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清，包被和酶標用的抗體最好分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用於包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應，作一步法檢測。
在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物。類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象，此時反應後顯色的吸光值（位於抗原過剩帶上）與標准曲線（位於抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同，如按常法測讀，所得結果將低於實際的含量，這種現象被稱為鉤狀效應（hook effect），因為標准曲線到達高峰後呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時，反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應注意可測范圍的最高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。
假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，顯然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性，這也是用單抗作夾心法應注意的問題。
雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子（RF）的干擾。RF是一種自身抗體，多為IgM型，能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF，它可充當抗原成份，同時與固相抗體和酶標抗體結合，表現出假陽性反應。採用F（ab'）或Fab片段作酶結合物的試劑，由於去除了Fc段，從而可消除RF的干擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為這類試劑的一項考核指標（參見6.2）。
雙抗體夾心法適用於測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用於測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。
雙抗原夾心法測抗體
反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋，可直接用於測定，因此其敏感度相對高於間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常採用本法。本法關鍵在於酶標抗原的制備，應根據抗原結構的不同，尋找合適的標記方法。 在雙抗體夾心法測定抗原時，如應用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步並作一步。這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應時間，如應用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應用使測定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法測定中，應注意鉤狀效應（hookeffect），類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象。當標本中待測抗原濃度相當高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物，所得結果將低於實際含量。鉤狀效應嚴重時甚至可出現假陰性結果。 間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：
⑴將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質。
⑵加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌後，固相載體上只留下特異性抗體。其他抗體及血清中的雜質由於不能與固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去。
⑶加酶標抗抗體：與固相復合物中的抗體結合，從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌後，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。
⑷加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。
本法主要用於對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應抗體的方法。
間接法成功的關鍵在於抗原的純度。雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結果，但應盡可能予以純化，以提高試驗的特異性。特別應注意除去能與一般健康人血清發生反應的雜質，例如以E.Coli為工程酶的重組抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能與受過E.Coli感染者血清中的抗E.Coli抗體發生反應。抗原中也不能含有與酶標抗人Ig反應的物質，例如來自人血漿或人體組織的抗原，如不將其中的Ig去除，試驗中也發生假陽性反應。另外如抗原中含有無關蛋白，也會因競爭吸附而影響包被效果。
間接法中另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性抗體。病人血清中受檢的特異性IgG只佔總IgG中的一小部分。IgG的吸附性很強，非特異IgG可直接吸附到固相載體上，有時也可吸附到包被抗原的表面。因此在間接法中，抗原包被後一般用無關蛋白質（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封閉（blocking）固相上的空餘間隙。另外，在檢測過程中標本須先行稀釋（1:40~1:200），以避免過高的陰性本底影響結果的判斷。 競爭法可用於測定抗原，也可用於測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，因此結合於固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下：
⑴將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌。
⑵待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應。如受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結合。如受檢標本中含有抗原，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結合，競爭性地佔去了酶標抗原與固相載體結合的機會，使酶標抗原與固相載體的結合量減少。參考管中只加酶標抗原，保溫後，酶標抗原與固相抗體的結合可達最充分的量。洗滌。
⑶加底物顯色：參考管中由於結合的酶標抗原最多，故顏色最深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡，表示標本中抗原含量越多。一般情況，是通過方波伏安法，檢測培養體系的峰電流，通過峰電流與抗原抗體的線性關系來最終確定體系的最終檢測目標的濃度。
當抗原材料中的干擾物質不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多，結合在固相上的酶標抗體愈少，因此陽性反應呈色淺於陰性反應。如抗原為高純度的，可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質，直接包被不易成功，可採用捕獲包被法，即先包被與固相抗原相應的抗體，然後加入抗原，形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質，然後再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應。競爭法測抗體有多種模式，可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合，抗HBc ELISA一般採用此法。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合，洗滌後再加入酶標抗體，與結合在固相上的抗原反應。抗HBe的檢測一般採用此法。 血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，後者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗體多用捕獲法，先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG後再測定特異性IgM。操作步驟如下：
⑴將抗人IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人IgM。洗滌。
⑵加入稀釋的血清標本：保溫反應後血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質成分。
⑶加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結合。洗滌。
⑷加入針對特異性的酶標抗體：使之與結合在固相上的抗原反應結合。洗滌。
⑸加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標本中的特異性IgM抗體存在，是為陽性反應。 親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結合。維生素H，分子量244.31，存在於蛋黃中。用化學方法製成的衍生物，生物素－羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產物。親和素與生物素的結合，雖不屬免疫反應，但特異性強，親和力大，兩者一經結合就極為穩定。由於1個親和素分子有4個生物素分子的結合位置，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復合體。因此把親和素和生物素與ELISA偶聯起來，就可大提高ELISA的敏感度。
親和素－生物素系統在ELISA中的應用有多種形式，可用於間接包被，亦可用於終反應放大。可以在固相上先預包被親和素，原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結合，通過親和素－生物素反應而使生物素化的抗體或抗在相化。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量，而且使其結合點充分暴露。另外，在常規ELISA中的酶標抗體也可用生物素化的抗體替代，然後連接親和素－酶結合物，以放大反應信號。 在臨床檢驗中一般採用商品試劑盒進行測定。ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：
⑴已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；⑵酶標記的抗原或抗體（結合物）；
⑶酶的底物；
⑷陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標准品和控制血清（定量測定中）；
⑸酶聯物（結合物）及標本的稀釋液；
⑹洗滌液；
⑺酶反應終止液。

Ⅷ HBeAg是什麼有何臨床意義

HBeAg是乙型肝炎病毒e抗原，乙型肝炎病毒核心部分的可溶性蛋白，一般認為，HBeAg是病毒復制和具體傳染性的指標。在急性乙型肝炎發病早期HBeAg出現陽性後數日至2周，幾乎所有病人血清都可檢出HBeAg，為時短暫，呈一過性，此時傳染性最強，如HBeAg持續陽性，提示肝炎慢性化。HBeAg檢測的意義如下。
（1）
HBeAg陽性是乙型肝炎病毒在體內復制的標志。
（2）
HBeAg的水平（定量）有助於判斷HBeAg攜帶者傳染性的強弱。
（3）
有助於判斷急性乙型肝炎的預後，在急性乙型肝炎病毒感染後，患者血清中HBeAg消失，抗-HBe的產生常提示病情好轉；若HBeAg持續陽性大於8~10周，提示有轉為慢性乙型肝炎的可能性。
（4）部分乙型肝炎患者，HBV可產生變異，HBeAg自動陰轉，但並不意味病毒復制停止和病情好轉。http://gzyg120.com

Ⅸ 如何檢測體內是否存在抗體

用人們俗稱的「兩對半」檢查， HBsAg (表面抗原)，HBsAb （表面抗體），HBeAg （e抗原），HbeAb（e抗體） ，HbcAb （核心抗原）。這種檢查方法較准確，誤診的機率很小，要是沒記錯的話HBsAg ，HbcAb ，HbeAb這三種指標都為陽性就是「大三陽」了，有較強的傳染性，其他指標陽性有可能是「小三陽」或是有抗體，感染後又好了的標志。

Ⅹ 乙肝抗原抗體檢測實驗的主要步驟

① 取出包被好的板，加入待測血清，再加入酶標記抗體，置濕合37℃30-45min
② 取出以洗滌劑洗滌3次，每次3-5min
③ 加入顯色液，置於37℃保溫箱15-30min