A. 測亞硝酸鹽含量操作
GB5009.33—2010 分光光度法
1、原理
亞硝酸鹽採用鹽酸萘乙二胺法測定測定。
試樣經沉澱蛋白質、除去脂肪後，在弱酸條件下亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮化後，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色染料，外標法測得亞硝酸鹽含量。
2、試劑和材料
除非另有規定，本方法所用試劑均為分析純。水為GB/T 6682 規定的二級水或去離子水。
2.1 亞鐵氰化鉀（K4Fe(CN)6·3H2O）
2.2 乙酸鋅（Zn(CH3COO)2·2H2O）
2.3 冰醋酸（CH3COOH）
2.4 硼酸鈉（Na2B4O7·10H2O）
2.5 對氨基苯磺酸(C6H7NO3S）
2.6鹽酸萘乙二胺(C12H14N2·2HCl）
2.7亞硝酸鈉（NaNO2）
2.8硝酸鈉（NaNO3）
2.9鋅皮或鋅棒。
2.10硫酸鎘。
2.11亞鐵氰化鉀溶液(106g/L)：
稱取106.0g 亞鐵氰化鉀（2.1），用水溶解，並稀釋至1000mL。
2.12乙酸鋅溶液(220g/L)：稱取220.0g乙酸鋅（2.2），先加30 mL 冰醋酸（2.3）溶解，用水稀釋至1000mL。
2.13飽和硼砂溶液(50g/L)：稱取5.0g硼酸鈉（2.4），溶於100 mL 熱水中，冷卻後備用。
2.14對氨基苯磺酸溶液（4 g/L） ：稱取 0.4g對氨基苯磺酸（2.5），溶於100mL20%
（V/V）鹽酸中，置棕色瓶中混勻，避光保存。
2.15鹽酸萘乙二胺溶液（2 g/L）：稱取0.2 g 鹽酸萘乙二胺（2.6），溶於100mL 水中,
混勻後，置棕色瓶中，避光保存。
2.16亞硝酸鈉標准溶液（200 μg/mL）：准確稱取0.1000g於110℃～120℃乾燥恆重的亞硝酸鈉，加水溶解移入500 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。
2.17亞硝酸鈉標准使用液（5.0 μg/mL）：臨用前，吸取亞硝酸鈉標准溶液5.00mL，置於 200mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度。
2.17硝酸鈉標准溶液（200 μg/mL，以亞硝酸鈉計）：准確稱取0.1232g 於110 ℃～120
℃乾燥恆重的硝酸鈉，加水溶解，移於入500mL 容量瓶中，並稀釋至刻度。
2.18硝酸鈉標准使用液（5 μg/mL）：臨用時吸取硝酸鈉標准溶液2.50mL，置於100mL
容量瓶中，加水稀釋至刻度。
3、儀器和設備
3.1 天平：感量為0.1mg 和1mg。
3.2組織搗碎機。
3.3超聲波清洗器。
3.4恆溫乾燥箱。
3.5分光光度計。
4、測定
4.1試樣的預處理
新鮮蔬菜、水果：將試樣用去離子水洗凈，晾乾後，取可食部切碎混勻。將切碎的樣品用四分法取適量，用食物粉碎機製成勻漿備用。如需加水應記錄加水量。
4.2提取
稱取5g（精確至0.01g）製成勻漿的試樣（如制備過程中加水，應按加水量折算），置於
50 mL燒杯中，加12.5 mL 飽和硼砂溶液，攪拌均勻，以 70 ℃左右的水約300mL 將試樣洗入500 mL容量瓶中，於沸水浴中加熱15min，取出置冷水浴中冷卻，並放置至室溫。
4.3提取液凈化
在振盪上述提取液時加入5mL 亞鐵氰化鉀溶液, 搖勻, 再加入5 mL 乙酸鋅溶液，以沉澱蛋白質。加水至刻度, 搖勻, 放置30 min, 除去上層脂肪, 上清液用濾紙過濾, 棄去初濾液30mL, 濾液備用。
4.4亞硝酸鹽的測定
吸取40.0mL 上述濾液於50mL帶塞比色管中，另吸取0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL 亞硝酸鈉標准使用液（相當於0.0 μg、1.0 μg、2.0 μg、3.0 μg、4.0 μg、5.0 μg、7.5 μg、10.0μg、12.5 μg亞硝酸鈉），分別置於50mL 帶塞比色管中。於標准管與試樣管中分別加入2mL 對氨基苯磺酸溶液，混勻，靜置3min～5min 後各加入1mL鹽酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混勻，靜置15min，用2cm 比色杯，以零管調節零點，於波長538nm處測吸光度，繪制標准曲線比較。同時做試劑空白。
5、分析結果的表述
5.1亞硝酸鹽含量計算
亞硝酸鹽（以亞硝酸鈉計）的含量按式（3）進行計算
式中：
X1——試樣中亞硝酸鈉的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
A1——測定用樣液中亞硝酸鈉的質量，單位為微克（μg）；
m——試樣質量，單位為克（g）；
V1——測定用樣液體積，單位為毫升（mL）；
V0 ——試樣處理液總體積，單位為毫升（mL）。
以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留兩位有效數字。
6、精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%
B. 誰知道亞硝酸鹽怎麼檢測越簡單越好
亞硝酸鹽與對氨基苯磺醯胺起重氮化作用，
再與鹽酸N-(1-萘基)-乙烯二胺發生偶合反應，
生成紫紅色的偶氮染料.
C. 蝦苗養殖亞硝酸鹽檢測方法
當水中的亞硝酸鹽濃度積累到0.1毫克/升後，屬於超標。亞硝酸鹽將對水體中養殖的魚、蝦產生危害。其作用機理主要是通過魚蝦的呼吸作用，由鰓絲進入血液，魚、蝦紅細胞數量和血紅蛋白數量逐漸減少，血液載氧能力逐漸減低，出現組織缺氧。此時魚、蝦攝食量降低，鰓組織出現病變，呼吸困難、躁動不安或反應遲鈍，從而導致魚蝦缺氧，甚至窒息死亡。亞硝酸鹽還可與仲胺類反應生成致癌性的亞硝酸胺類物質，pH值低時有利於亞硝酸胺形成。很多池塘出現魚蝦厭食現象，亞硝酸鹽過高就是主要原因之一。
亞硝酸鹽是氨轉化為硝酸鹽過程中的中間產物，在養殖水體中由於大量的投餌而留下的殘餌、水體中水生動物的大量排泄物的累積和定期使用的消毒葯劑，把有害的和有益的細菌通通殺滅，氧氣的供應不足，造成大量積累的氮素硝化過程受阻，形成養殖時水中氨氮和亞硝酸氮含量高，但由於氨氮的轉化速度較快，使得亞硝酸氮的問題最為突出。 硫化氫在缺氧條件下，由殘餌或糞便中的含硫有機物經厭氧細菌分解而產生。硫化氫可與水體底泥中的金屬鹽結合形成金屬硫化物，致使池底變黑。
D. 怎麼檢測食品中的亞硝酸鹽呢
可以把產品送到當地的食品葯品檢驗所或者是當地的第三方檢測機構進行產品的檢驗。
食品葯品檢驗所職責：
1、主要負責食品、保健食品、化妝品、葯品、醫療器械檢驗。
2、生態環境監測、檢驗檢測、評估。
3、固體廢物和危險廢物鑒別、檢驗檢測；環境監測儀器研發。
4、清潔生產審核；司法檢驗；應急檢驗。
5、相關能力范圍內的檢驗檢測業務、標准制定、技術服務、咨詢、培訓及協辦培訓；完成上級交辦的其他工作。
(4)亞硝酸鹽檢測儀器使用方法擴展閱讀：
亞硝酸鹽的危害：
1、嬰兒高鐵血紅蛋白症：
過量的硝酸鹽攝入能誘導嬰兒高鐵血紅蛋白症，由於人體內大量的亞硝酸鹽與血液中的血紅蛋白結合，使高鐵血紅蛋白含量上升，因高鐵血紅蛋白不能與氧結合，這時人缺氧，臨床表現為口唇、指甲發紺，皮膚出現紫斑等缺氧症狀，可導致死亡。
2、嬰兒先天畸形：
亞硝酸鹽能透過胎盤進入胎兒體內，6個月有內的嬰兒對硝酸鹽類特別敏感，對胎兒有致畸作用。
3、甲狀腺腫：
有研究認為高硝酸鹽攝入能減少人體對碘的消化吸收，從而導致甲狀腺腫，但硝酸鹽是否是人體甲狀腺腫的直接原因，還有待進一步考證。
4、癌症：
使用亞硝酸發色時，亞硝酸鹽與肉中的胺反應，生成亞硝基化合物，或在為腸道中的酸性環境下轉化為亞硝胺，這些亞硝基化合物均是致癌因子。
E. 亞硝酸鹽檢測方法是什麼
亞硝酸鹽的檢測方法有使用亞硝酸鹽快速檢測管、檢測硝酸鹽試紙條法、光度法、示波極譜法、熒光分析法、離子色譜法、毛細血管離子電泳法、液相色譜法。
亞硝酸鹽是一類無機化合物的總稱。主要指亞硝酸鈉，亞硝酸鈉為白色至淡黃色粉末或顆粒狀，味微咸，易溶於水
F. 魚缸氨,氮,亞硝酸鹽測試劑使用方法
魚缸氨氮測試劑使用方法如下：
1、將待測水樣清洗試杯，然後取5毫升水樣。
2、滴入1號試劑3滴，搖勻。
3、滴入2號試劑7滴，搖勻。
4、滴入3號試劑3滴，搖勻。
5、將水樣與比色卡對比，確定數值。
亞硝酸鹽測試劑使用方法如下：
1、將待測水樣清洗試杯，然後取5毫升水樣。
2、滴入1號試劑5滴，搖勻。
3、滴入2號試劑5滴，搖勻。
4、靜置5分鍾後與比色卡對比，確定數值。
G. 怎麼檢測食品中的亞硝酸鹽呢
由亞硝酸鹽引起食物中毒的機率較高。食入0.3 ～ 0.5 克的亞硝酸鹽即可引起中毒甚至死亡。亞硝酸鹽在胃部可與胺產生作用，生成亞硝胺。亞硝胺具有強烈的致癌作用，主要導致食管癌、胃癌、肝癌和大腸癌等。因此，亞硝酸鹽的測定含量是食品安全檢測中非常重要的項目。
亞硝酸鹽檢測試紙
亞硝酸鹽檢測試紙適用於食品中半定量的亞硝酸鹽檢測。食品中的亞硝酸鹽與試紙上的葯劑發生顯色反應，可根據試紙的顏色變化檢測出食品中亞硝酸鹽的含量。
亞硝酸鹽快速檢測管
食品中的亞硝酸鹽與試劑反應生成紫紅色特殊物質，通過與比色卡對比，可判定樣品中亞硝酸鹽是否超標，用於食品中亞硝酸鹽的快速檢測。
ST-1F/NO2亞硝酸鹽檢測儀
ST-1F/NO2亞硝酸鹽檢測儀，可用於快速檢測食品中的亞硝酸鹽，配合專用試劑直接進行定量檢測。此外還有ZYD-F亞硝酸鹽檢測儀，ZYD-F食品安全快速檢測儀系列，ST-1/NO2N亞硝酸鹽氮檢測儀(適用於水質檢測)，液態奶中亞硝酸鹽速測盒，ZYD-N03農產品三合一（農殘、亞硝酸鹽、重金屬鉛），SMART系列多功能食品安全檢測儀等均可檢測。
H. 如何使用紫外分光光度計檢測亞硝酸鹽濃度
實驗方法
顯色試劑的制備：取酒石酸 89g，鹽酸萘乙二胺 1g，對氨基苯磺酸
10g，研細，混勻，製作成 40mg 每粒，即為顯色試劑，保存於棕色廣口瓶
中放暗處。
亞硝酸鹽貯備溶液:取 0.02g 乾燥的亞硝酸鈉溶於大約 10ml 蒸餾
水中 , 向蒸餾水中加入一粒氫氧化鈉防止亞硝酸產生， 再加入 l0ml
氯仿用來抑制細菌的生長。 最後用蒸餾水定容至 1L。 該溶液貯於冰箱
內備用。
亞硝酸鹽工作溶液:(0.2mg/l) 取 1ml 硝酸鹽貯備液置於容量瓶中，
並用蒸餾水稀釋至 100ml,該溶液貯於冰箱內備用。
比色卡的製作:向 25ml 的具塞比色管中加入分別體積 10ml 的濃
度分別為 0.00、0.02、0.12、0.20、0.80、1.00、1.60mg/l 的亞硝酸鹽工作溶
液, 再加入一粒顯色試劑，振搖至試劑全部溶解，10min 即顯色且其穩
定性至少為 5 小時，然後用相機拍下不同濃度值的顏色，製作比色卡。
I. 求助,泡菜中亞硝酸鹽檢測方法
（1）配置溶液對氨基苯磺酸溶液：稱取0.4克對氨基苯磺酸， 0.4克對氨基苯磺酸 對氨基苯磺酸溶液：稱取0.4克對氨基苯磺酸， 溶解於100ml體積分數為20 的鹽酸中， 100ml體積分數為20％ 溶解於100ml體積分數為20％的鹽酸中，避光保存 (4mg/ml)。 (4mg/ml)。 N-1－萘基乙二胺鹽酸鹽溶液：稱取0.2克N-1－ 0.2克 萘基乙二胺鹽酸鹽溶液：稱取0.2 萘基乙二胺鹽酸鹽，溶解於100ml的水中， 100ml的水中 萘基乙二胺鹽酸鹽，溶解於100ml的水中，避光保 存(2mg/ml) 。 亞硝酸鈉溶液：稱取0.10 0.10克於硅膠乾燥器中乾燥 亞硝酸鈉溶液：稱取0.10克於硅膠乾燥器中乾燥 24小時的亞硝酸鈉 用水溶解至500ml 再轉移5 小時的亞硝酸鈉， 500ml， 24小時的亞硝酸鈉，用水溶解至500ml，再轉移5 ml溶液至 溶液至200 ml容量瓶 定容至200ml 容量瓶， 200ml(5ug/ml) ml溶液至200 ml容量瓶，定容至200ml(5ug/ml) 提取劑：分別稱取50克氯化鎘、氯化鋇，溶解於 50克 提取劑：分別稱取50 氯化鎘、氯化鋇， 1000ml蒸餾水中，用鹽酸調節pH ml蒸餾水中 pH至 1000ml蒸餾水中，用鹽酸調節pH至1。 氫氧化鋁乳液和2 mol/l的氫氧化鈉溶液 氫氧化鋁乳液和2.5mol/l的氫氧化鈉溶液。 的氫氧化鈉溶液。 （2） 制備標准顯色液用移液管吸取0.20ml 0.40ml、0.60ml、 用移液管吸取0.20ml、0.40ml、0.60ml、 0.20ml、 0.80ml、1.00ml、1.50ml亞硝酸鈉溶液 亞硝酸鈉溶液， 0.80ml、1.00ml、1.50ml亞硝酸鈉溶液，分別 置於50ml比色管中，再取1 50ml比色管中 置於50ml比色管中，再取1支比色管作為空白 對照。並分別加入2.0ml對氨基苯磺酸溶液， 2.0ml對氨基苯磺酸溶液 對照。並分別加入2.0ml對氨基苯磺酸溶液， 混勻，靜置3 分鍾後，再分別加入1.0ml N混勻，靜置3～5分鍾後，再分別加入1.0ml N萘基乙二胺鹽酸鹽溶液，加蒸餾水至50ml 50ml， 1－萘基乙二胺鹽酸鹽溶液，加蒸餾水至50ml， 混勻，觀察亞硝酸鈉溶液顏色的剃度變化。 混勻，觀察亞硝酸鈉溶液顏色的剃度變化。 （2）配製標准顯色液的基本步驟是： 配製標准顯色液的基本步驟是： 吸取體積0.2 0.4、0.6、 0.2、 ①用 刻度移液管 吸取體積0.2、0.4、0.6、 0.8、1.0、1.5mL的 0.8、1.0、1.5mL的 亞硝酸鈉 溶液分別置於 比色管中，另取1支比色管為空白對照。 比色管中，另取1支比色管為空白對照。 空白對照 向各管加入2.0mL ②向各管加入2.0mL 對氨基苯磺酸溶液 混勻 靜置3 分鍾。 靜置3～5分鍾。 向各管加入1.0mL ③向各管加入1.0mL N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽 溶液。 溶液。 ④最後用 蒸餾水 定容到50mL。 定容到50mL。 50mL （3）制備樣品處理液的步驟是： ）制備樣品處理液的步驟是： （3）制備樣品處理液的步驟是： 制備樣品處理液的步驟是： kg泡菜 粉碎榨汁，過濾得約200mL 泡菜， ①稱取 0.4 kg泡菜，粉碎榨汁，過濾得約200mL 汁液。 汁液。 100mL汁液倒入500mL容量瓶 添加200mL 汁液倒入500mL容量瓶， ②取100mL汁液倒入500mL容量瓶，添加200mL 蒸 搖床振盪1h 再加40mL 1h， 餾水 和100mL 提取劑 ，搖床振盪1h，再加40mL 定容到500mL 500mL並 氫氧化鈉溶液 ，最後用 蒸餾水 定容到500mL並 獲得濾液。 立刻 過濾 獲得濾液。 將濾液60mL移入100mL容量瓶， 60mL移入100mL容量瓶 ③將濾液60mL移入100mL容量瓶，用 氫氧化鋁乳 吸附脫色）定容後過濾， 液（吸附脫色）定容後過濾，獲得 無色透明 的濾液。 的濾液。 制備的氫氧化鋁膠體能吸附泡菜汁液中的雜質， 制備的氫氧化鋁膠體能吸附泡菜汁液中的雜質， 使泡菜汁透明澄清，以便進行後續的顯色反應。 使泡菜汁透明澄清，以便進行後續的顯色反應。 （4）比色的步驟是： 比色的步驟是： ①將40mL透明澄清的濾液移入50mL比色管中，並 40mL透明澄清的濾液移入50mL比色管中， 透明澄清的濾液移入50mL比色管中 編號。 編號。 分別依次加入2.0mL 2.0mL的對氨基苯磺酸溶液 ②分別依次加入2.0mL的對氨基苯磺酸溶液 和 1.0mL的 1.0mL的 N-1-萘基乙二胺鹽酸溶液 ，並定容到 50mL，混勻靜置15min 15min。 50mL，混勻靜置15min。 觀察顏色變化， 比較， ③觀察顏色變化，並與 標准顯色液 比較，
J. 亞硝酸鹽怎麼檢測
1.食鹽中亞硝酸鹽的快速檢測及食鹽與亞硝酸鹽的快速鑒別：用袋內附帶小勺取食鹽1平勺，加入到檢測管中，加入蒸餾水或純凈水至1ml刻度處，蓋上蓋，將固體部分搖溶，10分鍾後與標准色板對比，該色板上的數值乘上10即為食鹽中亞硝酸鹽的含量mg/ kg，（國標規定食鹽（精鹽）中亞硝酸鹽的限量衛生標准應≤2 mg/kg）。當樣品出現血紅色且有沉澱產生或很快退色變成黃色時，可判定亞硝酸鹽含量相當高，或樣品本身就是亞硝酸鹽。
2.液體樣品檢測：直接取澄清液體樣品1ml加入到檢測管中，蓋上蓋，將試劑搖溶，10分鍾後與標准色板對比，找出與檢測管中溶液顏色相同的色階，該色階上的數值即為樣品中亞硝酸鹽（以NaNO2計）的含量mg/L。如果亞硝酸鹽的含量是以氮（N）為計算單位（如飲用水或水源水等），讀取色階上的數值後除以5即可。如果亞硝酸鹽的含量是以亞硝酸根（NO2-）為計算單位（如礦泉水、瓶裝飲用純凈水等），讀取色階上的數值後除以3.28即可。
3.乳濁樣品檢測：牛乳及豆槳可直接取1ml加入到檢測管中，，蓋上蓋，將試劑搖溶，10分鍾後與標准色板對比，找出與檢測管中溶液顏色相同的色階，該色階上的數值乘以2即為樣品中亞硝酸鹽的近似含量mg/L。
4.固體或半固體樣品檢測：取粉碎均勻的樣品1.0g或1.0ml至10ml比色管中，加蒸餾水或去離子水（純凈水）至刻度，充分震搖後放置，取上清液（或過濾或離心得到的上清液）1.0ml加入到檢測管中，蓋上蓋，將試劑搖溶，10分鍾後與標准色板對比，該色板上的數值乘上10即為樣品中亞硝酸鹽的含量mg/ kg，L（以NaNO2計）。如果測試結果超出色板上的最高值，可定量稀釋後測定，並在計算結果時乘上稀釋倍數（如從10ml比色管中取出1.0mL轉入另一支10ml比色管中，加水至刻度，從中取1.0mL加入到檢測管中測定，測試結果乘上100（倍稀釋）即為樣品中亞硝酸鹽的含量。
5注意事項
5.1亞硝酸鹽含量較高時，試劑顯紅色後不久會變為黃色，將黃色溶液再稀釋放入另一新的速測管中又會顯出紅色，由此區分是亞硝酸鹽還是食用鹽。
5.2當樣品反應後的顏色大於標准色板2.00mg/L色階時，應將樣品稀釋後再測，計算結果時乘上稀釋倍數。
5.3生活飲用水中常有亞硝酸鹽存在，不宜作為測定用稀釋液。
6試劑質量控制
6.1將0.025、0.1、0.25、0.5、1、2、5mg/LNaNO2標准溶液分別加入裝有固體格林試劑的速測管，蓋蓋將試劑搖溶，10min後與標准色板進行對比，其含量與色板上的色階標識含量應當相同或相近。
