『壹』 幾種特殊檢驗標本的採集方法
幾種特殊檢驗標本的採集方法
特殊檢驗標本有哪些你知道嗎?如何採集特殊檢驗標本你了解嗎?下面是我為大家帶來的關於幾種特殊檢驗標本的採集方法的知識,歡迎閱讀。
糖耐量試驗
1、病人准備:試驗前3日停用胰島素治療,每日食物中糖含量控制在250-300克,且維持正常活動,影響試驗的葯物(如:咖啡因、口服避孕葯、水楊酸鹽等)應在3日前停用,試驗前8-14小時不進食。
2、標本採集:臨床上常用方法是清晨抽空腹血2ml後,將75克無水葡萄糖溶於200-300ml水中,5分種內飲完。再於給糖後0.5、1、2、3小時各取血1次。
3、標本類型、標本量:乾燥管,采血2ml。
4、標本保存條件:2-8℃保存。
胰島素釋放試驗准備同上。
高危型人乳頭瘤病毒檢測
1、病人准備:三天內不能做陰道沖洗或使用陰道;24小時內不能有性生活;非月經期采樣檢查。
2、標本採集:
2.1放置陰道張開器,用專用取樣刷置於子宮頸口與粘膜交界處逆時針轉三圈,停留10秒鍾;
2.2將取樣刷放於專用試管中,在切口處折斷多餘部分;
2.3擰緊蓋子,送檢。
3、標本類型、標准量:宮頸刷出物,盡量避免保存液在取樣過程中散出,否則標本量不夠無法檢測。
4、標本保存:4℃可保存3周;-20℃可保存半年。
膜式液基超薄細胞學檢測(TCT)
1、病人准備:病人在檢查前三天停止性生活,檢查前停止用葯,並清洗外陰部。
2、標本採集:採集標本應用專用TCT采樣器,醫生用窺陰呂擴開陰道後先觀察,如果宮頸表面粘液、血液者,應先用棉簽輕輕擦凈粘液血液,再用TCT采樣器抵住宮頸表面轉動5-10次。然後取出采樣器迅速保存液瓶內均勻數次,再擰緊瓶蓋,在瓶身上寫上病人姓名貼上條形碼,填寫送檢單,送檢。
3、標本類型:宮頸脫落細胞
4、標本保存:裝有標本析保存液瓶在常溫下可保存1-3月,如冰箱內可保存時間更長。
5、注意事項:
5.1 用取樣器採集標本時,取樣器前面的長毛刷應插進頸管內以便採集頸管上皮及移行區上皮細胞,采樣時動作應輕柔,用力適中,太大容易損傷宮頸,太小不能採到足夠用於診斷上皮細胞。
5.2 送檢單及標本瓶上應寫清病人姓名、年齡,並貼上條形碼,送檢單應詳細填寫各項內容,特別是月經情況、用葯史及婦科治療情況以便正確診斷。
唐氏綜合征檢查
讓患者了解篩查意義和局限性,在知情同意書上簽名。並在申請單上務必填寫孕婦出生日期、體重、身高、吸煙狀況、用葯情況、准確孕周(B超或末次月經計)、糖尿病胰島素治療情況、單或雙胎、聯系電話,否則無法作出風險評估。孕早期唐氏綜合征在孕9-13+6周抽血,孕中期唐氏綜合征(AFP、Freeβ-HCG、uE3)在孕15~20周抽血。
染色體標本
1、用一次性注射器吸取肝素鈉抗凝劑將針筒充分潤濕後將肝素鈉全部排除,抽靜脈血3ml(如果用稀釋後的肝素抗凝,按1:9的比例抽血3ml)或用無菌肝素抗凝管直接采血3 ml。盡快輕輕搖勻。
2、將注射器帽蓋密封蓋上注射器後送檢,可使用原注射器包裝袋封裝好。
3、采血和運送過程嚴格無菌操作,嚴防溶血、凝血。
4、標本保存:存放於4~10℃冰箱中,可保留24小時,建議盡快送檢。
微量元素標本採集:
微量元素標本極易受到污染,為保證檢驗結果准確有效,采血人員在采血過程中應按以下要求操作。
1、采血時不要戴乳膠手套(對鋅、鈣有污染),可用薄膜手套,或不戴手套把手洗干凈。
2、采血時按純水、碘酒、酒精順序清潔取血區皮膚(碘酒中含較多微量元素,一定要用酒精將碘酒拭乾,或者不用碘酒消毒)
3.保證采血場所的清潔,不要使用風扇降溫。
性病培養全套標本採集:
1、支原體(MH+UU)培養+葯敏:
1.1病人在採集標本時至少停用抗生素一周以上。
1.2支原體對干、熱抵抗力差,標本採集後應盡快接種於運輸培養基中送檢。
1.3女性:用沾取少許無菌生理鹽水的棉拭子取宮頸管內口1-2CM處單層柱壯上皮細胞,取樣拭子不可碰陰道壁,將拭子按無菌手續支原體運輸培養基中送檢。
1.4男性:用特別細的無菌棉拭子沾取無菌鹽水少許深入尿道口內2-2.5cm處取分泌物,將拭子按無菌手續在運輸培養基中送檢。 檢驗地帶網
1.5前列腺液亦可用棉拭子盡量多的沾取於運輸培養基中。
1.6中段尿可直接送檢。
2.淋球菌培養+葯敏
2.1病人在採集標本做該項目時至少停用抗生素一周以上。
2.2男性尿道炎急性期患者可用沾有少許生理鹽水的.無菌拭子取膿性分泌物。
2.3非急性期病人,可用無菌細小棉拭子沾取少許生理鹽水輕輕插入尿道2-4cm處,轉動拭子,然後取出。
2.4女性患者先用無菌棉拭子擦去宮頸口分泌物,再用另一沾有生理鹽水的棉拭子插入宮頸口內1cm處旋轉,取出分泌物。
2.5採取標本以後馬上把棉拭子插入運輸培養基中送檢。
3.沙眼衣原體抗原檢測
3.1標本類型:男性主要有尿道拭子樣本,尿液樣本和直腸拭子樣本,眼部採集眼結膜樣本。女性主要有子宮拭子樣本,陰道拭子樣本及眼結膜樣本。嬰兒主要為眼部和肺部感染,可採集眼結膜和喉嚨拭子樣本。不可以使用血清或者血漿檢測。
3.2男性尿道:將拭子直接插入尿道內2-3cm,旋轉10秒後停留10-20秒後取出,放入采樣試管中。若采樣部位有異常分泌物,應先進行淋球菌檢查。
3.3女性宮頸:先用一支大棉拭子擦去宮頸表面黏液,將該棉拭子丟.用另一拭子插入同一位置,轉動10秒後停留10-20秒後放入采樣管內.注意整個采樣過程避免與陰道接觸!若樣本黏液過多或者帶血應該盡量重新取樣。
3.4尿液采樣要求:
1)患者在采樣前至少兩小時沒有排尿;
2)只採集最初的10-15ml尿液。
4.念珠菌培養+葯敏
4.1病人在採集樣本做該項目時至少停用葯物一周以上。
4.2樣本採集:懷疑陰道念珠菌感染需要做培養及做葯物敏感試驗的患者用沾有生理鹽水的棉拭子沾取大量豆腐渣樣白帶或可疑白正帶懸於無菌試管中送檢。
;『貳』 哪種細菌對熱抵抗力最強
哪種細菌對熱抵抗力最強
最小的微生物:原核微生物支原體是目前已知的生物界最小的、能獨立繁殖的原核微生物,支原體是目前已知的最小的原核微生物
抵抗力最強的微生物:細菌芽孢
目前世界上最大的微生物:它和其它的微生物不同點在於這種微生物並不需藉由顯微鏡便可直接經由肉眼察覺到它的存在.Fishelson、Montgomery及Myrberg三人於1985年所出版的刊物中,發現一種生長於紅海水域中的熱帶魚(名叫surgeonfish)之小腸管道中的微生物是當時世界上所發現最大的微生物.這種微生物的名子叫做Epulopiscium fishelsoni.它外形與與雪茄煙很像,其長度約為200~500μm ( 1 mm=103μm),最長可到達600μm.其體積大小約為大腸桿菌的100萬倍
『叄』 )影響微生物對熱抵抗力的因素
a 菌種不同,它們之間的細胞結構特性及細胞組成特性不同,對熱的抵抗力也不一樣,就一種微 生物來說,其個體的差異對熱的抵抗力也不同。不同特性的微生物抗熱力一般說來嗜熱菌大 於嗜溫菌和嗜冷菌,芽孢大於非芽孢菌,球菌大於非芽孢桿菌,革蘭氏陽性菌大於革蘭氏陰 性菌,黴菌大於酵母菌,黴菌和酵母的孢子大於其菌絲體。細菌的芽孢和黴菌的菌核抗熱力 特別大。 b 同一菌種處於不同生育階段對熱的抵抗力也不一樣,在同樣條件下,對數生長期的菌體抗熱 力較差,而穩定期的老細胞較大,老齡的細菌芽孢較幼齡的細菌芽孢抗熱力強。
c 微生物個體數量的影響,菌數越多,抗熱力越強,因微生物群集在一起時,受熱致死不是同一 時間而是有先有後,同時菌體能分泌一些保護作用的蛋白性物質,菌多分泌的保護性物質也多, 抗熱性也就增強 d 基質的影響因素
『肆』 食品安全檢測手段有哪些
食品安全事件的頻頻發生,致使食品安全檢測受到高度重視,國家投入了大量的財力用以購買檢測設備、食品安全檢測機構加班加點工作、科研人員努力研發新型檢測方法、人大代表也在兩會中對食品安全檢測提出了建議。這對我國食品的食品安全水平的提高起到了巨大的推動作用,但是在如此頻繁的檢測工作下我國食品安全問題仍然時有出現,究竟是哪些漏洞造成了這一現象的產生?
1.食品安全檢測機構相似度高、檢驗項目重復
我國現有食品安全檢測機構約1100家,這些檢測機構隸屬於質檢部門、衛生部門、農業部門、食品葯品監督管理部門、工商行政部門等。有些實驗室之間從實驗室設置、儀器種類甚至型號都相同,造成了很多檢測機構的檢驗項目一致,僅檢測的樣品不同。如農業部門的檢測樣品多為蔬菜、水果、穀物等初級農產品;質監部門的檢測樣品除原材料外,多為加工食品;FDA的檢測多為餐飲原料乳、肉、魚、蛋、蔬菜、穀物等,以及部分餐飲產品。但這些檢測項目都具有高度的相似性,都包括細菌和黴菌檢測、化學污染檢測,而且大部分檢測機構都能對細菌學檢驗、農葯殘留、重金屬、獸葯殘留等進行檢測,而不能對二惡英等物質進行檢測。
2.樣品檢測重復
檢測機構的重復設置、缺乏特色,必然帶來重復檢測,如牛奶的三聚氰胺檢測,原料乳由農業檢驗機構檢測一遍;到企業生產過程中,企業、質檢部門的檢測機構再檢測一遍、進入流通領域後工商部門又檢測一遍,其結果必然導致熱點問題、熱點食品每個部門都去檢測,而有些食品檢測項目則無人問津。致使檢驗人員天天滿負荷工作,沒有時間研究新的危害因素,從而導致剛解決完一個食品安全問題,又曝出一個新問題,檢測機構疲於應付一個接一個的檢測任務。
3.產品檢測效能低
由於食品的特殊性,特別是預包裝食品,檢測後就會失去食用價值,因此只能依靠抽樣檢測結果來推斷其總體水平。這樣就會存在抽樣誤差的問題,特別是目前我國的初級農產品,由於分散式種、養,一個樣品並不一定具備代表性。例如對豬肉中瘦肉精進行抽樣檢測,如果這些豬是從不同養殖戶那分散收購的,那麼抽樣檢測幾乎沒有意義,即使抽樣率為90%,合格率是100%,也不敢肯定剩下的10%一定沒有問題,這樣就會使檢測的效能大大降低。
造成這種局面的根本原因是我們在食品安全管理中過分強調且依賴了檢測的作用。即使檢測方法很准確、檢測樣本很有代表性,但這種對產品的檢測只能是事後發現問題食品,處理問題食品,卻無法改變食品的安全性。因此,必須將食品安全檢測延伸到食品生產企業,將檢測作為工具,用於判斷生產原材料、生產環境、生產工藝、包裝材料、從業人員等各個環節是否能夠保障食品的安全。這就好比一個糖尿病患者測定血糖水平,其目的不在於知曉自身的血糖高低,而在於判斷葯物、飲食、運動等各個環節是否能夠有效地控制血糖。
但是,就我國目前的食品生產企業而言,原來各工藝參數的制訂是為了滿足生產工藝的需要。後來很多食品生產企業雖然實行了HACCP體系,但在對關鍵控制點設定限值時,幾乎沒有一個企業是通過實驗獲得的數據,都是照抄其他企業或者引用法律條文。我們知道,即使是同一種食品、相同的加工工藝,如果原料產地不同,微生物種群不同,熱抵抗力也不同,加熱溫度和時間自然也應該有所區別;如果不同企業所處的地理環境不同,環境溫度不同,加熱時間又會不一樣;還有如果企業所用的設備不同,其加熱功率、熱傳導系數也會不同。因此,奧普斯儀器的小編覺得食品生產企業應該通過實驗獲得具體的工藝參數,並以此為參考制訂關鍵控制點的關鍵限值,才能真正發揮HACCP的食品安全控製作用。並且,相比小包裝的產品檢測,針對原材料的檢測頻次可以大大降低,檢測成本也會隨之降低。
再有,有些食品生產企業即使購買了相關檢測設備,也沒有專業的技術人員。因此如果我國的檢測機構能夠為食品生產企業承擔原材料的檢測任務,為食品生產企業把好原材料質量關;與食品生產企業共同承擔工藝改進方面的研究,制訂有效的工藝參數,可以將食品安全的管理前移,做到預防性管理,這樣才能真正提高我國食品加工行業的食品質量安全。
『伍』 熱體質與冷體質 是怎麼回事
體質有寒熱之分,如何區分人體屬熱證還是寒證,比較簡單的檢測方法是:
若感到喝熱水舒服,大體屬寒證,一般來說,虛寒體質的人基礎代謝率低,體內產熱量少,四肢即便在夏季也是冷的,他們面色較常人白,很少口渴,也不喜歡接觸涼的東西,包括進空調房間。
若感到喝涼水舒服,大體屬熱證,實熱體質的人代謝旺盛,產熱多,經常臉色紅赤,口渴舌燥,喜歡吃冷飲,易煩躁,常便秘。
認識自己的體質
人的體質有寒熱虛實之分,先認識自己的體質,再配合相應性質的食物,便能達到保養身體之效。
寒冷體質
N種方式 玩轉中國 吳階平為新興題詞
度假居所 浪漫體驗 洪水肆意 出行指南
「寒體質」的人,產熱能量低,所以手足較冰冷,臉色比一般人蒼白,容易出汗,大便稀,小便清白,膚色淡,口淡無味,喜歡喝熱飲,很少口渴,即使炎炎夏日,進入冷氣房也會覺得不適,需要喝杯熱茶或加件外套才會舒服。這類體質的人飲食上宜選擇偏溫熱者。
體質屬冷性,較怕冷,偏向貧血症,若食用寒涼性食物時,則將使其冷症更嚴重,由於四肢之冰冷感增加,促使末稍血液循環不良,造成即使在天暑之際,仍有手足麻痹之感覺,一到冬天則受寒冷環境之影響疼痛更劇。
溫熱體質
「熱體質」的人,產熱能量增加,身體較有熱感,臉色紅赤,容易口渴舌燥,喜歡喝冷飲,小便色黃赤而量少,進入冷氣房就倍感舒適。這類體質的人不太適宜服用溫熱性質的飲食,反而吃一些寒涼滋潤的食物,方能維持身體之平衡,感覺舒服,減少全身性的熱感。
體質虛與實
「體質虛」是生命活動力衰退所造成,人的精神比較萎靡。「體質實」則容易發熱、腹脹、煩躁、呼吸氣粗,容易便秘。
除了以上分類外,體質還有寒熱虛實交雜的可能,約略可分「寒與偏寒」,「熱與偏熱」,又或以一般來區分。
說到食物屬性,中醫有所謂「四氣」,這是指食物進入體內,會產生「寒、熱、溫、冷」的作用,如果不溫不熱,不寒也不涼,則歸屬於「平」性,而每種水果,都有其屬性,一般分為「溫熱」、「寒涼」、「甘平」三類。
溫熱類水果
所謂溫熱水果,指的是熱量密度高、糖分高的水果。吃下去後,肝臟的葡萄糖磷酸化的反應加速、肝糖合成增加、胰島素與升糠淚素比例上升、脂肪酸合成提高,三酸甘油脂合成也提高,肝臟充滿了待送出的油脂和糖,就容易上火,身體能量增加,就比較「熱」。
溫熱類水果有:棗、栗、桃、杏、龍眼、荔枝、櫻桃、石榴、菠蘿等。體質燥熱的人吃這類水果應適量。
寒涼類水果
體質虛寒的人對這類水果應慎用。寒涼類水果包括:柑、橘、菱、香蕉、雪梨、柿子、百合、西瓜等。
甘平類水果
甘平類水果有:葡萄、木瓜、橄欖、李子、梅、枇杷、山楂、蘋果等。這種水果適宜於各種體質的人。
『陸』 什麼事沙門氏菌
簡介
沙門氏菌病的病原體。屬腸桿菌科,革蘭氏陰性腸道桿菌。已發現的近一千種(或菌株)。按其抗原成分,可將沙門氏菌分為甲、乙、丙、丁、戊等基本菌組。其中與人體疾病有關的主要有甲組的副傷寒甲桿菌,乙組的副傷寒乙桿菌和鼠傷寒桿菌,丙組的副傷寒丙桿菌和豬霍亂桿菌,丁組的傷寒桿菌和腸炎桿菌等。除傷寒桿菌、副傷寒甲桿菌和副傷寒乙桿菌引起人類的疾病外,大多數僅能目引起家畜、鼠類和禽類等動物的疾病,但有時也可污染人類的食物而引起食物中毒。
名稱由來
1885年沙門氏等在霍亂流行時分離到豬霍亂沙門氏菌,故定名為沙門氏菌屬。沙門氏菌屬有的專對人類致病,有的只對動物致病,也有對人和動物都致病。沙門氏菌病是指由各種類型沙門氏菌所引起的對人類、家畜以及野生禽獸不同形式的總稱。感染沙門氏菌的人或帶菌者的糞便污染食品,可使人發生食物中毒。據統計在世界各國的種類細菌性食物中毒中,沙門氏菌引起的食物中毒常列榜首。中國內陸地區也以沙門氏菌為首位。
沙門氏菌病
鼠傷寒沙門氏菌
沙門氏菌病是公共衛生學上具有重要意義的人畜共患病之一,其病原沙門氏菌屬腸道細菌科,包括那些引起食物中毒,導致胃腸炎、傷寒和副傷寒的細菌。它們除可感染人外,還可感染很多動物包括哺乳類、鳥、爬行類、魚、兩棲類及昆蟲。人畜感染後可呈無症狀帶菌狀態,也可表現為有臨床症狀的致死疾,它可能加重病態或死亡率,或者降低動物的繁殖生產力。
菌體大小(0.6~0.9)×(1~3)微米無芽胞,一般無莢膜,除雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌外,大多有周身鞭毛。營養要求不高,分離培養常採用腸道選擇鑒別培養基。生化反應對本屬菌的鑒別具有重要參考意義(見表)。不液化明膠,不分解尿素,不產生吲哚,不發酵乳糖和蔗糖,能發酵葡萄糖、甘露醇、麥芽糖和衛芽糖,大多產酸產氣,少數只產酸不產氣。VP試驗陰性,有賴氨酸脫羧酶。DNA的G+C含量為50~53%。對熱抵抗力不強,在60℃15分鍾可被殺死。在水中存活2~3周。在5%的石炭酸中,5分鍾死亡。沙門氏菌屬 本屬菌按生化反應分為4個亞屬。亞屬Ⅰ是生化反應典型的和最常見的沙門氏菌;亞屬Ⅱ和Ⅳ是生化反應不典型的沙門氏菌;亞屬Ⅲ是亞利桑那沙門氏菌。
沙門氏菌具有復雜的抗原結構,一般可分為菌體(O)抗原、鞭毛(H)抗原和表面(Vi)抗原3種。
傳播媒介
蛋、家禽和肉類產品是沙門氏菌病的主要傳播媒介,感染主要取決於沙門氏菌的血清型和食用者的身體狀況,受威脅最大的是小孩、老年人及免疫缺陷個體。根據國際慣例,要求對易受沙門氏菌污染的食品進行分類管理,以使大多數食物不含沙門氏菌,從而有效預防沙門氏菌病。為此,人們在探索沙門氏菌檢測方法的過程中,作出了不懈的努力,現將有關進展報告如下,並介紹兩種快速檢測沙門氏菌的試劑盒。
沙門氏菌的傳播途徑
肉的污染
肉及其製品的沙門氏菌檢出率美國為20%—25%、英國為9.9%、日本檢查進口家禽的污染率為10.3%,國內肉類沙門氏菌檢出率在1.1%—39.5%。
蛋的污染
中國蛋及其製品沙門氏菌檢出率為3.9%-43.7%,由於吃蛋引起鼠傷寒病的病例報告逐漸有增加的趨勢。
環境污染
食品在加工、運輸、出售過程中往往被沙門氏菌污染。沙門氏菌在糞便、土壤、食品、水中可生存5個月至2年之久。
傳播問題
恢復期患者和無症狀的帶菌者也是常見的傳染源。
『柒』 微生物:支原體簡介
支原體
支原體(mycoplasma):又稱霉形體,為目前發現的最小的最簡單的細胞,也是唯一一種沒有細胞壁的原核細胞。支原體細胞中唯一可見的細胞器是核糖體。
【發現】
支原體是在1898年發現的,是一種簡單的原核細胞。其大小介於細菌和病毒之間。結構也比較簡單,多數成球形,沒有細胞壁,只有三層結構的細胞膜,故具有較大的可變性。支原體可以在特殊的培養基上接種生長,用此法配合臨床進行診斷。與泌尿生殖道感染有關的主要是分解尿素支原體和人型支原體兩種,約有20-30%的非淋菌性尿道炎的病人,是由以上兩種支原體引起的,是非淋菌性尿道炎及宮頸炎的第二大致病菌。在成年人的泌尿生殖道中分解尿素支原體和人型支原體感染率主要與性活動有關,也就是說,與性交次數的多少、性交對象的數量有關,不管男女兩性都是如此。據統計女性的支原體感染率更高些,說明女性的生殖道比男性生殖道更易生長支原體。另外,分解尿素支原體的感染率要比人型支原體的感染率為高。
【形態】
(一)形態與結構
支原體的大小為0.2~0.3um,可通過濾菌器,常給細胞培養工作帶來污染的麻煩。無細胞壁,不能維持固定的形態而呈現多形性。革蘭氏染色不易著色,故常用Giemsa染色法將其染成淡紫色。細胞膜中膽固醇含量較多,約佔36%,對保持細胞膜的完整性具有一定作用。凡能作用於膽固醇的物質(如二性黴素B、皂素等)均可引起支原體膜的破壞而使支原體死亡。
支原體基因組為一環狀以雙鏈DNA,分子量小(僅有大腸桿菌的五分之一),合成與代謝很有限。
肺炎支原體的一端有一種特殊的末端結構(terminal structure),能使支原體粘附於呼吸道粘膜上皮細胞表面,與致病性有關。
(二)培養特性
營養要求比一般細菌高,除基礎營養物質外還需加入10~20%人或動物血清以提供支原體所需的膽固醇。最適pH7.8~8.0之間,低於7.0則死亡,但解脲脲原體最適pH6.0~6.5。
大多數兼性厭氧,有些菌株在初分離時加入5%CO2生長更好。生長緩慢,在瓊脂含量較少的固體培養基上孵育2~3天出現典型的「荷包蛋樣」菌落:圓形(直徑10~16um),核心部分較厚,向下長入培養基,周邊為一層薄的透明顆粒區。此外,支原體還能在雞胚絨毛尿囊膜或培養細胞中生長。
繁殖方式多樣,主要為二分裂繁殖,還有斷裂、分枝、出芽等方式,蓋因缺乏細胞壁造成分裂時二個子細胞大小均所致。同時,支原體分裂和其DNA復制不同步,可形成多核長絲體。
(三)生化反應與分型
一般能分解葡萄糖的支原體則不能利用精氨酸,能利用精氨酸的則不能分解葡萄糖,據此可將支原體分為兩類(見表19-1)。解脲脲原體不能利用葡萄糖或精氨酸,但可利用尿素作能源。
各種支原體都有特異的表面抗原結構,很少有交叉反應,具有型特異性。應用生長抑制試驗(Growth inhibition test,GIT)、代謝抑制試驗(Metabolic inhibition test,MIT)等可鑒定支原抗原,進行分型。
表19-1 人類支原體的主要生物學性狀 名稱 需要膽固醇 分解葡萄糖 分 解 還原四氮唑 吸附紅細胞
支原體屬
人型支原體
唾液支原體
發酵支原體
肺炎支原體
口腔支原體
生殖支原體
脲原體屬
解脲脲原體 +++++++ --++-+- ++--+-- ------+ ---+-±- ---++-+
(四)抵抗力
支原體對熱的抵抗力與細菌相似。對環境滲透壓敏感,滲透壓的突變可致細胞破裂。對重金屬鹽、石炭酸、來蘇爾和一些表面活性劑較細菌敏感,但對醋酸鉈、結晶紫和亞銻酸鹽的抵抗力比細菌大。對影響壁合成的抗生素如青黴素不敏感,但紅黴素、四環素、鏈黴素及氯黴素等作用於支原體核蛋白體的抗生素,可抑制或影響蛋白質合成,有殺滅支原體的作用。
二、致病性與免疫性
支原體不侵入機體組織與血液,而是在呼吸道或泌尿生殖道上皮細胞粘附並定居後,通過不同機制引起細胞損傷,如獲取細胞膜上的脂質與膽固醇造成膜的損傷,釋放神經(外)毒素、磷酸酶及過氧化氫等。
巨噬細胞、lgG 及 lgM 對支原體均有一定的殺傷作用。呼吸道粘膜產生的SlgA抗體已證明有阻止支原體吸附的作用。在兒童中,致敏淋巴細胞可增強機體對肺炎支原體的抵抗力。
【支原體感染】
致病支原體中,肺炎支原體起肺炎,人型支原體、解脲支原體和生殖器支原體主要泌尿生殖道感染。支原體肺炎又稱原發性非典型肺炎,支原體肺炎全年均可發病,以冬季多見,可有小流行。支原體腦炎是學齡前兒童及青年人常見的一種肺炎,支原體肺炎主要通過飛沫傳播,潛伏期較長,可達2~3周。支原體肺炎雖然病程較長,肺部病變較重,炎症吸收較慢,但絕大多數預後都是良好的,合並症亦少。生殖器支原體感染是近年新明確的一種性接觸傳播疾病。成人主要通過性接觸傳播,新生兒則由母親生殖道分娩時感染。成人男性的感染部位在尿道粘膜,女性感染部位在宮頸。新生兒主要引起結膜炎和肺炎。
【支原體的實驗診斷】
支原體實驗室檢測方法有:形態學檢查、支原體培養、抗原檢測、血清學方法和分子生物學方法。
解脲支原體MB抗原的研究表明:MB抗原是解脲支原體感染時被識別的主要外膜抗原,具有種特異性,包含血清特異的和交叉反應的抗原決定簇。編碼MB抗原的基因長1200多個鹼基、N端1/3為保守區,包含群特異的抗原決定簇:C端2/3是由重復序列組成的可變區,包含型特異的抗原決定簇,對該抗原的研究及對於研究疾病的發病機制和免疫機制起重要作用。MB抗原位於解脲支原體膜的表面,N端固定於膜上使C端重復區暴露於微生物周圍的微環境。N端可以作為其分群分型的基礎,C端最可能首先與宿主的防禦系統相遇而引起主要的抗體反應,是理解它的發病機制和免疫機制的基礎。MB抗原與疾病的關系,以及它在疾病中的作用還有待進一步探討。
測定支原體抗體的血清學試驗方法中,有支原體特異性血清學檢測和非特異性血清學檢測:支原體特異性血清學檢測方法中,最常用的是補體結合試驗,另有間接免疫熒光染色檢查法、生長抑制試驗、代謝抑制試驗、間接血凝試驗、酶免疫法和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)等。支原體的非特異血清學方法有肺炎支原體冷凝集試驗與MG鏈球菌凝集試驗,對支原體肺炎能起輔助診斷的作用。檢測特異性抗體IgG的方法尚不能達到早期快速診斷的目的,抗原的檢測為今後研究的發展方向。目前已有用酶聯免疫吸附試驗、熒游標記抗體、肺炎支原體膜蛋白單克隆抗體和反向間接血凝法直接檢測分泌物和體液中支原體抗原的報道,具有很高的特異度和靈敏度。人體感染肺炎支原體後,能產生特異性IgM和IgG類抗體。IgM類抗體出現早,一般在感染後1周出現,3~4周達高峰,以後逐漸降低。由於肺炎支原體感染的潛伏期為2~3周,當患者出現症狀而就診時,IgM抗體已達到相當高的水平,因此IgM抗體陽性可作為急性期感染的診斷指標。如IgM抗體陰性,則不能否定肺炎支原體感染, 需檢測IgG抗體。IgG較IgM出現晚,需動態觀察,如顯著升高提示近期感染,顯著降低說明處於感染後期。由此提示IgG與IgM同時測定,可提高診斷率,達到指導用葯、提高療效之目的。Savyon公司提供支原體IgM、IgG和IgA抗體ELISA檢測試劑盒。
支原體分子生物學檢測方法有基因探針和聚合酶鏈反應(PCR)等方法。基因探針的核酸雜交法,雖然敏感性和特異性都很高,但基因探針常用同位素標記,放射性危害大,設備要求高且繁瑣難以推廣,近年來發展的PCR技術,使得支原體檢測變得簡便、快速、敏感、特異,為支原體的檢測和實驗研究開辟了一個廣闊的前景。
tu1血清標本中的MP抗體與板上包被的MP抗原結合
tu2抗人IgG/IgM/IgA-HRP和板上的抗原抗體復合物結合
tu3加入的底物被酶分解的產物的顏色深度與標本中抗體的濃度成正比
SeroMP支原體ELISA試劑盒
本試劑盒是檢測支原體肺炎的第三代產品,它通過ELISA法在酶標板上完成人血清的IgM、IgG和IgA抗體檢測。沙眼衣原體感染的診斷方法有細胞培養、直接抗原檢測、分子生物學和血清學方法。直接抗原檢測法中獲取標本(在感染部位取材)較困難,所得結果可靠性也不強。而本試劑盒採用的血清學檢測以血清為標本,可檢測各個部位和各個時期的肺炎衣原體感染,並且某一類型的抗體象徵疾病處於一定發展階段。
【細胞培養支原體感染】
細胞培養(特別是傳代細胞)被支原體污染是個世界性問題。國內外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精氨酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見的污染細胞培養的支原體菌群,但能夠污染細胞的支原體種類是很多的,國外調查證明,大約有二十多種支原體能污染細胞,有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。
支原體污染的來源包括工作環境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養基的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。
組織細胞培養工作中,主要從以下幾個方面來預防支原體的污染:控制環境污染;嚴格實驗操作;細胞培養基和器材要保證無菌;在細胞培養基中加入適量的抗生素。支原體污染細胞後,特別是重要的細胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯合處理。支原體最突出的結構特徵是沒有細胞壁,一般來講,對作用於細胞壁生物合成的抗生素,如 -內醯胺類、萬古黴素等完全不敏感;對多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺葯物普遍耐葯。對支原體最有抑制活性及常用於支原體感染治療的抗生素是四環素類、大環內酯類及一些氟喹諾酮;其他類抗生素如氨基糖苷類、氯黴素對支原體有較小抑製作用,所以常不用來作為支原體感染的化學治療劑。InvivoGen公司研究開發的新一代支原體抗生素M-Plasmocin能有效地殺滅支原體,不影響細胞本身的代謝,並且用M-Plasmocin處理過的培養細胞,不會重新感染支原體。
支原體有時被稱為類菌質體。無細胞壁,多呈不規則球狀、長絲狀,可分枝,營寄生共生或腐生。一般侵害對象為動植物,可造成多種疾病。
支原體(Mycoplasmal)是目前所能發現的能在無生命培基中生長繁殖的最小的微生物。
支原體體形多樣,基本為球形,亦可呈球桿狀或絲狀,其菌落呈針尖大小,故又稱之為微小支原體。支原體特點是無細胞壁及前體,細胞器極少。DNA的G+C含量低,菌體內具有非常小的染色體組,其分子量約為45×108,菌體細胞大小約為0.2-0.3μm,很少超過1.0μm。由三層蛋白質和脂質組成的膜樣結構以及一層類似毛發結構組成。支原體由二分裂繁殖,形態多樣。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭氏染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養中生長。用培養基培養。營養要求比細菌高。由於它沒有細胞壁,因此對影響細胞壁合成的抗生素,如青黴素等不敏感,但紅黴素、四環素、卡那黴素、鏈黴素、氯黴素等作用於核蛋白體的抗生素,可抑制或影響支原體的蛋白質合成,有殺傷支原體作用,支原體對熱抵抗力差,通常55℃經15分鍾處理可使之滅活。石碳酸,來蘇兒易將其殺死。在培養基中置入脲素並以硫酸錳作指示劑極易與其他支原體作出鑒別。
它廣泛分布於自然界,有80餘種。與人類有關的支原體有肺炎支原體(M-pneumonie,Mp)、人型支原體(M.humenis,MH)、解脲支原體(Ureaplasma urealyticum, UU 分解尿素支原體)和生殖器支原體(M.genitalium,MG)等。
肺炎支原體引起肺炎。現已從人類泌尿生殖道分離出來7種支原體,其中分離率較高而與泌尿生殖道疾病有關,是解脲支原體,其次是人型支原體。人型支原體(M.humenis,MH)、解脲支原體(Ureaplasma urealyticum,UU)和生殖器支原體(M.genitalium,MG)都會引起泌尿生殖道感染。
解脲支原體(ureaplasma ure-alyticum)是一種原核微生物,呈球桿狀,大小為125-250毫微米,分子量4.5*108,高度多形性,沒有堅硬的細胞壁,能在無細菌的培養物中增殖,能產生尿素分解酶分解尿素。特異性抗體能抑制它生長,因其缺乏堅硬的細胞膜,對青黴素耐葯,對細胞膜有親和性,生長繁殖時需要類固醇物質。四環素、紅黴素、壯觀黴素對之有效。嬰兒或無性交接觸的女性生殖道內找不到解脲支原體。而性生活越亂,這種支原體陽性率也越高。Mc Donald 1982年報告587例急性尿道炎症狀病人中,209例(36%)中段尿中分離出解脲支原體。
人型支原體(mycoplasma hominis)支原體對外界環境抵抗力弱,45℃15min即可被殺死。對肥皂、酒精、四環素、紅黴素敏感。
【發病機理】
支原體只能粘附在呼吸道或泌尿生殖道的上皮細胞表面的受體上,而不進入組織和血液。支原體引起細胞損害的原因為:粘附於宿主細胞表面的支原體從細胞吸收營養,從細胞膜獲得脂質和膽固醇,引起細胞損傷;支原體代謝產生的有毒物質,如溶神經支原體能產生神經毒素,引起細胞膜損傷;脲原體含有尿素酶,可以水解尿素產生大量氨,對細胞有毒害作用。支原體除可以粘附於細胞、巨噬細胞表面外,還可以粘附於精子表面,從而阻止精子運動,其產生神經氨酸酶樣物質可干擾精子與卵子的結合。這就是支原體感染引起不育不孕的原因之一。
在動物實驗發現,小鼠腹腔巨噬細胞可以殺滅支原體,而中性粒細胞的作用不大。在體外,IgG1和IgG2抗體有調理作用。可加強巨噬細胞對支原體的殺傷作用。
【支原體與L型細菌的區別】
L型細菌是在抗生素、溶菌酶等作用下變成的一種細胞壁缺陷型細菌,其許多特性與支原體相似,在鑒定時很有必要將二者區別開來(見下表)。
表19-2 支原體與L型細菌的區別
支原體 L型細菌
自然界中廣泛存在絕大多數生長需膽固醇
在遺傳上與細菌無關,且無論在什麼條件下也不能變成細菌
菌落較小,0.1~0.3mm 自然界很少存在生長不一定需要膽固醇
在遺傳上與原菌相關,並可在誘導因素去除後回復為原菌
菌落稍大,0.5~1.0mm
主要病原性支原體
一、肺炎支原體所致
肺炎支原體(M.Pneumonia)是人類支原體肺炎的病原體。支原體肺炎的病理改變以間質性肺炎為主,有時並發支氣管肺炎,稱為原發性非典型性肺炎。主要經飛沫傳染,潛伏期2~3周,發病率以青少年最高。臨床症狀較輕,甚至根本無症狀,若有也只是頭痛、咽痛、發熱、咳嗽等一般的呼吸道症狀,但也有個別死亡報道。一年四季均可發生,但多在秋冬時節。
肺炎支原體的致病首先通過其頂端結構粘附在宿主細胞表面,並伸出微管插入胞內吸取營養、損傷細胞膜,繼而釋放出核酸酶、過氧化氫等代謝產生引起細胞的溶解、上皮細胞的腫脹與壞死。誘發機體產生的抗體也可能參與了上述病理損傷。呼吸道分泌的SlgA對再感染有一定防禦作用,但不夠牢固。
肺炎支原體的診斷方法主要依靠分離培養和血清學試驗。標本可采可疑病人的痰或咽試子,接種於含血清或酵母浸膏的瓊脂培養基。5~10天後觀察有無直徑30~100um的圓形房頂樣菌落。多次傳代後可變為典型的「荷包蛋」樣菌落,並能吸附多種動物紅細胞和氣管上皮細胞、HeLa細胞等,且此類吸附可被特異性抗體所抑制。分離的支原體經形態、溶血與生化反應作初步鑒定後需進一步用特異性抗血清作生長抑制試驗和代謝抑制試驗。用患者血清與支原體脂質抗原作補體結合試驗,恢復期較急性期效價高4倍以上具有診斷價值。亦可用間接免疫熒光試驗、間接血凝ELISA檢測標本。另外,有1/3~3/4患者的血清可與人O型紅細胞在4℃時有非特異性凝集(稱為「冷凝集試驗」),37℃時消失,患病一周時達到高峰。此方法簡便,有助於診斷。
治療可選用紅黴素、四環素和氯黴素等。
支原體死疫苗和減毒活疫苗仍在試驗中。
二、解脲脲原體
解脲脲原體(M.urealyticum)為脲原體屬中唯一的一個種,因生長需要尿素而得名。菌落微小,直徑僅有15~25um,須在低倍顯微鏡下觀察,故舊稱T株 (tiny strain)。菌落表面有粗糙顆粒,在合適條件下可轉成典型的荷包蛋樣菌落。生長需要膽固醇和尿素,分解尿素為其代謝特徵,產生氨氮,使培養基pH上升,導致自身死亡。
解脲脲原體可引起泌尿生殖道感染,並被認為是非淋球菌性尿道炎中僅次於衣原體(佔50%)的重要病原體。由於80%孕婦的生殖道內帶有解脲脲原體,因此可通過胎盤感染胎兒而導致早產、死胎,或在分娩時感染新生兒,引起呼吸道感染。此外,解脲脲原體還可引起不孕症。
治療用紅黴素、四環素、強力黴素等高度敏感的抗生素。