鉬酸鈉的檢測方法

❶ 釩鉬酸銨測磷的方法步驟和試劑的配置

磷含量的測定採用磷鉬酸喹啉滴定分析方法。

1 原理

在酸性溶液中，磷酸根與鉬酸鈉和喹啉反應，生成磷鉬酸喹啉沉澱，過濾並洗去所附著的酸液，將沉澱溶解於過量的鹼標准溶液中，再用酸標准溶液反滴定過量的鹼，即可計算出五氧化二磷的含量。

2 試劑和溶液

鉬酸鈉；檸檬酸；硝酸；硝酸溶液（1+1）；喹啉（不含還原劑）；丙酮。

喹鉬檸酮試劑：

①稱70g鉬酸鈉於400ml燒杯中，加入100ml水溶解；

②稱60g檸檬酸於1000 ml燒杯中，加入100ml水，溶解後，加85ml硝酸；

③把溶液①加到溶液②中，混勻；

④混合35 ml硝酸和100ml水在400 ml燒杯中，加入5ml喹啉；

⑤把溶液④加入溶液③中，混勻，靜置一夜，用濾紙或棉花過濾，濾液加入280ml丙酮，用水稀釋至1000ml，混勻，貯存在聚乙烯瓶中，放於暗處，避光，避熱。

混合指示液：

①稱取0.1 g百里香酚藍，溶於2.2 ml含0.1 mol/L NaOH的氫氧化鈉溶液中，

用60%（V/V）的乙醇溶液稀釋至100 ml；

②稱取0.1 g酚酞，溶於100 ml 60%（V/V）的乙醇溶液中；

③取3份體積的①溶液和2份體積的②溶液混合均勻。

氫氧化鈉標准溶液：c (NaOH)= 0.5mol/L。

鹽酸標准溶液：c(HCl)=0.25 mol/L。

不含二氧化碳的水：將水注入平底燒瓶中，煮沸10min，立即用裝有鈉石灰管的膠塞塞緊，放置冷卻。

3 測定步驟

吸取1ml濕法磷酸置於預先盛有10ml（1+1）硝酸溶液的100 ml容量瓶中，混勻，用水稀釋至100 ml，混勻。

從上述容量瓶中吸取1 ml試液於500 ml 燒杯中，加入10 ml（1+1）硝酸溶液，用水稀釋至100 ml，蓋上表面皿，於電爐上加熱至沸，加入35 ml 喹鉬檸酮試劑，繼續溫和地加熱微沸1 min，取下燒杯，冷卻至室溫，冷卻過程中轉動燒杯3~4次。

用中速濾紙（或脫脂棉）過濾，先將上層濾液濾完，然後以傾瀉法洗滌沉澱3 ~ 4次（每次用水約25 ml），將沉澱轉移至漏斗中再用水洗滌沉澱，直至所得濾液（取約20 ml濾液，加入1滴混合指示液和1滴c (NaOH)= 0.25mol/L的氫氧化鈉溶液後，所呈顏色與處理同體積蒸餾水所呈顏色相近為止）。將沉澱和濾紙（或脫脂棉）移入原燒杯中，用滴定管加入氫氧化鈉標准溶液，邊滴加邊攪拌，使沉澱溶解，再過量約5 ~ 10 ml氫氧化鈉標准溶液，充分攪拌至沉澱完全溶解後，加入100 ml 不含二氧化碳的水和約1 ml混合指示液，用鹽酸標准溶液滴定至溶液由紫色經灰藍色變為微黃色為終點。

按上述分析步驟同時進行空白實驗。

五氧化二磷的含量計算公式：

式中，c 1 為氫氧化

鈉標准溶液的物質的量濃度，mol/L；

c2 為鹽酸標准溶液的物質的量濃度，mol/L；

V1 為滴定時氫氧化鈉標准溶液的用量，ml；

V2 為滴定時鹽酸標准溶液的用量，ml；

V3 為空白實驗時氫氧化鈉標准溶液的用量，ml；

V4 為空白實驗時鹽酸標准溶液的用量，ml；

m0為測定時吸取試樣的量，相當於試樣的質量，g；

0.00273為與1.00 ml 氫氧化鈉標准滴定溶液c (NaOH) =1.000 mol/L 相當的五氧化二磷的質量，g。

❷ qubit可以用於蛋白濃度測定嗎

qubit可以用於蛋白濃度測定
常用紫外分光光度法測定蛋白質含量。
以下引用：

6種方法測定蛋白質含量
一、微量凱氏（kjeldahl）定氮法
樣品與濃硫酸共熱。含氮有機物即分解產生氨（消化），氨又與硫酸作用，變成硫酸氨。經強鹼鹼化使之分解放出氨，借蒸汽將氨蒸至酸液中，根據此酸液被中和的程度可計算得樣品之氮含量。若以甘氨酸為例，其反應式如下：
nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1)
2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2)
(nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3)
反應（1）、(2)在凱氏瓶內完成，反應（3）在凱氏蒸餾裝置中進行。
為了加速消化，可以加入cuso4作催化劑，k2so4以提高溶液的沸點。收集氨可用硼酸溶液，滴定則用強酸。實驗和計算方法這里從略。
計算所得結果為樣品總氮量，如欲求得 樣品中蛋白含量，應將總氮量減去非蛋白
氮即得。如欲進一步求得樣品中蛋白質的含量，即用樣品中蛋白氮乘以6．25即得。
二、雙縮脲法（biuret法）
（一）實驗原理
雙縮脲（nh3conhconh3）是兩個分子脲經180℃左右加熱，放出一個分子氨後得到的產物。在強鹼性溶液中，雙縮脲與cuso4形成紫色絡合物，稱為雙縮脲反應。凡具有兩個醯胺基或兩個直接連接的肽鍵，或能過一個中間碳原子相連的肽鍵，這類化合物都有雙縮脲反應。
紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關，故可用來測定蛋白質含量。測定范圍為1-10mg蛋白質。干擾這一測定的物質主要有：硫酸銨、tris緩沖液和某些氨基酸等。
此法的優點是較快速 ，不同的蛋白質產生顏色的深淺相近，以及干擾物質少。主要的缺點是靈敏度差。因此雙縮脲法常用於需要快速，但並不需要十分精確的蛋白質測定。
（二）試劑與器材
1. 試劑：
（1）標准蛋白質溶液：用標準的結晶牛血清清蛋白（bsa）或標准酪蛋白，配製成10mg/ml的標准蛋白溶液，可用bsa濃度1mg/ml的a280為0.66來校正其純度。如有需要，標准蛋白質還可預先用微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量，計算出其純度，再根據其純度，稱量配製成標准蛋白質溶液。牛血清清蛋白用h2o 或0.9%nacl配製，酪蛋白用0．05n naoh配製。
（2）雙縮脲試劑：稱以1.50克硫酸銅（cuso4•5h2o）和6.0克酒石酸鉀鈉（knac4h4o6•4h2o），用500毫升水溶解，在攪拌下加入300毫升10% naoh溶液，用水稀釋到1升，貯存於塑料瓶中（或內壁塗以石蠟的瓶中）。此試劑可長期保存。若貯存瓶中有黑色沉澱出現，則需要重新配製。
2. 器材：
可見光分光光度計、大試管15支、旋渦混合器等。
（三）操作方法
1. 標准曲線的測定：取12支試管分兩組，分別加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的標准蛋白質溶液，用水補足到1毫升，然後加入4毫升雙縮脲試劑。充分搖勻後，在室溫（20～25℃）下放置30分鍾，於540nm處進行比色測定。用未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照液。取兩組測定的平均值，以蛋白質的含量為橫座標，光吸收值為縱座標繪制標准曲線。
2、樣品的測定：取2～3個試管，用上述同樣的方法，測定未知樣品的蛋白質濃度。注意樣品濃度不要超過10mg/ml。

三、folin—酚試劑法（lowry法）
（一）實驗原理
這種蛋白質測定法是最靈敏的方法之一。過去此法是應用最廣泛的一種方法，由於其試劑乙的配製較為困難（現在已可以訂購），近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即folin—酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。這兩種顯色反應產生深蘭色的原因是：在鹼性條件下，蛋白質中的肽鍵與銅結合生成復合物。folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產生深蘭色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。在一定的條件下，蘭色深度與蛋白的量成正比。
folin—酚試劑法最早由lowry確定了蛋白質濃度測定的基本步驟。以後在生物化學領域得到廣泛的應用。這個測定法的優點是靈敏度高，比雙縮脲法靈敏得多，缺點是費時間較長，要精確控制操作時間，標准曲線也不是嚴格的直線形式，且專一性較差，干擾物質較多。對雙縮脲反應發生干擾的離子，同樣容易干擾lowry反應。而且對後者的影響還要大得多。酚類、檸檬酸、硫酸銨、tris緩沖液、甘氨酸、糖類、甘油等均有干擾作用。濃度較低的尿素（0.5%），硫酸納（1%），硝酸納（1%），三氯乙酸（0.5%），乙醇（5%），乙醚（5%），丙酮（0.5%）等溶液對顯色無影響，但這些物質濃度高時，必須作校正曲線。含硫酸銨的溶液，只須加濃碳酸鈉—氫氧化鈉溶液，即可顯色測定。若樣品酸度較高，顯色後會色淺，則必須提高碳酸鈉—氫氧化鈉溶液的濃度1～2倍。
進行測定時，加folin—酚試劑時要特別小心，因為該試劑僅在酸性ph條件下穩定，但上述還原反應只在ph=10的情況下發生，故當folin一酚試劑加到鹼性的銅—蛋白質溶液中時，必須立即混勻，以便在磷鉬酸—磷鎢酸試劑被破壞之前，還原反應即能發生。
此法也適用於酪氨酸和色氨酸的定量測定。
此法可檢測的最低蛋白質量達5mg。通常測定范圍是20~250mg。
（二）試劑與器材
1.試劑
（1）試劑甲：
（a）10克 na2co3，2克 naoh和0.25克酒石酸鉀鈉 （knac4h4o6•4h2o）。溶解於500毫升蒸餾水中。
（b）0.5克硫酸銅（cuso4•5h2o）溶解於100毫升蒸餾水中，每次使用前，將50份（a）與1份（b）混合，即為試劑甲。
（2）試劑乙：在2升磨口迴流瓶中，加入100克鎢酸鈉（na2wo4•2h2o）,25克鉬酸鈉（na2moo4•2h2o）及700毫升蒸餾水，再加50毫升85%磷酸，100毫升濃鹽酸，充分混合，接上迴流管，以小火迴流10小時，迴流結束時，加入150克硫 酸 鋰（li2so4），50毫升蒸餾水及數滴液體溴，開口繼續沸騰15分鍾，以便驅除過量的溴。冷卻後溶液呈黃色（如仍呈綠色，須再重復滴加液體溴的步驟）。稀釋至1升，過濾，濾液置於棕色試劑瓶中保存。使用時用標准naoh滴定，酚酞作指示劑，然後適當稀釋，約加水1倍，使最終的酸濃度為1n左右。
（3）標准蛋白質溶液: 精確稱取結晶牛血清清蛋白或 g—球蛋白，溶於蒸餾水，濃度為250mg/ml左右。牛血清清蛋白溶於水若混濁，可改用0.9%nacl溶液。
2. 器材
（1）可見光分光光度計
（2）旋渦混合器
（3）秒錶
（4）試管16支
（三）操作方法
1. 標准曲線的測定：取16支大試管，1支作空白，3支留作未知樣品，其餘試管分成兩組，分別加入0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升標准蛋白質溶液（濃度為250mg/ml）。用水補足到1.0毫升，然後每支試管加入5毫升試劑甲，在旋渦混合器上迅速混合，於室溫（20～25℃）放置10分鍾。再逐管加入0.5毫升試劑乙（folin—酚試劑），同樣立即混勻。這一步混合速度要快，否則會使顯色程度減弱。然後在室溫下放置30分鍾，以未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照，於700nm處測定各管中溶液的吸光度值。以蛋白質的量為橫座標，吸光度值為縱座標，繪制出標准曲線。
注意：因lowry反應的顯色隨時間不斷加深，因此各項操作必須精確控制時間，即第1支試管加入5毫升試劑甲後，開始計時，1分鍾後，第2支試管加入5毫升試劑甲，2分鍾後加第3支試管，余此類推。全部試管加完試劑甲後若已超過10分鍾，則第1支試管可立即加入0.5毫升試劑乙，1分鍾後第2支試管加入0.5毫升試劑乙，2分鍾後加第3支試管，余此類推。待最後一支試管加完試劑後，再放置30分鍾，然後開始測定光吸收。每分鍾測一個樣品。
進行多試管操作時，為了防止出錯，每位學生都必須在實驗記錄本上預先畫好下面的表格。表中是每個試管要加入的量（毫升），並按由左至右，由上至下的順序，逐管加入。最下面兩排是計算出的每管中蛋白質的量（微克）和測得的吸光度值。

❸ 如何准確測定樣品中蛋白質的含量

5種方法測定蛋白質含量

一、微量凱氏（kjeldahl）定氮法

樣品與濃硫酸共熱。含氮有機物即分解產生氨（消化），氨又與硫酸作用，變成硫酸氨。經強鹼鹼化使之分解放出氨，借蒸汽將氨蒸至酸液中，根據此酸液被中和的程度可計算得樣品之氮含量。

二、雙縮脲法（biuret法）

1、實驗原理

雙縮脲是兩個分子脲經180℃左右加熱，放出一個分子氨後得到的產物。在強鹼性溶液中，雙縮脲與硫酸銅形成紫色絡合物，稱為雙縮脲反應。凡具有兩個醯胺基或兩個直接連接的肽鍵，或能過一個中間碳原子相連的肽鍵，這類化合物都有雙縮脲反應。

紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關，故可用來測定蛋白質含量。測定范圍為1-10mg蛋白質。干擾這一測定的物質主要有：硫酸銨、tris緩沖液和某些氨基酸等。

此法的優點是較快速 ，不同的蛋白質產生顏色的深淺相近，以及干擾物質少。主要的缺點是靈敏度差。因此雙縮脲法常用於需要快速，但並不需要十分精確的蛋白質測定。

2、試劑與器材

（1）試劑：a、標准蛋白質溶液：用標準的結晶牛血清清蛋白或標准酪蛋白，配製成10mg/ml的標准蛋白溶液，可用bsa濃度1mg/ml的a280為0.66來校正其純度。

如有需要，標准蛋白質還可預先用微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量，計算出其純度，再根據其純度，稱量配製成標准蛋白質溶液。牛血清清蛋白用0.9%nacl配製，酪蛋白用0.05n nach配製。

b、雙縮脲試劑：稱以1.50克硫酸銅和6.0克酒石酸鉀鈉，用500毫升水溶解，在攪拌下加入300毫升10% naoh溶液，用水稀釋到1升，貯存於塑料瓶中（或內壁塗以石蠟的瓶中）。此試劑可長期保存。若貯存瓶中有黑色沉澱出現，則需要重新配製。

（2）器材： 可見光分光光度計、大試管15支、旋渦混合器等。

3、操作方法

（1）標准曲線的測定：取12支試管分兩組，分別加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的標准蛋白質溶液，用水補足到1毫升，然後加入4毫升雙縮脲試劑。充分搖勻後，在室溫（20～25℃）下放置30分鍾，於540nm處進行比色測定。

用未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照液。取兩組測定的平均值，以蛋白質的含量為橫座標，光吸收值為縱座標繪制標准曲線。

（2）樣品的測定：取2～3個試管，用上述同樣的方法，測定未知樣品的蛋白質濃度。注意樣品濃度不要超過10mg/ml。

三、folin—酚試劑法（lowry法）

1、實驗原理

這種蛋白質測定法是最靈敏的方法之一。過去此法是應用最廣泛的一種方法，由於其試劑乙的配製較為困難（現在已可以訂購），近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即folin—酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。

這兩種顯色反應產生深蘭色的原因是：在鹼性條件下，蛋白質中的肽鍵與銅結合生成復合物。folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產生深蘭色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。

在一定的條件下，蘭色深度與蛋白的量成正比。 folin—酚試劑法最早由lowry確定了蛋白質濃度測定的基本步驟。以後在生物化學領域得到廣泛的應用。這個測定法的優點是靈敏度高，比雙縮脲法靈敏得多，缺點是費時間較長，要精確控制操作時間，標准曲線也不是嚴格的直線形式，且專一性較差，干擾物質較多。

對雙縮脲反應發生干擾的離子，同樣容易干擾lowry反應。而且對後者的影響還要大得多。酚類、檸檬酸、硫酸銨、tris緩沖液、甘氨酸、糖類、甘油等均有干擾作用。

濃度較低的尿素（0.5%），硫酸納（1%），硝酸納（1%），三氯乙酸（0.5%），乙醇（5%），乙醚（5%），丙酮（0.5%）等溶液對顯色無影響，但這些物質濃度高時，必須作校正曲線。

含硫酸銨的溶液，只須加濃碳酸鈉—氫氧化鈉溶液，即可顯色測定。若樣品酸度較高，顯色後會色淺，則必須提高碳酸鈉—氫氧化鈉溶液的濃度1～2倍。

進行測定時，加folin—酚試劑時要特別小心，因為該試劑僅在酸性ph條件下穩定，但上述還原反應只在ph=10的情況下發生，故當folin一酚試劑加到鹼性的銅—蛋白質溶液中時，必須立即混勻，以便在磷鉬酸—磷鎢酸試劑被破壞之前，還原反應即能發生。

此法也適用於酪氨酸和色氨酸的定量測定。 此法可檢測的最低蛋白質量達5mg。通常測定范圍是20~250mg。

2、試劑與器材

（1）試劑

a、試劑甲： （a）10克碳酸鈉，2克 naoh和0.25克酒石酸鉀鈉 。溶解於500毫升蒸餾水中。 （b）0.5克硫酸銅溶解於100毫升蒸餾水中，每次使用前，將50份（a）與1份（b）混合，即為試劑甲。

b、試劑乙：在2升磨口迴流瓶中，加入100克鎢酸鈉，25克鉬酸鈉及700毫升蒸餾水，再加50毫升85%磷酸，100毫升濃鹽酸，充分混合，接上迴流管，以小火迴流10小時，迴流結束時，加入150克硫酸鋰，50毫升蒸餾水及數滴液體溴，

開口繼續沸騰15分鍾，以便驅除過量的溴。冷卻後溶液呈黃色（如仍呈綠色，須再重復滴加液體溴的步驟）。稀釋至1升，過濾，濾液置於棕色試劑瓶中保存。使用時用標准nach滴定，酚酞作指示劑，然後適當稀釋，約加水1倍，使最終的酸濃度為1n左右。

c、標准蛋白質溶液: 精確稱取結晶牛血清清蛋白或球蛋白，溶於蒸餾水，濃度為250mg/ml左右。牛血清清蛋白溶於水若混濁，可改用0.9%nacl溶液。

（2）器材

a、可見光分光光度計

b、旋渦混合器

c、秒錶

d、試管16支

3、操作方法

（1）標准曲線的測定：取16支大試管，1支作空白，3支留作未知樣品，其餘試管分成兩組，分別加入0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升標准蛋白質溶液（濃度為250mg/ml）。用水補足到1.0毫升，

然後每支試管加入5毫升試劑甲，在旋渦混合器上迅速混合，於室溫（20～25℃）放置10分鍾。再逐管加入0.5毫升試劑乙（folin—酚試劑），同樣立即混勻。

這一步混合速度要快，否則會使顯色程度減弱。然後在室溫下放置30分鍾，以未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照，於700nm處測定各管中溶液的吸光度值。以蛋白質的量為橫座標，吸光度值為縱座標，繪制出標准曲線。

注意：因lowry反應的顯色隨時間不斷加深，因此各項操作必須精確控制時間，即第1支試管加入5毫升試劑甲後，開始計時，1分鍾後，第2支試管加入5毫升試劑甲，2分鍾後加第3支試管，余此類推。

全部試管加完試劑甲後若已超過10分鍾，則第1支試管可立即加入0.5毫升試劑乙，1分鍾後第2支試管加入0.5毫升試劑乙，2分鍾後加第3支試管，余此類推。待最後一支試管加完試劑後，再放置30分鍾，然後開始測定光吸收。

每分鍾測一個樣品。 進行多試管操作時，為了防止出錯，每位學生都必須在實驗記錄本上預先畫好下面的表格。表中是每個試管要加入的量（毫升），並按由左至右，由上至下的順序，逐管加入。最下面兩排是計算出的每管中蛋白質的量（微克）和測得的吸光度值。

folin—酚試劑法實驗表 管號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 標准蛋白質 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 （250mg/ml） 未知蛋白質 0.2 0.4 0.6 （約250mg/ml）

蒸餾水 1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.8 0.6 0.4 試劑甲 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 試劑乙 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 每管中蛋白質的量（mg） 吸光度值（a700）

（2）樣品的測定：取1毫升樣品溶液（其中約含蛋白質20~250微克），按上述方法進行操作，取1毫升蒸餾水代替樣品作為空白對照。

通常樣品的測定也可與標准曲線的測定放在一起，同時進行。即在標准曲線測定的各試管後面，再增加3個試管。如上表中的8、9、10試管。

根據所測樣品的吸光度值，在標准曲線上查出相應的蛋白質量，從而計算出樣品溶液的蛋白質濃度。

注意:由於各種蛋白質含有不同量的酪氨酸和苯丙氨酸，顯色的深淺往往隨不同的蛋白質而變化。因而本測定法通常只適用於測定蛋白質的相對濃度（相對於標准蛋白質）。

四、改良的簡易folin—酚試劑法

1、試劑

（1）試劑甲：鹼性銅試劑溶液中，含0.5n 氯化鈉、10%碳酸鈉、0.1%酒石酸鉀和0.05%硫酸銅，配製時注意硫酸銅用少量蒸餾水溶解後，最後加入。

（2）試劑乙：與前面的基本法相同。臨用時加蒸餾水稀釋8倍。

（3）標准蛋白質溶液：同基本法。

2、操作步驟 測定標准曲線與樣品溶液的操作方法與基本法相同。只是試劑甲改為1毫升，室溫放置10分鍾後，試劑乙改為4毫升。在55℃恆溫水浴中保溫5分鍾。

用流動水冷卻後，在660nm下測定其吸光度值。 改良的快速簡易法，可獲得與 folin—酚試劑法（即lowry基本法）相接近的結果。

五、考馬斯亮蘭法（bradford法）

1、實驗原理 雙縮脲法（biuret法）和folin—酚試劑法（lowry法）的明顯缺點和許多限制，促使科學家們去尋找更好的蛋白質溶液測定的方法。

1976年由bradford建立的考馬斯亮蘭法（bradford法），是根據蛋白質與染料相結合的原理設計的。這種蛋白質測定法具有超過其他幾種方法的突出優點，因而正在得到廣泛的應用。

這一方法是目前靈敏度最高的蛋白質測定法。 考馬斯亮蘭g-250染料，在酸性溶液中與蛋白質結合，使染料的最大吸收峰的位置（lmax），由465nm變為595nm，溶液的顏色也由棕黑色變為蘭色。

經研究認為，染料主要是與蛋白質中的鹼性氨基酸（特別是精氨酸）和芳香族氨基酸殘基相結合。 在595nm下測定的吸光度值a595，與蛋白質濃度成正比。

2、試劑與器材

（1）試劑：

a、標准蛋白質溶液，用球蛋白或牛血清清蛋白，配製成1.0mg/ml和0.1mg/ml的標准蛋白質溶液。

b、考馬斯亮蘭g—250染料試劑：稱100mg考馬斯亮蘭g—250，溶於50ml 95%的乙醇後，再加入120ml 85%的磷酸，用水稀釋至1升。

（2）器材：

a、可見光分光光度計

b、旋渦混合器

c、試管16支

3、操作方法

（1）標准方法

a、取16支試管，1支作空白，3支留作未知樣品，其餘試管分為兩組按表中順序，分別加入樣品、水和試劑，即用1.0mg/ml的標准蛋白質溶液給各試管分別加入：0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml，然後用無離子水補充到0.1ml。

最後各試管中分別加入5.0ml考馬斯亮蘭g—250試劑，每加完一管，立即在旋渦混合器上混合（注意不要太劇烈，以免產生大量氣泡而難於消除）。未知樣品的加樣量見下表中的第8、9、10管。

b、加完試劑2-5分鍾後，即可開始用比色皿，在分光光度計上測定各樣品在595nm處的光吸收值a595，空白對照為第1號試管，即0.1ml水加5.0mg—250試劑。

注意：不可使用石英比色皿（因不易洗去染色），可用塑料或玻璃比色皿，使用後立即用少量95%的乙醇盪洗，以洗去染色。塑料比色皿決不可用乙醇或丙酮長時間浸泡。

考馬斯亮蘭法實驗表管號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 標准蛋白質 0 0.01 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 (1.0mg/ml) 未知蛋白質 0.02 0.04 0.06 (約1.0mg/ml)

蒸餾水 0.1 0.09 0.08 0.06 0.04 0.02 0 0.08 0.06 0.04 考馬斯亮藍 g－250試劑 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 每管中的蛋 白質量（mg） 光吸收值 （a595）

c、用標准蛋白質量（mg）為橫座標，用吸光度值a595為縱座標，作圖，即得到一條標准曲線。由此標准曲線，根據測出的未知樣品的a595值，即可查出未知樣品的蛋白質含量。 0.5mg牛血清蛋白/ml溶液的a595約為0.50。

（2）微量法 當樣品中蛋白質濃度較稀時（10－100mg/ml）,可將取樣量（包括補加的水）加大到0.5ml或1.0ml, 空白對照則分別為0.5ml或1.0ml水，考馬斯亮藍g－250試劑仍加5.0ml，同時作相應的標准曲線，測定595nm的光吸收值。 0.05mg牛血清蛋白/ml溶液的a595約為0.29。

❹ 鉬酸鈉水溶液顯鹼性的原理

碳酸鈉中碳酸根離子的水解而使碳酸鈉的水溶液顯鹼性
CO3(2-)+H2O<=====>HCO3(-)+OH-
水解生成OH-，所以顯鹼性
強酸弱鹼有顯酸性,強鹼弱酸鹽顯鹼性.
如NH4Cl,AgNO3,FeCl3顯酸性.
Na2CO3,NaHCO3,Na2S顯鹼性.
「誰強顯誰性」.
從鹼性粗鉬酸鈉溶液中萃取鉬製取純鉬酸銨溶液的方法。該方法採用甲基三烷基銨的碳酸鹽或甲基三烷基銨的碳酸氫鹽為萃取劑直接從鹼性粗鉬酸鈉溶液中萃取鉬，雜質磷、砷、硅等留在萃余液中而與鉬分離，負鉬有機相用碳酸氫銨溶液或碳酸氫銨和碳酸銨的混合溶液為反萃劑反萃取得到純鉬酸銨溶液。本發明在實現鉬酸鈉溶液向鉬酸銨溶液轉型的同時除去了磷、砷、硅等雜質，萃余液經適當處理後可返回浸出使用，工藝流程短，化學試劑消耗小，廢水排放量小，易於工業化實現。

❺ 生活污水化驗總磷總氮怎麼化驗有詳細的步驟嗎謝謝

國標有，附送後面。

其實你可以選擇一套總磷快速檢測儀，簡單測定，准確，這有操作視頻可以看看：http://www.qdhjhbjc.com/proct/158.html

工業循環冷卻水中總磷酸鹽測定方法

HG 5-1515-85

磷鉬蘭分光光度法

本方法適用於測定磷系循環冷卻水中總磷酸鹽（包括正磷酸鹽、無機聚磷酸鹽及有機磷酸鹽）。

1.方法提要

本方法採用強氧化劑過硫酸銨加熱分解有機磷酸鹽及聚磷酸鹽為正磷酸鹽，用硫酸肼還原磷鉬黃為磷鉬蘭後進行分光光度測定。

2.儀器與試劑

2.1儀器

2.1.1分光光度計：660nm；

2.1.2電爐：500W

2.2試劑

2.2.1硫酸：1N溶液；

2.2.2亞硫酸鈉：固體或市售的亞硫酸鈉片劑；

2.2.3甲醇；

2.2.4硫酸肼：0.15%水溶液；

2.2.5過硫酸銨：

2.2.6無水硫酸鈉：

3.准備工作

3.1鉬酸鈉——硫酸溶液：

將100ml濃硫酸慢慢地加到500ml水中，冷卻至室溫（A液）。另稱取10g鉬酸鈉溶於400ml水中（B液）。然後將A液加到B液中，混勻，貯存在聚乙烯瓶中；

3.2 過硫酸銨——硫酸鈉分解劑：

稱取0.8g過硫酸銨和4.2g無水硫酸鈉混合均勻或使用市售的過硫酸銨—硫酸鈉片劑。

3.3磷酸鹽標准溶液的配製：1ml=0.1毫克PO43-。

3.3.1 貯備液：稱取0.7165g於105℃乾燥過的磷酸二氫鉀，溶於水中，轉入1升容量瓶，稀釋至刻度搖勻，此溶液1ml=0.5mgPO43-。

3.3.2標准液：吸取100ml貯備液於500ml容量瓶中，稀釋至刻度。此溶液1ml=0.1mgPO43-。

3.3標准曲線繪制：

3.3.1取50ml比色管7支，用移液管分別加入0、0.5、1、2、3、4、5ml磷酸鹽標准溶液，用水稀釋至15ml。

3.3.2用移液管向所有各管中加入4ml鉬酸鈉——硫酸溶液及1ml硫酸肼溶液，混勻後，放入沸水浴中，到水浴煮沸後10分鍾取出，立即用流水冷卻，用水稀釋至刻度，混勻後，用25px比色皿，在波長660nm處，以試劑空白為對照，測定其吸光度，並以吸光度為縱坐標，磷酸鹽（以PO43-計）毫克數為橫坐標，繪制標准曲線。

4、試驗步驟

4.1用移液管吸取10ml經慢速過濾紙過濾後水樣於100ml錐形瓶中，加入1ml1N硫酸溶液及50mg過硫酸銨——硫酸鈉分解劑，將錐形瓶放置在置有石棉網的小電爐上，均勻加熱至溶液剛好乾並冒濃厚白煙為止。

4.2稍冷，加入10ml水，4——40mg亞硫酸鈉粉末或10滴甲醇，再在電路上微沸30——60秒，取下。將溶液小心轉移到50ml比色管中，並用少量水沖洗原錐形瓶幾次，（少量多次原則），洗液並入比色管中，（溶液控制在25ml左右）。

4.3加入10ml鉬酸鈉——硫酸鈉——硫酸溶液及1ml硫酸肼溶液，放入已煮沸的水浴中10分鍾後取出，流水冷卻，用水稀釋至刻度，立即用25px比色皿，在660nm 波長處，以試劑空白作對照測定其吸光度，從標准曲線上查得相應總磷酸鹽的含量。

註：①蒸干這一步是本方法的關鍵，因此應小心操作。

②如循環水中有機物較多，過硫酸銨——硫酸鈉分解劑可適當多加些。當蒸干冒白煙時有機物碳化變黑，這時應在加亞硫酸鈉微沸後進行過濾。

5、計算

試樣中總磷酸鹽含量X（毫克/升）按下式計算：

a

X= ——×1000

V

式中a——從標准曲線上查得相映的磷酸鹽（以PO43-計）毫克數。

V——吸取水樣的毫升數。

有機磷酸鹽（以PO43-計，毫克/升）=總磷酸鹽-總無機磷酸鹽

有機磷酸鹽（以EDTMP酸計，毫克/升）=有機磷酸鹽（以PO43-計）×1.15

有機磷酸鹽（以HEDP酸計，毫克/升）=有機磷酸鹽（以PO43-計）×1.08

有機磷酸鹽（以ATMP酸計，毫克/升）=有機磷酸鹽（以PO43-計）×1.04

1.08——系PO43-換算為HEDP酸的系數。

1.15——系PO43-換算為EDTMP酸的系數。

1.04——系PO43-換算為ATMP酸的系數。

6、容許差

6.1平行測定兩個結果間的差數不大於：

總磷含量（毫克/升）

差數（毫克/升）

<10

10——20

0. 3

1. 0

6.2 取平行測定兩個結果的算術平均值作為水樣中總磷酸鹽（以PO43-計）的含量。

工業循環冷卻水中正磷酸鹽測定方法

HG 5-1515-85

磷鉬蘭分光光度法

本方法適用於測定磷系循環冷卻水和磷-鋅預膜體系中0-3mg/l PO43-的正磷酸鹽。

1.方法提要

在酸性介質中磷酸鹽與鉬酸鈉生成磷鉬雜多酸，再被氯化亞錫還原成磷鉬藍後進行分光光度比色測定。

2.儀器與試劑

2.1儀器

2.1.1分光光度計：660nm；

2.1.2定性濾紙，慢速。

2.2試劑

2.2.1鉬酸鈉——硫酸溶液；

2.2.2氨磺酸：分析純，10%水溶液；

2.2.3氯化亞錫-甘油溶液：稱取分析純的氯化亞錫2.5克加入100毫升分析純的甘油中，促使其溶解。

3.准備工作

3.1 鉬酸鈉——硫酸溶液：

將100ml濃硫酸慢慢地加到500ml水中，冷卻至室溫（A液）。另稱取10g鉬酸鈉溶於400ml水中（B液）。然後將A液加到B液中，混勻，貯存在聚乙烯瓶中；

3.2磷酸鹽標准溶液的配製：1ml=0.01毫克PO43-。

3.2.1 貯備液：稱取0.7165g於105℃乾燥過的磷酸二氫鉀，溶於水中，轉入1升容量瓶，稀釋至刻度搖勻，此溶液1ml=0.5mgPO43-。

3.2.2標准液：吸取10ml貯備液於500ml容量瓶中，稀釋至刻度。此溶液1ml=0.01mgPO43-。

3.3標准曲線繪制：

3.3.1取50ml比色管6支，用移液管分別加入0、1、3、5、7、9ml磷酸鹽標准溶液，用水稀釋至40ml。

3.3.2用移液管向所有各管中加入7ml鉬酸鈉——硫酸溶液，混勻後用水稀釋至刻度，加入5滴氯化亞錫-甘油溶液，混勻後，放置10分鍾後立即用25px比色皿，在波長660nm處，以試劑空白為對照，測定其吸光度，並以吸光度為縱坐標，磷酸鹽（以PO43-計）毫克數為橫坐標，繪制標准曲線。

4、試驗步驟

4.1用移液管吸取25ml經慢速過濾紙過濾後水樣（磷-鋅預膜液可根據磷酸鹽含量適當少取）於50ml比色管中，加入氨磺酸4毫升，放置1分鍾用蒸餾水稀釋至40毫升左右。

4.2用移液管向所有各管中加入7ml鉬酸鈉——硫酸溶液，混勻後用水稀釋至刻度，加入5滴氯化亞錫-甘油溶液，混勻後，放置10分鍾後立即用25px比色皿，在波長660nm處，以試劑空白為對照，測定其吸光度，從標准曲線上查得相應正磷酸鹽的含量。

5、計算

試樣中正磷酸鹽含量X（毫克/升）按下式計算：

a

X= ——×1000

V

式中a——從標准曲線上查得相映的磷酸鹽（以PO43-計）毫克數。

V——吸取水樣的毫升數。

6、容許差

6.1平行測定兩個結果間的差數不大於：

正磷含量（毫克/升）

差數（毫克/升）

<10

10——20

0. 3

1. 0

6.2 取平行測定兩個結果的算術平均值作為水樣中正磷酸鹽（以PO43-計）的含量。

工業循環冷卻水中總無機磷酸鹽測定方法

HG 5-1515-85

磷鉬蘭分光光度法

本方法適用於測定磷系循環冷卻水和磷-鋅預膜體系50mg/l以下的總無機磷酸鹽（包括正磷酸鹽、無機聚磷酸鹽）。

1.方法提要

在煮沸情況下聚磷酸鹽逐步水解，與鉬酸鈉生成磷鉬黃多酸被硫酸肼還原為磷鉬蘭後進行分光光度比色測定。

2.儀器與試劑

2.1儀器

2.1.1分光光度計：660nm；

2.1.2電爐：500W

2.2試劑

2.2.1鉬酸鈉——硫酸溶液；

2.2.2亞硫酸鈉：固體或市售的亞硫酸鈉片劑；

2.2.3硫酸肼：0.15%水溶液；

3.准備工作

3.1鉬酸鈉——硫酸溶液：

將100ml濃硫酸慢慢地加到500ml水中，冷卻至室溫（A液）。另稱取10g鉬酸鈉溶於400ml水中（B液）。然後將A液加到B液中，混勻，貯存在聚乙烯瓶中；

3.2磷酸鹽標准溶液的配製：1ml=0.1毫克PO43-。

3.2.1 貯備液：稱取0.7165g於105℃乾燥過的磷酸二氫鉀，溶於水中，轉入1升容量瓶，稀釋至刻度搖勻，此溶液1ml=0.5mgPO43-。

3.2.2標准液：吸取100ml貯備液於500ml容量瓶中，稀釋至刻度。此溶液1ml=0.1mgPO43-。

3.3標准曲線繪制：

3.3.1取50ml比色管7支，用移液管分別加入0、0.5、1、2、3、4、5ml磷酸鹽標准溶液，用水稀釋至15ml。

3.3.2用移液管向所有各管中加入4ml鉬酸鈉——硫酸溶液及1ml硫酸肼溶液，混勻後，放入沸水浴中，到水浴煮沸後10分鍾取出，立即用流水冷卻，用水稀釋至刻度，混勻後，用25px比色皿，在波長660nm處，以試劑空白為對照，測定其吸光度，並以吸光度為縱坐標，磷酸鹽（以PO43-計）毫克數為橫坐標，繪制標准曲線。

4、試驗步驟

4.1用移液管吸取10ml經慢速過濾紙過濾後水樣（磷-鋅預膜液可根據磷酸鹽含量適當少取）於50ml比色管中，加入30—60mg亞硫酸鈉粉末及10ml鉬酸鈉—硫酸溶液，放入已煮沸的水浴中10分鍾後取出。

4.2加入1ml硫酸肼溶液，放入已煮沸的水浴中10分鍾後取出，流水冷卻，用蒸餾水稀釋至刻度，立即用25px比色皿，在660nm 波長處，以試劑空白作對照測定其吸光度，從標准曲線上查得相應總無機磷酸鹽的含量。

5、計算

試樣中總無機磷酸鹽含量X（毫克/升）按下式計算：

a

X= ——×1000

V

式中a——從標准曲線上查得相映的磷酸鹽（以PO43-計）毫克數。

V——吸取水樣的毫升數。

有機磷酸鹽（以PO43-計，毫克/升）=總磷酸鹽-總無機磷酸鹽

有機磷酸鹽（以EDTMP酸計，毫克/升）=有機磷酸鹽（以PO43-計）×1.15

有機磷酸鹽（以HEDP酸計，毫克/升）=有機磷酸鹽（以PO43-計）×1.08

有機磷酸鹽（以ATMP酸計，毫克/升）=有機磷酸鹽（以PO43-計）×1.04

1.08——系PO43-換算為HEDP酸的系數。

1.15——系PO43-換算為EDTMP酸的系數。

1.04——系PO43-換算為ATMP酸的系數。

6、容許差

6.1平行測定兩個結果間的差數不大於：

總無機磷含量（毫克/升）

差數（毫克/升）

<10

10——20

0. 3

1. 0

6.2 取平行測定兩個結果的算術平均值作為水樣中總無機磷酸鹽（以PO43-計）的含量。

❻ 二硫化鉬的理化性質

二硫化鉬，molybdenum disulfide
輝鉬礦的主要成分。黑色固體粉末，有金屬光澤。化學式MoS2，熔點1185℃，密度4.80g/cm3（14℃），莫氏硬度1.0～1.5。1370℃開始分解，1600℃分解為金屬鉬和硫。315℃在空氣中加熱時開始被氧化，溫度升高，氧化反應加快。二硫化鉬不溶於水、稀酸和濃硫酸，一般不溶於其他酸、鹼、有機溶劑中，但溶於王水和煮沸的濃硫酸。
400 ℃發生緩慢氧化，生成三氧化鉬：
2 MoS2+ 7 O2→ 2 MoO3+ 4 SO2可以用鈦鐵試劑來檢驗生成的三氧化鉬。首先將產物用氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液處理（原理是將三氧化鉬轉化為鉬酸鹽），然後滴加鈦鐵試劑溶液，會和生成的鉬酸鈉或鉬酸鉀反應，產生金黃色溶液。這種方法很靈敏，微量的鉬酸鹽都能被檢測出來。而如果沒有三氧化鉬生成，溶液就不會產生金黃色，因為二硫化鉬不和氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液反應。
二硫化鉬加熱可以和氯氣反應，生成五氯化鉬：2 MoS2+ 7 Cl2→ 2 MoCl5+ 2 S2Cl2
二硫化鉬和烷基鋰在控制下反應，形成嵌入化合物（夾層化合物）LixMoS2。如果和丁基鋰反應，那麼產物為LiMoS2。
二硫化鉬具有高含量活性硫，容易對銅造成腐蝕，在很多關於潤滑劑添加劑方面的書籍、論文中都有論述。另外，有銅及其合金製造的部位需要潤滑時，並非不可以選用含二硫化鉬潤滑產品，而是還需要添加防銅腐蝕劑。

❼ 鉬酸鈉的檢測方法

檢測鉬含量然後換算下就出來了

❽ 如果在食用油工廠做化驗員，應做哪些指標的檢驗方法是什麼

一般就油脂的理化指標：酸價、過氧化值、碘價、水分、色澤、氣味等，再高一點就是用氣相色譜對他的營養成分進行分析啊。

❾ 熒光光度法原理

方法提要

水樣用高氯酸-硫酸-鉬酸鈉消化，再用鹽酸將硒(Ⅵ)還原為硒(Ⅳ)。在酸性條件下，硒(Ⅳ)與2，3-二氨基萘反應生成有綠色熒光的4，5-苯並苤硒腦，用環己烷萃取，在激發波長376nm，發射波長520nm下，進行熒光光度法測定。

本法適用於海水、天然水中總硒的測定，若試樣不經酸處理，可直接測定四價硒的含量。方法檢出限為0.2μg/L。

儀器和裝置

熒光分光光度計。

電動振盪器。

試劑

鹽酸。

高氯酸。

硫酸。

去硒硫酸量取200mLH₂SO₄在攪拌下，徐徐加入200mL水中，加30mLHBr，混勻，置沙浴上加熱至冒白煙。

氫溴酸。

氫氧化銨。

環己烷若有熒光雜質需重蒸餾提純，用過的環己烷重蒸餾後可再使用。

EDTA溶液(0.2mol/L)稱取37gEDTA二鈉鹽於250mL燒杯中，加適量水，加熱溶解，冷卻後稀釋至500mL。

鹽酸羥胺溶液(100g/L)稱取10gNH₂OH·HCl於100mL燒杯中，用水溶解後，並稀釋至100mL。

EDTA-鹽酸羥胺混合溶液量取100mL0.2mol/LEDTA、10mL100g/L鹽酸羥胺溶液，加水稀釋至1000mL。

2，3-二氨基萘(DAN)溶液(1g/L)稱取400mgDAN於500mL燒杯中，加400mL0.1mol/LHCl溶解，然後轉入1000mL錐形分液漏斗中(漏斗頸部塞有脫脂棉)，在振盪器上振盪15min使其全部溶解。加入80mL環己烷再振盪5min，靜置分層後，收集水相，棄去有機相，如此反復純化數次，直至有機相的熒光強度降到接近純環己烷的熒光強度為止。將純化後的DAN溶液貯存於棕色瓶中，加入環己烷使其覆蓋液面約1cm厚，置於冰箱中保存，有效期一個月。

高氯酸-硫酸-鉬酸鈉混合溶液稱取7.5g鉬酸鈉(Na₂MoO₄·7H₂O)溶於150mL水中，加入200mLHClO₄和150mL去硒H₂SO₄，混勻。貯存於500mL試劑瓶中。

硒標准儲備溶液ρ(Se)=0.40mg/mL稱取0.1405g二氧化硒(SeO₂，純度99.9%)於50mL燒杯中，用適量水溶解後，移入250mL容量瓶中，加0.1mol/LHCl至標線，混勻。

硒標准溶液ρ(Se)=0.100μg/mL用0.1mol/LHCl逐級稀釋硒標准儲備溶液配製。

甲酚紅指示液(0.4g/L)稱取40mg甲酚紅於100mL燒杯中，加少量水及2滴(1+1)NH₄OH溶解，加水至100mL。

校準曲線

取6個50mL燒杯，分別加入0.00mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL和4.00mL硒標准溶液，加水稀釋至約10mL，混勻。

加5mL混合酸溶液，在沙浴中加熱消化至冒濃白煙，至溶液變黃(約2h)。取下冷卻至室溫，溶液恢復為無色，用水釋至約10mL。加5mLHCl，將燒杯放在沙浴表面加熱至溶液變黃為止。取下冷卻至室溫。

將溶液移到50mL比色管中，用少量水洗凈燒杯，洗液並入比色管中。加5mLEDTA-鹽酸羥胺混合溶液，4～5滴(0.4g/L)甲酚紅指示液，用(1+1)NH₄OH或0.1mol/LHCl調節pH為1.5～2.0(粉橙色)，加3.0mLDAN溶液，搖勻，置沸水浴中加熱5min取下冷卻到室溫。將溶液移入60mL分液漏斗中，用少量水洗滌比色管，洗液並入分液漏斗中。加3.0mL環己烷，振搖4min，分層後棄去水相。

將環己烷層從分液漏鬥口到入1cm比色皿中，在熒光分光光度計上，以376nm為激發波長，520nm為發射波長，環己烷為參比，測定硒的熒光強度I_i。以熒光強度I_i-I₀(標准空白)為縱坐標，相應硒含量(μg)為橫坐標繪制校準曲線。

分析步驟

量取5.00～50.0mL海水樣，於50mL燒杯中加5mL混合酸溶液，在沙浴中加熱消化至冒濃白煙，至溶液變黃(約2h)。以下按制定校準曲線步驟測定熒光強度I_w。同時測定分析空白熒光強度I_b。

由I_w-I_b查校準曲線得硒量，海水樣硒濃度的計算參見式(78.30)。

注意事項

1)配製DAN溶液時應在暗處進行。

2)在沸水浴上加熱5min後，用冷水冷卻的時間控制在10min內。否則結果會稍偏低。

3)甲酚紅指示劑有兩個變色范圍，當pH2～3時由紅變黃，pH7.2～8.8時由黃變紅。本方法中調節pH為1.5～2.0時至粉橙色，pH<1.5為桃紅色。因此調pH時要注意顏色變化，必要時可用精密pH試劑確證。

4)玻璃器皿用HNO₃溶液浸洗2～3d，洗凈後使用。

5)試樣制備。海水樣品用玻璃或塑料采樣器採集，水樣應及時經0.45μm濾膜(濾膜預先在0.5mol/LHCl中浸泡12h，用純水沖洗至中性，密封待用)過濾，並用HNO₃酸化至pH<2，貯存於聚乙烯塑料瓶或硬質玻璃瓶中，再以聚乙烯薄膜袋包封樣品瓶。

6)水樣體積的校正。在量取測定水樣之前向水樣加入的試劑溶液超過1%體積時，按式(78.31)進行體積校正。

7)水樣中硒含量低時，可增加水樣體積至50mL，對測定無影響。