檢測抗原抗體為什麼選用不同方法

⑴ 熒光抗體檢測技術和ELISA有什麼相同與不同之處

相同點：都利用了抗原抗體。

不同點：

一、性質不同

1、熒光抗體檢測技術性質：用熒光物標記抗體來檢測細胞或組織中相應抗原或抗體的技術。

2、ELISA性質：將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結合進行免疫反應的定性和定量檢測方法。

二、特點不同

1、熒光抗體檢測技術特點：本法較其他鑒定細菌的血清學方法速度快、操作簡單、敏感性高，但在細菌實驗診斷中，一般只能作為一種補充手段使用，而不能代替常規診斷。熒光抗體染色法對腦膜炎奈氏菌、痢疾志賀菌、霍亂弧菌、布氏桿菌和炭疽桿菌等的實驗診斷有較好效果。

2、ELISA特點：結合了酶的親和素分子與結合有特異性抗體的生物素分子產生反應，既起到了多級放大作用，又由於酶在遇到相應底物時的催化作用而呈色，達到檢測未知抗原（或抗體）分子的目的。

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熒光抗體檢測技術和ELISA的其它相關介紹：

熒光抗體技術已廣泛應用於細菌、病毒、寄生蟲的臨床檢測和自身免疫性疾病的診斷。主要用於細菌學試驗中的細菌鑒定。標本材料可以是培養物、感染組織、患者分泌的排泄物等，間接熒光染色法可用於流行病學調查和臨床回顧性診斷。

ELISA操作步驟復雜，影響反應因素較多，特別是固相載體的包衣很難達到個體間的一致性。因此，在定量測定中，應採用一系列不同濃度的參比標准，在相同條件下繪制標准曲線。

⑵ 免疫技術中競爭法可以測大分子抗原嗎

可以的 因為ELISA中有一種方法是競爭法測抗體，一般的抗原應該沒有抗體大吧IgG有15KD的，但是個人感覺就好像你拿1000ul的移液器去吸取0.5ul一樣，准確率不敢保證，原理上來說是沒問題的，下例：
抗體的測定一般不使用競爭法。當抗原中雜質難以去除或抗原的結合特異性不穩定時，可採用這種模式測定抗體。如乙型肝炎病毒核心抗體(HBcAb)和乙型肝炎病毒e抗體(HBe•Ab)的測定，由於e抗原較核心抗原僅多29個氨基酸，e抗原很容易轉變為核心抗原，因此，HBcAb和HBeAb的測定均採用競爭法。但其測定具體模式有區別。

⑶ ELISA直接法和雙抗體夾心法檢測抗原的區別

直接法需要先把抗原吸附到盤子的表面，然後再加抗體。

而間接法盤子表面是事先吸附好了抗體，便於大規模的商業化生產。更重要的是，間接法可以使用統一的標記二抗，這樣即使「免疫第二種動物獲得的抗體」千變萬化，只要都是來源於同一種動物，就可以使用一樣的二抗。大大減少標記不同抗體的時間和花費。

直接法需要先純化抗原，再吸附。費時費力

⑷ 為什麼雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法

1）將特異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。 2） 加受檢標本，保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。 洗滌除去其他未結合物質。 3） 加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合 的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。 4） 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。通過比色，測知標本中抗原的量。 在臨床檢驗中，此法適用於檢驗各種蛋白質等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、 AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用於包被固相載體和制備酶結合 物而建立此法。如抗體的來源為抗血清，包被和酶標用的抗體最好分別取自不同種屬的動 物。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用於包被固相 載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標 抗體一起保溫反應，作一步檢測。 在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標 抗體結合，而不再形成夾心復合物。類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象，此時反應 後顯色的吸光值（位於抗原過剩帶上）與標准曲線（位於抗體過剩帶上）某一抗原濃度的 吸光值相同（參見1.3.2，圖1-4），如按常法測讀，所得結果將低於實際的含量，這種現 象被稱為鉤狀效應（hook effect），因為標准曲線到達高峰後呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重 時，反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常 增高的物質（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應注意可測范圍的最高值。用 高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。 假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可 用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型 問題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應 性，這也是用單抗作夾心法應注意的問題。 雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子（RF）的干擾。RF是一種自身抗體，多為IgM型，能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF，它可充當抗原成份，同時與固相抗體和酶標抗體結合，表現出假陽性反應。採用F（ab'）或Fab片段作酶結合物的試劑，由於去除了Fc段，從而消除RF的干擾。 雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為這類試劑的一項考核指標。 雙抗體夾心法適用於測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用於測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。

⑸ 為什麼雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法

雙抗體夾心法適用於測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用於測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。那麼，為什麼雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法?
1、將特異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。
2、加受檢標本，保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。 洗滌除去其他未結合物質。
3、加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合 的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。
4、 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。

⑹ 高中生物，為什麼是用抗原抗體雜交法呢不是檢測基因的表達嗎

檢測基因的表達用的就是抗原抗體雜交法。
先製成抗體，再與受體細胞的抽取物進行抗原抗體雜交實驗，其中目的基因的表達產物是抗原。

⑺ 免疫學技術知識總結 第三章

第三章 經典免疫學技術

第一節 沉澱反應

一、沉澱反應的原理

沉澱反應：可溶性抗原與相應抗體在溶液或者凝膠中特異性結合後，如果兩者比例合適，可相互作用形成不溶性的免疫復合物，出現肉眼可見的不溶性沉澱物。（比例合適時，由分子熱運動引起。）

二、沉澱反應的類型

（一）溶液中的沉澱反應

是指在清澈透明的特異當中，呈現溶解狀態的抗原與抗體在試管內或凹薄片上混勻，可凝聚成為肉眼可見的須狀或顆粒狀的不溶性物質。

溶液中沉澱反應有：

1.     絮狀沉澱反應

絮狀沉澱法就是指將抗原與抗體相結合之後在適當的電解質存在條件下，抗原抗體形成肉眼可見的絮狀沉澱物。

特點：方法受抗原抗體比例的影響顯著；應用於測定抗原抗體反應的合適比例上。

絮狀沉澱法的三種方法：

抗原稀釋法：抗原最適比例

抗體稀釋法：抗體最適比例

方陣滴定法：抗原抗體最適比例

2.     環狀沉澱反應

環狀沉澱法是又叫毛細管內沉澱反應，是常見的一種檢測抗原抗體濃度的方法。在毛細管內，上面是抗原，下面是抗體，中間有一道平衡區即為沉澱，但假如不同種抗原或者抗體之後，就會發現不同濃度的抗原抗體所形成的環狀沉澱位置不同。抗原濃度越高，抗體濃度越低，出現的的沉澱越接近管底部。

1.     免疫比濁法

免疫比濁法的基本原理是：當抗原與抗體在特殊稀釋系統中反應而且比例合適時，形成的可溶性免疫復合物在稀釋系統中的促聚劑（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應液出現濁度。當抗體濃度固定時，形成的免疫復合物的量隨著檢樣中抗原量的增加而增加，反應液的濁度也隨之增加。通過測定反應液的濁度與一系列標准品對照，即可計算出檢樣中抗原的含量。

優點在於：矯正曲線穩定、簡便快速、已與自動化、沒有放射性核素污染。缺點在於靈敏度差，特異性較差。

免疫比濁法的分類：透射比濁法、散射比濁法、免疫膠乳濁度測定法、速率抑制免疫比濁法

2.     免疫沉澱技術（經典免疫學沉澱技術）

加入特異性抗體、沉澱試劑形成混合抗原，離心沉澱之後沉澱抗原，經過電泳分離之後放射自顯彰。

3.     免疫共沉澱技術

免疫共沉澱技術的原理：當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在argarose

beads上的蛋白質A的抗體免疫沉澱A蛋白，那麼與A蛋白在體內結合的蛋白質B也能一起沉澱下來。再通過蛋白變性分離，對B蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。

優點在於：1.可以檢測細胞內相互作用蛋白質的天然活性，2.檢測證實細胞環境中的蛋白質相互作用，3.獲得天然狀態下的相互作用的蛋白質復合物。

免疫共沉澱的局限性在於：1.難以檢測低親和力和短暫的相互作用。2.不能確切的分辨第三種蛋白的橋聯作用。3.靈敏度不如親和色譜高。4.需要對未知蛋白有一定新的了解。

免疫沉澱的應用范圍：應用於蛋白質相對含量的測定，蛋白質修飾水平等分析，蛋白質相互作用的研究。

（二）凝膠中的沉澱反應

1.     單向免疫擴散實驗：在瓊脂糖中加入抗體，形成抗體凝膠，抗原加入後，抗原根據濃度大小自由擴散，與抗體形成沉澱環，抗原濃度越大，沉澱環越大。

2.     雙向免疫擴散試驗：抗原抗體都會發生擴散，但兩者相互擴散形成沉澱線之後就表示出了濃度，形成的沉澱線離抗原越近，說明抗原的濃度越大。

3.     免疫電泳：免疫電泳法是將抗原樣品在瓊脂平板上先進行電泳，使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開，然後加入抗體做雙相免疫擴散，把已分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴散而使其相遇，在二者比例適當的地方，形成肉眼可見的沉澱弧。多用來分析抗原比較復雜的抗原復合物。

4.     火箭電泳試驗：凝膠含有抗體，叫抗原跑膠之後形成峰值，峰值越高，說明抗原濃度越高。

5.     免疫印跡技術：WB將混合抗原樣品在凝膠板上進行單向或雙向電泳分離, 然後取固定化基質膜與凝膠相貼。在印跡紙的自然吸附力、電場力或其它外力作用下, 使凝膠中的單一抗原組份轉移到印跡紙上, 並且固相化。最後應用免疫覆蓋液技術如免疫同位素探針或免疫酶探針等, 對抗原固定化基質膜進行檢測和分析。

第二節 凝集反應

一、凝集反應原理

凝集反應：顆粒型抗原與相應抗體結合，在適當電解質純愛下，形成肉眼可見的凝集團塊。凝集原和凝集素

凝集反應的特點：

1.

凝集反應中抗原顆粒較大，長期浸漬或者沉澱可以自然沉降。

2.凝集反應中凝集塊主要由抗原組成，沉澱反應中沉澱塊主要有抗體組成。

3.在您肌膚那英中，需要稀釋免疫血清中的抗體，是抗體不至於過多；而在沉澱反應中，為了防止抗原過多們一般都會稀釋抗原（即沉澱反應中的抗體過量，凝集反應中一般都是抗原過量）

二、凝集反應的類型

1.直接凝集反應：是將細菌或紅細胞與其相應抗體結合產生的細菌凝集或者紅細胞凝集。

（1）微生物凝集反應：肥達式反應，用已知的傷寒桿菌O、H抗原與甲乙型副傷寒桿菌H抗原，與病人的血清做定量凝集試驗，一測定患者血清中無相應抗體的存在，作為傷寒、副傷寒的診斷參考。

（2）同種紅細胞凝集反應：血型檢驗

2.間接凝集反應：將可溶性抗原（或抗體）包被在不溶性顆粒表面，與響應抗體（或抗原）在適宜條件下結合形成凝集團塊。

反應類型：

（1）正向間接凝集反應：將抗原先吸附在載體表面，然後與相應的抗體結合產生的凝集反應。

（2）反向間接凝集反應：將特異性抗體先結合在載體表面，然後與相應的抗原發生凝集反應。

（3）間接凝集抑制反應：先將可溶性抗原（或抗體）與相應的抗體（或抗原）混合，然後再加入抗原（或抗體）致敏的載體顆粒，若出現凝集現象，則說明標本中不存在相同抗原，抗體試劑未被結合。

3.橋梁凝集反應：也就相當於二抗的應用

4.共同凝集反應：抗原抗體都是顆粒型，又稱為協同凝集反應，指由兩種顆粒成分相互作用而發生的凝集反應。

（1）細菌共同凝集反應：金黃色葡萄球菌與IgG抗體結合之後形成抗體致敏的SPA，與抗原結合之後通過協同凝集形成細菌共凝集。

（2）玫瑰花結試驗：常見的有E花結、EA花結和EAC花結。E花結是由內綿陽血紅細胞和T細胞以及50%的NK細胞；E花結是由抗體致敏的紅細胞與B、T、NK、粒細胞、單核巨噬細胞共同組成；EAC花結是由補體致敏細胞和B細胞組成。

第三節 補體參與的抗原抗體反應

一、補體參與的抗原抗體反應的原理：利用補體來測定反應體系中抗原抗體的存在情況，並通過紅細胞裂解與否進行示蹤。

二、補體參與的抗原抗體類型

1.補體參與直接的抗原抗體反應：

（1）溶血反應：能從反應系統中50%的致敏綿羊紅細胞發生溶血的血清的量，即為每毫升血清中補體的含量。

（2）溶菌反應每毫升血清中補體的含量=1/血清用量×稀釋倍數

2.補體參與簡潔的抗原抗體反應：溶菌反應常作為某血清中是否含有相應抗體的檢測方法。

（1）補體結合試驗；華氏反應，基本原理為含有抗體的血清再加入抗原、補體、溶血素之後不會發生裂解。但是不含有抗體的血清再加入一系列物質之後會發生裂解。只加入抗原或者抗體都會不發生裂解。

（2）被動紅細胞溶血試驗：吸附抗原的紅細胞在有相應抗體和補體的情況下出現了紅細胞溶解的現象。

（3）溶血空斑試驗：是一種測定B細胞產生和蜂蜜抗體功能呢個的體外實驗。

直接溶血空斑試驗：脾臟淋巴細胞在綿陽血紅細胞瓊脂上培養，加入補體之後，會與抗原抗體結合，紅細胞溶解形成空斑。

間接溶血空斑試驗：一般用於測定溶血效率較低的IgG或者IgA抗體，夫納音過程中需要加入抗球蛋白抗體輔助溶血空斑的形成。

改良型溶血空斑試驗：將直接溶血空斑試驗分別用致敏紅細胞和淋巴細胞代替，加入補體之後形成空斑。

反向溶血空斑試驗：二抗對一抗的廣增反應。

第四節 中和反應

一、中和反應的原理：即將被檢血清與病原微生物混合，經過適當時間作用後，接種到宿主系統（包括動物、級配或者培養細胞），按照對其產生的保護效果的差異，可以判斷該微生物或毒素是否被綜合，並計算出綜合的程度。

有中和抗體和抗毒素

二、中和反應的類型

1.終點法中和反應：根據地定被血清中和後的參與獨立，來判斷血清中中和抗體的效價。中和指數=實驗組LD50/對照組LD50

（1）固定病毒稀釋血清發：線固定病毒的毒價，再與等量的遞進稀釋的待測血清混合。

（2）固定血清稀釋病毒法：先將病毒原液做10被遞進稀釋，分別與等量的正常血清、待測血清混合，計算中和指數。

2.蝕斑減少中和反應

抗體效價為：蝕斑數較少50%的血清稀釋度

⑻ 抗原抗體反應分為那四種類型各自有哪些常見的檢測方法

根據抗原和抗體性質的不同和反應條件的差別，抗原抗體反應表現為不同的形式。顆粒性抗原表現為凝集反應；可溶性抗原表現為沉澱反應；補體參與下細菌抗原表現為溶菌反應，紅細胞抗原表現為溶血反應；毒素抗原表現為中和反應等。

⑼ 抗原抗體反應原理及影響因素是哪些

抗原抗體反應原理：

1. 抗原決定簇與抗體超變區分子間的結構互補性與親和性；

2. 抗原決定簇與抗體超變區的溝槽分子表面的結合；

3. 抗原表位與抗體超變區必須緊密接觸，才可能又足夠的結合力。

抗原抗體反應影響因素：

（一）反應物自身的因素

1. 抗體：不同來源的抗體,反應性各有差異,抗體的濃度、特異性和親和力都影響抗體抗原反應,為提高試驗的可靠性,應選擇高特異性、高親和力的抗體作診斷試劑.等價帶的寬窄也影響抗原抗體復合物的形成,單克隆抗體不適用於沉澱反應.

2. 抗原：抗原的理化性狀、分子量、抗原決定簇的種類及數目均可影響反應結果.顆粒性抗原出現凝集反應,可溶性抗原出現沉澱反應,單價抗原與相應抗體結合不出現沉澱現象.

（二）反應環境條件

1. 酸鹼度：抗原抗體反應必須在合適的pH環境中進行.蛋白質具有兩性電離性質,因此每種蛋白質都有固定的等電點.抗原抗體反應一般在pH6～9進行,有補體參與的反應pH為7.7.4,pH過高或過低都將影響抗原與抗體反應.

2. 溫度：在一定范圍內,溫度升高可加速分子運動,抗原與抗體碰撞機會增多,使反應加速.一般為15℃～40℃,常用的抗原抗體反應溫度為37℃,溫度如高於56℃,可導致已結合的抗原抗體再解離,甚至變性或破壞.每種試驗都有其獨特的最適反應溫度要求.此外,適當振盪也可促進抗原抗體分子的接觸,加速反應.

3. 電解質：抗原與抗體發生特異性結合後,雖由親水膠體變為疏水膠體,若溶液中無電解質參加,仍不出現可見反應.為了促成沉澱物或凝集物的形成,常用0.85%NaCl或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液.