抗原抗體類型和檢測方法實驗報告

『壹』 乙肝病毒表面抗原酶聯免疫法檢測的實驗報告怎麼寫

酶免疫技術的基本原理是用酶標記的抗體（或抗原）與標本中的相應抗原（或抗體）特異性結合，用酶催化底物反應的生物放大作用顯示免疫復合物的存在，提高檢測檢測抗原抗體復合物的敏感性，基於上述基本原理，臨床的應用發展主要有酶免疫組化技術和酶免疫測定技術兩種。
酶免疫測定技術根據抗原抗體反應是否需要分離結合酶標記物與游離酶標記物又分為均相測定和異相測定。其中異相測定又根據反應介質的物理狀態分為液相沒免疫測定和固相酶免疫測定。
你所講的檢測乙肝病毒標志物的酶聯免疫法(全名：酶聯免疫吸附試驗 英文名：ELISA)就屬於固相酶免疫測定。它的基本原理是：將抗原（或抗體）吸附在聚苯乙烯（載體）反應板上後，加入酶標記抗體（或酶標記抗原）與相應抗原（或抗體）特異性結合；使得酶也結合到載體上，洗去游離的酶標記抗體（或酶標記抗原），加入底物顯色，根據顏色的深淺和有無進行定性或定量分析。從它的原理看出此方法它有三大必備要素：1、固相抗原或抗體2、酶標記抗體或抗原3、底物。
ELISA法有幾種類型，有雙抗體夾心法、雙抗原夾心法、雙位點一步法、間接法、競爭抑製法、捕獲法。類型不同具體的操作步驟和反應原理又不同。檢驗結果的判定也不同。請參考專業臨床醫學檢驗教科書或檢驗試劑里的說明書。

『貳』 抗原抗體反應分為那四種類型各自有哪些常見的檢測方法

根據抗原和抗體性質的不同和反應條件的差別,抗原抗體反應表現為不同的形式.顆粒性抗原表現為凝集反應；可溶性抗原表現為沉澱反應；補體參與下細菌抗原表現為溶菌反應,紅細胞抗原表現為溶血反應；毒素抗原表現為中和反應等.

『叄』 elisa試劑盒實驗原理

上海科艾博生物（COIBO）科技
從大的方面說ELISA屬於酶免疫技術。 免疫酶技術是將酶作為標記物，標記抗體或抗原後，與相應的抗原或抗體發生反應，通過標記酶相應底物的顏色反應作抗原抗體的定性和定量的檢測依據。
目前應用最多的免疫酶技術是酶聯免疫吸附實驗（ELISA），如果要分類的話，它屬於異相固相酶免疫技術。所謂異相是指在檢測時不需要將酶標記抗原抗體和游離抗原抗體分開，所謂固相就是指的ELISA的96孔板固相載體了。看下面均相酶免疫測定的原理圖：
ELISA的主要原理很簡單，有這么三個， 1、包被 抗原或者抗體能以物理性吸附於固相載體表面，可能原理是蛋白質和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，吸附之後能保持抗原抗體反應等免疫活性； 2、標記 抗原或者抗體可通過共價鍵與酶連接成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特點； 3、顯色 酶結合物與相應包被在固相載體的抗原或者抗體結合後，也被固定在固相載體上，加入酶的底物之後可出現顯色反應，根據反應的顏色深淺可計算抗原或者抗體的相對含量。ELISA 實驗設計根據檢測對象的不同，我分別給童鞋們介紹抗原的檢測方法設計和抗體的檢測方法設計。抗原的檢測設計 1、雙抗夾心法 針對至少2個抗原決定簇的多價抗原。首先介紹一下抗原決定簇，抗原決定簇就是決定抗原性的特殊化學基團，也叫抗原表位，理論上一個抗原決定簇能誘導產生一種單克隆抗體（可能有童鞋又要問單克隆抗體是神馬東東了，以後介紹啊）。由6－12氨基酸或碳水基團組成，它可以是由連續序列（線性表位）組成或由不連續的蛋白質三維結構（構象表位）組成。臨床上具有2個抗原決定簇的多價抗原有很多，比較常見有HBsAg、AFP、HCG等大分子抗原。檢測步驟也簡單，就是包被、洗滌、加樣、洗滌、加樣、洗滌、顯色。具體說來是先將純化的相應抗體包被在固相載體上，再加入待測樣品，若其中含有待測抗原就會與固相抗體結合，洗掉雜質後，再加入酶標記的檢測抗體進行反應，洗掉多於的酶標抗體後，加入底物顯色，顯色與否以及顏色的深淺就代表了待測抗原是否存在以及相對含量了，簡單吧。
對於雙抗夾心法檢測大分子抗原要注意幾點，1.固相抗體和酶標檢測抗體一定是分別針對待測抗原的兩個不同抗原決定簇，不然兩個抗體就會為爭同一個決定簇而打架，會出現假陰性的不良結果；2.如果檢測的樣本是血清，就要注意風濕病患者體內內風濕因子RF這種奇葩異種抗體的存在，它能夠神奇地結合固相抗體和檢測抗體，造成假陽性的不良結果；3.包被的固相抗體含量一定是高於樣品中的抗原含量，不然檢測到的含量會比實際含量低；4.如果有童鞋想高端省事一些，將待測樣品與酶標檢測抗體同時加入固相載體，在酶標檢測抗體高於樣品中的待測抗原的情況下，會出現假陰性結果，這種現象書本叫鉤狀效應。 2、競爭法 針對小分子抗原。這種方法也可以用於大分子抗原，只是相對雙抗夾心法這種強悍的策略，競爭法完全沒有優勢，所以競爭法只在檢測小分子這個邊緣地帶發揮余熱了。臨床上主要用於T3、T4、孕酮等激素以及葯物等。檢測步驟與雙抗夾心法更簡單，包被、洗滌、加樣、洗滌、顯色，少了一步加樣的過程，但是設計上復雜一些，首先將純化的相應抗體包被在固相載體上，然後每組樣本需要分兩組，一組同時加入事先混勻好的酶標檢測抗原和樣本的混合物，一組只加入酶標記抗原，兩組顏色只差便是待測抗原的含量，有點暈啊。
對於競爭法也需要注意一點，酶標記抗原和待測樣本一定要事先混勻好，然後同時加入固相載體，不然會造成不公平競爭，檢測出現偏差；抗體的檢測設計 就方法來說，有間接法、雙抗原夾心法、競爭法和捕獲法四種設計。 1、 間接法，這個是檢測抗體最常用也最簡單的方法。操作步驟與雙抗夾心一樣，只是包被是純化的相應抗原而不是抗體了，加入樣品後洗滌，再加入的酶標記抗抗體，然後顯色，顏色深淺與樣品中待測抗體的濃度正相關。這個間接法的原理和步驟與雙抗夾心一樣一樣的，為了區分就把包被抗原檢測抗體叫做間接法了，以此類推，之前的雙抗夾心法也可以叫做直接法，命名其實就是這么回事，規則多了就容易讓人糊塗。間接法也有一些自己的特點，1.酶標記抗抗體可選擇性檢測抗體的亞型，可用於鑒別感染時期，如果是IgM那麼提示感染早期；2.酶標抗抗體檢測抗體特異性不高，容易產生假陽性，如果封閉不完全，可出現全板陽性，挺嚇人的。臨床上常用該方法檢測抗HCV抗體、抗HEV抗體、抗CMV抗體、抗HSV抗體、抗沙眼衣原體抗體等等。
2、 雙抗原夾心法，這個完全是山寨雙抗夾心法的。原理和步驟也與雙抗夾心一樣一樣的，與間接法相比，具有優越的靈敏度和特異性，但不是很常用，因為就目前的技術條件，想得到能用於ELISA檢測的純化抗原還是有一定的難度。臨床上常用於檢測HIV抗體初篩，TP抗體和抗HBs抗體等，這些檢測對特異性和靈敏度，准確性都要求特別高。
3、 競爭法，和檢測抗原設計的競爭法完全一致，臨床上用的不多，我仔細總結了一下兩個很具有代表性的，也各具特點。1、抗HBc抗體，檢測方法與抗原相同，包被抗原之後，分兩組，一組加入預先混勻的酶標抗體和待測樣品，一組只加入酶標抗體，兩組的顯色之差可代表待測抗體的相對含量，需注意的是待測抗體與酶標抗體是同一物質；2、抗HBe抗體檢測，方法與抗原競爭法設計稍有區別，包被的抗HBe抗體後，檢測也分兩組，一組先加入酶標HBeAg再立即加入待測樣品，一組只加酶標HBeAg，兩組顯色之差代表待測抗體的相對含量，這種設計中包被抗體和待測抗體是同一物質。值得注意的是混合組不是事先混勻再加入，而是先加入待測抗體後再加入酶標抗原。所有的這些復雜的注意事項確實很容易把人搞暈，但是童鞋們只需要記住一條，競爭很殘酷，我們就要想盡一切辦法保證競爭的公平性，這樣就不會錯。
4、 捕獲法，這種方法比較少用，由於具有識別抗體類型的優點，僅用於需要早期診斷的急性感染或者具有爆發性感染的疾病，如HAV-IgM、HBc-IgM、ToRCH等等。原理還是逃不脫經典的雙抗夾心，具體方法是先包被能識別抗體類別的抗抗體，洗滌後加樣品，再洗滌，加酶標記抗原，洗滌後顯色，這些步驟閉上眼睛都能寫出來。

最後說兩句，與抗原檢測不同，抗體檢測的設計不是根據抗體的結構特點了，這么多種設計方法，童鞋們用的時候就會選擇障礙了，掌握2個原則，1.實驗要求，如果需要特異性和准確性特別高，那肯定是雙抗原夾心法，要求馬馬虎虎，那就間接法，如果要明確抗體類型，最好的選擇就是捕獲法了；2.實驗成本，與純化抗體不一樣，有時候想要獲得純化的抗原是非常困難的，更別說兩種不同的純化抗原了，所以雙抗原夾心法臨床上用的並不多。ABS-ELISA順便說一下ABS-ELISA設計，其實是和上面說的一樣的，通過親和素-生物素系統（ABS）方法顯色反應，增加檢測靈敏度而已，但是增加操作步驟與實驗成本，而且現在單克隆抗體的技術越見成熟，抗體特異性和親和力大大提高，靈敏度已經不是問題，所以這些次等裝備已經不常用。
結果判定最後和童鞋說說ELISA結果判定，分定性和定量兩種。對於定性試驗，參比陰、陽性對照的吸光度，以P/N或者S/CO比值形式報告。1. P/N比值是指（待測樣本-空白對照）/（陰性樣本-空白對照），一般以P/N≥2.1判為陽性，或許求知慾旺盛的童鞋會問，那麼競爭法用P/N比值怎麼判，呵呵，這里先不說，賣個乖，你可以網路或者私信我啊；2. S/CO比值，S是待測樣本吸光度值，CO為CUT-OFF值，通常取值陰性對照平均值的2.1倍。S/CO比值≥1為陽性，競爭法S/CO比值≤1為陽性。定量檢測沒有什麼可說的，老老實實做標准曲線，既鍛煉實驗操作能力，又可作為實驗內部參照。
記得有這么個規定，定性檢測不能目測判斷，要憑借酶標儀檢測，定量要在每次實驗都得與待測樣本相同實驗條件下繪制標准曲線，有一難度，但是為了對實驗負責，你就從了吧。

『肆』 HIV-抗體檢測方法的確認實驗

免疫印跡試驗（WB）、條帶免疫試驗（LIATEK HIVⅢ）、放射免疫沉澱試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）。國內常用的確認試驗方法是WB。
(一_免疫印跡實驗(westernblot，WB)是廣泛用於許多傳染病診斷的實驗方法，就HIV的病原學診斷而言，它是首選的用以確認HIV抗體的確認實驗方法，WB的檢測結果常常被作為鑒別其他檢驗方法優劣的「金標准」。
確認試驗流程:
有HIV-1/2混合型和單一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型試劑進行檢測，如果呈陰性反應，則報告HIV抗體陰性；如果呈陽性反應，則報告HIV-1抗體陽性；如果不滿足陽性標准，則判為HIV抗體檢測結果不確定。如果出現HIV-2型的特異性指示條帶，需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確認試驗，呈陰性反應，報告HIV-2抗體陰性；呈陽性反應則報告HIV-2抗體血清學陽性,並將樣品送國家參比實驗室進行核酸序列分析，
WB的敏感性一般不低於初篩實驗，但它的特異性很高，這主要是基於HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化，能夠檢測針對不同抗原成分的抗體，因而能夠用WB方法鑒別初篩實驗的准確性。從WB確認試驗結果看出，初篩試驗盡管選擇質量較好的試劑，如第三代ELISA，仍會有假陽性出現，必須通過確認試驗才能得出准確結果。
(二)免疫熒光實驗(IFA)
IFA法經濟、簡便、快速，曾被FDA推薦用於WB不確定樣品的診斷。但需要昂貴的熒光顯微鏡，需要受過良好訓練的技術人員、觀察和解釋結果易受主觀因素的影響，結果不宜長期保存，IFA不宜在一般的實驗室開展和應用。
HIV抗體確證試驗結果報告
HIV抗體確證試驗結果用附表3報告。
（1）符合HIV-1抗體陽性判斷標准，報告「HIV-1抗體陽性（+）」，並按規定做好檢測後咨詢、保密和疫情報告工作。符合HIV-2抗體陽性判斷標准，報告「HIV-2抗體陽性（+）」，並按規定做好檢測後咨詢、保密和疫情報告工作。
（2）符合HIV抗體陰性判斷標准，報告「HIV抗體陰性（－）」。如疑似「窗口期」感染，建議進一步做HIV核酸檢測，盡早明確診斷。
（3）符合HIV抗體不確定判斷標准，報告「HIV抗體不確定（±）」，在備注中應註明等待「4周後復檢」。

『伍』 試述抗原抗體反應有哪些影響因素

環境條件
(一)電解質
抗原與抗體發生結合後，由親水膠體變為疏水膠體的過程中須有電解 質參與才能進一步使抗原抗體復合物表面失去電荷，水化層破壞，復合物 相互靠攏聚集，形成大塊的凝集或沉澱。若無電解質參加，則不出現可見 反應。為了促使沉澱物或凝集物的形成，常用 O.85％氯化鈉或各種緩沖液 作抗原及抗體的稀釋液及反應液。但電解質的濃度不宜過高，否則會出現 鹽析現象。
(二)酸鹼度
蛋白質具有兩性電離性質，因此每種蛋白質都有固定的等電點。抗原抗體 反應必須在合適的 pH 環境中進行，pH 過高或過低都將影響抗原與抗體的理 化性質。抗原抗體反應一般在 pH 為 6～9 進行。
(三)溫度
抗原抗體反應必須在合適的溫度中進行，一般以 15～40℃為宜，最適 反應溫度為 37℃。某些特殊的抗原抗體反應，對溫度有 一些特殊的要求，例如冷凝集素在 4℃左右與紅細胞結合最好，20℃以上反 而解離。
此外，適當振盪和攪拌也能促進抗原抗體分子的接觸，加速反應，其 作用與反應物粒子大小成正比。
第四節 抗原抗體反應的類型
隨著免疫學技術的飛速發展，在原有經典免疫學實驗方法的基礎上， 新的免疫學測定方法不斷出現，使免疫學實驗技術更特異、更敏感和更穩 定。目前根據抗原和抗體性質的不同和反應條件的差別，抗原抗體反應出 現的現象和結果不同，以及反應時參與的其他條件不同，可將抗原抗體反 應分為五種類型：①顆粒性抗原與相應抗體結合所產生的凝集反應 (agglutination)；②可溶性抗原與相應抗體結合所產生的沉澱反應 (precipitation)；③抗原抗體結合後激活補體所致的細胞溶解反應 (cytolysis)，細菌抗原表現為溶菌反應，紅細胞抗原表現為溶血反應；④ 細菌外毒素或病毒與相應抗體結合所致的中和反應；⑤免疫標記的抗原抗 體反應等。

『陸』 ABO血型鑒定的實驗報告 求答案~

主要是抗原抗體反應的結果。
血型是因為紅細胞表面含有的抗原類型不同，如果你是B型，說明你的紅細胞表面含有B抗原。抗原如果碰到相應的抗體（抗B凝集素），便會產生抗原抗體反應，也就是紅細胞的凝集反應。如果說明你是B型血，肯定是與標准血清抗B一側的發生凝集，而沒有在另一側凝集，也就是只和B凝集原發生凝集反應，因而判斷你是B型血。