檢測方法說明書

1. 請問河豚魚毒素(TTX)的檢測方法是什麼有國標嗎有沒有快速檢測方法及其相關資料呀

河豚毒素（TTX）定量酶聯免疫檢測試劑盒說明書
ELISA-kit for TTX

本測試盒用間接競爭免疫分析法定量測定河豚魚中的河豚毒素（TTX）。該測試盒反應孔可拆卸，可測單份樣品，也可測多份樣品。定量分析時需有含450nm波長的微孔板酶標儀。

1 概要
河豚毒素（TTX）是一種強神經毒素，其性質穩定，加熱、鹽腌及高溫烹煮均不易使其被破壞。河豚魚中常含有河豚毒素。我國沿海居民素有食用河豚魚的習慣。因誤食或食用加工不當的河豚魚而發生人畜中毒的事件每年都有發生。故准確檢測河豚魚中的河豚毒素對預防和控制河豚毒素中毒，具有重要意義。本檢測方法具有靈敏、快速、簡便、特異性好、取樣量小並可同時檢測大量樣品等優點。

2 測定原理
本試劑盒採用固相酶聯免疫吸附原理，利用間接競爭ELISA法進行測定。用抗原包被微孔板，加入河豚毒素標准品或樣品、抗河豚毒素單克隆抗體進行孵育後，將未與包被抗原結合的抗體洗去；再加入酶標記的抗鼠IgG抗體孵育，加入顯色液，經過終止液終止後，用酶標儀在450nm處測定OD值。

3 提供的物品
微孔板
5個濃度的TTX標准溶液（各0.5mL）
標准1：0ng/mL ……………………………………………………………直接使用
標准2：10.0ng/mL ………………………………………………………直接使用
標准3：20.0ng/mL ………………………………………………………直接使用
標准4：50.0ng/mL ………………………………………………………直接使用
標准5：200.0ng/mL ………………………………………………………直接使用
抗體溶液(6mL) …………………………………………………………………直接使用
酶標物(12mL) …………………………………………………………………直接使用
顯色液(12mL) …………………………………………………………………直接使用
終止液(6mL) ………………………………………………………………………直接使用
濃縮洗液(30mL) …………………………………………………………………稀釋使用

4 盒中未提供，需自備物品
微孔板酶標儀（含450nm）、離心機、電爐、微量移液器、磁力攪拌器
量筒、漏斗、容量瓶、快速定性濾紙、分液漏斗
乙酸、氫氧化鈉、去離子水或蒸餾水、PBS緩沖液

5 操作者注意事項
標准溶液中含有TTX毒素，應特別小心。
終止液為0.5M硫酸，避免接觸皮膚。
每次加樣後立即將所有試劑放回2~8 ℃。
每步加樣時間應控制在5min內。
孵育過程中應避光。
不要使用過期試劑盒。
不要交叉使用不同批號試劑盒中的試劑。

6 儲存條件
保存試劑盒於2~8℃。不要冷凍
顯色液對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
將不用的微孔板放進原鋁箔袋中，置2~8℃保存。

7 試劑變質的標志
標准1的吸光度值小於0.5個單位（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。

8 樣品處理
8.1 鮮河豚魚中河豚毒素的檢測
----稱取5g河豚魚樣品(肌肉、皮或內臟)，剪碎，加入25mL 0.1%的乙酸，用燒杯在電爐上煮沸攪拌10min。此步驟應注意不要讓液體沸出容器，應控制加熱溫度，並不斷攪拌。
----待冷卻至室溫後，上清用快速定性濾紙過濾於50mL離心管中
----沉澱用20mL0.1% 乙酸洗到燒杯中，再煮沸3min
----冷卻至室溫後，所有的液體及煮沸的樣品都加到離心管中，3000rpm離心10min。
----取上清，量體積，置分液漏斗中
----加入等體積乙醚，振搖1分鍾，靜置分層。放出水層，量體積後至另一分液漏斗中，再加入等體積的乙醚，振搖1分鍾，靜止分層。
----將水層放入50mL容量瓶中，用1M氫氧化鈉調節提取液中的pH值至6.5~7.4，然後加入PBS至50mL，提取液4℃保存備用。
8.2 魚片、魚干製品中河豚毒素的檢測
-----樣品中的TTX用0.1%乙酸在水浴中超聲提取，提取液中的TTX用ELISA方法進行檢測，若樣品中TTX含量低於檢出限則報告為<100mg/kg；樣品中TTX含量在100~3000mg/kg之間，直接按ELISA實驗結果報告；如果樣品中TTX含量達到3000mg/kg，則需採用小鼠生物測定法進行驗證，確認毒性反應後再按照ELISA實驗結果報告。

9 酶免疫分析程序
----濃縮洗液為10倍濃縮液，使用時與去離子水或蒸餾水按體積比1:9稀釋後使用。
----取所需數量的板條插入微孔架，用洗液洗滌微孔板3min×2次，記錄樣品及標準的位置。
----加入50mL標准品或處理好的樣品到微孔，每個標准和樣品必須使用新的吸頭。
----加入50mL抗河豚毒素單克隆抗體溶液到每個微孔（注意移液器管尖不要接觸到孔中的液體，避免交叉污染）中，37℃孵育90min。
----甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板3min×3次，最後一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。
----每孔加入酶標物100mL，37℃孵育60min。
----用洗液洗滌微孔板3min×5次，最後一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。
----每孔加入顯色液100mL（2滴），37℃孵育12min。
----每孔加入終止液50mL（1滴），立即用酶標儀在波長450nm處測定吸光度值（OD值）。
註：在定量分析中，顯色液和終止液需要用移液器准確量取。

10 樣品濃度計算
以標准溶液OD值與標准1的OD值的比值為縱坐標（即標准品OD比），所對應標准溶液濃度（ng/mL）的對數值為橫坐標，製作標准曲線。根據樣品OD值與標准1的OD的比值（即樣品OD比），可從曲線上得到對應點的橫坐標，即為TTX濃度的對數值，求得反對數即為測定液中TTX濃度C（ng/mL），按下列公式計算出樣品中TTX含量：
TTX含量（mg/kg）= 10×C×K
式中：C：測定液中TTX濃度（ng/mL）
K：提取液的稀釋倍數
11 主要技術指標及參數
11.1 最低檢出濃度10.0 ng/mL。
11.2 加標回收率在70~120%，條內變異系數＜10%，條件變異系數＜15%。

2. 土壤檢測方法

一、看土壤的顏色

土壤的顏色是反映土壤在肥力上的一個明顯指標，也是一個最容易掌握的方法。一般土壤顏色比較深的都是肥土，顏色較淺的則為瘦土。

二、看土層深淺（耕作層）

土壤肥沃的田塊土層都比較深，深度通常都大於60公分（水田除外），而貧瘠瘦土則非常淺，嚴重地區甚至低於20公分，只是表層有一層土而已。

三、看土壤適耕性

一般土壤肥沃的田塊，土層疏鬆，易於耕作，「干耕像香灰，濕耕如糖化」；而土壤貧瘠的田塊，土層黏犁，耕作費力，「敲敲一個洞，鋤鋤一條縫」。

四、看淀漿及裂紋

肥土不易淀漿，土壤裂紋多而小；瘦土極易淀漿，易板結，土壤裂紋少而大。

五、看水質

水滑膩、黏腳，日照或腳踩時冒大泡的為肥土；水質清淡無色，水田不起泡，或氣泡小而易散的為瘦土。

六、看保水性

水分有下滲，但速度平緩，灌水一次可保持1周左右的為肥土地；灌水後水層不下滲或沿裂紋快速下滲的均為瘦土。

七、看是否夜潮

夜潮是指夜間表土溫度降低，深層土壤中的溫暖水汽上行，遇到低溫表土後凝結成水而濕潤表土的現象。夜潮現象能說明土壤的兩個優點：第一，透氣性強，溫暖水汽可以上行。第二，土層較深，能夠形成溫差。所以，有夜潮現象的土壤基本上都是肥土；無夜潮現象，說明土質板結硬化，均為瘦土。

八、看保肥性

土壤是一種帶負電的膠體，可以交換吸附一些陽離子（就是養分），而達到保肥的作用，這些被吸附的養分在作物生長過程中會逐漸從土壤中釋放出來以供作物吸收利用。肥沃的土壤通常能夠吸附的陽離子較多，肥效持久。而貧瘠的土壤通常陽離子吸附量較少，大部分養分隨水流失，肥效來得快去的快。

3. HIV核酸檢測的HIV核酸檢測方法及程序

1.1 方法和試劑
1.1.1 方法
（1）檢測方法為商品化試劑盒和實驗室自建方法，商品化試劑應嚴格按說明書操作。下面介紹的方法是實驗室自建方法，供參考。
（2）檢測血漿或血清樣品使用逆轉錄PCR（RT-PCR）方法，建議第一輪PCR擴增使用RT-PCR一步法；檢測血細胞或組織樣品使用PCR方法。一般使用擴增兩輪的套式PCR方法。
（3）設立陽性、陰性及空白對照。陽性對照為與待測樣品同質、含有目的基因的樣品；陰性對照為與待測樣品同質、不含有目的基因的樣品。陽性和陰性對照樣品應與待檢樣品處理程序一致。陰性對照的設置數量應根據實驗樣品的數量設置在不同的位置。
1.1.2 試劑
（1）PCR引物：一般使用擴增HIVgag和/或pol和/或env和/或LTR等引物。進行RNA逆轉錄時可使用下游特異性引物或隨機引物。引物設計可參考文獻或自行設計，應盡量涵蓋常見的HIV流行毒株，也可使用兼並性引物。
（2）主要試劑：包括核酸提取純化、逆轉錄、PCR所需的試劑。使用商品化核酸提取純化試劑、逆轉錄酶反應試劑和PCR擴增試劑。
（3）抗污染試劑：實驗室自建檢測方法可使用抗污染試劑，參考尿嘧啶DNA糖基化酶抗污染方法。
1.2 擴增目的基因片段
1.2.1 樣品的採集和處理
1.2.2 核酸提取
可使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備並按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置於-20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應置於-80℃保存。
1.2.3 逆轉錄合成cDNA
使用商品化試劑並按說明書操作。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。建議使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。
1.2.4 PCR擴增反應
使用商品化試劑按說明書操作。PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板（DNA或cDNA）。在擴增儀中，按照設定的程序進行擴增。一般使用二次擴增的套式PCR擴增方法。
1.3 擴增產物分析及結果報告
1.3.1 擴增產物分析
擴增產物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標准比較，判斷擴增片段是否在預期的分子量范圍內。其它擴增產物分析方法還有限制性內切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。自動化核酸擴增儀使用酶聯比色分析或熒光探針雜交等原理測定。
1.3.2 結果判定和報告
（1）實驗成立的條件：每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照，只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立，可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。
（2）HIV核酸檢測陽性：使用商品化檢測試劑，發現核酸陽性反應，應該重復採集樣品進行復測，復測結果呈核酸陽性反應則判定為核酸陽性，復測結果為核酸陰性反應則判為不確定結果，需進一步隨訪檢測。
（3）HIV核酸檢測陰性：只可報告本次實驗結果陰性。
（4）應在完成檢測後7個工作日內發出檢測報告。 2.1 方法
HIV核酸定量檢測主要基於靶核酸擴增RT-PCR和信號放大擴增兩種方法。國內常用的方法中，NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1採用國際單位（IU/ml），與NASBA的拷貝數關系基本為1:1；Amplicor Cobas 的拷貝數約為1.2～1.5國際單位；bDNA方法的拷貝數約為0.8～1.0國際單位。不同方法的關系與HIV的亞型有關。
2.2 試劑
必須使用經中國葯品生物製品監督管理局注冊批準的商品化試劑並嚴格按說明書操作。
2.2.1 靶核酸擴增試劑和性能
（1）RT-PCR擴增試劑
1）Amplicor HIV-1 Monitor v1.5（RT-PCR微孔板捕獲比色分析法），核酸手工提取（異丙醇沉澱），比色分析測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。標准法的檢測線性范圍是400～750，000；超敏法的線性范圍是50～100，000 RNA拷貝/毫升。
2）COBAS Amplicor HIV-1 Monitor v1.5, 核酸手工提取（異丙醇沉澱），儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。標准法的檢測線性范圍是400～750，000；超敏法的線性范圍是50～100，000 RNA拷貝/毫升。
3）COBAS AmpliPrep/COBAS Amplicor HIV-1 Monitor v1.5 （COBAS Amplicor 分析儀）,儀器提取核酸，儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。標准方法的檢測線性范圍是400～1，000，000；超敏方法的線性范圍是50～100，000 RNA拷貝/毫升。
以上三種試劑均採用基於PCR擴增靶核酸檢測法，僅在設備的使用、自動化程度和樣品制備的方法有所不同。
4）COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test（實時熒光探針RT-PCR分析法）, 儀器提取核酸,實時熒光探針PCR擴增儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，可擴增HIV-1M組的A-H基因亞型。檢測線性范圍是40～10，000，000 RNA拷貝/毫升，比上述三種方法的檢測線性范圍要寬，樣品可不經稀釋一次完成檢測。
以上四種試劑均使用一個內部定量標准品，1個陰性、1個弱陽性和1個強陽性外部外部質控品。均使用dUTP/UNG防污染試劑。
5）LCx HIV RNA Quantitative Assay（競爭性RT-PCR微顆粒酶免疫分析法）,手工或儀器提取核酸（活化硅膠柱純化），儀器測定。擴增靶核酸位置是pol（整合酶）基因區，可擴增HIV-1基因M組的A-G亞型和0組病毒，尤其可檢測M組C基因亞型和一些重組病毒。檢測線性范圍是50～1，000，000 RNA 拷貝/毫升；使用一個內部定量標准品和六個外部定量標准品。
6）RealTime HIV-1 Assay（實時熒光探針RT-PCR分析法）,使用獨特的雙鏈熒光探針。手工或儀器提取核酸（磁性顆粒純化），儀器測定。擴增靶核酸位置是pol（整合酶）基因區，擴增HIV-1基因亞型是M組的A-G亞型和0組以及N組病毒。檢測線性范圍是40～1，000，000 RNA 拷貝/毫升。使用一個內部定量標准品。檢測結果與LCx HIV RNA Quantitative Assay結果高度相關。
（2）基於核酸序列擴增試劑（NASBA擴增技術）：以等溫方式直接擴增HIV-1 RNA。
NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1（實時熒光探針分析法）, 使用熒游標記的分子信標探針技術檢測擴增子。手工或儀器提取核酸（硅膠純化，異丙醇沉澱）,儀器測定。擴增靶核酸位置是gag基因區，擴增HIV-1基因亞型是M組的A-G亞型。檢測線性范圍是50～3，000，000 RNA 國際單位/毫升；使用一個內部定量標准品，沒有陰陽性外部外部質控品。每次檢測8的整數倍樣品，直至48個。檢測結果與Versant HIV-1 RNA、和Amplicor HIV-1 Monitor v1.5 方法的結果有著高度的相關性。國際上已經推薦使用V2.0試劑盒。
2.2.2 信號放大擴增試劑和性能
Versant HIV-1 RNA 3.0.bDNA（分枝狀DNA探針雜交微孔板捕獲比色分析法）, 利用分枝狀DNA多級信號放大原理。無需RNA純化和PCR擴增步驟。離心濃縮病毒子並用去垢劑和蛋白酶K消化病毒釋放病毒RNA，儀器測定。擴增靶核酸位置是pol基因區，擴增HIV-1基因亞型是M組的A-H亞型，檢測線性范圍是50～500，000 RNA 拷貝/毫升；使用六個外部定量標准品，1個陰性、1個弱陽性和1個強陽性外部外部質控品。每次可檢測12的整數倍樣品。
以上試劑均可使用EDTA和ACD作為樣品的抗凝劑，NucliSens HIV-1 QT和NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1以及Versant HIV-1 RNA 3.0.bDNA試劑還可以使用肝素作為抗凝劑。如果必須使用經肝素處理的血漿樣品進行RT-PCR擴增，則必須在樣品中直接加肝素酶消化肝素。
2.2.3 實時熒光定量PCR技術
實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最後通過標准曲線對未知模板進行定量分析的方法。每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系。利用已知起始拷貝數的標准品可作出標准曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數的對數，縱坐標代表Ct值）。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標准曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
實時熒光定量PCR擴增的實驗檢測過程可分為：（1）樣品制備,抽提和濃縮目標RNA分子，並除去可能存在的抑制因子。（2）Real-time PCR，檢測PCR的產物使用熒游標記的寡核苷酸探針。檢測的原理基於熒光信號增長曲線與循環數相關。（3）RT-PCR反應，病毒RNA利用逆轉錄酶將RNA逆轉錄為cDNA，然後通過DNA聚合酶對特定片段進行擴增。（4）擴增產物的檢測，基於檢測閾值的設定，當病毒載量高時，低循環數即能檢測到熒光信號，當病毒載量低時，高循環數時才能檢測到熒光。循環數與樣品載量成線性關系。利用標准品製作循環數與載量的標准曲線就能對樣品載量進行定量檢測。 使用集合核酸擴增檢測技術和方法，利用核酸檢測方法的高度敏感性，對高度懷疑感染人群且抗體陰性的樣品進行集合核酸檢測，可及時發現窗口期感染者。該方法較單份樣品的核酸檢測具有更高的成本效益。
3.1 樣品集合程序
3.1.1 根據預處理樣品量，計算預形成一級和二級集合數量，在登記表格上記錄一級和二級集合及對應的原始樣品編號。
3.1.2 吸取130mL樣品，移入標記二級集合的離心管中；10份樣品形成一個1300mL的二級集合樣品，充分渦旋震盪混勻。
3.1.3 從5個二級集合管中分別吸取210mL樣品，移入標記有一級集合的離心管中，形成由50份樣品1050mL體積組成的一級集合樣品，充分渦旋震盪混勻。
3.1.4 從每個一、二級集合管中吸取500mL集合樣品，分裝至另一相應標記的離心管，用超敏感核酸檢測試劑進行檢測。
3.1.5 制備陰性集合外部質控品：使用50份HIV抗體和核酸陰性樣品，按上述步驟，分別集合成5個陰性二級集合外部質控品和1個一級集合外部質控品。
3.1.6 制備陽性集合外部質控品：從9份HIV抗體和核酸陰性樣品和一份至少含有HIV RNA10c/ml陽性樣品中，分別移取130mL加入離心管中，形成一個1300mL的陽性二級集合外部質控品。再分別從4個已制備好的陰性二級集合外部質控品和上述陽性二級集合外部質控品中，移取210mL至標記為一級陽性集合外部質控品的離心管中，形成一級陽性集合外部質控品。
3.1.7 一級和二級陰、陽性集合外部質控品分別用於RT-PCR中每一輪一級和二級集合樣品的檢測。
3.2 集合樣品的檢測和分解路線
使用商品化核酸檢測試劑，應嚴格按照試劑說明書操作。按照各商品化核酸試劑集合PCR的方案進行檢測，集合樣品的數量根據各試劑方案操作。方法簡述如下：
3.2.1 用HIV RNA RT-PCR超敏檢測方法對一級集合樣品進行檢測，陽性反應的一級集合樣品進入下一檢測步驟。
3.2.2 用HIV RNA RT-PCR超敏檢測方法對所有組成陽性一級集合的二級集合樣品進行檢測，陽性反應的二級集合樣品進入下一檢測步驟。
3.2.3 用HIV RNA RT-PCR標准檢測方法檢測所有組成陽性二級集合樣品的的10份單個樣品，確定核酸陽性的單個樣品。 HIV感染產婦所生嬰幼兒在出生後18個月內可應用HIV核酸（DNA或RNA）檢測進行早期HIV感染診斷。盡管HIV RNA檢測敏感性在感染早期較高（出生後1個月內），但是HIV DNA檢測不受母親圍產期抗逆轉錄病毒治療和人乳汁中抗逆轉錄病毒葯物以及嬰幼兒預防性抗逆轉錄病毒治療的干擾而影響早期診斷。另外，考慮母親血液污染因素，不推薦使用臍帶血進行HIV核酸檢測。嬰幼兒的抗體檢測流程和結果判斷見第二章（HIV抗體檢測）。
4.1 適用范圍
未滿18個月的HIV感染產婦所生嬰幼兒；未滿18個月的嬰幼兒，其母親HIV感染狀態不詳，兒童出現HIV相關臨床表現，臨床懷疑HIV感染者。
4.2 檢測程序及結果報告
4.2.1 於嬰兒出生後6周（42天）採集第一份血樣本（血樣本可制備成DBS或EDTA抗凝全血），送檢。
4.2.2 若第一份血樣本檢測呈陽性反應，盡快再次採集第二份血樣本進行檢測。若兩份血樣本檢測均呈陽性反應，報告「嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陽性」，診斷兒童HIV感染。及時對HIV感染兒童進行追蹤和病情監測，將其轉介到兒童抗病毒治療醫療服務機構，並為其提供機會性感染預防等服務措施；若第二份血樣本檢測呈陰性反應，待嬰兒滿3個月再次採集血樣本進行檢測。若第一份血樣本檢測呈陰性反應，繼續提供兒童保健和隨訪服務，待嬰兒滿3個月再次採集血樣本進行檢測。
4.2.3 若嬰兒滿3個月再次檢測呈陰性反應，報告「嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陰性」，按照未感染兒童處理，繼續提供兒童保健隨訪服務；於兒童滿12個月時，按照「HIV感染產婦所生兒童HIV抗體檢測流程」（圖4），開始HIV抗體檢測，最終確定兒童感染狀態。若嬰兒滿3個月再次檢測呈陽性反應，盡快再次採集血樣本進行檢測。第三份血樣本檢測呈陽性反應，報告「嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陽性」；若第三份血樣本檢測呈陰性反應，報告「嬰兒HIV感染早期診斷檢測結果陰性」；分別按照前述流程提供相應服務。
4.2.4 不同時間「嬰兒HIV感染早期診斷」檢測均呈陰性反應的喂哺母乳的兒童，應在完全停止喂哺母乳後的6周和3個月（若6周時檢測結果為陽性可盡快）再次采血進行核酸定性檢測，進行早期診斷。兒童滿18個月後則可直接進行抗體檢測。
4.2.5 如果嬰兒第一次采血時已滿3個月，但未滿12個月，則應盡快在不同時間採集兩份血樣本；同時將兩份血樣本送檢，按照前述流程進行檢測。如果兒童第一次采血時已滿12個月，則應首先按照「艾滋病感染產婦所生兒童HIV抗體檢測流程」（ 圖4）進行HIV抗體檢測。若兩種不同原理或廠家生產的HIV抗體檢測試劑檢測結果均為陰性，則排除兒童感染；若HIV抗體檢測試劑檢測結果呈陽性反應，不能通過抗體檢測確定兒童感染狀態，則可在不同時間採集兩份血樣本，按照前述流程進行「嬰兒HIV感染早期診斷」檢測。如果兒童第一次采血時已滿18個月，則應按照HIV抗體檢測流程（圖1）進行HIV抗體檢測，無需進行「嬰兒HIV感染早期診斷」檢測。

4. 汞的檢測方法有哪些

汞的測定方法：
1 「冷原子吸收光譜法」。
2原理：汞蒸氣對波長253.7nm的共振線具有強烈的吸收作用。樣品經過酸消解或催化酸消解使汞轉為離子狀態，在強酸性介質中以氯化亞錫還原成元素汞，以氮氣或乾燥空氣作為載體，將元素汞吹入汞測定儀，進行冷原子吸收測定，在一定濃度范圍其吸收值與汞含量成正比，與標准系列比較定量。
3試劑：分析過程中全部用水均使用去離子水(電阻率在8×105以上)，所使用的化學試劑均為分析純或優級純。
3.1硝酸。
3.2鹽酸。
3.3過氧化氫(30%)。
3.4硝酸(0.5＋99.5)：取0.5mL硝酸，慢慢加入50mL水中，然後加水稀釋至100mL。
3.5高錳酸鉀溶液(50g/L)：稱取5.0g高錳酸鉀，置於100mL棕色瓶中，以水溶解稀釋至100mL。
3.6硝酸—重鉻酸鉀溶液(5＋0.05＋94.5)：稱取0.05g重鉻酸鉀，溶於水中，加入5mL硝酸，用水稀釋至100mL。
3.7氯化亞錫溶液(100g/L)：稱取10g氯化亞錫，溶於20mL鹽酸中，以水稀釋至100mL，臨用時現配。
3.8無水氯化鈣。
3.9汞標准儲備液：准確稱取0.1354g經乾燥器乾燥過的二氧化汞，溶於硝酸重鉻酸鉀溶液中，移入100mL容量瓶中，以硝酸—重鉻酸鉀溶液稀釋至刻度。混勻。此溶液每毫升含1.0mg汞。
3.10汞標准使用液：由1.0mg/mL汞標准儲備液經硝酸—重鉻酸鉀溶液稀釋成2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ng/mL的汞標准使用液。臨用時現配。
4儀器：所用玻璃儀器均需以硝酸(1＋5)浸泡過夜，用水反復沖洗，最後用去離子水沖冼干凈。
4.1雙光束測汞儀(附氣體循環泵、氣體乾燥裝置、汞蒸氣發生裝置及汞蒸氣吸收瓶)。
4.2恆溫乾燥箱。
4.3壓力消解器、壓力消解罐或壓力溶彈。
5分析步驟
5.1樣品預處理
在采樣和制備過程中，應注意不使樣品污染。儲於塑料瓶中，保存備用。
5.2樣品消解(可根據實驗室條件選用以下任何一種方法消解)
5.2.1 壓力消解罐消解法：稱取1.00～3.00g樣品(干樣、含脂肪高的樣品少於1.00g，鮮樣少於3.00g或按壓力消解罐使用說明書稱取樣品)於聚四氟乙烯內罐，加硝酸2～4mL浸泡過夜。再加過氧化氫(30%)2～3mL(總量不能超過罐容積的1/3)。蓋好內蓋，旋緊不銹鋼外套，放入恆溫乾燥箱，120～140℃保持3～4h，在箱內自然冷卻至室溫，用滴管將消化液洗入或過濾入(視消化後樣品的鹽分而定)10.0mL容量瓶中，用水少量多次洗滌罐，洗液合並於容量瓶中並定容至刻度，混勻備用；同時作試劑空白。
5.3測定
5.3.1 儀器條件：打開測汞儀，預熱1～2h，並將儀器性能調至最佳狀態。
5.3.2 標准曲線繪制：吸取上面配製的汞標准使用液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ng/mL各5.0mL(相當於10.0，20.0，30.0，40.0，50.0ng汞)，置於測汞儀的汞蒸氣發生器的還原瓶中，分別加入1.0mL還原劑氯化亞錫(100g/L)，迅速蓋緊瓶塞，隨後有氣泡產生，從儀器讀數顯示的最高點測得其吸收值，然後，打開吸收瓶上的三通閥將產生的汞蒸氣吸收於高錳酸鉀溶液(50g/L)中，待測汞儀上的讀數達到零點時進行下一次測定。並求得吸光值與汞質量關系的一元線性回歸方程。
5.3.3樣品測定：分別吸取樣液和試劑空白液各5.0mL，置於測汞儀的汞蒸氣發生器的還原瓶中，以下按5.3.2自「分別加入1.0mL還原劑氯化亞錫」起進行。將所測得其吸收值，代入標准系列的一元線性回歸方程中求得樣液中汞含量。
6計算

（m1 - m2）×（V1／V2）× 1000
X1 = ────────────────────........... (1)
m3× 1000

式中：X1——樣品中汞含量，µg/kg(µg/L)；
m1——測定樣品消化液中汞質量，ng；
m2——試劑空白液中汞質量，ng；
V1——樣品消化液總體積，mL；
V2——測定用樣品消化液體積，mL；
m3——樣品質量或體積，g或mL。
結果的表述：報告算術平均值的二位有效數字。
7允許差
相對相差≤20%。

5. 核酸檢測方法

對於新型冠狀病毒的核酸檢測，首先根據試劑盒說明書」樣本要求「部分進行樣本採集，常規的樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。

獲得患者樣本後，需盡快進行檢測，如無法立即檢測需要轉運的樣本，應按照說明書的要求進行低溫封裝，並送到專門的檢測機構進行檢測。檢測機構收到樣本後，對樣本進行核酸提取，核酸提取試劑應使用批准產品說明書中指定的核酸提取試劑盒。

病毒RNA需要首先逆轉錄為cDNA，再進行擴增檢測。PCR擴增和檢測應使用批准產品說明書中指定的熒光定量PCR儀，通過熒光定量PCR所得到的樣本Ct值的大小，可以判斷患者樣本中是否含有新型冠狀病毒。

(5)檢測方法說明書擴展閱讀

核酸檢測原理

所有生物除朊病毒外都含有核酸，核酸包括脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），新型冠狀病毒是一種僅含有RNA的病毒，病毒中特異性RNA序列是區分該病毒與其它病原體的標志物。新型冠狀病毒出現後，我國科學家在極短的時間里完成了對新型冠狀病毒全基因組序列的解析。

並通過與其它物種的基因組序列對比，發現了新型冠狀病毒中的特異核酸序列。臨床實驗檢測過程中，如果能在患者樣本中檢測到新型冠狀病毒的特異核酸序列，應提示該患者可能被新型冠狀病毒感染

6. 攜帶型氣體檢測儀的使用方法

一、使用前
①作業前仔細閱讀與氣體檢測儀對應的使用說明書，熟悉機器的性能和操作方法。
②檢查電池電量是否充足，如發現電池電量不足應及時更換電池。

③檢查進氣口氣濾有無雜物堵住，堵住需清理干凈或更換。

④開機過程中自檢時應聽一下分級報警聲光報警、震動報警是否准確，如不符合要求設定不準使用，並應立即校訂。

⑤開機啟動時長按啟動鍵保持三秒，進入自檢狀態，觀察檢測儀設定低報警值、高報警值是否設定準確（CO檢測儀一級報警50ppm，二級報警100ppm；氧氣檢測儀一級報警報19.5%，二級報警報22%；硫化氫檢測儀一級報警10 ppm，二級報警15ppm），如不符要求設定不準使用，並應立即校訂。開機過程中自檢時應聽一下分級報警聲光報警、震動報警是否准確，如不符合要求設定不準使用，並應立即校訂。

⑥在清新空氣條件下開機後觀察初始數值是否准確（CO檢測儀初始顯示0 ppm；O2檢測儀初始顯示20.9%；硫化氫檢測儀初始顯示0 ppm），如顯示數值不準確嚴禁使用，應立即校訂。

二、使用過程中
①攜帶型氣體檢測儀使用時應佩戴在盡量接近口、鼻的部位，如衣服前領口、上衣口袋等，嚴禁將報警器放置於口袋內等不易查看的部位，影響檢測數值。
②使用過程中應盡量避免碰撞，造成檢測數據異常。

③氣體檢測儀感測器等部件屬於精密部件，調整好的儀器不要隨便開蓋，使用過程中應注意防水和雜質進入，防止造成數據異常。

④使用時如出現指示燈連續閃亮、顯示屏突然無數值顯示、氣體明顯超標區域顯示數值不動作、差距大等異常情況應立即停止作業，撤離到空氣清新區域觀察是何問題，並及時排除，否則嚴禁繼續使用。

⑤各類氣體檢測超標情況下作業執行國家及公司規定：

煤氣現場作業（不包含受限空間）濃度與作業時間要求：

CO在空氣中的濃度為24ppm時，可以正常作業；

CO在空氣中的濃度為40ppm時，可以工作1小時；

CO在空氣中的濃度為80ppm時，可以工作半小時；

CO在空氣中的濃度為160ppm時，只允許工作15~20分鍾，每次工作間隔時間為2小時。

氧氣作業：作業區域環境氧氣含量不得低於19.5%，有限空間內氧含量一般為 19.5%～21%，在富氧環境下不得大於23.5%。

硫化氫作業：

當硫化氫濃度低於40ppm時可以佩戴過濾式防毒面具作業，並在濾毒罐表面註明適用物質；

當硫化氫濃度大於40ppm或濃度不明或二氧化硫濃度高於2ppm的區域內作業時應使用正壓式空氣呼吸器；

嚴禁任何人不佩戴合適的防護用品進入可能含有硫化氫氣體的區域，禁止在有毒區域內摘除防毒用具。

⑥如在作業中出現頭暈、耳鳴、眼花、惡心等情況時應立即停止作業，撤離到空氣清新區域（注意空氣流向，選擇上風口），如事態較大應立即啟動應急響應，開展自救、他救。

三、使用完畢後

①攜帶型氣體檢測儀使用完畢後按住關機鍵不放，顯示屏顯示5秒倒計，倒計時結束後LCD顯示「off」，隨後儀器無顯示，儀器關機，嚴禁直接扣除電池強制關機。
②儀器關機後應對表面附著的灰塵進行清理，做好器材清潔。

③儀器長期不工作時，應關機，置於乾燥、無塵、符合儲存溫度的環境中。

④氣體檢測儀實行專人專管制度，防止出現丟失等情況造成器械缺失，影響正常使用。

7. 手持甲醛檢測儀的使用方法是什麼

一、手持式甲醛檢測儀簡介 手持式甲醛檢測儀用於快速檢測甲醛氣體濃度、溫濕度測量並超標報警，主要檢測原理有：電化學、紅外、催化燃燒、熱導、PID光離子，可以檢測管道中或受限空間、大氣環境中的氣體濃度，也可以檢測各種氣體泄漏和各種背景氣體為氮氣或氧氣的高濃度單一氣體純度，檢測種類超過500多種。 該圖片由注冊用戶"生活小當家"提供，版權聲明反饋 二、手持式甲醛檢測儀的特點有哪些 1、防水、防塵、防爆、防震，本安電路設計，抗靜電，抗電磁干擾。 2、內置水汽、粉塵過濾器，防止因水汽和粉塵損壞感測器和儀器，可用於高濕度高粉塵環境。 3、內置泵吸式測量，響應迅速，采樣距離超過10米，特殊氣路設計，可直接檢測負壓或正壓-0.5～2公斤的氣體。 4、顯示實時濃度、報警、時間、溫度、濕度、存儲、通信、列印、電量、充電狀態等信息，菜單界面採用高清模擬圖標顯示各個菜單的功能名稱。 5、大容量數據存儲功能，標配10萬條數據存儲容量，更大容量可訂制。支持實時存儲、定時存儲，或只存報警濃度數據和時間、支持本機查看數據，也可通過USB或RS232介面將數據上傳到電腦，用上位機軟體分析數據和存儲、列印。 6、紅外通信介面（選配）、USB介面、RS232介面，可選配外置微型無線紅外列印機，列印：公司名稱、氣體名稱、日期時間、環境溫濕度、濃度數據、檢測結果（是否合格）。 7、USB充電介面，可用電腦或充電寶充電，兼容手機充電器，過充、過放、過壓、短路、過熱保護，支持USB熱插拔，檢測儀在充電時可正常工作。採用5500mA大容量可充電高分子聚合物電池，可長時間連續工作。 8、聲光報警、振動報警、視覺報警、欠壓報警、故障報警，報警時多方位立體顯示報警狀態。報警值可設，報警方式可選低報警、高報警、區間報警、加權平均值報警。 9、高精度溫濕度測量（選配），同時對感測器進行溫度補償，儀器使用溫度范圍-40～70度，可檢測800度的氣體，更高溫度的氣體檢測可訂制（選配高溫采樣降溫過濾手柄或高溫高濕預處理系統）可以同時檢測1～5種氣體，單位自由切換，常規氣體不需要輸入分子量，特殊氣體需要輸入分子量就自動計算並切換，單位可選：PPM、mg/m3、Vol%、LEL%、PPHM、ppb、mg/L。 10、三種顯示模式可切換：同時顯示四種氣體濃度、大字體循環顯示單通道氣體的濃度、實時曲線，各通道之間自動循環或手動循環可切換，可設置是否顯示最大值、最小值、氣體名稱，可查看歷史記錄曲線圖。 11、數據恢復功能，可以選擇性恢復或全部恢復，免去誤操作引起的後顧之憂 12、零點自動跟蹤，長期使用不受零點漂移影響。目標點多級校準，保證測量的線性度和精度，能同時符合國家標准和地方計量局標准。濃度校準誤操作自動識別並阻止，能避免人為因素造成的不良。 13、可以實時檢測或定時檢測（針對被測氣體的量比較小的情況），不檢測時可以把泵關閉以延長開機時間。 14、可記錄校準日誌、維修日誌、故障解決對策，感測器壽命到期提醒，下次濃度校準時間提醒功能。 三、手持甲醛檢測儀怎麼用 1、開箱檢驗 在初次收到該測驗儀器的時分，請依照如下所述的進程進行檢驗查看。從包裝箱中取出儀器，查看裝運期間是不是有損害。打開包裝箱後，查看包裝箱和包裝材料。假如全部完好，保存原包裝材料，以便將來使用；假如包裝材料損壞，說明儀器在裝運進程中受到了外力的沖擊，維持原狀並告訴貨運公司，以便貨運公司查看。然後依照說明書的操作規程進行操作查看，依據儀器損害的狀況向貨運公司或承運人提出賠償要求。 2、功用說明 手持甲醛檢測儀的用法很簡單，儀器的前面板分為定時操作區、甲醛流量調節區、甲醛測定區三個部分，通過定時操作能夠設定各個檢查項目所需要的的檢查時間，檢查甲醛時能夠通過向左向右調節流量計下方的圓形旋扭來調整檢查甲醛時每分鍾的空氣通過量，甲醛測定區通過操作能夠進行甲醛測定、感測器校零、數據列印等作業。機器的後面板有電源開關和電源插線介面及玻璃氣泡吸收管的掛板支架螺絲，檢查項目介面從右向左依次為：甲醛、苯、氨、甲苯、二甲苯、TVOC。機器的左邊是內置式熱敏列印機，在此能夠列印定製的甲醛測驗報告。 3、報警功用 手持甲醛檢查儀中首要的是作業電極，它是用一個具有催化活性的金屬，將其塗覆在一張透氣但憎水的膜上做成。甲醛氣體經分散過多孔的膜在其上進行氧化還原反應，作業電極作業信號經擴大變成儀器的輸出信號，使作業電極與參考電極間維持穩定的電位差。電壓信號經集成電路處理器對比後生成甲醛氣體濃度值，並用數字顯現在儀器面板上。 4、注意事項 檢查前檢查環境密閉1小時，待甲醛充分均勻的散布在環境中；檢查過程中不要進行影響測驗成果的活動，如吸煙和用燃氣灶等；檢查現場需整理潔凈，不能堆積剩餘的塗料、油漆、板材等；檢查過程中不要運用化工產品，如空氣新鮮劑，香水，酒精等等。甲醛規范為：0.1mg/m3以下合格。

8. simco fmx 004靜電測試儀的使用方法說明書

杉本貿易產品使用說明單按歸零重置。
功能：有效檢測ESD工作場所設備，工作檯面，工具的帶靜電電荷。
特性：液晶/電平顯示檢測數據，測試數據保持，數字清零顯示，高/低檔量程。
輸出：紅色LCD顯示正電荷、藍色LCD顯示負電荷
精度:低范圍精度為：正負0.1kv 高范圍精度為：正負1kv
聲響報警:開機/閑置自動關機/超出可測范圍
自動關機:閑置約5分鍾