口蹄疫疫苗中和抗體檢測方法

① 豬口蹄疫做完幾天產生免疫

口蹄疫產生一般為15天左右，免疫期6個月左右。

該病潛伏期1—7天，平均2—4天病牛精神沉鬱，閉口，流涎，開口時有吸吮聲，體溫可升高到40一41℃。發病1—2天後，病牛齒齦、舌面、唇內面可見到蠶豆到核桃大的水皰，涎液增多並呈白色泡沫狀掛於嘴邊。採食及反芻停止。

水皰約經一晝夜破裂，形成潰瘍，這時體溫會逐漸降至正常。在口腔發生水皰的同時或稍後，趾間及蹄冠的柔軟皮膚上也發生水皰，也會很快破潰，然後逐漸癒合。有時在乳頭皮膚上也可見到水皰。

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原理：利用異硫氰酸胍方法提取RNA，在反轉錄酶的作用下，以RNA為模板，以引物為起點合成與RNA模板互補的cDNA鏈。利用西安天隆科技有限公司生產的DTC型基因擴增儀，在TaqDNA聚合酶的作用下，經高溫變性、低溫退火、中溫延伸的循環。

使特異性DNA片段的基因拷貝數放大一倍。經過35個循環，最終使基因放大數百萬倍。將擴增產物進行電泳，經溴化乙錠染色後，在紫外燈照射下，肉眼可見DNA片段的擴增帶。該方法可以檢測所有亞型的口蹄疫病毒，檢測結果為陽性，需進一步採用分型診斷試劑盒進行進一步檢測。

② 口蹄疫病毒的疫苗研究

疫苗接種是特異性預防FMD的可靠和有效手段，安全有效的疫苗是成功地預防、控制乃至最終消滅FMD的先決條件。FMD弱毒疫苗和滅活疫苗等常規疫苗都具有良好的免疫原形，在預防和控制FMD的過程中發揮著重要作用，但由於病毒毒力返強、病毒滅活不徹底、活病毒逃逸加工廠等不安全因素，世界上一些地區FMD的暴發似乎與滅活疫苗中殘存的活病毒有關，促使人們尋求一種更加安全有效的FMD疫苗。隨著分子生物學技術的飛速發展，FMDV基因工程疫苗如亞單位疫苗、可飼疫苗、合成肽疫苗、蛋白質載體疫苗、基因缺失疫苗、活載體疫苗、核酸疫苗等不斷涌現。 基因工程亞單位疫苗是指採用基因工程手段制備病原體亞單位成分，由於亞單位疫苗只含有病原體的一部分，不會引起病原體所導致的動物發病，在安全性方面大大提高。
FMDV基因工程亞單位疫苗主要是利用各種表達系統表達VP1蛋白，製成疫苗。Kupper等（1981）等克隆了FMDVVP1基因，將其插入到原核表達載體PL啟動子的下游，實現VP1基因的原核表達，並通過間接ELISA和放射免疫試驗證實了其表達產物具有抗原性，從而為FMDV基因工程亞單位疫苗的研製提供了理論依據。同年Kield用大腸桿菌表達的A型FMDVVP1蛋白免疫豬和牛，都可誘導中和抗體的產生，用高濃的VP1蛋白或重復接種牛，可使牛抵抗FMDV強毒的攻擊。Morgan證實：用A12-32二聚體多次接種豬，豬也可產生高水平的中和抗體，可以保護豬免受強毒的攻擊，但是該技術不適合O型FMDV。已經發現FMDV結構基因和非結構基因2A、3C串聯起來表達，可以產生76S的類病毒粒子，提純該病毒粒子，用來免疫動物，其免疫效果類似於全病毒，可產生高水平的中和抗體，能抵抗強毒的攻擊，並徹底解決了FMDV常規疫苗散毒的危險，顯示其良好的年個月度年個前景。除此以外，酵母和桿狀病毒系統也用來表達VP1蛋白，解決VP1蛋白在原核表達系統中不被修飾加工等問題，以期提高其免疫原性。 可飼（食）疫苗即利用膿桿菌或基因槍等技術，將免疫原性基因導入植株中，獲得表達免疫原性蛋白的植株。
FMD轉基因植物可飼疫苗是研究較早，並且效果較好的例子之一。早在1998年，Carrillo等用FMDV的主要保護性抗原基因VP1獲得了轉基因擬南芥，用葉浸提物免疫小鼠，可誘導產生特異性抗體，所有免疫的小鼠都能抵抗FMDV強毒半數致死量的攻擊，這是有關轉基因植物表達的病毒抗原使免疫動物全部獲得保護的首篇報道，而且一個免疫劑量僅為25-50mg葉片。1999年Wigdorovitta等又利用苜蓿作為受體材料，成功獲得了轉基因苜蓿，以15-20mg劑量免疫小鼠，免疫鼠能100%抵抗致死量強毒的攻擊。Carrillo等又以馬鈴薯作為受體材料，成功獲得了表達VP1的轉基因馬鈴薯，動物實驗證實免疫鼠也能抵抗強毒的。FMDV轉基因植物可飼疫苗的研究成功，將為牛、羊等草食動物FMD的防治帶來光明的前景。 合成肽苗即用根據免疫抗原表位的氨基酸序列合成的抗原決定基小肽製作的疫苗。一般是從蛋白質的一級結構並結合單克隆抗體的分析，推導出蛋白質免疫主要抗原表位的氨基酸順序，然後合成或基因工程表達這一段肽作為抗原。
Dimarch用合成O1K病毒VP1141-158和200-213片段氨基酸組成的40個氨基酸肽（半胱氨酸-半胱氨酸-200-213-脯氨酸-脯氨酸-絲氨酸-141-158-脯氨酸-半胱氨酸-苷氨酸），在其中間加上兩個脯氨酸和一個絲氨酸，使多肽折成立體構型，達到提高了單段肽（141-158-脯氨酸-半胱氨酸-苷氨酸）在豚鼠中的應答水平，並提出了N-末端氨基酸（半胱氨酸-半胱氨酸）在提高保護應答的重要性。Brown等用化學法合成了FMDVVP1基因編碼的140-160及200-213位肽段基因片段，並在大腸桿菌體內得到了表達，用其免疫牛、豬等都獲得了較好的免疫力。Doel分別用A、O、C血清型FMDVVP1序列的141-158和200-213肽段組成的40個aa合成肽，用牛和豚鼠進行了試驗，結果每個肽都產生了特異性高水平抗病毒中和抗體，在豚鼠中O、A型肽可抗各自病毒的攻擊並獲得完全保護，C型較差。 運用基因工程手段克隆FMDV全長cDNA，構建感染性克隆，在DNA水平上來RNA，通過缺失與病毒力相關的基因，減弱其毒力但不喪失其免疫原性。
FMDV與Mengo病毒同屬小RNA病毒，人們已通過DNA重組技術，將Mengo病毒polly（C）片段縮短，構成突變體，這種突變體對小鼠無害，而且在小鼠體內能產生高水平的抗體，保護小鼠免受強毒的攻擊，因而研究人員試圖借鑒Mengo病毒的經驗，FMDVpoly（C）片段縮短，雖然縮短了poly（C）片段的FMDV突變體的毒力沒有減弱，但這給人們某種啟發，對FMDV基因組特定位點的缺失，極有可能構建FMDV弱毒株。
X射線晶體分析發現，FMDV具有一定立體構象，其表面由VP1-VP3組成，在VP1的一個高度可變區域內，有一高度保守的β環狀（G-H環）氨基酸序列暴露於病毒粒子的表面，其中包含精氨酸-苷氨酸-天門冬氨酸（RGD）序列，構成病毒的細胞吸附位點。Ochoa等人研究FMDVVP1基因片段的主要抗原位點G-H環合成肽晶體結構時發現，針對VP1單抗可以產生一定程序的病毒凝集和很強的抑制病毒與細胞吸附作用。Acharya等也發現含有RGD序列的感染性的cDNA克隆，制備RGD缺失或突變的病毒粒子就成為可能。Mason通過取代病毒RGD序列內的氨基酸構建FMDV突變株，使病毒不能吸附和感染細胞。以上的研究均證實RGD序列是病毒吸附宿主細胞所必需的。Mckenna等用SGSNPGSL序列取代野生型SGSGVRGDFGSL的RGD編碼序列，構建了RGD缺失病毒。這種缺失RGD序列的病毒粒子不吸附和感染細胞。利用該缺失病毒進行小鼠和豬的動物試驗發現，野生型病毒對照組出現典型的FMD症狀，試驗組無任何症狀。通過免疫沉澱監測了這些動物在接種28d後的血樣，其中對照組顯示很強的結構蛋白活性，沒有測到非結構蛋白活性，證明了野生病毒在動物中能復制，而所構建的病毒不能復制。用海福特牛對這種病毒所做的油作比較，證明在產生血清中和抗體、刺激機體產生免疫應答、動物保護等方面與滅活疫苗一致，有些優於滅活疫苗。 核酸疫苗又稱基因疫苗，是將編碼病原體免疫保護性抗原蛋白基因置於真表達元件的控制下，並將其導入動物機體內，通過宿主細胞的轉錄系統合成抗原蛋白，從而誘導宿主產生對抗原蛋白的免疫應答。由於FMDV血清型多，各型間無交叉保護性，這給FMD的仿製帶來巨大的困難。90年代，隨著基因免疫概念的問世及完善，為FMDV免疫帶來契機。Benvenisti將FMDV完整的結構基因P1和非結構基因2A、3CD串聯起來，同時加入腦心肌炎病毒（EMCV）內部核糖體進入(IRES)，並通過免疫熒光和免疫斑點技術檢測到豬皮膚中，部分豬獲得抵抗FMDV強毒的攻擊。Shieh未了克服亞單位疫苗不能產生持久的免疫保護，通過基因免疫和亞單位疫苗聯合免疫來增強其免疫效果，首先用含有FMDV主要免疫原性VP1的質粒免疫鼠，接下來VP1多肽偶合物（P29-KLH）刺激，免疫的鼠產生高效價的抗體，並具有中和FMDV活性。
總之，理想的疫苗必須安全、有效、同時還應具備價廉、易於推廣等優點。雖然FMDV滅活疫苗具有良好的免疫原性，但潛在的不安全性影響其使用；另外，由於滅活疫苗制備成本高，價格昂貴，限制了該疫苗的推廣。基因疫苗經驗有安全性高，同時可以根據需要制備同一病毒多哥成分或多價病毒疫苗，大幅度節約生產成本等優點，因此，FMDV記憶內工程疫苗是未來的發展方向。

③ 豬口蹄疫治療比較快的方法是什麼

1、撲殺病畜及染毒動物

撲殺動物的目的是消除傳染源，病毒是最主要的傳染源，其次是隱性感染動物和牛、羊等持續性感染帶毒動物。疫情發生後，可根據具體情況決定撲殺動物的范圍，撲殺措施由寬到嚴的次序可為病畜→病畜的同群畜→疫區所有易感動物。

2、免疫接種

目的是保護易感動物，提高易感動物的免疫水平，降低口蹄疫流行的嚴重程度和流行范圍。現行油佐劑滅活疫苗的注射密度達80%以上時，能有效遏制口蹄疫流行。疫苗接種可分為常年計劃免疫、疫區周圍環狀免疫和疫區單邊帶狀免疫。

實施免疫接種應根據疫情選擇疫苗種類、劑量和次數。常規免疫應保證每年2～3次，每頭份疫苗含3PD50以上。緊急預防應將每頭份疫苗提高到6 PD50，並增加免疫次數。

3、限制動物、動物產品和其他染毒物品移動

目的是切斷傳播途徑。小到一個養豬戶，大到一個國家，要想保持無口蹄疫狀態，必須對上述動物和物品的引入和進口保持高度警惕。疫區必須有全局觀念，其易感動物及其產品運出是疫情擴散的主要原因。

4、動物衛生措施

疫區除對場地嚴格消毒外，還要關閉與動物及產品相關的交易市場。

5、流行病學調查

包括疫源追溯和追查易感動物及相關產品外運去向，並對之進行嚴密監控和處理。

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最易感染的動物是黃牛、水牛、豬、駱駝、羊、鹿等；黃羊、麝、野豬、野牛等野生動物也易感染此病。本病以牛最易感，羊的感染率低。口蹄疫在亞洲、非洲和中東以及南美均有流行，在非流行區也有散發病例。

口蹄疫發病後一般不致死，但會使病獸的口、蹄部出現大量水皰，高燒不退，使實際畜產量銳減。另外，有個別口蹄疫病毒的變種可傳染給人。因此，每次爆發後只能屠宰和集體焚毀染病牲畜以絕後患。由於口蹄疫傳播迅速、難於防治、補救措施少，被稱為畜牧業的「頭號殺手」。

④ 口蹄疫疫苗怎麼打

豬場對豬口蹄疫做免疫預防可以參考一下。分主動和被動免疫，做好了話，非常好的。希望對你有用： 主動免疫，疫苗：口蹄疫O型濃縮滅活苗 後備母豬配種前接種4-5ML/頭，產前30天接種4-5ML/頭。 經產母豬產前30天接種4-5ML/頭，產前10天再次接種一次4-5ML/頭。 公豬每3個月一次，每次接種...4-5ML/頭。 仔豬出生後70天接種3ML/頭，仔豬出生後100天加強接種5ML/頭. 被動免疫：增強機體非特異性抗體的產生，有效降低口蹄疫病毒的感染率。 豬群使用復方花青素500克+黃芪多糖500克/T,拌料飼喂。

⑤ 羊口蹄疫的治療方法

羊口蹄疫發生於羊的口蹄疫部位或牛。一般情況下，羊口蹄疫具有相應的口蹄疫疫苗，且羊口蹄疫較易發生在春季或秋季，屬於群發性疾病。因此建議提前注射疫苗。同時建議保持牛群、羊群圍欄的清潔衛生。在羊群外出後，建議針對羊群居住地進行紫外線消毒。

⑥ 豬口蹄疫苗怎樣打

在注射口蹄疫疫苗之前請你先選擇好產品的生產廠家，如上海申聯的、中農威特、新疆天康的產品都比較好。以下希望對你有所幫助。
口蹄疫疫苗——使用方法
預防口蹄疫的疫苗有牛O型口蹄疫滅活疫苗，豬O型口蹄疫滅活疫苗，牛羊口蹄疫O型鼠化弱毒疫苗等。其具體的應用為：

(1)牛O型口蹄疫滅活疫苗系選擇抗原譜廣、抗原性和免疫原性良好的牛源強毒OA/58為毒種，接種於BHK-21傳代細胞系單層培養，制備病毒抗原，經二乙烯亞胺(BEI)滅活，加礦物油佐劑製成的乳劑疫苗。為略帶粉紅色或乳白色的粘滯性液體。用於各種年齡的黃牛、水牛、奶牛、氂牛預防接種和緊急接種，免疫持續期為6個月。成年牛肌肉注射3毫升，1歲以下犢牛肌肉注射2毫升。本品應防止凍結。在4～8℃條件下貯存，有效期為10個月。

(2)豬O型口蹄疫滅活疫苗系用豬源強毒接種BHK-21或IBRS-2細胞單層，收獲細胞毒液，經二乙烯亞胺(BEI)滅活，與油佐劑混合乳化製成。為乳白色或淡紅色粘滯性乳狀液，經貯存後允許液面上有少量油，瓶底有微量水(分別不得超過1/10)，搖之即呈均勻乳狀液。用於預防豬O型口蹄疫，免疫持續期6個月。疫苗注射前充分搖勻，豬耳根後肌肉注射，體重10～25公斤注射2毫升；25公斤以上注射3毫升。注意疫苗應在10℃以下冷藏包裝運送。本品保存於2～10℃冷庫，有效期為1年。

(3)口蹄疫O型鼠化弱毒活疫苗系用口蹄疫O型鼠化弱毒株接種乳兔，收獲含毒組織並磨碎，將病毒浸出液加入等量甘油製成。為暗赤色液體。靜置後，瓶底有部分沉澱；振搖後，呈均勻的混懸液。用於預防1歲以上的黃牛、氂牛和4個月以上的綿羊、山羊O型口蹄疫。牛肌肉注射2毫升，羊皮下注射1毫升，免疫持續期6～8個月。本品不能用於豬、奶牛、水牛。在-12℃以下保存，有效期為1年；在2～6℃保存為5個月；在20～22℃保存為7天。

口蹄疫疫苗
1.口蹄疫疫苗是一種滅活苗，是防治口蹄疫的發生、流行最主要的武器之一。但還存在一些缺陷，一般只能誘發短期免疫，即4個月。

2.選擇使用有效疫苗。防疫接種前，要先鑒別疫苗是否過期、失效，效價是否高，疫苗瓶是否有裂損。如遇破乳或超過規定量的分層(1/10)則不能使用。

3.疫苗當天開啟當天用完。疫苗入庫應做好記錄，使用時採取「先入先用」的原則。每瓶疫苗啟用後，瓶內剩餘疫苗用蠟封閉針孔於2℃~8℃儲存，超過24小時不可再用。

4.器械消毒。接種用所有器械，如注射器等，用溫熱方法高壓滅菌或用潔凈水加熱煮沸消毒至少15分鍾。嚴禁使用化學方法消毒。

5.動物免疫要求。免疫前應了解接種動物品種、健康狀況、病史及免疫史，凡有病、瘦弱、臨產母畜(10天~15天)不應接種，待病畜康復、母畜產後再按規定補針。

6.善後處理。使用疫苗後，所有疫苗包裝，如疫苗瓶、使用過的酒精棉球、碘酊棉，要集中銷毀。散亂在畜舍中會成為病原的來源。

7.飼養管理。接種疫苗前後2日~3日不要投喂抗生素，在飼料中，復合維生素用量提高5％，連用1周。

防治口蹄疫疫苗反應的措施

1.接種後，少數動物因品種、個體狀況，可能出現疫苗反應，應加強觀察，及時用腎上腺素或其他辦法治療，以減少損失。

2.接種後的養殖戶(場)，應在畜舍內外進行一次徹底消毒工作，堅持1周。

3.凡曾接觸過病畜的人員，應在更換衣服、鞋帽和必要的消毒後，方可參與疫苗注射。

4.接種動物，應休息1天~2天。

5.接種高齡孕畜或瘦弱動物，應做到一觀察、二診斷、三注射。