薄層色譜板的制備鑒別方法

① 薄層色譜法實驗步驟

薄層色譜法的實驗步驟包括薄層板的制備、點樣、樣品的展開和斑點定位。

② 什麼是薄層色譜法

優點：操作、顯色比較方便，薄層色譜法斑點集中，薄層板耐腐蝕。
紙色譜法
點：操作、顯色比較方便，以紙為支持劑，沒有薄層色譜法鋪層的麻煩；缺點：不能用腐蝕性顯色劑，分離效果不如薄層色譜法斑點集中。
氣相色譜法
優點：高效能、高選擇性、高靈敏度、用量少、分析速度快、並可制備高純物質。
液相色譜法
優點：高效能、高選擇性、高靈敏度、用量少、分析速度快、並可制備高純物質。

③ 薄層色譜法的操作

除另有規定外，將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡後，倒入塗布器中，在玻板上平穩地移動塗布器進行塗布（厚度為0.2～0.3mm），取下塗好薄層的玻板，置水平台上於室溫下晾乾，後在110℃烘30分鍾，即置有乾燥劑的乾燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（可通過透射光和反射光檢視）。
手工制板一般分不含粘合劑的軟板和含粘合劑的硬板倆種。
常用吸附劑的基本情況：顆粒的大小，太大洗脫劑流速快分離效果不好，太細溶液流速太慢。一般說來吸附性強的顆粒稍大，吸附性弱的顆粒稍小。氧化鋁一般在100-150目。氧化鋁分為鹼性氧化鋁，適用於碳氫化合物、生物鹼及鹼性化合物的分離，一般適用於PH為9-10的環境。中性氧化鋁適用於醛、酮、醌、酯等PH約為7.5的中性物質的分離。酸性氧化鋁適用於PH4~4.5的酸性有機酸類的分離。氧化鋁、硅膠根據活性分為五個級，一級活性最高，五級最低。
黏合劑及添加劑：為了使固定相（吸附劑）牢固地附著在載板上以增加薄層的機械強度，有利於操作，需要時在吸附劑中加入合適的黏合劑：有時為了特殊的分離或檢出需要，要在固定相中加入某些添加劑。
薄層板的活化：硅膠板於105-110℃烘30分鍾，氧化鋁板於150-160℃烘4小時，可得活性的薄層板。 除另有規定外，用點樣器點樣於薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊2.0cm，樣點直徑及點間距離同紙色譜法，點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。
點樣直徑不超過5mm，點樣距離一般為1~1.5cm即可。
樣品在溶劑中的溶解度很大，原點將呈空心環——環形色譜效應。因此配製樣品溶液時應選擇對組分溶解度相對較小的溶劑。
點樣方式有點狀點樣和帶狀點樣。
展開劑也稱溶劑系統，流動性或洗脫劑，是在平面色譜中用作流動相的液體。展開劑的主要任務是溶解被分離的物質，在吸附劑薄層上轉移被分離物質，使各組分的Rf值在0.2~0.8之間並對被分離物質要有適當的選擇性。作為展開劑的溶劑應滿足以下要求：適當的純度、適當的穩定性、低黏度 、線性分配等溫線、很低或很高的蒸氣壓以及盡可能低的毒性。
展開方式總的來講平面色譜的展開有線性、環形及向心3種幾何形式。
A 單次展開 用同一種展開劑一個方向展開一次，這種方式在平面色譜中應用最為廣泛。（垂直上行展開，垂直下行展開，一向水平展開，對向水平展開）
B 多次展開 單向對此展開，用相同的展開劑沿同一方向進行相同距離的重復展開，直至分離滿意，廣泛應用於薄層色譜法
C 雙向展開 用於成分較多、性質比較接近的難分離組分的分離。
薄層展開室需預先用展開劑飽和，可在室中加入足夠量的展開劑，並在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封室頂的蓋，使系統平衡或按正文規定操作。將點好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中，浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5～1.0cm（切勿將樣點浸入展開劑中），密封室蓋，待展開至規定距離（一般為10～15cm），取出薄層板，晾乾，按各品種項下的規定檢測。
影響展開的因素
A 相對濕度的影響
B溶劑蒸汽的影響（a 展開室的飽和b預吸附）
C 溫度的影響
D 展距的影響與分離度僅正比與展距的平方根。 A 光學檢出法
a自然光（400~800nm）
b紫外光（254nm或365nm）
c熒光一些化合物吸收了較短波長的光，在瞬間發射出比照射光波長更長的光，而在紙或薄層上顯出不同顏色的熒光斑點（靈敏度高、專屬性高）
B 蒸汽顯色法
多數有機化合物吸附碘蒸氣後顯示不同程度的黃褐色斑點，這種反應有可逆及不可逆兩種情況，前者在離開碘蒸氣後，黃褐色斑點逐漸消退，並且不會改變化合物的性質，且靈敏度也很高，故是定位時常用的方法；後者是由於化合物被碘蒸氣氧化、脫氫增強了共軛體系，因此在紫外光下可以發出強烈而穩定的熒光，對定性及定量都非常有利，但是制備薄層時要注意被分離的化合物是否改變了原來的性質。
C 物理顯色法
用紫外照射分離後的紙或薄層後，使化合物產生光加成，光分解、光氧化還原及光異構等光化學反應，導致物質結構發生某些變化，如形成熒光發射功能團。發生熒光增強或淬滅及熒光物質的激發或發射波長發生移動等現象，從而提高了分析的靈敏度和選擇性。
D 試劑顯色法
廣泛應用的定位方法。用於紙色譜的顯色劑一般都適用於薄層色譜，還有防腐劑的顯色劑不適合用於紙色譜及含有有機黏合劑薄層的顯色，又時噴顯色劑後續加熱，這也不是用於紙色譜。
顯色方法a噴霧顯色：顯色劑溶液以氣溶膠的形式均勻的噴灑在紙和薄層。b 浸漬顯色：揮去展開劑的薄層板，垂直的插入盛有展開劑的浸漬槽中，設定浸板及抽出速度和規定在顯色劑中浸漬的時間。
顯色試劑
a 通用顯色劑硫酸溶液（硫酸：水 1：1，硫酸：乙醇1：1）、0.5%碘的氯仿溶液、中性0.05%高錳酸鉀溶液、鹼性高錳酸鉀溶液（還原性化合物在淡紅色背景上顯黃色斑點）
b 專屬顯色劑
⑸測定比移值
在一定的色譜條件下，特定化合物的Rf值是一個常數，因此有可能根據化合物的Rf值鑒定化合物。
⑹ 薄層掃描
薄層掃描法指用一定波長的光照射在經薄層層析後的層析板上，對具有吸收或能產生熒光的層析斑點進行掃描，用反射法或透射法測定吸收的強度，以檢測層析譜。對於中成葯復方制劑，亦可用相應的原葯材按需要組合作陰、陽對照，然後比較其薄層掃描圖譜加以鑒別。使用儀器為薄層掃描儀。
如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出，或直接在薄層上對色譜斑點作掃描定量，則可用薄層掃描法。薄層掃描的方法，除另有規定外，可根據各種薄層掃描儀的結構特點及使用說明，結合具體情況，選擇吸收法或熒光法，用雙波長或單波長掃描。由於影響薄層掃描結果的因素很多，故應在保證供試品的斑點在一定濃度范圍內呈線性的情況下，將供試品與對照品在同一塊薄層上展開後掃描，進行比較並計算定量，以減少誤差。各種供試品，只有得到分離度和重現性好的薄層色譜，才能獲得滿意的結果。

④ 薄層色譜法工作原理

薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法，它利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同，使在流動相(溶劑)流過固定相(吸附劑)的過程中，連續的產生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達到各成分的互相分離的目的。

薄層層析可根據作為固定相的支持物不同，分為薄層吸附層析(吸附劑)、薄層分配層析(纖維素)、薄層離子交換層析(離子交換劑)、薄層凝膠層析(分子篩凝膠)等。一般實驗中應用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。

吸附是表面的一個重要性質。任何兩個相都可以形成表面，吸附就是其中一個相的物質或溶解於其中的溶質在此表面上的密集現象。在固體與氣體之間、固體與液體之間、吸附液體與氣體之間的表面上，都可能發生吸附現象。

物質分子之所以能在固體表面停留，這是因為固體表面的分子(離子或原子)和固體內部分子所受的吸引力不相等。在固體內部，分子之間相互作用的力是對稱的，其力場互相抵消。

(4)薄層色譜板的制備鑒別方法擴展閱讀：

一、薄層色譜的特點：

靈敏度及解析度高、分離快速、操作方便、同時分離多個樣品、樣品預處理簡單、設備簡單。

由於這些特點，薄層色譜在實際工作中的應用十分廣泛。由於通常用薄層色譜分析法進行定量分析的過程中，薄層掃描儀是最為重要的，因此對它進行略詳的介紹。

薄層掃描儀的基本結構及主要功能基本是相同的，每台儀器都包括光源、分光器、檢測器、數據處理及信號輸出幾個部分。

二、優點

它保持了操作方便、設備簡單、顯色容易等特點，同時展開速率快，一般僅需15～20分鍾；混合物易分離，分辨力一般比以往的紙層析高10～100倍。

它既適用於只有0．01μg的樣品分離，又能分離大於500mg的樣品作制備用，而且還可以使用如濃硫酸、濃鹽酸之類的腐蝕性顯色劑。薄層層析的缺點是對生物高分子的分離效果不甚理想。

⑤ 什麼叫薄層色譜法原理是什麼！！急！！

一、薄層色譜法

薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法，它利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同，使在流動相（溶劑）流過固定相（吸附劑）的過程中，連續的產生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達到各成分的互相分離的目的。

二、薄層色譜法的基本原理

例如用硅膠和氧化鋁作支持劑，其主要原理是吸附力與分配系數的不同，使混合物得以分離。當溶劑沿著吸附劑移動時，帶著樣品中的各組分一起移動，同時發生連續吸附與解吸作用以及反復分配作用。

由於各組分在溶劑中的溶解度不同，以及吸附劑對它們的吸附能力的差異，最終將混合物分離成一系列斑點。如作為標準的化合物在層析薄板上一起展開，則可以根據這些已知化合物的Rf值（後面介紹Rf值）對各斑點的組分進行鑒定，同時也可以進一步採用某些方法加以定量。

(5)薄層色譜板的制備鑒別方法擴展閱讀：

薄層色譜法（TLC）薄層色譜具有選用范圍廣，重現性好等優點，常用於中葯各種成分的鑒別。

用固定波長對薄層展開的各斑點作薄層掃描圖譜比目測的層析圖譜更為客觀准確，因而具有更好的指紋鑒別意義。但由於受薄層板的質量和開放式層析系統等外界因素的影響，易引起一定的實驗誤差。

薄層色譜法與紙層析和紙層析比較TLC快速、分離效率高、靈敏度高、顯色方法多樣、圖像易保存。

⑥ 制備色譜如何用

yun0145(站內聯系TA)那位高手幫幫忙！！！whate0545(站內聯系TA)制備薄層色譜使用薄層色譜板進行制備分離，從混合物中提取所需要的單體。與常用的柱色譜相比，具有簡單、快速與節省溶劑與人力的優點，是實驗室比較常用的制備方法之一，比較常用的是制備薄層板色譜、制備離心薄層色譜、制備干柱薄層色譜三個類別。
1、 制備薄層板色譜
制備板：一般使用200X200mm的薄層色譜板，吸附劑厚度最好為0.5~1mm，一般不超過2m，平均1mm厚需要的硅膠量為15~20g。為了得到低成本、鋪層均勻的高質量制備薄層板，建議使用上海科哲公司的TD-II型全自動制備薄層鋪板機。
點樣：制備薄層分離的樣品量大，一般採用條帶點樣、不使用圓點點樣；一般1mm厚的硅膠最大約100mg，樣品濃度不宜太稀，應在2~10%為宜。為了得到均勻而規則的點樣結果，建議使用上海科哲公司的SP-3型電動薄層條帶點樣器。同時展開劑的用量比較大，點樣位置要比較高
展開：薄層色譜層析缸要充分飽和，如制備板數量較多，請選用上海科哲公司的制備薄層板架；
顯色：一般使用紫外燈或碘蒸汽等非破壞方式顯色，或在板邊緣進行化學試劑顯色；
回收：將檢測到的樣品連同硅膠一齊刮下，防入砂芯漏斗，使用適當溶劑將組分洗脫，將洗脫溶劑蒸干即可。一般希望洗脫溶劑沸點較低，不與組分發生反應。
制備薄層板色譜優點是使用最為方便、便宜、節省人力，缺點是分離時間較長。
2、 制備離心薄層色譜
與普通制備板有三個不同點：
首先：色譜板是圓的，是徑向色譜，分離能力優於方板；
其次：洗脫液的流動不靠毛細現象，靠離心力，減少了分離時間與脫尾，分離效能很高；
最後：洗脫液是連續流動的，可以非常容易的形成梯度，並且不需要刮下吸附層，這樣可以使色譜板可以反復使用；
所以，制備離心薄層色譜的分離效能與分離速度要遠高於制備薄層板色譜，建議採用上海公司科哲公司的KH-CTLC型制備離心薄層色譜儀。
3、制備干柱薄層色譜
可以看作棒狀的薄層色譜，優點是簡單易行，快速經濟、制備量大。缺點是必須使用可透紫外的管材，而且在收集樣品時要割斷管材，使費用略高。上海科哲公司提供專用的薄層色譜柱。本方法與真空系統聯用，構成減壓真空色譜，性能會得到進一步提升。
這三種不同的方法在不同場合都擁有自己的優勢，總的來講，制備薄層板色譜適用於制備量較小、分離程度較好的場合；制備離心薄層色譜適用於制備量中等，分離程度較差的場合；制備干柱薄層色譜用於大量樣品制備的場合。三種設備如果互相聯用，分離效率會進一步提高。這三種設備也可與柱色譜聯用yun0145(站內聯系TA)非常感謝，很有用。wszyq1985(站內聯系TA)樣品量大的話，可以用硅膠住層析；如果樣兩很少，則制備色譜user53900(站內聯系TA):)制備薄層色譜，說起來是相當的簡單，呵呵我說說我自己的經驗
我上個項目就是提純分離，考慮到這個制備薄層，結果就用了，但是薄層的最大的缺點就是重復性太小了。我上一批能用薄層制備出來，但是，下次作的制備薄層分離的就不好，因為它的影響因素太多了，比如說溫度和濕度，人為的配比，都有一定的誤差，說的最直接的就是這一批下來的板子，這快分離所得到的結果，但是下一塊就不行，我有過這也的經歷。呵呵，日本那邊用這個方法的多，但是要有心理准備

⑦ 薄層色譜法及高效液相色譜法鑒別葯物的依據分別是什麼

and with it I leave my curse. My curse on St. Gildas, on Marie Trevec, and on her descendants. I will come back to St. Gildas when my remains are disturbed. Woe to that Englishman whom my branded skull shall touch!』」

⑧ 如何制備薄層色譜硅膠板

首先准備洗凈並乾燥的玻璃板；
然後調制硅膠的勻漿，稱取一定量的硅膠加入適量蒸餾水（或者0.5%~1.0%的CMC-Na溶液，看你自己的需要），比例一般為1:2或者1:3，在研缽中用研棒研勻，研磨的時間與固定相種類和粘合劑不同而有所不同，必須在實驗時根據具體情況而定，我一般研大約10分鍾，注意不要有氣泡。
OK，開始鋪板，將硅膠的勻漿塗布在准備好的玻璃板上，注意速度要快，避免硅膠勻漿過度凝固給塗布帶來困難，而且要均勻。我一般是把適量的硅膠勻漿倒在玻璃板上，然後顛玻璃板，使其分布均勻。
塗布後的薄層水平放置，室溫晾乾備用，晾乾過程中應避免因通風而導致薄層產生裂紋。用之前最好活化，一般105℃烘0.5到1個小時。
說起來很麻煩，但其實很簡單的過程，我覺得你最好找一個鋪過的人指導一下。
但願對你有所幫助。

⑨ 制備薄層色譜法的優缺點是什麼 簡述制備薄層分離的過程，找出每一步驟的關鍵操作。

轉載：《分析測試網路網》
PTLC的應用體會

PTLC也就是我們通常所說的制備薄層板，對於一些在TLC小板上分離度比較好的化合物，我們可以考慮用制備薄層來進行分離，進而得到單品。這個也算是實驗室一種很常規的一種分離方法，大家應該有所體會。

下面就是我做PTLC的過程：

第一，鋪板：稱取30克的薄層硅膠，加入3倍量的千分之五的CMC-Na沿著一個方向攪勻，攪拌的時間大概在25分鍾左右，當然個體存在差異，力氣大的可能15分鍾也可以攪的很勻。放在窗檯晾乾24小時也就可以使用了。

第二，洗板：在點樣之前，先用純甲醇把板洗一下，因為硅膠板中有一些雜質本身會影響我們的樣品，一般會看到友一層淡黃色的帶被推到最前沿，那就是雜質了，這樣洗板的目的也就達到了，將洗好的板拿出來放在通風櫥吹乾待用。

第三，點樣：這是關鍵的一步，若是點樣點的不好，會非常影響我們制備薄層板的效果，嚴重的甚至達不到分離的目的。一般我是將樣品溶液10-50mg（點樣量不可過多，超載的話在展開的板上出現鋸齒狀，點也不可砸壞，會大大的影響效果）線性滴加於硅膠板上，盡量不要用水來溶解樣品，否則會擴散的很嚴重，效果不好。

第四，飽和：先把展開劑（展開劑最好不要用水，甲醇等極性打的展開劑，可能會使硅膠，CMC-Na等一起洗下來）（20ml）左右放在展開槽一側，把PTLC板放在另一側30分鍾進行預飽和，之後將展開劑傾斜倒入另一側進行展開，這樣可以避免邊緣效應，目的還是一個，為了使我們的分離效更好。

第五，刮板：將上面展開後的板拿出吹乾以後，確定自己要刮的范圍，用鉛筆畫上即可，接著用刀片將所畫的范圍刮下來即可。將掛下的硅膠用小柱裝上，用展開溶劑將其洗出即可，充的話盡量充干凈，不然浪費的都是自己的樣品啊。

我在制備TLC的時候就是上面的步驟了，這其中可能有一些我想的還不周到的地方，希望大家海涵！

優缺點要有對比才好說吧，

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⑩ 薄層色譜法起源及使用是什麼

薄層色譜法起源於60年代，至今,它已成為一般實驗室必不可少的分離分析手段,常常被首選成不可替代的方法。

薄層色譜又叫薄板層析，是色譜法中的一種，是快速分離和定性分析少量物質的一種很重要的實驗技術，屬固—液吸附色譜，它兼備了柱色譜和紙色譜的優點，一方面適用於少量樣品（幾到幾微克，甚至0.01微克）的分離；另一方面在製作薄層板時，把吸附層加厚加大，因此，又可用來精製樣品，此法特別適用於揮發性較小或較高溫度易發生變化而不能用氣相色譜分析的質。此外，薄層色譜法還可用來跟蹤有機反應及進行柱色譜之前的一種「預試」。

薄層色譜法，系將適宜的固定相塗布於玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點樣、展開後，與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比，用以進行葯品的鑒別、雜質檢查或含量測定的方法。

玻板 除另有規定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的規格,要求光滑、平整，洗凈後不附水珠，晾乾。

固定相或載體 最常用的有硅膠G、硅膠GF<[254]> 、硅膠H、 硅膠HF<[254]>,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、 微晶纖維素F<[254]>等。 其顆粒大小,一般要求直徑為10～40μm。薄層塗布,一般可分無粘合劑和含粘合劑兩種;前者系將固定相直接塗布於玻璃板上, 後者系在固定相中加入一定量的粘合劑，一般常用10～15％煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小時)，混勻後加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉水溶液(0.5～0.7％)適量調成糊狀，均勻塗布於玻璃板上。也有含一定固定相或緩沖液的薄層。

塗布器 應能使固定相或載體在玻璃板上塗成一層符合厚度要求的均勻薄層。

點樣器 同紙色譜法項下。

展開室 應使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸，並有嚴密的蓋子，除另有規定外，底部應平整光滑，應便於觀察。

薄層板制備 除另有規定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的氣泡後，倒入塗布器中,在玻板上平穩地移動塗布器進行塗布（厚度為0.2～0.3mm），取下塗好薄層的玻板，置水平台上於室溫下晾乾，後在110℃烘30分鍾，即置有乾燥劑的乾燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（可通過透射光和反射光檢視）。

點樣 除另有規定外，用點樣器點樣於薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊2.0cm，樣點直徑及點間距離同紙色譜法,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。

展開 展開室如需預先用展開劑飽和，可在室中加入足夠量的展開劑，並在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封室頂的蓋，使系統平衡或按正文規定操作。 將點好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5～1.0cm（切勿將樣點浸入展開劑中）,密封室蓋,待展開至規定距離(一般為10～15cm),取出薄層板，晾乾，按各品種項下的規定檢測。

如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出，或直接在薄層上對色譜斑點作掃描定量，則可用薄層掃描法。 薄層掃描的方法，除另有規定外，可根據各種薄層掃描儀的結構特點及使用說明，結合具體情況，選擇吸收法或熒光法，用雙波長或單波長掃描。由於影響薄層掃描結果的因素很多，故應在保證供試品的斑點在一定濃度范圍內呈線性的情況下，將供試品與對照品在同一塊薄層上展開後掃描，進行比較並計算定量，以減少誤差。各種供試品，只有得到分離度和重現性好的薄層色譜，才能獲得滿意的結果。希望能幫到您！