藻毒素的高效液相測定方法檢測器

Ⅰ 超高效液相色譜的應用

如今，超高效液相色譜儀主要應用於
（1）葯物分析 如天然產物中復雜組分的分析
（2）生化分析 如蛋白質、多肽、代謝組學等生化樣品
（3）食品分析 如食品中農葯殘留的檢測
（4）環境分析 如水中微囊藻毒素的檢測
（5）其他 如化妝品中違禁品的檢測
超高效液相色譜儀尤其對中葯研究領域的發展是一個極大的促進。中葯的組分復雜，分離困難等問題都可以通過超高效液相色譜法逐漸解決。在同樣條件下，UPLC能分離的色譜峰比HPLC多出一倍還多。在同樣條件下，UPLC的解析度能夠認出更多的色譜峰。
相信在分析實驗室中超高效液相色譜會越來越普及，讓液相色譜法得到飛躍和進步。

Ⅱ 高效液相色譜儀的常用檢測器有哪幾種，有什麼區別

檢測器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉化為可供檢測的信號，常用檢測器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學發光等。

PDA檢測器：即紫外檢測器，點時間可檢測單一點處吸收值。

DAD檢測器：二極體陣列檢測器，可理解為無數個PDA檢測器串聯。即點時間可檢測某一波段吸收值，比PDA檢測器定性能力強大。

熒光檢測器：對某些吸收紫外光後可發射熒光的物質進行檢測，靈敏度較高。

蒸發光散射檢測器：可以檢測沒有紫外吸收的有機物質（不可用於梯度洗脫）

示差折光檢測器：根據折射率的變化對樣品濃度檢測（不可用於梯度洗脫），萬能檢測器，但是定性能力和PDA一樣差。

Ⅲ 微囊藻素的毒素檢測

用於檢測微囊藻毒素的方法有很多，例如生物分析法、細胞毒性檢測法、酶聯免疫吸附法（ELISA）、高效液相色譜法（HPLC）、毛細管電泳法（CE）、蛋白磷酸酶抑製法等，這些方法都有各自的優點，但又有不同程度的缺陷性.生物檢測法不能區分微囊藻毒素的異構體，工作量很大；細胞毒素檢測法的靈敏度較低；高效液相色譜法的預處理過程繁瑣，設備昂貴；CE法的重現性差；蛋白磷酸酶抑製法不能區分特異的毒素同系物，且後處理困難。 動物試驗法是最早採用的常規毒性分析法，主要是採取對小鼠進行灌喂或腹腔注射來鑒定藻毒素的毒性。該方法能直觀地反映微囊藻毒素的總體毒性。用純化的MCs或藍藻中粗提取的藻毒素進行測試，根據半致死劑量（LD50μg/kg）可初步確定其毒性。除個別異構體的LD50為200~250μg/kg，多數MCs的LD50為60~70μg/kg。該法具有操作簡單，結果直觀、快速等優點，但需要消耗較多的毒素，靈敏度和專一性都不高；無法准確定量，也不能辨別毒素的異構體類型；小鼠的維持費用高、工作量大。因此，動物試驗法通常只作為毒性檢測的最初篩選方法，並且正日益被其他方法所取代。
細胞毒性檢測技術是利用毒素對細胞的毒性作用來檢測毒素的一種技術，不僅可以判斷毒素是否存在，還可以對毒素進行精確的定量。谷康定等用2步灌流法制備大鼠原代肝細胞，經MC-LR處理後，數小時後細胞形態學即發生改變，其靈敏度可達μg/L級。Fladmark等利用藻毒素誘導沙門氏菌和大鼠的原發性肝細胞死亡的能力為參數檢測MC-LR，表明懸浮培養液中的沙門氏菌肝細胞為檢測較廣范圍的肝毒素提供了迅速靈敏的系統。該技術靈敏度雖然較高，但操作繁瑣，基本上處於初步研究階段，較難得到推廣應用。 高效液相色譜法（HPLC）是最常用的MC分析方法之一。自然界中MC常以痕量形式存在且干擾物質較多，所以色譜檢測前必須先將樣品通過萃取、吸附、富集等預處理，凈化洗脫，再將洗脫液進行HPLC色譜分析，經檢測器檢測，將樣品色譜圖的保留時間和峰面積與標准品比較，從而進行定性和定量。HPLC檢測MC主要使用的檢測器有紫外（UV或VWD）、熒光（FL）、化學發光（CL）、二極體陣列（PDA 或DAD）等，最常用的是紫外和二極體陣列檢測器。MC是一種環狀多肽，其共軛雙鍵在237 nm～239 nm下有最大吸收，故可通過紫外檢測。紫外檢測器成本較低，但MC各種異構體之間的特徵吸收很接近，也就是說，紫外檢測器在識別MC過程中存在相互干擾的缺陷，影響測定準確度；另外如果有其他物質伴隨MC一同洗脫出來，其單波長吸收峰就會受到干擾。二極體陣列檢測器比單波長紫外檢測器解析度高（它有一個特定的光譜吸收范圍，通常是190 nm～280nm），噪音低，線性范圍寬，其缺點是流動相的選擇有一定限制，流動相的截止波長必須小於檢測波長。
HPLC可以對MC進行定性和定量，是了解MC化學性質甚至結構的重要手段，但是它對高純度標准品高度依賴，而由於技術的限制，商業用標准品又非常有限，這就限制了HPLC測定MC的發展。
液質聯用法（LC-MS）以液相色譜為分離系統，質譜為檢測系統。MC樣品在質譜部分和流動相分離，被離子化後，經質譜的質量分析器將離子碎片按質量數分開，經檢測器得到質譜圖。所以只要知道相對分子質量，就可以對樣品進行精確的定量檢測。1990年，LC/MS 技術首次被應用於藍藻毒素的檢測。
HPLC-電噴霧電離質譜法（HPLC-ESI-MS）是帶有電噴霧離子化系統的質譜分析法。其大致原理是MC樣品溶液在強電場的作用下破碎成許多細小的帶有電荷的液滴，解吸出離子，離子碰撞活化裂解成碎片，從而獲得分子的結構信息，樣品的分子離子和裂片離子經一系列分離器和靜電透鏡進入質量分析器進行質譜分析。1993年開始使用此方法檢測MC。
四極桿質譜由四根帶有直流電壓（DC）和疊加的射頻電壓（RF）的准確平行桿構成，相對的一對電極是等電位的，兩對電極之間電位相反。當一組質荷比不同的離子進入由DC和RF組成的電場時，只有滿足特定條件的離子穩定振盪通過四極桿，到達監測器而被檢測。通過掃RF場可以獲得質譜圖。四極桿成本低，價格便宜，雖然日常分析的質荷比的范圍只能達到3000，但由於分析器內部可容許較高壓力，很適合在大氣壓條件下產生離子的ESI離子化方式，並且，ESI電離最突出特點是產生多電荷，MC電噴霧電離所產生的電荷分布在3000以下，所以四極桿廣泛地與ESI聯用，另外，三重四極桿由於可以做多級質譜，檢出定量限（LOQ）為10pg，滿足了低含量MC樣品的檢測要求。
離子肼質譜是利用離子肼作為分析器的質譜方法。離子肼（Ion trap）由一對環形電極和兩個呈雙曲面形的端蓋電極組成。在環形電極上加射頻電壓或再加直流電壓，上下兩個端蓋電極接地。逐漸增大射頻電壓的最高值，離子進入不穩定區，由端蓋極上的小孔排出。因此，當射頻電壓的最高值逐漸增高時，質荷比從小到大的離子逐次排除並被記錄而獲得質譜圖。離子肼質譜可以很方便的進行多級質譜分析，對於物質結構的鑒定非常有用。Zweigenbaum JA等人採用離子肼質譜對MC-LR、RR等進行質譜碎裂機理的研究，採用LC 柱富集技術，經切換閥將MC通入質譜，最後採用多級離子肼質譜對其母離子和碎片離子進行碎片斷裂分析。
微囊藻素質譜圖冊參考資料。
飛行時間質譜根據相同能量的離子質量不同時速度不同的原理，使用電子電離源，施加脈沖拉出電壓，再經加速極加快離子速度後進入無場區漂移管。不同質量的離子則以不同的時間通過相同的漂移距離到達接收器。飛行時間質譜掃描速度快，靈敏度高，此設備結構簡單，不受質量范圍限制。Pasquale Ferranti等首次運用高效液相/電噴霧-四極桿飛行時間串聯質譜法（HPLC/ESI-Q-TOF-MS/MS）測定淡水中的MC-RR、-LR、-YR、-LW和-LF，其檢出定量限（LOQ）均達到0.1μg/L。使用基質輔助激光解吸電離飛行時間串聯質譜法（MALDI-TOF-MS/MS）和離子肼串聯質譜法（Ion trap-MS/MS）同時檢測從而比較檢測結果，結果證明HPLC/ESI-Q-TOF-MS/MS檢測淡水中MC具有更高的靈敏度、選擇性和重復性。
超高效液相色譜是分離科學中的一個全新類別，UPLC藉助於HPLC的理論及原理，涵蓋了小顆粒填料、非常低系統體積及快速檢測手段等全新技術，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。與傳統的HPLC相比，UPLC的速度、靈敏度及分離度分別是HPLC的9倍、3倍及1.7倍。Jing Wang等運用超高效液相色譜串聯質譜法（UPLC-MS/MS）檢測浙江省地表水中的MC-LR、-RR、-LW和-LF，回收率為91.7%～111%，RSD7.9% ～12%，檢出定量限（LOQ）為2.5ng/L，6.0 ng/L，2.5ng/L和1.3ng/L。傳統的液相色譜分離這四種MC需要30min，而UPLC只需要3min；Stuart A.Oehrle等運用UPLC-MS/MS檢測淡水中的7種MC也只用了8 min，其HPLC檢測需要35 min。 利用微囊藻毒素誘發免疫反應產生抗體，利用抗體對抗原的特異性識別來對各種毒素進行檢測。以免疫技術為基礎，微囊藻毒素的免疫化學法包括酶聯免疫吸附法、放射免疫分析法、免疫親和色譜法、膠體金法及免疫感測器法等。這類方法靈敏度較高、樣品處理簡單，便於操作，其檢測限低於WHO水平，被認為是較有發展前景的方法。
自20世紀80年代末Kifir、Brooks等分別報道了對藻類毒素的單克隆抗體和多克隆抗體以後，酶聯免疫吸附技術（ELISA）開始用於MCs的分析。該技術具有較高的靈敏度、快捷的分析速度等優點。直接競爭ELISA方法其原理是將抗藻毒素抗體包被在多孔板上，被檢樣品、MC-LR標准品與標記有過氧化物酶的MC-LR競爭性結合多孔板上的抗體，過氧化物酶催化底物產生的顏色與MC-LR的濃度成反比，即深色表明MC-LR濃度低，淺色表示MC-LR濃度高。也有將MC-LR牛血清白蛋白包被在多孔板上，利用第一抗體和帶標記的抗體而建立的間接競爭ELISA方法。間接競爭ELISA比直接競爭ELISA方法靈敏度略高。
蛋白磷酸酶法可以反映各種毒素的總量，具有檢測靈敏度高、測定時間較短等優點。Serres等讓未標記的被測毒素和經放射性標記的MC-YR一起與蛋白磷酸脂酶2A（PP2A）進行競爭結合，達到平衡後進行凝膠過濾，使與PP2A結合的毒素和未與PP2A結合的毒素分離，然後檢測收集到的待測125I-MC-YR-PP2A的放射性。根據用B/（Bo-B）（Bo為無毒素時125I-MC-YR的放射性，B為有標准毒素或待測毒素時125I-MC-YR的放射性）和標准毒素的濃度得到的標准曲線即可求出待測毒素的量。Wong等探索了利用比色法篩選水體中的MCs，試驗中以P-硝基苯酚為底物，監測黃色產物P-硝基酚的生成速率以表示蛋白磷酸酶2A的活性。結果表明，比色法蛋白磷酸酶抑制分析是一種簡便、便宜的篩選水體中具有腫瘤促進特性的MCs的工具。

Ⅳ 高效液相色譜的使用等各種儀器的使用

1 高效液相色譜儀的系統組成、工作原理
高效液相色譜儀的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相) 內, 由於樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數, 在兩相中作相對運動時, 經過反復多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分在移動速度上產生較大的差別, 被分離成單個組分依次從柱內流出, 通過檢測器時, 樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式列印出來。

2 高效液相色譜儀的應用
高效液相色譜法只要求樣品能製成溶液, 不受樣品揮發性的限制,流動相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。
與試樣預處理技術相配合,HPL C 所達到的高解析度和高靈敏度, 使分離和同時測定性質上十分相近的物質成為可能,能夠分離復雜相體中的微量成分。隨著固定相的發展, 有可能在充分保持生化物質活性的條件下完成其分離。
HPL C 成為解決生化分析問題最有前途的方法。由於HPL C具有高解析度、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用, 流出組分易收集等優點,因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫葯研究、環境分析、無機分析等各種領域。高效液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。
液相色譜- 質譜連用技術受到普遍重視, 如分析氨基甲酸酯農葯和多核芳烴等; 液相色譜- 紅外光譜連用也發展很快,如在環境污染分析測定水中的烴類, 海水中的不揮發烴類, 使環境污染分析得到新的發展。

分光光度計的工作原理：溶液中的物質在光的照射激發下，產生對光吸收的效應，這種吸收是具有選擇性的，各種不同的物質都有各自的吸收光譜，因些當某單色光通過溶液時其能量就會被吸收而減弱，光能量減弱的程度和物質的濃度有一定的比例關系，即符合朗伯爾—比爾定律 T = I/I0 LogI0/I = KCL A = KCL 其中： T 透射比 I0 入射光強度 I 透射光強度 A 吸光度 K 吸收系數 L 溶液的光程長 C 溶液的濃度通常做物質鑒定、純度檢查，有機分子結構的研究。分光光度計分類：原子吸收分光光度計、熒光分光光度計、可見分光光度計、紅外分光光度計、紫外可見分光光度計 不同的分類有不同的應用領域：原子吸收分光光度計為冶金、地質環保、食品、醫療、化工、農林等行業的材料分析及質量控制部門進行常量、微量金屬（半金屬）元素分析的有力工具，是生產、教育、科研單位分析實驗室的比備常規儀器之一。熒光分光光度計是用於掃描液相熒游標記物所發出的熒光光譜的一種儀器。應用於科研、化工、醫葯、生化、環保以及臨床檢驗、食品檢驗、教學實驗等領域。可見分光光度計具有透射比,吸光度,濃度直接測定,有自動調0%τ,100%τ功能.能選配5cm光徑比色架及2.3.5cm矩形比色皿擴大測定范圍.可選配PC軟體包,經RS232C聯結PC機,列印機實施功能擴大.廣泛應用於治金、治葯、食品工業、醫葯,衛生,化工,學校,生物化學,石油化工, ,質量控制,,環境保護及科研實驗室等化學分析等紅外分光光度計. 一般的紅外光譜是指2.5-50微米（對應波數4000--200厘米-1）之間的中紅外光譜，這是研究研究有機化合物最常用的光譜區域。紅外光譜法的特點是：快速、樣品量少（幾微克-幾毫克），特徵性強（各種物質有其特定的紅外光譜圖）、能分析各種狀態（氣、液、固）的試樣以及不破壞樣品。紅外光譜儀是化學、物理、地質、生物、醫學、紡織、環保及材料科學等的重要研究工具和測試手段，而遠紅光譜更是研究金屬配位化合物的重要手段。紫外可見分光光度計該儀器操作簡單、功能完善、可靠性高，在國內居領先水平。該儀器操作簡單、功能完善、可靠性高，可廣泛用於葯品檢驗、葯物分析、環境檢測、衛生防疫食品、化工、科研等領域對物質進行定性、定量分析。是生產、科研、教學的必備儀器。

紅外光譜與分子的結構密切相關，是研究表徵分子結構的一種有效手段，與其它方法相比較，紅外光譜由於對樣品沒有任何限制，它是公認的一種重要分析工具。在分子構型和構象研究、化學化工、物理、能源、材料、天文、氣象、遙感、環境、地質、生物、醫學、葯物、農業、食品、法庭鑒定和工業過程式控制制等多方面的分析測定中都有十分廣泛的應用。紅外光譜可以研究分子的結構和化學鍵，如力常數的測定和分子對稱性等，利用紅外光譜方法可測定分子的鍵長和鍵角，並由此推測分子的立體構型。根據所得的力常數可推知化學鍵的強弱，由簡正頻率計算熱力學函數等。分子中的某些基團或化學鍵在不同化合物中所對應的譜帶波數基本上是固定的或只在小波段范圍內變化，因此許多有機官能團例如甲基、亞甲基、羰基，氰基，羥基，胺基等等在紅外光譜中都有特徵吸收，通過紅外光譜測定，人們就可以判定未知樣品中存在哪些有機官能團，這為最終確定未知物的化學結構奠定了基礎。由於分子內和分子間相互作用，有機官能團的特徵頻率會由於官能團所處的化學環境不同而發生微細變化，這為研究表徵分子內、分子間相互作用創造了條件。分子在低波數區的許多簡正振動往往涉及分子中全部原子，不同的分子的振動方式彼此不同，這使得紅外光譜具有像指紋一樣高度的特徵性，稱為指紋區。利用這一特點，人們採集了成千上萬種已知化合物的紅外光譜，並把它們存入計算機中，編成紅外光譜標准譜圖庫。人們只需把測得未知物的紅外光譜與標准譜圖庫中的光譜進行比對，就可以迅速判定未知化合物的成份。當代紅外光譜技術的發展已使紅外光譜的意義遠遠超越了對樣品進行簡單的常規測試並從而推斷化合物的組成的階段。紅外光譜儀與其它多種測試手段聯用衍生出許多新的分子光譜領域，例如，色譜技術與紅外光譜儀聯合為深化認識復雜的混合物體系中各種組份的化學結構創造了機會；把紅外光譜儀與顯微鏡方法結合起來，形成紅外成像技術，用於研究非均相體系的形態結構，由於紅外光譜能利用其特徵譜帶有效地區分不同化合物，這使得該方法具有其它方法難以匹敵的化學反差。另外，隨著電子技術的日益進步，半導體檢測器已實現集成化，焦平面陣列式檢測器已商品化，它有效地推動了紅外成像技術的發展，也為未來發展非傅里葉變換紅外光譜儀創造了契機。隨著同步輻射技術的發展和廣泛應用，現已出現用同步輻射光作為光源的紅外光譜儀，由於同步輻射光的強度比常規光源高五個數量級，這能有效地提高光譜的信噪比和解析度，特別值得指出的是，近年來自由電子激光技術為人們提供了一種單色性好，亮度高，波長連續可調的新型紅外光源，使之與近場技術相結合，可使得紅外成像技無論是在解析度和化學反差兩方面皆得到有效提高。

原子吸收光譜儀
原子吸收光譜儀
基本原理：儀器從光源輻射出具有待測元素特徵譜線的光，通過試樣蒸氣時被蒸氣中待測元素基態原子所吸收，由輻射特徵譜線光被減弱的程度來測定試樣中待測元素的含量。
用 途：
原子吸收光譜儀可測定多種元素，火焰原子吸收光譜法可測到10-9g/mL數量級，石墨爐原子吸收法可測到10-13g/mL數量級。其氫化物發生器可對8種揮發性元素汞、砷、鉛、硒、錫、碲、銻、鍺等進行微痕量測定。
因原子吸收光譜儀的靈敏、准確、簡便等特點，現已廣泛用於冶金、地質、采礦、石油、輕工、農業、醫葯、衛生、食品及環境監測等方面的常量及微痕量元素分析。
原子吸收光譜儀－基本知識
Ⅰ、基本知識
1.方法原理
原子吸收是指呈氣態的原子對由同類原子輻射出的特徵譜線所具有的吸收現象。
當輻射投射到原子蒸氣上時，如果輻射波長相應的能量等於原子由基態躍遷到激發態所需要的能量時，則會引起原子對輻射的吸收，產生吸收光譜。基態原子吸收了能量，最外層的電子產生躍遷，從低能態躍遷到激發態。
2.原子吸收光譜儀的組成
原子吸收光譜儀是由光源、原子化系統、分光系統和檢測系統組成。
A 光源
作為光源要求發射的待測元素的銳線光譜有足夠的強度、背景小、穩定性
一般採用：空心陰極燈 無極放電燈
B 原子化器（atomizer）
可分為預混合型火焰原子化器（premixed flame atomizer）,石墨爐原子化器(graphite furnace atomizer),石英爐原子化器(quartz furnace atomizer)，陰極濺射原子化器(cathode sputtering atomizer)。
a 火焰原子化器：由噴霧器、預混合室、燃燒器三部分組成
特點：操作簡便、重現性好
b 石墨爐原子化器：是一類將試樣放置在石墨管壁、石墨平台、碳棒盛樣小孔或石墨坩堝內用電加熱至高溫實現原子化的系統。其中管式石墨爐是最常用的原子化器。
原子化程序分為乾燥、灰化、原子化、高溫凈化
原子化效率高：在可調的高溫下試樣利用率達100%
靈敏度高：其檢測限達10-6~10-14
試樣用量少：適合難熔元素的測定
c.石英爐原子化系統是將氣態分析物引入石英爐內在較低溫度下實現原子化的一種方法，又稱低溫原子化法。它主要是與蒸氣發生法配合使用（氫化物發生，汞蒸氣發生和揮發性化合物發生）。
d.陰極濺射原子化器是利用輝光放電產生的正離子轟擊陰極表面，從固體表面直接將被測定元素轉化為原子蒸氣。
C 分光系統（單色器）
由凹面反射鏡、狹縫或色散元件組成
色散元件為棱鏡或衍射光柵
單色器的性能是指色散率、解析度和集光本領
D 檢測系統率
由檢測器（光電倍增管）、放大器、對數轉換器和電腦組成
3.最佳條件的選擇
A 吸收波長的選擇
B 原子化工作條件的選擇
a 空心陰極燈工作條件的選擇（包括預熱時間、工作電流）
b 火焰燃燒器操作條件的選擇（試液提升量、火焰類型、燃燒器的高度）
c 石墨爐最佳操作條件的選擇（惰性氣體、最佳原子化溫度）
C 光譜通帶的選擇
D 檢測器光電倍增管工作條件的選擇
4.干擾及消除方法
干擾分為：化學干擾、物理干擾、電離干擾、光譜干擾、背景干擾
化學干擾消除辦法：改變火焰溫度、加入釋放劑、加入保護絡合劑、加入緩沖劑
背景干擾的消除辦法：雙波長法、氘燈校正法、自吸收法、塞曼效應法

Ⅳ 高效液相色譜法為什麼使用紫外檢測器

紫外檢測器是一種光譜檢測器，紫外光譜是最具實用性的檢測途徑。大部分物質在溶液狀態下都具有紫外吸收，其吸收值與其物質的量具有極好的線性，專屬性也非常好。並且紫外光譜作為已經非常成熟的技術而具有可靠、通用性強、靈敏度高、使用方便、維護簡單、設備生產成本低等特點。
在液體作為流動相的液相色譜法中，紫外檢測器應作為首選檢測器這一點已經是化學分析的基本共識。
以下情況將用到其他檢測器：
全波長掃描光譜信息時使用二極體陣列檢測器
紫外光區段內沒有吸收的物質使用示差折光檢測器
無光譜吸收的物質使用蒸發光散射檢測器
測定經熒光染色的物質時使用熒光檢測器

Ⅵ 高效液相色譜儀器怎麼操作啊簡單嗎

一．開機程序
1．打開氮氣總閥，擰緊分壓閥。
2．打開穩壓電源和色譜儀開關。
3．啟動計算機，運行軟體，調用預先編輯好的控制方法，下載到色譜儀。
4．待柱箱溫度達到控制方法設定的初始值後，測量柱流量：
在皂膜流量計里加入幾滴檢漏液，把軟膠管接在檢測器出口；
按色譜儀鍵盤上的TIME，顯示屏出現t＝0∶00∶00 1/t＝0.00，按ENTER開始計時，再按停止，按CLEAR回零；
若以皂膜流量計的1ml刻度為基準，則測得的柱流量為1(ml)×1/t(s-1)，10ml、100ml依此類推；
調節柱頭壓，得到所需的柱流量。
5．打開空氣泵和氫氣發生器。
6．調節輔助控制面板流量表的空氣和氫氣分別至35psi和20psi，把檢測器A控制面板的空氣和氫氣調節鈕開到最大，按點火開關點火。
7．慢慢把檢測器A控制面板的輔助氣調節鈕開到最大。

二．軟體（HP3398A GC Chemstation）的使用要點與樣品的簡單測定
1．控制方法：
菜單操作：運行－>編輯控制方法－>系統system1；
按Edit編輯控制方法；
在Inlet欄選擇Back，設置進樣器溫度；在Oven欄設置柱箱的升溫程序；在Detector欄選擇Front，設置檢測器溫度；在General欄Signal項選擇1：DetA，2：DetA；

按Send將控制方法下載到色譜儀，關閉，保存。
2．採集：
菜單操作：採集－>簡單採集－>適用於system1；
指定文件前綴、標識符，選擇所需的控制方法，按開始；
待色譜儀上的NOT READY指示燈（紅）滅後，用微量進樣器在進樣口2快速進樣，馬上按色譜儀鍵盤上的START，計算機屏幕實時顯示採集數據的情況；
採集結束後，待紅色指示燈滅再開始下一次進樣；
若採集過程中要停止，先按色譜儀鍵盤的STOP，再按採集窗口的STOP。

5．關閉空氣泵和穩壓電源。
6．關閉氮氣總閥，表頭回零後擰松分壓閥。
將色譜儀上的檢測器A控制面板的空氣、氫氣和輔助氣調節鈕關至最小。

Ⅶ 高效液相色譜分析法的原理是什麼

它是用高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，經進樣閥注入待測樣品，由流動相帶入柱內，在柱內各成分被分離後，依次進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。