㈠ 請舉一例簡述蛋白質激酶催化反應的生物學意義
蛋白激酶（protein kinases）又稱蛋白質磷酸化酶(protein phosphakinase)。一類催化蛋白質磷酸化反應的酶。磷酸化(由激酶催化)和去磷酸化(由磷酸酶催化)是控制細胞周期的關鍵。它們都被用來控制調控途徑自身活性和執行調控途徑決定的底物活性。細胞周期調控途徑由一系列激酶和磷酸酶組成，它們通過將途徑的下一個底物磷酸化和去磷酸化而對外來信號和檢驗點做出反應。途徑最終顯示的是通過控制M 期激酶(或S 期激酶)的磷酸化狀態決定其活性。
M 期激酶的激活引發M 期的開始，它的失活是離開M 期必須的。這表明M 期激酶調控的活動是可轉換的：細胞重新組織形成有絲分裂紡錘體要求底物磷酸化，返回到細胞間期狀態要求同一底物去磷酸化。
M 期激酶作用的靶位是什麼？細胞主要的重新組織發生在有絲分裂中，MPF 誘導有絲分裂的能力說明，M 期激酶直接或間接地引發這些活動。我們在後面討論結構的重新組織，現在要探討M 期激酶對多種蛋白質底物的作用是直接的還是間接的。對其作用有兩種假設的模型:
它可能是磷酸化靶蛋白質的「主調控因子」，靶蛋白輪流作用調控其它必須的功能，一個典型的級聯反應。
它可能是一個「工作室」，直接磷酸化執行調控功能或是周期中細胞重新組織所必須的決定性底物。
被M 期激酶磷酸化的底物唯一共有的性質是都存在一對Ser-Pro 序列，位於鹼性殘基的側面(最常見的是Ser-Pro-X-Lys 形式)。潛在的底物依賴於體內M 期激酶准備磷酸化底物的能力，這些底物包括H1 組蛋白(可能是染色體凝集的需要)、核纖層蛋白質(可能是核膜溶解的需要)、核仁素(Nucleolin，阻斷核糖體合成)和其它結構性酶活性。這些證據的力度不同，取決於在體內某種循環方式中哪個底物被磷酸化，以及M 期激酶是否是實際激活酶。然而，從多種底物中，M 期激酶似乎直接作用於那些有絲分裂中細胞結構改變涉及的多種蛋白質。
確定一個潛在底物在細胞周期中是Cdc2 的有效靶點的標準是什麼呢？在體內相同的位點應被Cdc2 磷酸化，當Cdc2 被激活時，它就被磷酸化。體內Cdc2 被周期性磷酸化。理想情況下，體內Cdc2 激酶活性的突變可能阻止磷酸化，但目前僅在酵母中是這樣。要做出這樣的結論，磷酸化在細胞周期中是一個明顯的活動，蛋白質的一些功能必須被磷酸基團的存在改變。這可以通過標記的磷酸化氨基酸的突變鑒定沒有磷酸化是否阻止有絲分裂的功能。
Cdc2 激酶研究較多的底物是H1 組蛋白(組成染色質主要蛋白質的五種組蛋白質之一，見第19 章)。早就知道H1 在細胞周期中被磷酸化，在S 期加上兩個磷酸基團，有絲分裂時再加上4 個磷酸基團。細胞主要的H1 激酶活性由M 期激酶提供。
細胞周期中磷酸化H1 的目的是一個值得思索的問題，因為沒有直接表明它對染色質結構有影響。可能與M 期染色體凝集相關，可能為復制(可能需要解旋)或復制後的結果(為有絲分裂的開始做准備)做准備，這些假設是合理的，但在S 期這些修飾發生的時間尚缺乏了解。然而，H1 組蛋白的確是Cdc2 發動的激酶的很好底物，因此H1 激酶活性已成為檢測體內激酶活性的常用方法。例如，這種檢測對釀酒酵母很適用，通過檢測H1 激酶活性評估M 期激酶的周期活性，盡管實際上這種酵母通常不含H1 組蛋白。
㈡ 在細胞周期的運轉調控中，細胞周期蛋白（cyclin）和細胞周期蛋白依賴性蛋白激酶（CDK）是如何發揮作用的
在細胞周期的後期逐漸合成、至周期的中間階段突然消失的周期性存在蛋白，成為細胞周期蛋白。細胞周期蛋白可分為3類：S期周期蛋白，M期周期蛋白，G1期周期蛋白。S期周期蛋白為cyclin A，在S期開始表達，到中期時開始消失；M期周期蛋白為cyclin B，在S期開始表達，在G2/M期到達峰值，中期到後期轉換時消失。G1期周期蛋白在脊椎動物中位cyclin C、D、E，在酵母中為Cln1、Cln2、Cln3，他們在G1期開始表達，進入S期後消失。
能與細胞周期蛋白結合並將周期蛋白作為其調節亞單位、進而表現出蛋白激酶活性的蛋白統稱為細胞周期蛋白依賴性蛋白激酶，簡稱為CDK激酶。
細胞由G1期向S期轉化主要受G1期CDK激酶控制。哺乳動物細胞中，與G1期細胞周期蛋白結合的CDK激酶主要包括CDK2、CDK4和CDK6。cyclin D主要與CDK4和CDK6結合並調節後者活性；cyclin A常被劃分為M期周期蛋白，但它也可與CDK2結合使後者表現激酶活性，說明cyclin A可能參與調控G1/S期轉化過程。cyclin E在G1/S期與CDK2結合，呈現CDK2的激酶活性促進細胞進入S期。
G2/M期主要受CDK1激酶調控，CDK1激酶即MPF,或P34cdc2蛋白和細胞周期蛋白cyclin B組成。CDK1蛋白本身不具有蛋白激酶的活性。當cyclin A/B含量積累到一定值時，兩者相互結合成復合體，結合cyclin的CDK1被Wee1將Thr14和Tyr15磷酸化，並被CDK激活激酶將Thr161磷酸化。在M期，Wee1的活性下降，cdc25使CDK1的Thr14和Tyr15去磷酸化，其激酶活性才能表現出來。在G2/M期，cyclin A、cyclin B與CDK1結合，CDK1使底物蛋白磷酸化，如將組蛋白H1磷酸化導致染色體凝縮，核纖層蛋白磷酸化使核膜解體。
在M期，當MPF活性達到最高時，激活後期促進因子APC，將泛素連接在cycli A和cyclin B上，通過多泛素化作用，使它們被蛋白酶體降解，完成一個細胞周期。
㈢ PKA（蛋白激酶A）的活性如何測定
目的研究蛋白激酶C(protein KinaseC,PKC)和蛋白激酶A(protein kinaseA,PKA)在甲狀腺癌發生過程中的作用.方法利用酶的放射分析方法測定手術切除經病理證實的18例甲狀腺癌患者和17例甲狀腺癌患者手術切除的腫瘤組織中PKC和PKA活性水平.結果甲狀腺癌組織中胞膜和胞漿PKC活性分別為7.280±2.380和7.397±4.065,PKA活性水平為1.716±0.923.甲狀腺癌組織中胞膜和胞漿PKC活性分別為0.515±0.676和0.347±0.332,PKA活性水平為0.646±0.324.胞漿部分PKC與PKA活性比值:甲狀腺癌組織為4.3;甲狀腺癌組織為0.53.結論PKC與PKA均參入甲狀腺癌細胞的增殖過程.
㈣ 如何探究細胞中某個蛋白激酶的活性
MPF即卵細胞促進成熟因子（maturation-promotingfactor），或細胞分裂促進因子。在成熟的卵母細胞、分裂期粘菌、酵母等中可提取到這種促細胞分裂因子。由兩個亞基組成，一種是細胞周期蛋白，一個是依賴周期蛋白起作用的蛋白激酶，其中周期蛋白為調節亞基。能夠促使染色體凝集，使細胞由G2期進入M期的因子。在結構上，它是一種復合物，由周期蛋白依賴性蛋白激酶（Cdk）和G2期周期蛋白組成，其中，周期蛋白對蛋白激酶起激活作用，周期蛋白依賴性蛋白激酶是催化亞基,它能夠將磷酸基團從ATP轉移到特定底物的絲氨酸和蘇氨酸殘基上。酵母細胞周期中只有一種Cdk,而哺乳動物的細胞周期中有多種Cdk,所以哺乳動物的MPF是由Cdk1和周期蛋白B組成的復合物。有絲分裂期細胞與間期細胞融合後，會使間期細胞產生形態各異的染色體凝集，稱作早熟染色體凝集。這一現象表明，分裂期細胞中可能存在某種誘導染色體發生凝集的因子。在成熟卵母細胞分裂期黏菌酵母等中提取到了這種促細胞分裂因子，稱為成熟促進因子（Maturation-promotingfactor）。MPF是由催化亞單位和調節亞單位組成。催化亞單位是由cdc2基因編碼的一類蛋白質，只有與調節亞單位結合後，才具蛋白激酶活性，促使細胞進入分裂期。調節亞單位是一類隨細胞周期變化而周期性出現或消失的蛋白質，稱為細胞周期蛋白，它具有細胞周期特異性及細胞類型特異性。MPF(M期促進因子或細胞促分裂因子或卵細胞促成熟因子)是一種使多種底物蛋白磷酸化的蛋白激酶，即CDK1激酶，由p34cdc2蛋白和周期蛋白B結合而成。CDK1激酶活性首先依賴於周期蛋白B含量的積累，隨周期蛋白B濃度變化而變化：周期蛋白B一般在G1期的晚期開始合成，通過S期，其含量不斷增加，隨著周期蛋白B含量達到一定程度，CDK1激酶活性開始出現；到達G2期時周期蛋白B含量達到最大值，G2晚期階段CDK1激酶活性達到最大值並一直維持到M期的中期階段。CDK1激酶活性還受到激酶與磷酸酶的調節，活化的CDK1激酶可使的CDK1激酶活化。活化的CDK1激酶促使分裂期細胞在分裂前期執行下列生化事件：染色質開始濃縮形成有絲分裂染色體；細胞骨架解聚，有絲分裂紡錘體開始組裝；高爾基復合體、內質網等細胞器解體，形成小的膜泡。
㈤ DGKC法是什麼
DGKC法是醫學中檢驗科常用的檢測方法之一，它由德國臨床化學學會（DGKC是德國臨床化學學會的縮寫）推薦，被廣泛應用於醫學當中。比如，可以用DGKC推薦方法測定血清中的膽鹼酯酶及其基因型檢測。
㈥ 請問測定AMP激活的蛋白激酶（AMPK）活性都有什麼方法急！
可以通過分光光度計，或pH來測定!
磷酸腺苷
AMP—Adenosine monophosphate，翻譯為腺嘌呤核糖核苷酸，也稱為腺苷一磷酸或一磷酸腺苷。由一分子腺嘌呤、一分子核糖組成的腺苷，以及一分子磷酸組成。是在機體內由ATP與ADP釋放能量之後形成的。可以繼續結合磷酸基團形成二磷酸腺苷(ADP)和三磷酸腺苷(ATP)
[編輯本段]氨苄西林
AMP—氨苄西林(Ampicillin的縮寫),是一種抗生素.為廣譜半合成青黴素，毒性極低。抗菌譜與青黴素相似，對青黴素敏感的細菌效力較低，對草綠色鏈球菌的抗菌作用與青黴素相仿或略強。對白喉桿菌、破傷風桿菌和放線菌其效能基本和青黴素相同。對腸球菌及李司忒菌的作用則優於苄青黴素。對耐葯葡萄球菌及其它能產生青黴素酶的細菌均無抗菌作用。對革蘭陰性菌有效，但易產生耐葯性。
主要用於敏感菌所致的泌尿系統、呼吸系統、膽道、腸道感染以及腦膜炎、心內膜炎等。
[編輯本段]其他
HTML代碼中＆符號的縮寫便是AMP
APM=Actions Per Minute 就是每分鍾操作的次數。它統計的操作包括了滑鼠每次的左擊，右擊以及每次的鍵盤敲擊。多見於星際爭霸和魔獸爭霸3（WAR3）這兩款游戲中 APM的高低往往象徵著玩家操作的精細程度，一定程度上反映了玩家的水平
AMP Amplifier 放大器
amplifier ['æmplifaiə] n. 放大器,擴音機
AMP-EN Amplifier Enable 放大器啟動端
AMP-N Amplifier Negative 音頻放大器信號負
AMP-P Amplifier Positive 音頻放大器信號正
AMPC Amplifier Control 放大器控制
㈦ 簡述檢測蛋白質磷酸化的檢測方法及其原理
方法及原理：
1.激酶活性分析
生物學樣品中的激酶活性通常是在體外測定的，在ATP的存在下將免疫沉澱的激酶與外源底物共同孵育。之後通過一些報告系統來評估特定激酶對底物的磷酸化，包括顯色、放射性或熒光檢測。
直接測定蛋白磷酸化的一種經典方法是將整個細胞與放射性標記的32P-磷酸鹽共同孵育，獲得細胞提取物，通過SDS-PAGE分離，並曝光在膠片上。這種繁瑣的方法需要多次幾小時的孵育，且使用放射性同位素。其他傳統方法包括2D凝膠電泳，這種技術假定磷酸化會改變蛋白的遷移率和等電點。
2.WesternBlot
利用SDS-PAGE分離生物樣品，隨後轉移到膜上（通常是PVDF或尼龍膜），之後利用磷酸化特異的抗體來鑒定目的蛋白。
由於測得的磷酸化蛋白水平可能隨處理或凝膠上樣誤差而變化，研究人員常常利用一個抗體來檢測同源蛋白的總水平（而不考慮磷酸化狀態），以確定磷酸化組分相對於總組分的比例，並充當上樣內對照。化學發光和顯色法都很常用，而分子量marker常用來提供蛋白分子量的信息。
3.酶聯免疫吸附分析（ELISA）
ELISA的定量能力優於Westernblot，且在調節激酶活性和功能的研究中表現出巨大的作用。這種微孔板形式的分析一般利用目的蛋白特異的捕獲抗體，與磷酸化狀態無關。隨後讓目的蛋白結合在抗體包被的分析板中，目的蛋白可以是純的，也可以是復雜的異質樣品（如細胞裂解液）中的一個組分。加入待分析的磷酸化位點特異的檢測抗體。這些分析通常設計為顯色或熒光檢測。
4.基於細胞的ELISA
來自目的蛋白的信號可通過第二種蛋白來標准化，校正各孔之間的差異，實現磷酸化蛋白水平的准確評估，並比較多個樣品，與傳統免疫印跡中使用磷酸化特異和總蛋白抗體相似。這些分析繞過了制備細胞裂解液的需要，因此更適合高通量分析。
5.質譜
首先，磷酸化肽段的信號通常較弱，因為它們帶負電荷，而電噴霧質譜在正電模式下作用，因此電離效果不好。其次，在大量非磷酸化蛋白的高背景之下，很難觀察到低豐度目的蛋白的信號。
6.多個分析物圖譜分析
㈧ cdc基因名詞解釋
cdc基因（cell division cycle gene，細胞分裂周期基因）是一類產物表達具細胞周期依賴性或直接參與細胞周期調控的基因，主要包括cyclin基因、Cdk基因、CKI基因等。此外，與DNA復制相關的DNA聚合酶、DNA連接酶基因也屬於cdc基因。
補充
基因由來
酵母中這些與細胞分裂和細胞周期調控有關的基因，被稱為cdc(cell division cycle)基因。人們根據cdc基因被發現的先後順序對這些基因進行了命名，如cdc2、cdc25、cdc28等。
cdc(cell division cycle)基因的最初發現源於以P.Nurse和L.Hartwell為代表的一批酵母生物學家以酵母為實驗材料發現在限定溫度下不同突變株的某個基因發生突變，其細胞停留在細胞周期中的某個特定時期。
表達蛋白
cdc基因表達的蛋白被稱為cdc蛋白，如cdc2基因表達的產物cdc2 蛋白（一種相對分子質量34000的蛋白，即p34）。由於它能與周期蛋白cyclinB結合形成MPF（後期促進復合物,促進M期的啟動，又稱成熟促進因子或有絲分裂促進因子）表現出蛋白激酶的活性，所以又被稱為CDK1（周期蛋白依賴性蛋白激酶）。