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什麼方法特異性檢測

發布時間:2022-08-18 05:16:19

A. 檢測基因表達的方法

主要用探針檢測mRNA或用抗體檢測出表達的蛋白質(轉錄水平上對特異mRNA的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測)

一、外源基因轉錄水平的鑒定

基因表達分為轉錄及翻譯兩階段,轉錄是以DNA(基因)為模板生成mRNA的過程,翻譯是以mRNA為模板生成蛋白質的過程,檢測外源基因的表達就是檢測特異mRNA及特異蛋白質的生成。所以基因表達檢測分為兩個水平。

即轉錄水平上對特異mRNA的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測。轉錄水平上的檢測主要方法是Northern雜交,它是以DNA或RNA為探針,檢測RNA鏈。和Southern雜交相同,Northern雜交包括斑點雜交和印跡雜交。

也可用RT-PCR(reverse transcribed PCR)方法檢測外源DNA在植物體內的轉錄表達。其原理是以植物總RNA或mRNA為模板進行反轉錄,然後再經PCR擴增。

如果從細胞總RNA提取物中得到特異的cDNA擴增條帶,則表明外源基因實現了轉錄。此法簡單、快速,但對外源基因轉錄的最後決定,還需與Northern雜交的實驗結果結合。

二、外源基因表達蛋白的檢測

表達蛋白的檢測方法有三種:

1、生化反應檢測法:主要通過酶反應來檢測;

2、免疫學檢測法:通過目的蛋白(抗原)與其抗體的特異性結合進行檢測,具體方法有Western雜交、酶聯免疫吸附法(ELISA)及免疫沉澱法;

3、生物學活性的檢測。

Western雜交是將聚丙烯醯胺凝膠(SDS-PAGE)電泳分離抗原(Antigen)固定在固體支持物上(如硝酸纖維素膜,NC膜)。不同分子量大小的蛋白質在凝膠中遷移率不同,據此可確定特定的抗原存在與否以及相對豐度,或者蛋白質是否遭到降解等。

蛋白質電泳後轉到NC膜,放在蛋白質(如牛血清蛋白BSA)或奶粉溶液中,溫育,以封閉非特異性位點,然後用含有放射性標記或酶標記的特定抗體雜交,抗原-抗體結合,再通過放射性自顯影或顯色觀察。

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外顯子與內含子表達過程中的相對性 從內含子與外顯子的定義來看,兩者是不能混淆的,但是真核生物的外顯子也並非都「顯」(編碼氨基酸),除了tRNA基因和rRNA基因的外顯子完全「不顯」之外,幾乎全部的結構基因的首尾兩外顯子都只有部分核苷酸順序編碼氨基酸,還有完全不編碼基酸的外顯子,如人類G6PD基因的第一外顯子核苷酸順序。

已發現一個基因的外顯子可以是另一基因的內含子,所這亦然。以小鼠的澱粉酶基因為例,來源於肝的與來源於唾液腺的是同一基因。澱粉酶基因包括4個外顯子,肝生成的澱粉酶不保留外顯子1,而唾液腺中的澱粉酶則保留了外顯子1的50bp順序,但把外顯子2與前後兩段內含子一起剪切掉,經過這樣剪接,外顯子2就變成唾液澱粉酶基因中的內含子。

同一基因在不同組織能生成不同的基因產物來源於不同組織的類似蛋白,可以由同一基因編碼產生,這種現象首先是由於基因中的增強子等有組織特異性,它能與不同組織中的組織特異因子結合,故在不同組織中同一基因會產生不同的轉錄物與轉錄後加工作用。

此外真核生物基因可有一個以一的poly(A)位點,因此能在不同的細胞中產生具有不同3』末端的前mRNA,從而會有不同的剪接方式。由於大多數真核生物基因的轉錄物是先加poly(A)尾巴,然後再行剪接,因此不同組織、細胞中會有不同的因子干預多聚腺苷酸化作用,最後影響剪接模式。

B. 定性檢測方法的靈敏度和特異性是什麼意思

靈敏度:正確檢出陽性患者的能力,也就是指在診斷疾病的時候對真正的病人不漏診的機會有多大。靈敏度越高,假陰性越少。

特異性:正確檢出陰性患者的能力,也就是指對一個健康人不造成誤診的機會有多大。特異性越高,假陽性越少。

臨床靈敏度可用來衡量某種試驗檢測出有病者的能力,靈敏度是將實際有病的人正確地判定為真陽性的比例。

臨床特異度是衡量試驗正確地判定無病者的能力,特異度是將實際無病的人正確地判定為真陰性的比例。

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靈敏度=真陽性人數/(真陽性人數+假陰性人數)*100%。正確判斷病人的率。

特異度=真陰性人數/(真陰性人數+假陽性人數))*100%。正確判斷非病人的率。

特異性就是檢查發現dsDNA陽性,那他就是SLE患者的概率;敏感性就是檢查dsDNA陰性,那他就不是SLE患者的概率。用來評估真陽性和真陰性的。

C. pcr的特異性檢測和敏感性檢測要怎麼

  1. pcr靈敏度檢測

    1.1 樣本准備:以4次方國家一級或者二級標准品為基礎樣本,用陰性血清進行倍比稀釋,稀釋後的樣本濃度分別為1000IU/ml、500IU/ml、250IU/ml、125IU/ml、100IU/ml、50IU/ml、25IU/ml,每份樣本使用1000μl進行檢測。

    1.2 用質檢合格核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)進行檢測,每個濃度每批次試劑盒做5個復管,分析各濃度標本的檢出率(即陽性率)。以標本濃度值對數為橫坐標,對應的檢出率為縱坐標描點,用Origin的Sigmoidal Fit 的方法擬合成曲線,根據軟體給出的曲線公式計算出當檢出率為95%時所對應的濃度,此濃度即為本試劑盒對HBV標本的分析靈敏度。

  2. pcr特異性檢測

    2.1 參考樣本選擇:選擇與目的片段相近或者感染方式相似的其他病毒或者細菌高載量樣本,同時應滿足臨床或者其他方法確認目的片段為陰性,做5個副管擴增並且全部為陰性。以乙肝為例:選擇高載量HCV、CMV、EBV、HSV2的陽性標本各1個(乙肝表面抗原為陰性),分別檢測乙肝表面抗原及乙肝核酸量。每個測5次,全部陰性或者在參考范圍以下為特異性良好。

    希望能夠幫到你,有其他需要可以隨時交流!

D. 用什麼方法檢測細胞與組織內特異性蛋白

人類基因組(genome)含有3萬-5萬個可單拷貝的結構基因,但在一個細胞生長的特定條件下,往往只有少數基因表達.有些基因幾乎普遍地在所有細胞活躍地處於表達狀態,並保證其表達產物的功能.如多數酵解酶類蛋白,鈣調節蛋白.此外,多數細胞均有其細胞骨架的特定組分,或產生特定代謝的酶.這些蛋白在各細胞中表現出它的組織特異性(tissue-speificprotein),當有關細胞損害過程中,它們在血循環中可以出現,可以反應該細胞的特異損害.這一事實被利用於監測某組織是否進行性損害的一種非損傷性的手段,並正在發展中. 有幾種方法可以檢測出特殊蛋白的組織特異性,如果該蛋白本身就是酶,可以直接測定酶的活性.例如肌酸激酶在骨骼肌中含量很高,但它們並不存在於肝內.血清中該酶的活性可以反應肌肉的損害,特別是骨骼肌的病變--肌萎縮症,或心肌損害.如果該蛋白並非具有酶活性,但可以表現一定的抗原性,可用於制備相應的抗體,用相應的免疫學方法來檢測.新的組織特異性蛋白質也可以通過高解析度的雙相電泳色譜而定位,可以比較不同的組織,而檢出特殊器官中特異性蛋白的存在. 一個真核細胞的胞質部分(往往指細胞在去除其亞細胞的結構組分--包括線粒體和內質網及核微粒等成分後,殘留下的可溶性部分),往往尚含有20%-30%高濃度蛋白質溶液,各個蛋白質之間具有弱的相互作用

E. 艾滋病的檢測都有哪些方法 5種方法測出你有沒有艾滋

檢測不出來的,必須說明是查艾滋的,才可以的

F. 山東已使用特異性核酸檢測方法,這究竟是一種怎樣的檢測方法

山東省疾病預防控制中心對奧米克戎突變體採用了特異性核酸檢測方法,並繼續對可能的輸入病例和相關本地病例進行病毒基因組監測,這有助於及時檢測可能進口或與本地病例相關的Omicron突變體,它有一定的潛伏期和隱匿性感染。

與核酸檢測相比,通常用於感染早期。與核酸檢測相比,抗原檢測速度更快,約12-20分鍾即可獲得初步結果。核酸檢測至少需要3-4小時。從靈敏度的角度來看,核酸檢測更准確。就像在家裡用驗孕棒檢測懷孕一樣,抗原檢測可以在家裡進行,也可以在偏遠地區和條件差的基層醫療機構進行,這可以大大擴大核酸檢測的范圍酸檢測服務。

G. 新型冠狀病毒的特異性檢測包括哪些

新冠病毒咽試子核酸檢測,新冠病毒基因測序,肺泡灌洗液核酸檢測等。很多新冠肺炎患者核酸檢測幾次為陰性,需多次檢測可呈現陽性。患新冠肺炎要積極配合醫生治療,做好個人防護,減少病毒傳播。注意監測病情變化,新冠肺炎容易發生病情惡化。

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