萊克多巴胺檢測方法

A. 現在瘦肉精的檢測方法有哪些

（1）膠體金快速檢測法將待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上後，待檢物與金標試劑的結合物又與試紙條發生特異性結合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結果，從而實現特異性免疫診斷。測試卡分析快速，僅需3～5分鍾，無需專業人員操作，無需藉助儀器，可以憑肉眼觀察到結果，定性檢測，測試卡可常溫保存。

（2）酶聯免疫吸附法（ELISA）酶聯免疫吸附法是酶免疫測定技術中應用最廣的技術。其原理是利用抗原抗體特異性結合和酶的高效催化作用，通過化學方法將辣根過氧化物酶（HRP）與克侖特羅（CL）結合，形成酶偶聯克侖特羅。將固相載體上已包被的抗體與特異性的抗克侖特羅抗體結合，然後加入待測克侖特羅和酶偶聯克侖特羅，它們競爭性與克侖特羅抗體結合，洗滌後加底物，根據有色物的變化計量待測克侖特羅含量。若待測克侖特羅多，則被結合的酶偶聯克侖特羅少，有色物量就少。用目測法或比色法測定樣品中的克侖特羅含量，比色法的最佳波長為450納米。

B. 萊克多巴胺是什麼東西

萊克多巴胺是一種人工合成的β-腎上腺受體激動劑(俗稱β-興奮劑)類化合物，是由美國制葯公司研究出的毒性小、代謝快的克倫特羅替代品，屬於第二代瘦肉精。

因其具有調節蛋白質合成的作用，國外也稱為蛋白質再分配劑(Repartitioner)，在臨床上主要用於治療支氣管哮喘、充血性心力衰竭症和肌肉萎縮症等。

(2)萊克多巴胺檢測方法擴展閱讀

萊克多巴胺的毒性遠低於具有相同功能的其它瘦肉精添加物。常規劑量的瘦肉精類葯物可在機體內被代謝並排出體外，不會對機體造成傷害，

但過量攝入萊克多巴胺，人體會出現不同程度的中毒反應，其症狀與動物中毒症狀相似，表現為肌肉震顫、四肢麻痹、心動過速、心律失常、腹痛、肌肉疼痛、惡心眩暈等症狀，重者可引發高血壓、心臟病甚至死亡。

當萊克多巴胺的使用量為臨床使用量的5～10倍時，可以增加胴體蛋白質含量、減少脂肪組織，有效提高瘦肉率和飼料利用率。

參考資料來源：中國淮濱-關於「萊克多巴胺」的科學解讀

C. 檢測鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺試劑盒假陽性出現的幾率有多大

試劑盒的假陽性幾率不是太大，跟公司產品質量關系最大。目前國內的主要用綠詩源品牌的，性價比高；國外的基本用拜發

D. 萊克多巴胺快速檢測卡技術指標為多少

三方圓萊克多巴胺快速檢測卡技術指標為尿樣3g/ml，組織3ng/g，飼料3
ng/g。

E. 如何檢測鹽酸克倫特羅

產品編號：KL-SE-S071
產品名稱：克倫特羅酶聯免疫試劑盒
規 格： 96孔

一、概要
克倫特羅是一種腎上腺受體激動劑即神經興奮劑。80年代末期發現其對家畜具有促進生長，降低脂肪，提高瘦肉率的功效，曾被作為飼料添加劑使用。然而，90 年代初期以來，出現多起克倫特羅中毒事件，並出現了死亡案例，因此被禁止使用。「快靈」牌克倫特羅酶聯免疫試劑盒採用直接競爭酶聯免疫一步法，可對尿液、飼料、肉類組織中的克倫特羅進行快速定量檢測。

二、試驗原理
樣品中的游離克倫特羅與酶標記的克倫特羅競爭結合酶標板微孔中固相化的克倫特羅特異性抗體，通過洗滌步驟洗掉未結合的酶標記克倫特羅，再通過酶的專一性顯色劑顯色根據顯色的深淺來判斷樣品中克倫特羅含量。檢測時設置標准曲線，通過標准曲線測定樣品中克倫特羅的含量。

三、適用范圍
可定性、定量檢測尿液、飼料、肉類組織中等樣本中的克倫特羅的殘留量。

四、需要的設備及試劑
酶標儀，移液器，前處理所需試劑及相關儀器。

五、交叉反應率
克倫特羅…………100% 沙美特羅…………<0.1%
沙丁胺醇…………<0.1% 萊克多巴胺………<0.1%
鹽酸麻黃鹼………<0.1% 特布它林…………<0.1%
福英特羅…………<0.1% 多巴酚丁胺…………<0.1%

六、檢測方法靈敏度、准確度、精密度
本試劑盒檢測下限為0.1ng/mL。
尿液回收率90±15％
飼料回收率85±15％
肉類組織回收率85±15％
試劑盒板內變異系數小於6%，板間變異系數小於10%。

七、其他說明請參快靈牌克倫特羅酶聯免疫試劑盒說明書

地 址: 上海 • 浦東新區

楊高南路1998號生產大樓三樓

電 話: 021-50947188

傳 真: 021-50947186

E-mail: [email protected]

郵 編: 200125

F. 瘦肉精檢測方法有哪幾種

目前的瘦肉精檢測方法，大致有一下四種方法，市場上的一些檢測物品也是根據這些方法衍生而來的。

氣象色譜-質譜法，簡稱GC-MS，GC-MS法優點是把色譜高效快速的分離效果和質譜高靈敏度的定性分析有機合起來，能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進行定性、定量分析，而且具更高的檢測極限。

高效液相色譜法，此法適合測定熱不穩定和強極性的β-激動劑及其代謝產物，而且，HPLC可以與柱前提取、純化及柱後熒光衍生化反應和質譜（MS）等系統聯用，容易實現分析過程的自動化。其優點是專屬性好、選擇性強、檢測精確度較高，而且假陽性率低；缺點是樣品處理時間長，檢測過程煩瑣、難於操作，需貴重儀器，在實際應用中受到一定的限制。

酶聯免疫吸附法，利用免疫學抗原抗體特異性結合和酶的高效催化作用，通過化學方法將植物辣根過氧化物酶（HRP）與克倫特羅（CL）結合，形成酶偶聯克倫特羅。將固相載體上已包被的抗體（羊抗兔IgG抗體）與特異性的抗克倫特羅抗體結合，然後加入待測克倫特羅和酶偶聯克倫特羅，它們競爭性與克倫特羅抗體結合，洗滌後加底物，根據有色物的變化計量待測克倫特羅量。

膠體金免疫層析法，利用競爭法膠體金免疫層析技術，檢測液中的Clen與金標墊上的金標抗體結合形成復合物，若Clen在檢測液中濃度低於靈敏度值，未結合的金標抗體流到T區時，被固定在膜上的Clen-BSA偶聯物結合，逐漸凝集成一條可見的T線；若Clen濃度高於靈敏度值，金標抗體全部形成復合物，不會再與T線處Clen-BSA偶聯物結合形成可見T線。

G. 萊克多巴胺是什麼東西

[鹽酸萊克多巴胺]

鹽酸萊克多巴胺
英文名稱：ractopamine
原料名稱：翻譯成萊克多巴胺也有人翻譯成雷托巴胺
化學名稱：1-（4-羥基苯基）-2[1-甲基-3-（4-羥基苯基）-丙氨基]-乙醇鹽酸鹽
理化性質：可溶於水，微溶於丙酮，可溶於乙醇，PH值：6～7，呈中性，熔點：159.8℃
質量標准：最低含量99%（高壓液相法）
化學分子式：C18H23NO3Cl 分 子 量：337.83
海關編碼：2922.1100
化學分類：苯基乙醇胺類
用途：鹽酸萊克多巴胺是一種醫葯原料，一種可用於治療沖血性心力衰竭症的強心葯。還可以用於治療肌肉萎縮症，增長肌肉，減少脂肪蓄積，並對胎兒和新生兒生長有益。美國FDA在 2000年批准，可以用於動物營養重新配劑，廣泛地用於畜牧業和養殖業。可以同時提高動物的日增重，提高飼料利用率，提高動物的蛋白質含量。
PAYLEAN（萊克多巴胺）對商品豬的影響和利用
商品豬生產者的目的是高效率地生產出瘦肉率高質量好的豬肉以跟其他的動物產品競爭。瘦肉胴體的定價系統導致了對瘦肉生長速度、胴體瘦肉率和飼料報酬的進一步選擇。健康、營養和設備管理策略的推行都是為了盡可能地提高瘦肉生長效率。但是鹽酸克倫特羅在全世界養豬業中的使用都是違法的，最近美國FDA批準的鹽酸萊克多巴胺在豬中使用後，美國養豬戶把使用前後是"黑夜與白天的差別"。應承認鹽酸萊克多巴胺能否在中國批准生產和使用
需大量試驗驗證和相當一段時間。以下敘述權當拋磚引玉！
Paylean是一種飼料添加劑，是美國Elanco Lilly公司的注冊商標並被美國FDA於今年7月份批准生產僅在養豬生產中使用，它能進一步提高肌肉組織生長速度和效率。它含有萊克多巴胺的鹽酸鹽，是提高肌肉蛋白生長和飼料效率的小分子。Ractopamine是phenethanolamines成員之一。Paylean不是一種激素、類固醇、抗生素，也不是生物工程產物。它已經被證實在150~240的最後90磅體重期間的飼料中添加4.5~18克/噸，已經被美國食品葯物管理局廣泛而反復評估了其有效性和安全性。大量的試驗證明ractopamine添加量在18克/噸在商品豬上市前90磅的效果。在這些試驗中，ractopamine提高無脂瘦肉34%。Ractopamine在提高生長速度的同時降低了採食量。第10肋背膘厚降低13.7%,瘦肉量提高11%，屠宰率能從73.3%提高到 74.4%，產生增加1.5%的效果。
生長性能和胴體性能的提高受paylean添加量的影響。飼喂添加4.5克/噸的豬生長速度與飼喂添加9、18克/噸的一樣，而瘦肉率和背膘厚度的改善只有飼喂18克/噸的40~50%。飼喂9克/噸的改善介於4.5與18克/噸之間。
在上市前90磅飼喂paylean，添加20ppm的無脂瘦肉日增量能提高34%，添加 10ppm的無脂瘦肉日增量能提高23.3%。這些結果在上市體重為220~280磅的范圍測驗均是一致的。Paylean對瘦肉生長率的影響在具有不同瘦肉生長潛力的品種間試驗均為一致。包含7個具有完全不同瘦肉率的基因型的研究證實，添加20ppm paylean均對不同基因型豬產生了34%的瘦肉量的提高。所以，它能在高瘦肉率基因型品系產生反應。換句話說，paylean能在高瘦肉率基因型品系豬原來的基礎上額外提高34%的瘦肉率生長。
Paylean對不同胴體測量沒有相同的效應。它對第10肋的背膘厚有巨大的影響。對胴體的組成方面，偏離背中線的第10至最後肋的背膘厚的測定比背中線的具更准確的預測指示作用。Paylean在降低膘厚方面影響不大，但可以大大提高眼肌面積。4.5克/噸的添加水平並沒有明顯降低背膘厚，但已經提高了眼肌面積。
關於ractopamine的研究表明，在上市體重前90磅的活豬對ractopamine的反應並不是恆定的，而是先升高，後達到一個平台，然後再下降。最大的反應是在日增重達到22~26磅或添加20ppm paylean 的19-24天時。
試驗表明，低~中瘦肉率的基因型豬在150~240磅體重時，添加paylean組可以在其瘦肉生長下降時產生提高無脂瘦肉的影響。
與許多胴體改良劑一樣，paylean對無脂瘦肉生長的有利影響需要一定的氨基酸水平。日糧賴氨酸水平和每天賴氨酸攝入量都要有相應的提高。在150~240磅體重范圍可以設計2個賴氨酸水平的日糧。
Paylean 的功能是通過把營養素重分配把脂肪生長轉向瘦肉生長。採食量因商品豬生產環境、品種和季節的不同而異。低能量飼料一般限制瘦肉的生長，但paylean的添加仍可提高34%的無脂瘦肉生長。這就使得其在商業環境中推廣利用更為廣泛。
飼喂paylean的回報在2個方面。其一，提高了生長速度、飼料效率和屠宰率（表4）。所有生產者都可獲得這$3.64的回報。其二，paylean最大的優勢是能獲得額外的10.45磅的無脂瘦肉生長，這可以帶來$9~11。Ractopamine 改變了瘦肉的分布，提高了後腿瘦肉的比率。當然評估瘦肉增量仍有不少困難。因為它才使最後肋的背膘厚降低0.03inches 。即使光學測量儀和標准胴體也只能預測paylean的一半反應。
Ractopamine的最適用量和銷售策略將由添加ractopamine通過不同質量的胴體定價系統，為養豬生產者帶來的額外收益決定，當瘦肉比肥肉的價格高得多時，paylean 的用量和使用期就可以增加。飼料成本、市場價格和豬肉加工定價系統均影響paylean的最佳添加量。已經證實Paylean 對豬肉品質有很小的影響，Ractopamine 在提高肌肉中的蛋白質含量時也提高了後腿的可加工比例。豬肉風味鑒定小組發現paylean的與對照組的多汁性、風味和嫩度均無區別，有2個試驗表明添加後能使豬肉產生略高的剪切力。就瘦肉生長速度、瘦肉飼料轉化率和胴體瘦肉率而言，Paylean的最適添加量和添加時機取決於胴體瘦肉的定價，主要是因添加Paylean而獲得的額外瘦肉的報酬來決定。
萊克多巴胺的含量檢測
一、液相方法
試劑和溶液
乙腈和甲醇：色譜純；
甲醇、二氯甲烷、正已烷：分析純；
2%冰乙酸：取5ml 冰乙酸，用水定容到250ml。
提取液：取900ml甲醇，用水定容到1000ml,再加2ml濃鹽酸，混勻。
流動相：取320ml乙腈，用水定容到1000ml，再加20ml冰乙酸和0.87g戊烷磺酸鈉，混勻。
萊克多巴胺標准貯備液：准確稱取萊克多巴胺（純度≥99%）0.1000g，置於100ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容，其濃度1000μg/ml的貯備液，置4℃冰箱中保存。
萊克多巴胺標准工作溶液：分別准確吸取一定量的標准貯備液，置於10ml容量瓶中，用2%冰醋酸稀釋、定容，配製成濃度為0.01μg/ml、0.1μg/ml、0.2μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml的標准溶液，分別進HPLC檢測。
儀器和設備
高效液相色譜儀：配熒光檢測器；
離心機；
振盪器；
微孔濾膜（0.45μm）。
HPLC色譜條件
色譜柱：C18柱，250×4.6mm(i.d),粒徑5μm；
柱溫：室溫；
動相：320ml乙腈+680ml超純水+20ml冰乙酸+0.87g戊烷磺酸鈉；
激發波長：226nm
發射波長：305nm。

H. 如何檢查瘦肉精

目前，檢測「瘦肉精」殘留的方法主要有四種，即高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜-質譜法（GC-MS）、毛細管區帶電泳法（CE）和免疫分析技術（IA）。目前，我國將HPLC法作為「瘦肉精」檢測殘留的半確證性方法，其最低檢測限范圍為1～15納克/克。IA技術主要有放射免疫分析技術（RIA）和酶免疫分析技術（EIA）。RIA最低檢測限可達到0.5納克/克，國外已生產出RIA測定克倫特羅的試劑盒。檢測克倫特羅較高效的EIA是ELISA技術，檢測限可達0.05納克/克，最高可達0.003納克/克。我國研製的「瘦肉精」多克隆抗體檢測試劑盒，對樣品檢測的特異性強，檢測時間短，可同時檢測多個樣品。

I. 滴滴涕，萊克多巴胺是什麼

[鹽酸萊克多巴胺]

鹽酸萊克多巴胺
英文名稱：ractopamine
原料名稱：翻譯成萊克多巴胺也有人翻譯成雷托巴胺
化學名稱：1-（4-羥基苯基）-2[1-甲基-3-（4-羥基苯基）-丙氨基]-乙醇鹽酸鹽
理化性質：可溶於水，微溶於丙酮，可溶於乙醇，PH值：6～7，呈中性，熔點：159.8℃
質量標准：最低含量99%（高壓液相法）
化學分子式：C18H23NO3Cl 分 子 量：337.83
海關編碼：2922.1100
化學分類：苯基乙醇胺類
用途：鹽酸萊克多巴胺是一種醫葯原料，一種可用於治療沖血性心力衰竭症的強心葯。還可以用於治療肌肉萎縮症，增長肌肉，減少脂肪蓄積，並對胎兒和新生兒生長有益。美國FDA在 2000年批准，可以用於動物營養重新配劑，廣泛地用於畜牧業和養殖業。可以同時提高動物的日增重，提高飼料利用率，提高動物的蛋白質含量。
PAYLEAN（萊克多巴胺）對商品豬的影響和利用
商品豬生產者的目的是高效率地生產出瘦肉率高質量好的豬肉以跟其他的動物產品競爭。瘦肉胴體的定價系統導致了對瘦肉生長速度、胴體瘦肉率和飼料報酬的進一步選擇。健康、營養和設備管理策略的推行都是為了盡可能地提高瘦肉生長效率。但是鹽酸克倫特羅在全世界養豬業中的使用都是違法的，最近美國FDA批準的鹽酸萊克多巴胺在豬中使用後，美國養豬戶把使用前後是"黑夜與白天的差別"。應承認鹽酸萊克多巴胺能否在中國批准生產和使用
需大量試驗驗證和相當一段時間。以下敘述權當拋磚引玉！
Paylean是一種飼料添加劑，是美國Elanco Lilly公司的注冊商標並被美國FDA於今年7月份批准生產僅在養豬生產中使用，它能進一步提高肌肉組織生長速度和效率。它含有萊克多巴胺的鹽酸鹽，是提高肌肉蛋白生長和飼料效率的小分子。Ractopamine是phenethanolamines成員之一。Paylean不是一種激素、類固醇、抗生素，也不是生物工程產物。它已經被證實在150~240的最後90磅體重期間的飼料中添加4.5~18克/噸，已經被美國食品葯物管理局廣泛而反復評估了其有效性和安全性。大量的試驗證明ractopamine添加量在18克/噸在商品豬上市前90磅的效果。在這些試驗中，ractopamine提高無脂瘦肉34%。Ractopamine在提高生長速度的同時降低了採食量。第10肋背膘厚降低13.7%,瘦肉量提高11%，屠宰率能從73.3%提高到 74.4%，產生增加1.5%的效果。
生長性能和胴體性能的提高受paylean添加量的影響。飼喂添加4.5克/噸的豬生長速度與飼喂添加9、18克/噸的一樣，而瘦肉率和背膘厚度的改善只有飼喂18克/噸的40~50%。飼喂9克/噸的改善介於4.5與18克/噸之間。
在上市前90磅飼喂paylean，添加20ppm的無脂瘦肉日增量能提高34%，添加 10ppm的無脂瘦肉日增量能提高23.3%。這些結果在上市體重為220~280磅的范圍測驗均是一致的。Paylean對瘦肉生長率的影響在具有不同瘦肉生長潛力的品種間試驗均為一致。包含7個具有完全不同瘦肉率的基因型的研究證實，添加20ppm paylean均對不同基因型豬產生了34%的瘦肉量的提高。所以，它能在高瘦肉率基因型品系產生反應。換句話說，paylean能在高瘦肉率基因型品系豬原來的基礎上額外提高34%的瘦肉率生長。
Paylean對不同胴體測量沒有相同的效應。它對第10肋的背膘厚有巨大的影響。對胴體的組成方面，偏離背中線的第10至最後肋的背膘厚的測定比背中線的具更准確的預測指示作用。Paylean在降低膘厚方面影響不大，但可以大大提高眼肌面積。4.5克/噸的添加水平並沒有明顯降低背膘厚，但已經提高了眼肌面積。
關於ractopamine的研究表明，在上市體重前90磅的活豬對ractopamine的反應並不是恆定的，而是先升高，後達到一個平台，然後再下降。最大的反應是在日增重達到22~26磅或添加20ppm paylean 的19-24天時。
試驗表明，低~中瘦肉率的基因型豬在150~240磅體重時，添加paylean組可以在其瘦肉生長下降時產生提高無脂瘦肉的影響。
與許多胴體改良劑一樣，paylean對無脂瘦肉生長的有利影響需要一定的氨基酸水平。日糧賴氨酸水平和每天賴氨酸攝入量都要有相應的提高。在150~240磅體重范圍可以設計2個賴氨酸水平的日糧。
Paylean 的功能是通過把營養素重分配把脂肪生長轉向瘦肉生長。採食量因商品豬生產環境、品種和季節的不同而異。低能量飼料一般限制瘦肉的生長，但paylean的添加仍可提高34%的無脂瘦肉生長。這就使得其在商業環境中推廣利用更為廣泛。
飼喂paylean的回報在2個方面。其一，提高了生長速度、飼料效率和屠宰率（表4）。所有生產者都可獲得這$3.64的回報。其二，paylean最大的優勢是能獲得額外的10.45磅的無脂瘦肉生長，這可以帶來$9~11。Ractopamine 改變了瘦肉的分布，提高了後腿瘦肉的比率。當然評估瘦肉增量仍有不少困難。因為它才使最後肋的背膘厚降低0.03inches 。即使光學測量儀和標准胴體也只能預測paylean的一半反應。
Ractopamine的最適用量和銷售策略將由添加ractopamine通過不同質量的胴體定價系統，為養豬生產者帶來的額外收益決定，當瘦肉比肥肉的價格高得多時，paylean 的用量和使用期就可以增加。飼料成本、市場價格和豬肉加工定價系統均影響paylean的最佳添加量。已經證實Paylean 對豬肉品質有很小的影響，Ractopamine 在提高肌肉中的蛋白質含量時也提高了後腿的可加工比例。豬肉風味鑒定小組發現paylean的與對照組的多汁性、風味和嫩度均無區別，有2個試驗表明添加後能使豬肉產生略高的剪切力。就瘦肉生長速度、瘦肉飼料轉化率和胴體瘦肉率而言，Paylean的最適添加量和添加時機取決於胴體瘦肉的定價，主要是因添加Paylean而獲得的額外瘦肉的報酬來決定。
萊克多巴胺的含量檢測
一、液相方法
試劑和溶液
乙腈和甲醇：色譜純；
甲醇、二氯甲烷、正已烷：分析純；
2%冰乙酸：取5ml 冰乙酸，用水定容到250ml。
提取液：取900ml甲醇，用水定容到1000ml,再加2ml濃鹽酸，混勻。
流動相：取320ml乙腈，用水定容到1000ml，再加20ml冰乙酸和0.87g戊烷磺酸鈉，混勻。
萊克多巴胺標准貯備液：准確稱取萊克多巴胺（純度≥99%）0.1000g，置於100ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容，其濃度1000μg/ml的貯備液，置4℃冰箱中保存。
萊克多巴胺標准工作溶液：分別准確吸取一定量的標准貯備液，置於10ml容量瓶中，用2%冰醋酸稀釋、定容，配製成濃度為0.01μg/ml、0.1μg/ml、0.2μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml的標准溶液，分別進HPLC檢測。
儀器和設備
高效液相色譜儀：配熒光檢測器；
離心機；
振盪器；
微孔濾膜（0.45μm）。
HPLC色譜條件
色譜柱：C18柱，250×4.6mm(i.d),粒徑5μm；
柱溫：室溫；
動相：320ml乙腈+680ml超純水+20ml冰乙酸+0.87g戊烷磺酸鈉；
激發波長：226nm
發射波長：305nm。
二、酶聯免疫快速檢測試劑盒
採用間接競爭ELISA方法檢測樣本中的萊克多巴胺，在微孔條上預包被上偶聯抗原，樣本中的萊克多巴胺將和微孔條上預包被偶聯抗原競爭抗萊克多巴胺抗體，加入酶標記物後，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含萊克多巴胺含量成負相關，與標准曲線比較即可得出樣本中萊克多巴胺的殘留量。

J. 求助一份萊克多巴胺試劑盒說明書

萊克多巴胺(Ractopamine)快速檢測試劑盒說明書
本試劑盒採用間接競爭ELISA方法檢測豬尿和豬肝等樣本中的萊克多巴胺，在微孔條上預包被上偶聯抗原，樣本中的萊克多巴胺將和微孔條上預包被偶聯抗原競爭抗萊克多巴胺抗體，加入酶標二抗後，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含萊克多巴胺量成負相關，與標准曲線比較即可得出萊克多巴胺含量。

一、概要簡介
萊克多巴胺（Ractopamine）屬於beta興奮劑， β-興奮劑是營養重分配劑一種，是一類結構和功能類似腎上腺素和去甲腎上 腺素的苯乙醇胺類衍生物，它可以加快畜禽生長速度，降低酮體脂肪含量，提高瘦肉率。在歐盟β-興奮劑已被禁止用於家禽的生長促進劑，我國在《禁止在飼料和動物飲用水中使用的葯物品種目錄》中也有明文規定， 但由於萊克多巴胺屬於非處方葯，且價格遠低於克侖特羅，因此其非法應用者不斷增多。我公司研製的萊克多巴胺ELISA快速檢測試劑盒可用於動物組織、飼料、尿液中萊克多巴胺的殘留檢測。
試劑盒特性：
試劑盒靈敏度 0.5ppb
樣本回收率：
尿樣…………………………… 80%±10%
肌肉肝臟……………………… 75%±10%
飼料…………………………… 60%——120%
交叉反應率：
萊克多巴丁胺 ………………………22.3%
二、試劑盒組成
1、 96孔板酶標板 X 1塊
2、 標准液X6瓶,800l/瓶，為Ractopamine水溶液 ： 0ng/ml, 0.5ng/ml，1.5ng/ml, 4.5ng/ml,13.5ng/ml,40.5ng/ml
3、酶標記物12ml ………………………………紅色帽
4、Ractopamine抗體 7ml…………………………綠色帽
5、底物液 A液 7ml………………………………白色帽
6、底物液 B液 7ml………………………………紅色帽
7、終止液 7ml………………………………黃色帽
8、20倍濃縮洗滌液 40ml…………………………透明帽
9、4倍濃縮復溶液50ml …………………………透明帽

三、操作步驟
樣本處理
檢測室須具備的儀器：
——均質器
——振盪器
——離心機
——20l，50l，100l，200l微量加樣器
試劑
——甲醇
——乙醇
——二氯甲烷
配液：
buffer 1：
無水Na2CO3 48g
NaCL 15g
去離子水 100ml
1 尿樣本處理
尿樣不用處理，清亮尿樣，用試劑盒提供的緩沖液以1：10倍稀釋後，取50l進行測定，暫不使用的樣品應冷凍保存。
註：樣本被稀釋了10倍，尿液中檢測下限為10ppb（因部份樣本存在一定的雜質干擾）
2 組織樣本
1）稱取組織3g±0.1g ，加入無水乙晴9ml， 充分振盪10min。
2) 3000g ，15℃以上離心10min 。取上清夜3ml.在氮氣流下吹乾。
3）加入（buffer 1） 1ml混合後，加入3ml異丁醇振盪萃取5min，3000g ，15℃以上離心5min，取出上層有機相，再加入3ml異丁醇振盪萃取5min 。合並兩次萃取的有機相，氮氣流下吹乾。
4）用2ml 已稀釋了的復溶液溶解，取50l進行分析。
註：樣本被稀釋了2倍，檢測下限為1ppb
3 飼料樣本
1）准確稱取2.0±0.1g飼料於40ml離心管中。
2）加入10ml甲醇:乙醇（1:1；V/V），充分振盪10min， 4000rpm離心10min。
3）取上清2ml，氮氣吹乾。
4）加入1ml二氯甲烷，溶解殘留物，再加入1ml 復溶液，充分混合5min，10000rpm離心10min，取上層液用試劑盒提供的緩沖液根據飼料的種類來進行不同倍數的稀釋。
配合料按1：10倍稀釋，濃縮料、預混料按1：30倍進行稀釋，然後取50l用於ELISA分析。
註： 配合料被稀釋了50倍。檢測下限為25ppb
濃縮料、預混料被稀釋了150倍.檢測下限75ppb

四、酶標免疫分析程序
1、將試劑盒從冷藏環境中取出並將所需試劑從盒中取出，置於室溫（20-24℃）平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用蒸餾水或去離子水稀釋至800ml備用。（按需量稀釋）
3、取出需要數量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存於2-8℃不要冷凍。
4、編號：將樣品和標准品對應微孔按序編號，每個樣品和標准品均需做2孔。
5、用加樣器每孔加標准品或樣本50l 後，每孔再加50l抗體溶液。
6、用蓋板膜蓋板後置於25℃環境反應1h。
7、小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用洗滌液每孔250l充分洗滌4－5次，每次間隔15－30秒，用吸水紙拍干。
8、加酶標記物：每孔加入100l。用蓋板膜蓋板後置25℃
環境反應30min，取出重復第7步。
9、顯色：每孔加入底物液A液50l，再加底物液B液50l，輕輕振盪混勻25℃環境避光顯色30min。
10、測定：每孔加入終止液50l，輕輕振盪混勻，設定酶標儀於450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測），測定每孔OD值。
四、結果
結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含萊克多巴胺量成負相關。
1、用樣品的平均吸光度值與標准值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣品1的吸光度值為0.301, 樣品2的吸光度值為0.812, 標准品吸光度值分別是：0ng/ml為1.500；0.5ng/ml為1.280；1.5ng/ml為1.080； 4.5ng/ml為0.710； 13.5ng/ml為0.405；40.5ng/ml為0.250。則樣品1的濃度范圍是13.5ng/ml-40.5ng/ml; 樣品2的濃度范圍是1.5ng/ml-4.5ng/ml。
2、所獲得的每個濃度標准溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以第一個標准（0標准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B
百分吸光度值（%）＝ — ×100%
B0
B—標准溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0µg/L標准溶液的平均吸光度值
以萊克多巴胺濃度(µg/L)的自然對數值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標准曲線圖。相對應每一個樣品的濃度(µg/L)可以從標准曲線上讀出。也可以用回歸方程法，計算出樣本溶液濃度。利用計算機專業軟體，更便於大量樣品的快速分析。
五、注意事項
1、室溫低於20℃或試劑及標本沒有回到室溫（20-24度）會導致所有標準的OD值偏低（非常關鍵）。
2、在洗板過程中如果出現板孔乾燥的情況，則會出現標准曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干後應立即進行下一步操作。（非常重要）
3、混合要均勻，洗板要徹底，在EIA分析中的再現性，很大程度上取決於洗板的一致性（非常重要）。
4、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會引起靈敏度的降低。不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件
保存試劑盒於2-8℃，不要冷凍，將不用的微孔板放進自封袋重新密封。標准物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質的跡象
發色試劑有任何顏色表明發色劑變質，應當棄之。
0標準的吸光度 （450/630nm）值小於0.5個單位（A450nm<0.5 ）時，表示試劑可能變質。