❶ 生物:蛋白質,糖類,脂肪,核酸各用什麼試劑檢查有什麼顏色反應
蛋白質用雙縮尿試劑會發生紫色反應
糖類用斐林試劑反應會生成磚紅色的沉澱
脂肪用蘇丹三蘇丹四溶液,蘇丹三+脂肪變成橘黃色,蘇丹四+脂肪變成紅色
核酸提取採用磁珠法。
望採納,謝謝
❷ 核酸和蛋白質序列分析的內容和方法有哪些
核酸和蛋白質序列分析的內容和方法有哪些
蛋白質結構分析方法:X射線晶體衍射分析和核磁共振
x 射線衍射法的解析度可達到原子的水平,使它可以測定亞基的空間結構、各亞基間的相對拓撲布局,還可清楚的描述配體存在與否對蛋白質的影響。多維核磁共振波譜技術已成為確定蛋白質和核酸等生物分子溶液三維結構的唯一有效手段。NM R技術最大的優點不在於它的解析度,而在於它能對溶液中和非晶態的蛋白質進行測量。
蛋白質的序列結構測定:
1.到目前為止,最經典的蛋白質的氨基酸序列分析方法是,sarI等人基於Edman降解原理研製的液相蛋白質序列儀,及後來發展的固相和氣相的蛋白質序列分析儀。
2.質譜:早期的質譜電離的方式主要是電子轟擊電離(EI),它要求樣品的揮發性好,一般與
氣相色譜聯用。但使用G C/M S分析,肽的長度受到限制,只能分析小的肽段。近年來,
在離子化的技術及儀器方面取得了突破性進展,使得質譜所能測定的分子量的范圍大大超
出了10k u。因此,軟離子化技術、基質輔助的激光解吸/離子化(MALDI)和電噴霧離子化(E SI)顯得尤為有前途。通過串聯質譜技術(MS/MS)和源後衰減基質輔助的激光解吸/離子化(PSD—MAIDI—MS),人們就可以從質譜分析中獲得肽及蛋白質的結構信息。
❸ 如何檢測dna,rna及蛋白質
1.rna在細胞核處由dna轉錄形成,不是雙螺旋,是單鏈
2.腺嘌呤
尿嘧啶
鳥嘌呤
胞嘧啶
dna中沒有尿嘧啶有胸腺嘧啶,rna的組成是核糖核酸,區別是其中的五碳糖是不脫氧的
3.rna有mrna,作用是傳遞密碼子,trna,作用是運載氨基酸,rrna,作用是參與形成核糖體
4.dna在dna解旋酶的作用下開始解旋,然後游離的核糖核苷酸與dna的模板鏈根據鹼基互補配對原則合成mrna,該rna從細胞核中釋放,到細胞質中
,與核糖體和trna合成蛋白質
5這個我沒有研究過
❹ 核酸含量的測定方法及原理都有哪些
核酸定量常用方法及原理如下:
1、光吸收法:核酸中鹼基共軛結構在近紫外光波長260nm處有最大吸收,吸收強度與核酸濃度成正比,因此可以用於核酸定量。
2、定P法:核酸中P含量約為9.5%,因此可以通過測定樣品中的有機P量來進行核酸定量。
核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,為生命的最基本物質之一。
核酸廣泛存在於所有動植物細胞、微生物體內,生物體內的核酸常與蛋白質結合形成核蛋白。不同的核酸,其化學組成、核苷酸排列順序等不同。根據化學組成不同,核酸可分為核糖核酸(簡稱RNA)和脫氧核糖核酸(簡稱DNA)。
❺ 常用的蛋白質含量測定方法有哪些
①凱氏定氮法
原理:蛋白質平均含氮量為16%。當樣品與濃硫酸共熱,蛋白氮轉化為銨鹽,在強鹼性條件下將氨蒸出,用加有指示劑的硼酸吸收,最後用標准酸滴定硼酸,通過標准酸的用量即可求出蛋白質中的含氮量和蛋白質含量。
②雙縮脲法
原理:尿素在180℃下脫氨生成雙縮脲,在鹼性溶液中雙縮脲可與Cu2+形成穩定的紫紅色絡合物。蛋白質中的肽鍵實際上就是醯胺鍵,故多肽、蛋白質等都有雙縮脲(biuret)反應,產生藍色或紫色復合物。比色定蛋白質含量。
缺點:靈敏度低,樣品必須可溶,在大量糖類共存和含有脯氨酸的肽中顯色不好。其 精確度 較差 (數mg),且會受樣品中 硫酸銨 及 Tris 的干擾,但 准確度 較高,不受蛋白質的種類影響。
③Folin酚法(Lowry)
Folin酚法是biuret 法的延伸,所用試劑由試劑甲和乙兩部分組成。試劑甲相當於雙縮脲試劑(鹼性銅試劑),試劑乙中含有磷鉬酸和磷鎢酸。
在鹼性條件下,蛋白質中的巰基和酚基等可將Cu2+還原成Cu+, Cu+能定量地與Folin-酚試劑反應生成藍色物質,600nm比色測定蛋白質含量。
靈敏度較高(約 0.1 mg),但較麻煩,也會受 硫酸銨 及 硫醇化合物 的干擾。 步驟中各項試劑的混合,要特別注意均勻澈底,否則會有大誤差。
④紫外法
280nm光吸收法:利用Tyr在280nm在吸收進行測定。
280nm-260nm的吸收差法:若樣品液中有少量核酸共存按下式計算:
蛋白質濃度(mg/ml)=1.24E280-0.74E260 (280 260為角標)
⑤色素結合法(Bradford 法)
直接測定法:利用蛋白質與色素分子(Coomassie Brilliant Blue G-250)結合物的光吸收用分光光度法進行測定。
考馬斯亮蘭(CBG)染色法測定蛋白質含量。CBG 有點像指示劑,會在不同的酸鹼度下變色;在酸性下是茶色,在中性下為藍色。當 CBG接到蛋白質上去的時候,因為蛋白質會提供 CBG一個較為中性的環境,因此會變成藍色。當樣本中的蛋白質越多,吸到蛋白質上的CBG也多,藍色也會增強。因此,藍色的呈色強度,是與樣本中的蛋白質量成正比。
間接測定法:蛋白質與某些酸性或鹼性色素分子結合形成不溶性的鹽沉澱。用分光光度計測定未結合的色素,以每克樣品結合色素的量來表示蛋白質含量的多少。
⑥BCA法
BCA(Bicinchoninc acid procere,4,4』-二羧-2,2』-二喹啉)法與Lowry法相似,主要差別在鹼性溶液中,蛋白質使Cu2+轉變Cu+後,進一步以BCA 取代Folin試劑與Cu+結合產生深紫色,在波長562 nm有強的吸收。
它的優點在於鹼性溶液中BCA 比Folin試劑穩定,因此BCA與鹼性銅離子溶液結合的呈色反應只需一步驟即完成。靈敏度Lowry法相似。
本方法對於陰離子、非離子性及二性離子的清潔劑和尿素較具容忍度,較不受干擾,但會受還原糖 及EDTA的干擾。
⑦膠體金測定法
膠體金(colloidal gold)是氯金酸(chloroauric acid)的水溶膠,呈洋紅色,具有高電子密度,並能與多種生物大分子結合。
膠體金是一種帶負電荷的疏水膠體遇蛋白質轉變為藍色,顏色的改變與蛋白質有定量關系,可用於蛋白質的定量測定。
⑧其他方法
有些蛋白質含有特殊的 非蛋白質基團,如 過氧化物酶含有 亞鐵血紅素基團,可測 403 nm 波長的吸光來定量之。 含特殊金屬的酶 (如鎘),則可追蹤該金屬。
❻ 檢測核酸、蛋白質分子量的方法
一般來說是電泳法,核酸用的是瓊脂糖凝膠電泳,蛋白質用的是聚丙烯醯胺凝膠電泳,通常在樣品的旁邊,會跑一個由多種已知大小的樣品組成的marker,這樣在你的條帶跑出來之後,就可以看出其大小了,核酸最多可以精確到50bp之內。蛋白的話大概1kd左右。
當然你做實驗的時候一般都是知道你的樣品大小的,所以一般做比較看是不是出現在正確的位置就好。
希望能夠幫到你~望採納~謝謝~有不明白的歡迎追問~
❼ 核酸含量的測定方法及原理都有哪些
核酸檢測的主要原理其實是反轉錄和聚合酶鏈式擴增反應。也叫做RT-PCR。目前對新型冠狀病毒進行的核酸檢測也主要採用此種方式。簡單來說就是採取患者鼻咽拭子、痰和其他下呼吸道分泌物、血液、糞便,檢測人員通過。核酸提取試劑盒提取患者標本里邊兒的核酸,然後把提取到的核酸放進檢測試劑中進行復制擴增。然後再根據檢測結果進行判斷如果是陰性代表沒有感染,如果是陽性代表有感染。目前對新型冠狀病毒核酸檢測會存在假陰性的可能,所以可以選擇多次測量。如果連續兩次核酸檢測為陰性,同時沒有臨床症狀可以排除感染,並且對已經感染了新型冠狀病毒肺炎的患者,如果連續兩次檢測核酸為陰性,注意間隔時間必須大於一天,同時臨床症狀緩解,影像學好轉也可以解除隔離。
❽ 核酸檢測是怎樣檢測的
眾所周知,新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)是一種烈性呼吸道傳染病,其病原體為新型冠狀病毒。若想證實已出現的感染症狀是由本病毒所引起,最准確的方法是從患者體內分離出活病毒,並進行病毒培養。
然而,此方法並不適合大面積應用,在此次疑似病例的確診工作中,也並不適用。這是因為病毒培養所需時間較長,需要的場所條件也很高(P3級實驗室),時效性遠遠跟不上臨床需要。
而核酸檢測作為病原學的檢測手段之一,效率很高,一般情況下幾個小時就可以知道結果。因此,在此次疫情中,臨床上取得病原學證據的主要方式並不是病毒培養,而是核酸檢測。
核酸是遺傳信息載體,是對DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)的統稱。病毒則主要由遺傳物質和蛋白質組成。而新型冠狀病毒正是一種RNA病毒,其遺傳物質是單鏈RNA。核酸檢測的原理,正是檢測在被測者的咽拭子等樣本中,是否存在病毒的RNA。如果存在,說明被病毒感染。那麼,我們是否已經獲悉了病毒的RNA呢?
△RNA與DNA(圖片來源網路)
在武漢疫情初期,中國疾病預防控制中心應用宏基因組學技術,在短時間內完成該病毒的鑒定,並獲取了全基因組序列。在病毒全基因組序列公布後,實時熒光逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)試劑被快速研發。
隨後,核酸檢測試劑盒被應用於臨床,並為確診新冠肺炎提供病原學證據。那麼,應用試劑盒進行核酸檢測,究竟是怎樣的一個過程呢?
首先,檢測人員需要在試劑的幫助下,將樣本中的核酸提取出來。再把已經分離出來的核酸加到核酸擴增試劑中,然後將其放到核酸擴增儀內,一般兩個小時內就會有結果。
事實上,在操作步驟中,擴增是很重要的一環。擴增的意義在於能讓微量的遺傳信息成指數增加。只要樣本中有核酸基因片段,就能用PCR法加以放大,從而更清晰地與病毒全基因組序列實現比對。
實時熒光逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)法已在臨床實驗室應用多年,檢測體系成熟,具有特異性強、靈敏度高、檢測周期短和可定量檢測的優點,而且還能對病毒感染程度和治療效果進行動態監測。
中日友好醫院呼吸與危重症醫學科主任醫師陳欣在記者采訪中介紹道:核酸檢測十分敏感,只要在被檢者的分泌物樣本中找到一部分病毒的核酸,就可以通過RT-PCR擴增的方式,整合成序列。
"雖然不確定核酸是否來自於活病毒,但對於有呼吸道感染症狀的患者或疑似患者來說,如果其咽拭子有這種核酸,一般認為來源於活病毒的一部分,間接證實其體內存在著病毒的繁殖和感染。" 陳欣告訴記者。
核酸檢測容易出現"假陰性"
雖然核酸檢測有靈敏度高、檢測周期短等優點,但也存在著一定的弊端。不同於從人體內直接分離出活病毒的方式,核酸檢測採用的是一種間接的方式,有可能造成假陰性。
因為試劑盒存在最低檢測限的問題,所以只有當採到的樣本中,病毒的含量達到一定程度時才能檢測出來。少數情況下,可能康復者並未康復,但由於樣本中病毒載量低,故康復者核酸檢測的結果呈陰性,也就是我們常說的"假陰性"。
因此,在《新型冠狀病毒肺炎診療標准(試行第七版)》中,出院標准之一為連續兩次痰、鼻咽拭子等呼吸道標本核酸檢測陰性(釆樣時間至少間隔24小時)。
而之所以選取呼吸道標本進行核酸檢測,是因為新冠肺炎屬於呼吸道傳染病,故而優先考慮從呼吸道的分泌物中取得標本。呼吸道又分為上呼吸道和下呼吸道,前者主要包括鼻、咽、喉;後者主要包括氣管、主支氣管及肺內各級支氣管。
相應地,現在對疑似患者檢測病毒核酸,標本的採集一般有兩大類,上呼吸道標本和下呼吸道標本。
上呼吸道標本主要包括口咽拭子、鼻咽拭子(NPS)、鼻咽吸取物(NPA);下呼吸道標本主要包括痰液、氣管吸取物、支氣管肺泡灌洗液(BALF)等。
❾ 核酸檢測的方式有幾種
核酸定量常用方法如下:
1、光吸收法:核酸中鹼基共軛結構在近紫外光波長260納米處有最大吸收,吸收強度與核酸濃度成正比,因此可以用於核酸定量。
2、定P法:核酸中P含量約為0.095,因此可以通過測定樣品中的有機P量來進行核酸定量。核酸簡介:核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,為生命的最基本物質之一。核酸廣泛存在於所有動植物細胞、微生物體內,生物體內的核酸常與蛋白質結合形成核蛋白。不同的核酸,其化學組成、核苷酸排列順序等不同。根據化學組成不同,核酸可分為核糖核酸和脫氧核糖核酸。DNA是儲存、復制和傳遞遺傳信息的主要物質基礎。RNA在蛋白質合成過程中起著重要作用,其中轉運核糖核酸,簡稱tRNA,起著攜帶和轉移活化氨基酸的作用;信使核糖核酸,簡稱mRNA,是合成蛋白質的模板;核糖體的核糖核酸,簡稱rRNA,是細胞合成蛋白質的主要場所。