分子生物學檢測方法及原理

㈠ 分子生物學的技術有哪些 原理

隨著生命科學和化學的不斷發展，人們對生物體的認知已經逐漸深入到微觀水平。從單個的生物體到器官到組織到細胞，再從細胞結構到核酸和蛋白的分子水平，人們意識到可以通過檢測分子水平的線性結構（如核酸序列），來橫向比較不同物種，同物種不同個體，同個體不同細胞或不同生理（病理）狀態的差異。這就為生物學和醫學的各個領域，提供了一個強有力的技術平台。
分子生物學技術：可應用於遺傳性疾病的研究和病原體的檢測及腫瘤的病因學、發病學、診斷和治療等方面的研究提高到了基因分子水平。
生物學定義：生物學是研究生命現象和生物活動規律的科學。
據研究對象分為動物學、植物學、微生物學、古生物學等；依研究內容，分為分類學、解剖學、生理學、細胞學、分子生物學、遺傳學、進化生物學、生態學等；從方法論分為實驗生物學與系統生物學等體系。

㈡ 細胞內DNA、RNA、蛋白質常用的分子生物學檢測方法shi

細胞內DNA用甲基綠檢測，而rna用吡羅紅檢測，蛋白質則用雙縮脲試劑檢測。

㈢ 與分子生物學相關的實驗方法有哪些

與分子生物學相關的實驗方法有哪些

主要包括植物、動物、微生物基因組DNA的提取與鑒定，哺乳動物組織總RNA的提取與鑒定，質粒DNA的提取與鑒定，PCR擴增，分子雜交技術，限制性內切酶消化，分子克隆全過程和基因文庫的構建等實驗項目的原理及步驟。

分子生物學（molecular biology ）：從分子水平上研究生命現象物質基礎的學科。研究細胞成分的物理、化學的性質和變化以及這些性質和變化與生命現象的關系，如遺傳信息的傳遞，基因的結構、復制、轉錄、翻譯、表達調控和表達產物的生理功能，以及細胞信號的轉導等。

分子生物學中最基本的技術是蛋白質的表達和純化。首先是編碼目的蛋白的DNA序列被克隆（用PCR技術和限制性內切酶）到作為表達載體的質粒中。隨後構建好的質粒被引入到宿主細胞。編碼序列在質粒上的特殊的啟動子元件的驅動下，被宿主細胞的表達系統所表達。質粒上通常還帶有抗生素抗性標簽以便於質粒篩選。

質粒可以被插入到細菌或動物細胞。外源DNA被引入細菌被稱為轉化，可以通過電穿孔法、微注射法、正吸收和融合來實現；外源DNA被引入真核細胞，如動物細胞，被稱為轉染，轉染技術包括磷酸鈣法、脂質體法和一些有專利權的商用轉染試劑。DNA也可以以病毒或病原菌為載體被帶入宿主細胞；應用這種病毒或病菌的轉染技術於細胞時，用術語來說就是「對細胞進行轉導（transce）」。

多聚酶鏈式反應(PCR)是一項用於體外復制DNA的極為通用的技術。簡而言之，PCR技術可以使單鏈DNA被復制數百萬次，也允許用事先確定好的方式對被復制的DNA序列進行改動。例如，PCR技術可以用於引入限制性酶切位點，或者對特定的DNA鹼基進行突變（改變）。PCR技術還可以用於從cDNA文庫獲得特定的DNA片斷，或者從另一個角度，用於判斷一個cDNA文庫中是否含有特定的DNA片斷。

凝膠電泳是分子生物學最主要的一項技術。其基本原理是：DNA、RNA和蛋白質可以用電場來進行分離。在瓊脂糖凝膠電泳中，DNA和RNA可以被瓊脂糖凝膠按其分子大小進行分離。同樣，蛋白質可以被SDS－聚丙烯醯胺凝膠電泳（SDS-PAGE）按分子量大小分離；此外，蛋白質還可以由於所帶電荷的不同被等電聚焦電泳分離。

㈣ Sanger法測序的原理是什麼

Sanger法測序的原理就是利用一種DNA聚合酶來延伸結合在待定序列模板上的引物。直到摻入一種鏈終止核苷酸為止。每一次序列測定由一套四個單獨的反應構成，每個反應含有所有四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)，並混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。

由於ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基因，使延長的寡聚核苷酸選擇性地在G、A、T或C處終止。終止點由反應中相應的雙脫氧而定。每一種dNTPs和ddNTPs的相對濃度可以調整，使反應得到一組長幾百至幾千鹼基的鏈終止產物。

Sanger法

是根據核苷酸在某一固定的點開始，隨機在某一個特定的鹼基處終止，並且在每個鹼基後面進行熒游標記，產生以A、T、C、G結束的四組不同長度的一系列核苷酸，然後在尿素變性的PAGE膠上電泳進行檢測，從而獲得可見DNA鹼基序列的一種方法。

在分子生物學研究中，DNA的序列分析是進一步研究和改造目的基因的基礎。用於DNA測序的技術主要有Frederick Sanger發明的Sanger雙脫氧鏈終止法（Chain Termination Method）

以上內容參考：網路-Sanger法測序

㈤ 可用於遺傳病診斷的現代分子生物學技術有哪些原理是什麼

可用於遺傳病診斷的現代分子生物學技術大致可分為三大類
一、細胞水平
細胞水平的遺傳病診斷主要有組織、細胞學檢查和染色體分析。
如遺傳性球形紅細胞增多症，是一種顯性遺傳病。通過對患者的細胞學檢查，可以發現紅細胞變小，中心色度變深，紅細胞自溶可高達15%~45% 。染色體異常的遺傳病一般都可以通過對細胞中的染色體分析，作出明確的診斷。
染色體檢查也稱核型分析是確診染色體病的主要方法。由於顯帶技術的廣泛開展，已使染色體病的診斷和定位更加准確。各醫療單位對進行核型分析的適應證有不同的規定，隨著技術改進和新的染色體病的發現，需要進行染色體檢查的適應證將日益增多。性染色體(包括X染色體和Y染色體)的檢查對性染色體數量畸變所致疾病的診斷有一定意義。
二、蛋白質水平（也稱成分的生化分析）
1、檢測基因產物——蛋白質、酶的量和活性；
2、是檢測酶促反應底物或產物的變化。
例如以蛋白質分子的結構和功能缺陷為病變基礎的單基因病，往往可以對蛋白質分子本身和酶促反應過程中的底物或產物進行定量或定性分析。由於單基因病的種類繁多，加上蛋白質分子或酶促反應的底物或產物的性質各不相同，所以檢測方法也不一致。要在某個醫療部門或研究機構同時建立一套完整的單基因病生化檢測系統幾乎是不可能的。一些國家為此建立了生化檢測的協作網路，不同的部門分別從事不同的單基因病生化測定與研究，同時促進部門間的相互協作。用於生化檢測的材料主要有血液、活檢組織、尿、糞、陰道分泌物、脫落細胞和培養細胞等。不同遺傳病的生化檢測可用不同的檢測材料。
三、基因水平也就是基因診斷
基因水平的遺傳病診斷也就是基因診斷(genediagnosis)（又稱為DNA診斷），是20世紀70年代在重組DNA技術基礎上迅速發展起來的一項應用技術，旨在對患者或收檢者的某一特定基因或其轉錄產物進行分析和檢測，從而對相應的遺傳病進行診斷。越來越多的證據表明，遺傳病的發生不僅與基因（DNA）的結構有關，而且與轉錄水平或翻譯水平上的變化有關。人體基因組的類型早在受精卵開始時就已形成，因此在人體發育的任何時期，只要獲得受檢者的基因組DNA，應用恰當的DNA分析技術，便能鑒定出缺陷的基因，而不論該基因產物是否已經表達。而且，應用這一方法，不僅能夠檢測單個鹼基置換、缺失和插入等，還能發現DNA的多態現象以及遺傳病的異質性。

㈥ 分子生物學實驗基本技術原理和技術方法要點是什麼

PCR 分子克隆 核酸電泳、瓊脂糖凝膠電泳 測序 DNA， RNA 提取 轉化外源DNA 體外轉錄、逆轉錄 cDNA文庫構建 原位雜交、酵母雙雜交、差減雜交、扣除雜交 藍白斑篩癬抗生素篩選 基因工程技術大部分都是依據分子生物學原理設計出來的。

㈦ 用中心法則可以解釋哪些分子生物學及基因工程常用的技術方法及原理。

1.dnd-dna分子雜交技術，用於檢測目的基因是否導入
2.rna-dna分子雜交技術，用於目的基因轉錄出的信使rna的檢測
3.抗原-抗體雜交技術，用於檢測目的基因翻譯出的蛋白質

㈧ 細胞因子檢測可以用哪些方法，簡述其原理

細胞因子主要是指由內分泌細胞分泌的一類可以參與免疫應答的蛋白多肽。對於細胞因子的檢測方法主要有三種：細胞生物學檢測、免疫學檢測和分子生物學檢測。細胞因子的發現依賴於其生物學活性，因此，建立了生物分析法用於細胞因子的檢測。隨後，用於檢測實驗溶液(如組織培養上清液)中細胞因子的免疫分析法被建立，並不斷用於實驗室研究。但准確地、可重復地測定細胞因子具有一定困難，主要原因是眾所周知的細胞因子的含量極低(大部分都是以pmol/L計)，同時存在著源於異嗜性抗體，類風濕因子以及特異的和非特異的細胞因子結合蛋白等[1，2] 的顯著干擾。

㈨ 細菌的分子生物學鑒定要怎麼做

是的，要做PCR。
首先你要提出細菌的DNA。
方法如下：
1、液體培養及保種：從斜面上挑取菌苔於液體培養基中放搖床上震盪（轉速160r/min）培養16小時。吸取菌液於1.5ml的經過滅菌的EP管中，再加甘油（30-40%）進行保種。（-80攝氏度保藏2年）
2、提取DNA（CTAB法）：
（1）取1.5ml菌液於1. 5ml離心管中，12000r/min離心2min，棄上清。
（2）向沉澱物中加入350ul雙蒸水，重新懸浮沉澱。
（3）加入20ul10%SDS和3ul的蛋白酶K（20mg/ml），溶菌酶3ul，混勻，於50℃溫育1h。
（4）加入50ul 5mol/L NaCl溶液，充分混勻，再加入50ul CTAB/NaCl溶液，混合後再65℃溫育30min。
（6）冷卻後加入等體積的酚(沉澱蛋白質)：氯仿：異戊醇（增強酚的作用）（25:24:1），小心上下顛倒混勻，12000r/min離心5min，將上清液轉移到新的EP管，重復此步驟2-3次，直至分層界面無白色沉澱。
（7）加入等體積的氯仿：異戊醇（24:1），小心顛倒混勻，12000r/min離心5min將上清液轉移到新的EP管。（純化作用）
（8）加入0.6倍體積的異丙醇，輕輕混合直到DNA沉澱下來，12000r/min離心15min棄上清。
（9）向離心管中加入75%乙醇，12000r/min離心5min洗滌DNA沉澱，小心棄上清，重復洗滌1次，棄上清將離心管倒置於吸水紙上，晾乾。
（10）加入50ul（雙蒸水）/ TE Buffer溶解DNA於4℃保存。
（11）電泳檢測
6、PCR擴增：（細菌的通用引物為27F和1492R）將提取得到的DNA進行PCR擴增，電泳檢測擴增得到的16S rDNA（如果菌類分明，條帶清晰，PCR原液可直接送去測序，雙向測通，得到測序序列後到NCBI的BLAST頁面比對，得出鑒定結果）
7、酶切帶型分型確定操作單元：將擴增產物用HhaI和HaeIII兩種限制性內切酶進行酶切，電泳檢測酶切產物，酶切帶型相同的分為一個操作單元。
8、連接轉化：從每一個操作單元中選取一株菌的16S rDNA進行連接實驗。將連接產物轉入感受態細胞中，將感受態細胞塗布於含有Amp的平板上，倒置培養12-16h。
9、克隆子挑選及PCR鑒定：從上一步的平板上挑取單菌落於含有Amp的液體培養基中震盪培養12h，以培養液為模板直接進行PCR擴增鑒定（1000-2000bp）。將含有目的片段的克隆子菌液低溫保存。
10、測序：將含有目的片段的克隆子菌液送去測序。
11、序列拼接：運用DNAMAN軟體對測序得到的序列進行拼接。
12、建樹：對拼接得到的序列用Blast進行比對，最後將比對得到的所有序列運用MEGA6建立系統發育樹。