檢測細胞產量的方法

Ⅰ 大腸桿菌檢測方法國標是用什麼方法檢測的

大腸桿菌檢測方法分為三種：

1、細菌分離鑒定法

分離培養與鑒定：糞便標本直接接種腸道桿菌選擇性培養基。血液先經肉湯增菌，然後轉種血瓊脂平板。其他標本同時接種血瓊脂平板和腸道桿菌選擇性培養基。

37℃孵育18～24小時後，觀察菌落塗片染色鏡檢。腸致病性大腸桿菌須先作血清學定型試驗。必要的時候檢定腸黴毒素。

2、衛生細菌學檢查法

大腸桿菌會不斷隨糞便排出體外，污染周圍環境水源、食品等。取樣檢查時，樣品中大腸桿菌越多，則表示樣品被糞便污染的越嚴重，表明樣品中存在腸道致病菌的可能性也就越大。

大腸菌數指數：指每立升中大腸菌群數，採用乳糖發酵法檢測。中國衛生標準是每1000ml飲水中不得超過3個大腸菌群，瓶裝汽水和果汁中每100ml大腸菌群不能超過5個。

3、全自動微生物定量分析儀（TEMPO）檢測法

全自動微生物定量分析（TEMPO）儀大腸桿菌群計數檢測有TEMPOTC和TEMPOCC兩種方法。

TEMPOTC的開發是為獲得NF ISO4832標准相當性能水平。

TEMPOCC法是TEMPO儀器上根據BAM方法專門用於24h計數食品中大腸桿菌群方法。

(1)檢測細胞產量的方法擴展閱讀：

大腸桿菌在生物技術中的應用

這些菌株由於失去了細胞壁等重要組分，所以在自然條件下已無法生長。甚至普通的清潔劑都可以輕易地殺滅這類菌株。即便由於操作不慎導致活菌從實驗室流出，也不易導致生化危機。

生物工程用的菌株基因組都被優化過，使之帶有不同基因型（例如β半乳糖苷酶缺陷型），可以更好的用於分子克隆實驗。

真核基因在大腸桿菌中表達，必須有合適的表達載體(Vector),常用載體：pBV220,pET系統。

目的基因在大腸桿菌中表達的情況：

大腸桿菌更適合原核基因的表達，外源基因表達產量與單位體積產量是正相相關的，外源基因拷貝數和表達 產物產量之間存在動態平衡，單個細胞的產量又與外源基因拷貝數，基因表達效率，表達產物的穩定性和細胞代謝負荷等因素有關。

Ⅱ BrdU檢測細胞增殖的方法

細胞增殖的檢驗方法：BrdU標記法

1、細胞以1.5×105 /ml細胞數接種於直徑35ml培養皿中（內放置一蓋玻片），培養1天，用含0.4％FCS培養液同步化3天，使絕大多數細胞處於G0 期。

2、終止細胞培養前，加入BrdU（終濃度為30μg/L），37℃，孵育40min。

3、棄培養液，玻片用PBS洗滌3次。

4、甲醇/醋酸固定10min。

5、經固定的玻片空氣乾燥，0.3％H2 O2 -甲醇30min滅活內源性氧化酶。

6、5％正常兔血清封閉。

7、甲醯胺100℃，5min變性核酸。

8、冰浴冷卻後PBS洗滌，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃度1：50），陰性對照加PBS或血清。

9、按ABC法進行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數，計算標記指數（LI）。

Ⅲ 細胞活性檢測的方法有多少種

細胞活性測定方法有台盼藍染色法、克隆（集落）形成法、 3H 放射性同位素摻入法、 MTT 法等。其中 MTT 法以其快速簡便，不需要特殊檢測儀器、無放射性同位素、適合大批量檢測的特點而得到廣泛的應用。但 MTT 法形成的 Formazan 為水不溶性的，需要加有機溶劑溶解，由於在去上清操作時會有可能帶走小部分的 Formazan ，故有時重復性略差。為了解決這個問題，研究人員又開發了很多種水溶性的四氮唑鹽類：如 XTT 、 CCK-8 （ WST-8 ）等。

Ⅳ 微生物計數方法有哪些我想知道詳細的操作步驟

微生物的顯微直接計數法

一、實驗目的
了解血球計數板的構造、計數原理和計數方法，掌握顯微鏡下直接計數的技能。
二、實驗原理
測定微生物細胞數量的方法很多，通常採用的有顯微直接計數法和平板計數法。
顯微計數法適用於各種含單細胞菌體的純培養懸浮液，如有雜菌或雜質，常不易分辨。菌體較大的酵母菌或黴菌孢子可採用血球計數板，一般細菌則採用彼得羅夫·霍澤（Petrof Hausser）細菌計數板。兩種計數板的原理和部件相同，只是細菌計數板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計數板較厚，不能使用油鏡，計數板下部的細菌不易看清。
血球計數板是一塊特製的厚型載玻片，載玻片上有4條槽而構成3個平台。中間的平台較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各有一個計數區（圖21-1），計數區的刻度有兩種：一種是計數區分為16個大方格（大方格用三線隔開），而每個大方格又分成25個小方格；另一種是一個計數區分成25個大方格（大方格之間用雙線分開），而每個大方格又分成16個小方格。但是不管計數區是哪一種構造，它們都有一個共同特點，即計數區都由400個小方格組成。
計數區邊長為1mm，則計數區的面積為l mm2，每個小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片後，計數區的高度為0.1mm，所以每個計數區的體積為0.1mm3，每個小方格的體積為1/4000mm3。
使用血球計數板計數時，先要測定每個小方格中微生物的數量，再換算成每毫升菌液（或每克樣品）中微生物細胞的數量。
已知：1mm3體積=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3
所以：1mm3體積應含有小方格數為1000mm3/1/4000mm3=4×106個小方格，即系數K=4×106 。
因此：每ml菌懸液中含有細胞數= 每個小格中細胞平均數（N）×系數（K）×菌液稀釋倍數（d）
三、實驗器材
1．活材料：釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面或培養液。
2．器材：顯微鏡、血球計數板、蓋玻片（22mm×22mm）、吸水紙、計數器、滴管、擦鏡紙。
四、實驗方法
1．視待測菌懸液濃度，加無菌水適當稀釋（斜面一般稀釋到10-2），以每小格的菌數可數為度。
2．取潔凈的血球計數板一塊，在計數區上蓋上一塊蓋玻片。
3．將酵母菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計數板中間平台兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數區，勿使氣泡產生，並用吸水紙吸去溝槽中流出的多餘菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數區上，不要使計數區兩邊平台沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片後，造成計數區深度的升高。然後加蓋蓋玻片（勿使產生氣泡）。4．靜置片刻，將血球計數板置載物台上夾穩，先在低倍鏡下找到計數區後，再轉換高倍鏡觀察並計數。由於生活細胞的折光率和水的折光率相近，觀察時應減弱光照的強度。
5．計數時若計數區是由16個大方格組成，按對角線方位，數左上、左下、右上、右下的4個大方格（即100小格）的菌數。如果是25個大方格組成的計數區，除數上述四個大方格外，還需數中央l個大方格的菌數（即80個小格）。如菌體位於大方格的雙線上，計數時則數上線不數下線，數左線不數右線，以減少誤差。
6．對於出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數2—3次（每次數值不應相差過大，否則應重新操作），求出每一個小格中細胞平均數（N），按公式計算出每ml（g）菌懸液所含酵母菌細胞數量。
7．測數完畢，取下蓋玻片，用水將血球計數板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網格刻度。洗凈後自行晾乾或用吹風機吹乾，放入盒內保存。
五、實驗作業：
將實驗結果填入下表中：
計數次數 每個大方格菌數 稀 釋
倍 數 試管斜面中的總菌數 平均值
1 2 3 4 5
第一次
第二次

Ⅳ 微生物細胞生長的測定方法

微生物生長的測定方法有多種，根據研究對象或目的選擇。(一)微生物細胞數目的檢測方法1．總細胞計數法 顯微鏡直接記數法和比濁法(1)血球計數板法 血球汁數板中央有一個體積一定的計數室( 0.1mm3)。將菌懸液或孢子懸液在顯微鏡下計數，然後再按一定公式計算出細菌總數。 (2)塗片計數法 將一定體積(0.1ml)的樣品，均勻地塗在載片的一定面積內(1cm2)。在顯微鏡下計算細胞數量，推算1cm2所含細胞數目。（3）比濁法：菌體細胞培養液混濁，在一定范圍內，菌體數量與渾濁成正比，故可通過分光光度計或比色計求出渾濁度，通過與標准曲線對比，求出樣品中菌液濃度，算出個體數。特點：所得結果包括死菌和活菌。2. 活菌計數法（平板菌落記數法）：是通過測定樣品在培養基上形成的菌落數來間接確定其活菌數的方法．故又稱平板計數法。特點：計算的結果是活菌落。注意：樣品稀釋度。一個活細胞形成一個菌落。（1）塗布平板法 用滅菌的塗布器將一定體積(不大於0.1ml)的適當稀釋度的菌液塗布在瓊脂培養基的表面，然後保溫培養有到菌落出現，記錄菌落的數目並換算成每毫升試樣中的活細胞數量。（2）倒平板法 將樣品稀釋到一定濃度，取一定體積(0.1—1ml)倒入冷卻至45℃的固體培養基混合，製成平板，培養後，出現菌落，由菌落數推算出的菌總數。3 濾膜過濾法：樣品同過微孔濾膜後，細菌收集在濾膜上，然後將濾膜放在培養基中培養，通過菌落計數求出樣品活菌落。 (二)微生物生長量和生理指標的測定方法測定微生物生長量及相關的生理指標，常用以下方法：1．濕重法：將單位體積微生物培養液離心，收集沉澱物，然後再稱重。2．乾重法：將離心得到的細胞沉澱物，置於100---105℃的烘箱中乾燥過夜除去水分，然後再稱重。特點：適合與菌體濃度高的樣品。表示菌體生長量。3、測定細胞內菌種化學成分：方法難，操做困難，但較准確。細胞內菌種化學成分多少（∝），反映群體中菌體數量的多少。（1） 測定含氮量：N在細胞內穩定，測定總N量，粗蛋白=N*6.25g。（2） 測定DNA：微生物細胞DNA含量穩定，採用熒光指示劑或染色劑與菌體DNA作用熒光比色或分光光度法測得DNA的含量。（3） 其他生理指標：如測定碳、磷、RNA、ATP、DAP(二氨基庚二酸)的含量等。 (二)絲狀微生物菌絲長度的測定方法 對於絲狀微生物。特別是絲狀真菌，通常是通過測定菌絲的長度變化來反映它們的生長速率。方法有： 1．培養基表面菌體生長速率測定法 主要測定一定時間內在瓊脂培養基表面的菌落直徑的增加值。 2．培養料中菌體速率測定法主要測定一定時間內在固體培養料中菌絲體向前延伸的距離。如：栽培食用菌的培養料。 3．單個菌絲頂端生長速率測定法 在顯微鏡下藉助目鏡測微尺測定在一定時間內單個菌絲的伸長長度。

Ⅵ 如何檢測細胞的增殖活性，簡要描述實驗步驟

細胞增殖檢測方法 細胞增殖檢測通常是檢測分裂中的細胞數量或者細胞群體發生的變化。目前細胞增殖檢測主要分為五類：DNA合成檢測、代謝活性檢測、細胞數量檢測、細胞增殖相關抗原檢測和ATP 濃度檢測。在這些方法中作何選擇，主要取決於所研究的細胞類型和研究方案。 1. DNA合成檢測 這是目前實驗室中檢測細胞增殖最准確可靠的方式。該法是將放射性標記的3H-胸腺嘧啶與細胞一同孵育，這樣新增殖細胞的DNA中就會摻入放射性標記，經洗脫後可用閃爍計數器檢測。該方法耗時長，而且有個明顯的弊端就，即使用和處理放射性物質既麻煩又不安全。不過，可以使用5-溴-2-脫氧尿苷BrdU來進行類似實驗，因為BrdU也同樣可以摻入到新合成的DNA中。但這樣就需要進行額外的實驗步驟，先孵育特異性BrdU單抗和帶標記的二抗，然後再進行比色法、化學發光檢測或熒光信號檢測等步驟。該方法的優點就是不再需要放射性物質。BrdU標記很適合免疫組化IHC、免疫細胞化學IC、細胞內ELISA、流式細胞分析和高通量篩選。 2. 代謝活性檢測 檢測細胞群體的代謝活性也可以反映細胞增殖的情況。在細胞增殖過程中脫氫酶的活性會增加，因此其底物四唑鹽或Alamar Blue在代謝活躍的細胞環境中會逐漸減少，形成能夠改變培養基顏色的甲臢染料。可以通過低配置或高配置的分光光度計和酶標儀來讀取含染料培養基的吸光度，從而衡量細胞的代謝活性，檢測細胞增殖的情況。 四種最常見的四唑鹽是：MTT、XTT、MTS和WST1。MTT在標準的細胞培養基中是不溶的，而且其生成的甲臢晶體需要溶解在DMSO或者異丙醇中。因此，MTT主要作為終點檢測方法。其他三種鹽與Alamar Blue一樣，都是可溶且無毒。它們可以作為連續監控手段來跟蹤細胞增殖的動態改變。其中XTT的效率較低，需要添加額外的因子；WST1更靈敏有效，與其他鹽相比能夠更快顯色；Alamar Blue的靈敏度也很高，只要微孔板的孔中有100個細胞就能夠檢測到。四唑鹽和Alamar Blue氧化還原染料能夠用於多種儀器和高通量研究，非常方便。它們適用的檢測儀器包括：標准分光光度計、熒光分光光度計和酶標儀等。

Ⅶ 檢測細胞增殖的方法有哪些

一、MTT比色：
MTT比色是一種目前被廣泛採用的檢測細胞生長和存活的方法，其原理是外源性MTT（四唑鹽）可被活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原成難溶的藍紫色結晶物並沉澱在細胞中，而死細胞無此功能，DMSO（二甲基亞碸）能溶解細胞中的紫色結晶物，用酶聯檢測儀在490nm波長處檢測其光密度值，可間接反映活細胞數量。在一定范圍內，MTT結晶物形成的量與細胞數成正比，此方法已廣泛用於檢測細胞活力、觀察細胞生長等方面，具有靈敏度高、重復性好、操作簡便、經濟、快速、易自動化、無放射性污染等特點，與細胞計數有良好的相關性。
二、rdU標記法
1．細胞以1.5×105/ml細胞數接種於直徑35ml培養皿中（內放置一蓋玻片），培養1天，用含0.4％ FCS培養液同步化3天，使絕大多數細胞處於G0期。
2．終止細胞培養前，加入BrdU（終濃度為30μg/L），37℃，孵育40min。
3．棄培養液，玻片用PBS洗滌3次。
4．甲醇/醋酸固定10min。
5．經固定的玻片空氣乾燥，0.3％H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。
6．5％正常兔血清封閉。
7．甲醯胺100℃，5min變性核酸。
8．冰浴冷卻後PBS洗滌，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃度1：50），陰性對照加PBS或血清。
9．按ABC法進行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數，計算標記指數（LI）。
三、結晶紫法
1．體外細胞培養結束後，去培養液，加入11％的戊二醛固定，置於振盪器上搖20min。
2．固定細胞用去離子水洗滌至戊二醛液洗凈。
3．置空氣或烘箱37℃徹底乾燥。
4．加入0.1％的結晶紫液對細胞染色，振搖30min。
5．用蒸餾水洗滌，至多餘的結晶紫液沖洗干凈。
6．置空氣或37℃烘箱中徹底乾燥。
7．加入10％的乙酸對細胞吸收的結晶紫進行提取。
8．1h後在酶標儀上測定光吸收度，波長595nm。
四、酸性磷酸酶法
1．96孔細胞培養板中培養細胞，去培養液。用0.01mol/L PBS洗滌1次（如為懸浮細胞則用離心洗滌）。
2．去洗滌液後加入磷酸酶底物100μl/孔。
3．37℃，孵育1～4h。
4．加入0.1mol/L氫氧化鈉10μl/孔。
5．在多孔酶標儀上405nm處測光吸收度，將細胞培養板其中不含細胞，同樣處理過的一孔作為空白對照，所測的每孔光吸收度可間接反應每孔中的細胞數。如在同樣條件下作一細胞數的系列標准對照，以細胞數為X軸，光吸收度為Y軸，可作直線回歸，可推算出每孔中的細胞。

Ⅷ 細胞計數的方法

你好，很高興為你解答：
顯微鏡直接計數法：
顯微鏡直接計數法是將小量待測樣品的懸浮液置於一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上（又稱計菌器），於顯微鏡下直接計數的一種簡便、快速、直觀的方法。細胞(英文名:cell)並沒有統一的定義，比較普遍的提法是:細胞是生物體基本的結構和功能單位。已知除病毒之外的所有生物均由細胞所組成，但病毒生命活動也必須在細胞中才能體現。

Ⅸ 怎樣檢測細胞的生長，存活及增殖

BrdU標記法
1．細胞以1.5×105/ml細胞數接種於直徑35ml培養皿中（內放置一蓋玻片），培養1天，用含0.4％ FCS培養液同步化3天，使絕大多數細胞處於G0期。
2．終止細胞培養前，加入BrdU（終濃度為30μg/L），37℃，孵育40min。
3．棄培養液，玻片用PBS洗滌3次。
4．甲醇/醋酸固定10min。
5．經固定的玻片空氣乾燥，0.3％H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。
6．5％正常兔血清封閉。
7．甲醯胺100℃，5min變性核酸。
8．冰浴冷卻後PBS洗滌，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃度1：50），陰性對照加PBS或血清。
9．按ABC法進行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數，計算標記指數（LI）。
結晶紫法
1．體外細胞培養結束後，去培養液，加入11％的戊二醛固定，置於振盪器上搖20min。
2．固定細胞用去離子水洗滌至戊二醛液洗凈。
3．置空氣或烘箱37℃徹底乾燥。
4．加入0.1％的結晶紫液對細胞染色，振搖30min。
5．用蒸餾水洗滌，至多餘的結晶紫液沖洗干凈。
6．置空氣或37℃烘箱中徹底乾燥。
7．加入10％的乙酸對細胞吸收的結晶紫進行提取。
8．1h後在酶標儀上測定光吸收度，波長595nm。
酸性磷酸酶法
1．96孔細胞培養板中培養細胞，去培養液。用0.01mol/L PBS洗滌1次（如為懸浮細胞則用離心洗滌）。
2．去洗滌液後加入磷酸酶底物100μl/孔。
3．37℃，孵育1～4h。
4．加入0.1mol/L氫氧化鈉10μl/孔。
5．在多孔酶標儀上405nm處測光吸收度，將細胞培養板其中不含細胞，同樣處理過的一孔作為空白對照，所測的每孔光吸收度可間接反應每孔中的細胞數。如在同樣條件下作一細胞數的系列標准對照，以細胞數為X軸，光吸收度為Y軸，可作直線回歸，可推算出每孔中的細胞。

Ⅹ 如何用流式檢測細胞增殖情況

一般可以用tracing
dye.
也就是一些熒光染料，被細胞攝取後不會被排出。這樣，先用染料染色。經過數個細胞周期後，上機檢測。如果細胞沒有分裂增殖，那細胞的熒光強度最高。每分裂增殖一次，熒光強度衰減一半（分到兩個子細胞了）。以此類推。
增殖越多的細胞，會出現幾個逐漸減半熒光強度的峰值。峰值和熒光強度減弱的越多，就說明增殖的越多。