金黃色葡萄球菌的染色檢測方法

① 金黃色葡萄球菌的檢驗過程

1、樣品制備：

稱取25g樣品至盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯中，固體樣品研磨或置均質器中做成1:10的樣品混懸液。若供計數檢驗，可按十進制遞增稀釋法將樣品勻液再進行適當稀釋。

2、增菌與分離培養：

將上述樣品勻液於36℃±1℃培養18h～24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長。將上述培養物，分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培養18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培養24h～48h。

金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直徑為2mm～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈見圖[4]。用接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣的硬度，偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落；但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或乾燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產生的黑色較淡些，外觀可能粗糙並乾燥。在血平板上，形成菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色（有時為白色），菌落周圍可見完全透明溶血圈見圖[5]。挑取上述菌落進行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗。

向左轉|向右轉

② 金黃色葡萄球菌的球菌檢驗

第一，金黃色葡萄球菌的檢驗
樣品處理：無菌取25g或25mL食品樣品，放入225mL滅菌生理鹽水中均質，製成10-1稀釋液。
增菌培養：將10-1稀釋液接入7.5%NaCl肉湯或胰蛋白腖肉湯中，37°C培養24小時。
分離培養：將上述稀釋液或培養液分別劃線血平板和Baird-Parker平板，置37°C培養24~48小時。金黃色葡萄球菌在血平板上呈金黃或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周圍有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落為圓形，直徑2~3mm，顏色灰或黑色，周圍有一渾濁帶。
染色觀察：從平板上挑取可疑性菌落進行革蘭氏染色，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性，顯微鏡下呈葡萄狀排列無芽胞、莢膜，直徑0.5~1μm。
血漿凝固酶試驗：吸取0.5mL兔血漿與0.5mL金黃色葡萄球菌試液浸液肉湯24小時培養物充分混勻，置36±1°C培養，每隔半小時觀察一次，連續觀察6小時，出現凝固，即將小試管傾斜或倒置時，內容物不流動，判為陽性。同時做陰陽性對照。耐熱核酸酶試驗：將24小時肉湯培養物沸水浴處理15min，用接種環劃線刺種於甲苯胺蘭-DNA平板，36±1°C培養24小時，在刺種線周圍出現淡粉色者為陽性。本試驗金黃色葡萄球菌為陽性。
第二，金黃色葡萄球菌腸毒素檢測
金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測主要有動物試驗、血清學試驗、免疫熒光試驗及酶聯免疫吸附等方法，在此就不一一贅述。

③ 金黃色葡萄球菌的檢測方法

1、培養特性及形態特徵①培養特性在37℃條件下，需氧與厭氧培養的血液營養瓊脂平板均長出光滑、濕潤、隆起，約1mm大小的金黃色菌落，並且有β溶血現象。②鏡檢結果顯微鏡下觀察該菌為革蘭氏陽性球菌，排列成葡萄串狀，也有個別2個或3個球菌相連。根據菌落形態、鏡檢結果懷疑該菌為葡萄球菌。2、菌落計數報告將直接計數法試驗中的3個平板中疑似黑色葡萄球菌的金黃色菌落數相加，乘以血漿凝固酶試驗陽性數，除以5，在乘以稀釋倍數，即為每克樣品中金黃色葡萄球菌數量。3、動物感染試驗只注生理鹽水的小白鼠沒有任何變化：接種分離菌的小白鼠在9h內死亡。將死亡的小白鼠剖檢採集病料，進行細菌分離和生化試驗，得到與原分離菌。
「金球菌」列為「極重要質量項目」
金黃色葡萄球菌因思念、三全、灣仔碼頭事件而引發標准爭議，在2011年12月21日實施的速凍食品新國標中，金黃色葡萄球菌從原來「不得檢出」變為「限量檢出」，但這一檢測標準的改變並不代表可以忽略金黃色葡萄球菌的危害性。
在市質監局徵集意見而公示的抽檢項目中查詢到，對包括速凍水餃、湯圓、包子、花捲、饅頭、南瓜餅、八寶飯等在內的速凍米麵食品，仍然計劃把金黃色葡萄球菌列入A類檢驗項目，並標注為「極重要質量項目」，同時速凍米麵食品的沙門氏菌也是A類檢驗。
產品檢出「金球菌」屬嚴重不合格
市質監局介紹，速凍面米抽檢中，金黃色葡萄球菌也是A類檢驗項目。如果食品檢驗項目中任一項或一項以上不符合規定的要求，判定為不合格；當產品存在A類項目不合格時，屬於嚴重不合格；僅有B類項目不合格，屬於一般不合格。
同時，在嬰幼兒奶粉、蛋製品中，三聚氰胺、蘇丹紅也是同樣的A類。為避免一些肉禽食品可能含瘦肉精，此次在肉禽罐頭食品中，還有專門針對瘦肉精的檢測。
速凍食品「金球菌」可限量檢出
中國現行《速凍預包裝面米食品衛生標准》（GB19295－2003）規定金黃色葡萄球菌等致病菌不得檢出。
而衛生部於2012年12月21日實施的《速凍面米製品食品安全國家標准》，將金黃色葡萄球菌檢測由定性轉向定量，規定每批產品抽檢5個樣品中，至多隻能有1個樣品每克生製品中檢出的金黃色葡萄球菌含量在1000至10000個之間。

④ 金黃色葡萄球菌的塗片染色怎麼做

金黃色葡萄球菌的簡單染色
1．塗片：在潔凈的載玻片中央滴1 小滴無菌水，用無菌接種環（火焰滅菌）挑取少量大腸桿菌或金黃色葡萄球菌分別與無菌水充分混合，塗成極薄的菌膜；（注意：菌量不宜過多，否則菌體堆積成塊不易看清個體形態！）
2．固定：手執玻片一端，將有菌膜的一面朝上，通過微火3-4 次，使水分蒸干；（注意：可用手背接觸塗片反面，以不燙手為宜。否則過分烘烤會導致菌體變形！）
3．染色：將玻片置於玻片架上，待其冷卻後，在塗片部位滴加適量（蓋滿菌膜）的草酸銨結晶紫染液，染色1 分鍾；
4．水洗：傾去染液，用普通蒸餾水自玻片一端輕輕沖洗，至流下的水中無染液的顏色為止。
5．乾燥：用吸水紙吸去多餘水分；（注意：勿擦去菌體！）

6.觀察。

⑤ 金黃色葡萄球菌檢測AOAC方法

金黃色葡萄球菌食物中毒的實驗室診斷常通過檢測剩餘食品，根據金黃色葡萄球菌數量達到105cfu/g以上，或者檢出腸毒素來判定。先達基因專注於現場核酸檢測，開發了致病微生物，水產病害，支原體污染等領域現場檢測產品方案。1、常規細菌培養法目前，從食品中檢測金黃色葡萄球菌的常規細菌培養方法(
GB
4789.10-2010《食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗》)
，可對食品中金黃色葡萄球菌進行定性和定量檢驗，該方法設備簡單、成本低;
但檢驗時間較長(
3
～
5d)
，操作繁瑣，且靈敏度較低;
不宜應對突發性公共衛生和食物中毒事件中篩檢出金黃色葡萄球菌球菌的污染，

⑥ 金黃色葡萄球菌的檢驗

1、樣品制備：
稱取25g樣品至盛有225mL 7.5%氯化鈉肉湯中，固體樣品研磨或置均質器中做成1:10的樣品混懸液。若供計數檢驗，可按十進制遞增稀釋法將樣品勻液再進行適當稀釋。
2、 增菌與分離培養：
將上述樣品勻液於36℃±1℃培養18h～24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長。將上述培養物，分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板，血平板 36℃±1℃培養18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培養24h～48h。
金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直徑為2mm～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈見圖[4]。用接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣的硬度，偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落；但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或乾燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產生的黑色較淡些，外觀可能粗糙並乾燥。在血平板上，形成菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色（有時為白色），菌落周圍可見完全透明溶血圈見圖[5]。挑取上述菌落進行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗。

⑦ 金黃色葡萄球菌的鑒別要點有哪些

1、形態染色鑒別：

革蘭陽性球菌，葡萄串狀排列。

2、菌落特徵鑒別：

在血平板上菌落中等大小、光滑濕潤、菌落呈金黃色、菌落周圍有透明溶血環。

3、鑒定試驗鑒別：

甘露醇發酵試驗陽性，血漿凝固酶試驗陽性，觸酶陽性球菌，耐熱核酸試驗酶陽性，新生黴素試驗敏感。

(7)金黃色葡萄球菌的染色檢測方法擴展閱讀：

金黃色葡萄球菌的檢驗規定：

根據 GB4789.10-2016《食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗》第一法定性檢驗和第二法平板計數法進行實驗操作。

其中定性檢驗的主要步驟有檢樣處理、增菌、分離、鏡檢、腸毒素檢驗等，定量實驗主要步驟有：檢樣處理、接種、培養、計數和確認試驗等，常規的計數培養方法時間需要48 h左右。

衛生部於2012年12月21日實施的《速凍面米製品食品安全國家標准》，將金黃色葡萄球菌檢測由定性轉向定量，規定每批產品抽檢5個樣品中，至多隻能有1個樣品每克生製品中檢出的金黃色葡萄球菌含量在1000至10000個之間。

⑧ 求金黃色葡萄球菌檢驗

金黃色葡萄球菌檢驗
1
目的
1.1
了解金黃色葡萄球菌檢驗原理
1.2
掌握金黃色葡萄球菌鑒定要點和檢驗方法
2
原理
葡萄球菌在自然界分布極廣，空氣、土壤、水、飼料、食品(剩飯、糕點、牛奶、肉品等)以及人和動物的體表粘膜等處均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。金黃色葡萄球菌是葡萄球菌屬一個種。可引起皮膚組織炎症，還能產生腸毒素。如果在食品中大量生長繁殖，產生毒素，人誤食了含有毒素的食品，就會發生食物中毒，故食品中存在金黃色葡萄球菌對人的健康是一種潛在危險，檢查食品中金黃色葡萄球菌及數量具有實際意義。
金黃色葡萄球菌能產生凝固酶，使血漿凝固，多數致病菌株能產生溶血毒素，使血瓊脂平板菌落周圍出現溶血環，在試管中出現溶血反應。這些是鑒定致病性金黃色葡萄球菌的重要指標。
3
材料
3.1
樣品
奶、肉、蛋、魚製品和飲料等。
3.2
菌種
金黃色葡萄球菌（Staphylococcus
aureus）
藤黃八疊球菌（Sarcina
lutea）
3.3
培養基與試劑
7.5%氯化鈉肉湯、血瓊脂平板、Baird-parker氏培養基、無菌鹽水、兔血漿、革蘭氏染色液。
3.4
其它
顯微鏡、溫箱、離心機、無菌吸管、無菌試管、
無菌平皿、均質器、
載玻片、L型塗布棒、酒精燈、接種環等。
4
流程
5
步驟
5.1
一般培養
稱取25g固體樣品，加入225mL無菌生理鹽水，製成混懸液(液體樣品可不稀釋)。吸取5mL上述混懸液，接種於7.5%氯化鈉肉湯或胰酪腖大豆肉湯50mL培養基內，同時挑取混懸液或液體樣品直接在血平板和Baird-Parker平板劃線分離。同時將對照菌種在上述兩種平板上作劃線分離接種。置36±1℃溫箱培養24h。
5.2
分純培養
將上述血平板和Baird-Parker平板上挑取可疑菌落,先觀察對照的菌落特徵,再觀察被檢樣品的菌落.,並挑取可疑菌落在血平板上進行分離純化。若無菌落生長，可用也增菌培養物在上上述平板上劃線分離，在36±1℃溫箱培養24h後再分離純化，挑取可疑菌落及對照菌種進行革蘭氏染色及血漿凝固酶試驗。
5.3
形態特徵
本菌為革蘭氏陽性球菌，排列是葡萄狀，無芽孢，無莢膜，致病性葡萄球菌菌體較小，直徑約為0.5～1um。
在肉湯中呈混濁生長，在胰酪腖大豆肉湯內有時液體澄清，菌量多時呈混濁生長，血平板菌落呈金黃色，也有時呈白色，大而突起、圓形、不透明、表面光滑，周圍有溶血圈。在Baird-Parker平板上為圓形、光滑凸起、濕潤、直徑2～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度。偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落；但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或乾燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產生的黑色較淡些，外觀可能粗糙並乾燥。
5.5血漿凝固酶試驗
挑取上述可疑菌落菌種於肉浸液肉湯，同時將金黃色葡萄球菌和藤黃八疊球菌分別接種於肉浸液肉湯，在36±1℃溫箱培養24h後進行血漿凝固酶試驗。
吸取1∶4新鮮兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入培養24h的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯培養基0.5mL，振盪搖勻，放在36℃溫箱或水浴內，每0.5h觀察一次，觀察6h，如呈現凝固，即將試管傾斜或倒置時，呈現凝塊者，被認為是陽性結果。同時以已知陽性和陰性葡萄球菌株及肉湯作為對照。
6
結果
根據形態染色，血平板情況以及血漿凝固酶試驗，判別檢樣有否金黃色葡萄球菌。
7
思考
7.1
金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上的菌落特徵如何？為什麼？
7.2
鑒定致病性金黃色葡萄球菌的重要指標是什麼？

⑨ 金黃色葡萄球菌怎麼鑒別，用什麼樣的培養基

金黃色葡萄球菌檢測步驟為：增菌、劃平板、血漿凝固酶試驗等。
平板通常為BP和血平板，BP上菌落為黑色菌落有渾濁帶和透明環，血平板上為灰白色菌落有溶血環。
血漿凝固酶實驗為陽性。

⑩ 細菌有哪些染色方法

1
革蘭氏染色法
是最常用的鑒別染色法之一。此法起始1881年，染色步驟是先用結晶紫或龍膽紫染液加於已固定好的標本上使之著色，其後加碘液作媒染劑，再用酒精脫色，最後用復紅或沙黃復染。革蘭氏染色的結果與培養基成分、培養條件及操作技術等有密切關系。如塗片太厚影響酒精脫色，革蘭氏陰性菌則可染成革蘭氏陽性菌。脫色時若酒精作用時間太長,
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,革蘭氏陽性菌又會染成革蘭氏陰性菌。在缺乏鎂鹽的培養基中，革蘭氏陽性菌可變成革蘭氏陰性菌。菌齡也能影響染色的結果，這與生長過程中核酸含量的改變有關。革蘭氏染色法的原理還不十分清楚，有化學學說、等電點學說、滲透性學法，目前最通常的解釋是革蘭氏陽性菌在95%酒精中因含粘肽多而導致細胞壁脫水，通透性減低，使在細菌細胞內著色的染料─碘復合物不易透出細胞壁，所以保留了紫色；革蘭氏陰性菌含粘肽少，其細胞壁在95%酒精作用下通透性變化不大，酒精容易進入菌體內溶解染料─碘復合物而透出，失去紫色後被復染成為紅色。
2
抗酸染色法
有些細菌，如結核桿菌，不般不易著色，一旦染上色後又不易被鹽酸酒精脫色，稱為抗酸菌。主要步驟是將細菌塗片、乾燥、固定後，以石炭酸復紅染液加溫進行染色，然後用含酸的酒精脫色，最後用美藍復染。一般細菌以及標本中的物質都被脫色，抗酸菌則不能，仍為紅色。在藍色背景上呈紅色的細菌即為抗酸菌。
3
細菌特殊結構的染色法
細菌的特殊結構，如鞭毛、莢膜、細胞壁、芽孢及異染顆粒等，用普通染色法不易著色，故需用特殊染色法。
4
負染色法
是指背景著色而細菌本身不著色。常用墨汁負染色法配合單染色法（如美藍）檢查細菌的莢膜，背景呈黑色，菌體染成藍色,
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,莢膜不著色，包繞在菌體周圍，成為一層透明的空圈。
5
熒光染色法
用熒光染料，如金胺、吖啶橙等進行染色。細菌用熒光染料著色後在熒光顯微鏡下檢查，可在黑的背景中觀察到細菌發出明亮的熒光。用熒光染色法檢查細菌，有加快檢查速度和提高陽性率等優點。
求採納