常用於肽鏈碳端分析的方法有哪些

『壹』 蛋白質由n端走向c端是什麼意思

蛋白質由n端走向c端是指蛋白質生物合成過程中的氨基酸排列走向。

N端是「氮返正」，是—NH₂，讀氨基；

氨基（Amino）是有機化學中的基本鹼基，所有含有氨基的有機物都有一定鹼的特性，由一個氮原子和兩個氫原子組成。

C端是「碳」，是—COOH，讀羧基。

羧基（carboxyl）是有機化學中的基本化學基，所有的含有羧基的有機酸物質都可以叫羧酸，由一個碳原子、兩個氧原子漏伏悔和一個氫原子組成，化學式-COOH。

多肽合成是一個固相合成順序一般從N端（氨基端）向 C端（羧基端）合成。過去的多肽合成是在溶液中進行的稱為液相合成法。

(1)常用於肽鏈碳端分析的方法有哪些擴展閱讀：

多肽合成技術

1963年，Merrifield首次提出了固相多肽合成方法(SPPS)，由於其合成方便，迅速，成為多肽合成的首選方法，而且帶來了多肽有機合成上的一廳頃次革命，並成為了一支獨立的學科——固相有機合成，固相合成的發明同時促進了肽合成的自動化。世界上第一台真正意義上的多肽合成儀出現在1980年代初期。

液相合成

基於將單個N-α保護氨基酸反復加到生長的氨基成份上，合成一步步地進行， 通常從合成鏈的C端氨基酸開始，接著的單個氨基酸的連接通過用DCC，混合炭酐， 或N-carboxy酐方法實現。

Carbodiimide方法包括用DCC做連接劑連接N-和C-保護氨基酸。重要的是，這種連接試劑促接N保護氨基酸自己炭基和C保護氨基酸自由氨基間的縮水，形成肽鏈。 然而，此方法因其導致消旋的副反應，或在強鹼存在時形成5(4H)-oxaylones和N-acylurea而受到影響。

慶幸地是， 這些副反應能最小化，但是還不能完全消除。方法是加入象HoSu或HoBT這樣的連接催化劑， 此外，此方法也可用於合成N保護氨基酸的活性酯衍生物。依次產生的活性酯將自發與任何別的C保護氨基酸或肽反應形成新的肽

參考資料來源：網路-多肽合成

『貳』 測定多肽鏈C末端的氨基酸試劑

1、氫硼化鋰還原c端為氨基醇，肽鏈水解後層析分析
2、羧肽酶作用c端
3、肼解法：（肼試劑）肼解後，一條肽鏈只有一個c端氨基酸游離下來。將游離下來的c端氨基酸與DNFB（二硝基氟苯）反應生成DNP—氨基酸（用以層析分析），剩餘肼化肽鏈部分與苯甲醛反應生成不溶於水的二亞苄衍生物。

『叄』 肽鏈的末端可以用那四種方法測定,而和什麼法則是測定C末端氨基酸最常用的方法

常用於N－末端的測定方法：1. DNFP法（桑格反應） 2. PITC法（艾德曼反應） 3. 氨肽酶法（專一性的從氨基末端將肽鍵切斷）
常用於C－末端測定方法： 1. 肼解法 2. 還原法（硼氫化鋰） 3. 羧肽酶法（專一性的從羧基末端將肽鍵切斷）
肼解法是測定C末端氨基酸最常用的方法

『肆』 常用於蛋白質多肽鏈N端.C端測定的方法有幾種

(1)N-末端測定
A.二硝基氟苯法(FDNB,DNFB)：1945年Sanger提出此方法,是他的重要貢獻之一.
DNP-氨基酸用有機溶劑抽提遲擾後碼困旦,通過層析位置可鑒定它是何種氨基酸.Sanger用此方法測定了胰島素的N末端分別為甘氨酸及苯丙氨酸.
B.氰酸鹽法：1963年Stank及Smyth介紹了一種測定N末端的新方法,步驟如下：
由於乙內醯脲氨基酸不帶電荷,因此可用離子交換層析法將它與游離氨基酸分開,分離所得的乙內醯脲氨基酸再被鹽酸水解,重新生成游離的氨基酸,鑒別此氨基酸即可了解N-末端是何種氨基酸.
C.二甲基氨基萘磺醯氯法：1956年Hartley等報告了一種測定N-末端的靈敏方法,採用1-二甲基氨基萘-5-磺醯氯,簡稱丹磺醯氯.它與游離氨基末端作用,方法類似於Sanger的DNFB法,產物是磺醯胺衍生物.
丹尺橋磺醯鏈酸具有強烈的黃色熒光.此法優點為靈敏性較高(比FDNB法提高100倍,樣品量小於1毫微克分子)及丹磺醯氨基酸穩定性較高(對酸水解穩定性較DNP氨基酸高),可用紙電泳或聚醯胺薄膜層析鑒定.
(2)C-末端分析
A.肼解法：這是測定C-末端最常用的方法.將多肽溶於無水肼中,100℃下進行反應,結果羧基末端氨基酸以游離氨基酸狀釋放,而其餘肽鏈部分與肼生成氨基酸肼.
這樣羧基末端氨基酸可以採用抽提或離子交換層析的方法將其分出而進行分析.如果羧基末端氨基酸側鏈是帶有醯胺如天冬醯胺和谷氨醯胺,則肼解時不能產生游離的羧基末端氨基酸.此外肼解時注意避免任何少量的水解,以免釋出的氨基酸混淆末端分析.
B.羧肽酶水解法：羧肽酶可以專一性地水解羧基末端氨基酸.根據酶解的專一性不同,可區分為羧肽酶A、B和C.應用羧肽酶測定末端時,需要事先進行酶的動力學實驗,以便選擇合適的酶濃度及反應時間,使釋放出的氨基酸主要是C末端氨基酸.

『伍』 蛋白質多肽鏈N端測定的方法及基本原理

1 多肽鏈的拆分。由多條多肽鏈組成的蛋白質分子，必須先進行拆分。幾條多肽鏈藉助非共價鍵連接在一起，稱為寡聚蛋白質，如，血紅蛋白為四聚體，烯醇化酶為二聚體；可用8mol/L尿素或6mol/L鹽酸胍處理，即可分開多肽鏈(亞基).
2 測定蛋白質分子中多肽鏈的數目。通過測定末端氨基酸殘基的摩爾數與蛋白質分子量之間的關系，即可確定多肽鏈的數目。
3 二硫鍵的斷裂。幾條多肽鏈通過二硫鍵交聯在一起，可在8mol/L尿素或6mol/L鹽酸胍存在下，用過量的-巰基乙醇處理，使二硫鍵還原為巰基，然後用烷基化試劑保護生成的巰基，以防止它重新被氧化。
二硫鍵的切割與保護（元素後數字為下標）
a 過甲酸〔performic acid〕 不可逆
－CH2SO3H
b、還原＋氧化 不可逆
[ 巰基乙醇，DTT ] ＋ 碘乙酸等
－S-CH2-COOH
c、亞硫酸分解〔Sulfitolysis〕 可逆
－R1-S-S-R2 ＋ HSO3-
R1-S- + R2-S-SOH3
可以通過加入鹽酸胍的方法解離多肽鏈之間的非共價力；應用過甲酸氧化法或巰基還原法拆分多肽鏈間的二硫鍵。
巰基（-SH）的保護4 測定每條多肽鏈的氨基酸組成，並計算出氨基酸成分的分子比（如右圖）
5 分析多肽鏈的N-末端和C-末端
多肽鏈端基氨基酸分為兩類：N-端氨基酸(amino-terminal)和C-端氨基酸(Carboxyl-terminal) 。在肽鏈氨基酸順序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。N末端分析法（Sanger法；Edman法；DNS-Cl；酶降解法），C末端分析法（肼解法；酶降解法；硼氫化鋰法）。
6 多肽鏈斷裂成多個肽段。可採用兩種或多種不同的斷裂方法將多肽樣品斷裂成兩套或多套肽段或肽碎片，並將其分離開來。
7 測定每個肽段的氨基酸順序
8 確定肽段在多肽鏈中的次序。
利用兩套或多套肽段的氨基酸順序彼此間的交錯重疊，拼湊出整條多肽鏈的氨基酸順序。
9 確定原多肽鏈中二硫鍵的位置
一般採用胃蛋白酶處理沒有斷開二硫鍵的多肽鏈，再利用雙向電泳技術分離出各個肽段，用過甲酸處理後，將可能含有二硫鍵的肽段進行組成及順序分析，然後同其它方法分析的肽段進行比較，確定二硫鍵的位置。

『陸』 對有機化合物的結構鑒定,除了紅外光譜外,常用的還有哪些方法

核磁共振

確定分子結構有化學方法與物理方法,
化學方法是利用有機物官能團的特徵反應,以確定該化合物所含官能團,還可以利用化學反應進行衍生化,通過確定衍生物的結構進一步推斷原分子的結構.化學方法比較麻煩、耗時、消耗樣品較多.
物理方法因所需樣品量少、速度快、准確,甚至可以確定分子的三維空間結構,而顯出較大的優越性,是化學方法所不能比擬的.
質譜分析：
質譜分析法是一種通過測量化學物質分子或分子碎片的質量進行分析的方法,所用的儀器稱為質譜儀,所得的譜圖稱為質譜圖.
紅外光譜：
在鑒定有機化合物結構的搜冊工作中,紅外光譜是一種重要的手段,它可以確定有機化合物中存在何種官能團,也可以用來推測物質的純度.分子中的原子總是處在不斷地振動中,包括伸縮振動與彎曲振動,這兩種振動的頻率正好位於紅外區.
核磁共振氫譜：
核磁共振譜學是一門發展極為迅速的科學.因為質量數為奇數的原子核,如1H、13C、15N、19F和31P的核自旋所產生的弱磁場,在強外磁場或漏談中可以對某個衫碰特定頻率的電磁波發生共振吸收,吸收頻率和吸收強度可以提供分子結構的重要信息,從而發展成為核磁共振譜學.

『柒』 請教：氨基酸序列的測定方法

有兩種方法，一是直接測序列法，常用Edman降解法，在弱鹼性條件下多肽連N端氨基酸（阿爾發）與PITC反應，標記為苯氨基硫代甲醯蛋白質。肽鏈中的第一個肽鍵變弱，在無水酸的存在下發發生降解，第一個氨基酸（AA1）經過分子重排成為PTH-AA1結合層析技術即可確定氨基酸的性質。C端氨基酸殘基分析，可用；羧基肽酶，肼解法；二是串聯質譜測定多肽鏈氨基酸測序。

氨基酸（amino acid）：含有氨基和羧基的一類有機化合物的通稱。生物功能大分子蛋白質的基本組成單位，是構成動物營養所需蛋白質的基本物質。是含有鹼性氨基和酸性羧基的有機化合物。氨基連在α-碳上的為α-氨基酸。組成蛋白質的氨基酸均為α-氨基酸。

『捌』 常用於蛋白質多肽鏈N端.C端測定的方法有幾種

N-末端分析1、二硝基氟苯法蔽肆（FDNB法）2、二甲基宏銷轎氨基萘磺醯氯法（DNS-Cl法斗旁）3、異硫氰酸笨酯法（Edman法）C-末端分析1、肼解法2、還原法3、羧肽酶法

『玖』 常用於蛋白質多肽鏈N端.C端測定的方法有幾種

(1)N-末端測定 A.二硝基氟苯(FDNBDNFB)：1945Sanger提重要貢獻DNP-氨基酸用機溶劑抽提通層析位置鑒定何種氨基酸Sanger用測定胰島素N末端別甘氨酸及苯丙氨酸B.氰酸鹽：1963Stank及Smyth介紹種測定N末端新步驟：由於乙內醯脲氨基酸帶電荷用離交換層析與游離氨基酸離所乙內醯脲氨基酸再鹽酸水解重新游離氨基酸鑒別氨基酸即解N-末端何種氨基酸C.二甲基氨基萘磺醯氯：1956Hartley等報告種測定N-末端靈敏採用1-二甲基氨基萘-5-磺醯氯簡稱丹磺醯氯與游離氨基末端作用類似於SangerDNFB產物磺醯胺衍物丹磺醯鏈酸具強烈黃色熒光優點靈敏性較高(比FDNB提高100倍品量於1毫微克)及丹磺醯氨基酸穩定性較高(酸水解穩定性較DNP氨基酸高)用紙電泳或聚醯胺薄膜層析鑒定(2)C-末端析A.肼解：測定C-末端用肽溶於水肼100℃進行反應結羧基末端氨基酸游離氨基酸狀釋放其餘肽鏈部與肼氨基酸肼羧基末端氨基酸採用抽提或離交換層析其進行析羧基末端氨基酸側鏈帶醯胺冬醯胺谷氨醯胺則肼解能產游離羧基末端氨基酸外肼解注意避免任何少量水解免釋氨基酸混淆末端析B.羧肽酶水解：羧肽酶專性水解羧基末端氨基酸根據酶解專性同區羧肽酶A、BC應用羧肽酶測定末端需要事先進行酶力實驗便選擇合適酶濃度及反應間使釋放氨基酸主要C末端氨基酸

『拾』 什麼是N端和C端

蛋白質生物合成過程中的氨基酸排列走向。N端是「氮」，是—NH2，讀氨基；C端是「碳」，是—COOH，讀羧（suo,一聲）基。是Dintzis等人用3H-亮氨酸作標記分析敏畝了兔網織紅細胞無細胞體系中血紅蛋白生物合成的過程來證明的。血紅蛋白中含有較多亮氨酸。其氨基酸序列為已知。合成反應在較低溫度（15度）中進行，以降低合成速度。在反應開始後的4-60分鍾內，每隔一定時間取樣分析。將帶有標記的蛋白質分離出來，用胰蛋白酶水解肽鏈，用紙層析法分離水解碎片並測定所含放射性強度。從實驗談祥結果中發現，反應4分鍾後，只有竣基端含有3H-亮氨酸。隨著反應時間的延長，帶有標記的肽段自羧基向N端延伸，到含拿搏60min時，幾乎整個肽斷都布滿了標記物。這個實驗說明多肽鏈的合成是從N端向C端進行的