㈠ 半定量RT-PCR電泳圖如何分析
半定量RT-PCR參照的做法一般有兩種:
1) 將要比較的兩個樣品的BETA-ACTIN 調成一樣的亮度,然後就可以直接比較目的基因的亮度了。方法的結果比較直觀,但較費事。
2) 不進行調平,一個樣品里將目的基因和BETA-ACTIN直接比較,用軟體就可以做到,然後將不同樣品的這個比值進行比較就可以了。方法比較簡單,但結果不夠直觀。
1.每個標本都要做自己的內參,不能用同一個內參!
2.每個標本在實際做前都要摸最佳循環數,包括內參,但內參的循環數不一定要和目的基因一樣,都要選擇上升期的中間數作為最佳循環數,否則進入平台期就沒有可比性了!所以內參要有它自己的最佳循環數!
3.電泳掃描後,計算灰度值,先用同一標本的內參和目的進行比較,然後用這個相對值再去和其他你所要比較的平行組進行比較,一般每組4個樣本以上。這樣就可以知道各組之間的差別了!
㈡ 如何分析SDS-PAGE電泳圖掃描後圖上蛋白條帶的量
SDS-PAGE檢測蛋白是一種定性的檢測方法,圖上蛋白條帶不能做到精確定量。
一般只能通過一些對照樣品來比較分析圖上蛋白條帶的量。
比如用已知蛋白量的樣品(BSA)和需檢測的蛋白樣品跑在附近的泳道,通過對比染色後樣品的大小,顏色,深淺來估計出需檢測蛋白樣品的量。
㈢ 做PCR擴增,電泳圖該怎麼分析啊
1. 首先需要的是marker,即有既定片段長度的DNA片段。
2. 看膠,里點樣孔越近的DNA片段長度越大,離點樣孔遠的DNA片段長度小。
以你的圖片看,5.6兩個孔的片段比前邊4個孔的片段短,如果你知道前邊4個孔的片段長度,可以估計一下。
條帶上方的模糊的一片應該是引物二聚體來的。做連接或者其他操作前用PCR產物回收試劑盒回收一下,就可以去掉引物二聚體了。
㈣ pcr擴增產物的凝膠電泳圖怎麼分析
通過凝膠成像系統拍攝圖片,注意調整對比度。如果是寫報告的話,可以標記出marker各條帶的分子量以及亮度,詳見說明書;
然後說明擴增片段與目的片段大小相同,均為xx;如果圖像上有雜帶可以分析一下,比如可能是引物二聚體之類的情況,以便下次實驗可以酌量調整退火溫度或者各成分的用量。
(4)電泳圖的分析方法擴展閱讀:
電源電壓
在低電壓時,線狀DNA片段的遷移速率與所加電壓成正比。但是隨著電場強度的增加,不同分子量的DNA片段的遷移率將以不同的幅度增長。
片段越大,因場強升高引起的遷移率升高幅度也越大,因此電壓增加,瓊脂糖凝膠的有效分離范圍將縮小。要使大於2kb的DNA片段有效分離所加電壓不得超過5V/cm。
嵌入染料的存在
熒光染料溴化乙啶用於檢測瓊脂糖凝膠中的DNA,染料會嵌入到堆積的鹼基對之間並拉長線狀和帶缺口的環狀DNA,使其剛性更強,還會使線狀DNA遷移率降低15%。
離子強度影響
電泳緩沖液的組成及其離子強度影響DNA的電泳遷移率。在沒有離子存在時(如誤用蒸餾水配製凝膠),電導率最小,DNA幾乎不移動,在高離子強度的緩沖液中(如誤加10×電泳緩沖液),則電導很高並明顯產熱,嚴重時會引起凝膠熔化或DNA變性。
㈤ 電泳圖蛋白質的怎麼看
電泳圖蛋白質這樣看。
1、直接將帶條帶的凝膠放在凝膠呈像系統中進行定量分析。
2、將所需要的條帶剪切下來,用X體積蒸餾水溶解,通過紫外分光光度計在280納米條件下,測定吸光度值。根據儀器目前標准曲線計算蛋白質濃度,與蒸餾水體積相乘,得到蛋白質質量。
3、如果樣品中含有熒光成分,可以進行熒光分析。
電泳圖譜(electrophoregram)是通過電泳將一個混合物樣品(如血清)在支持介質上分成區帶。但須將電泳條經過染色,使區帶顯示出來而得電泳圖譜。還可以進一步在光密度計上進行掃描而獲得記錄圖譜。
帶電粒子在電場的作用下,向著與其電性相反的電極移動的現象,稱為電泳。利用帶電粒子在電場中移動速度不同,對混合物各組份進行分離、純化和測定的技術稱為電泳技術。
可分離的樣品即可以是大分子的蛋白質、多糖、核酸,也可以是小分子的氨基酸,核苷等。
電泳方式差別很大.但基本原理是一致的,即:待分離樣品中各種分子在同一pH下帶電性質和帶電量以及分子本身大小、形狀等性質的差異,使帶電分子在電場中產生不同的遷移速度,從而實現對樣品分離、鑒定或提純。
㈥ 【急!】如何分析電泳圖【有例子】【大謝啊!!!】
首先先說明一點,我水平很有限的。謝謝了
1.質粒是環狀的,擁有高級結構,而且不同的高級結構在相同條件電泳時擁有不同的遷移率(超螺旋>線性>開環),我不知道你的mark是什麼?所以也不好說。
2.①很多原因造成切開的質粒粘性末端又重新粘接起來
②眾多原因造成質粒根本就沒切開
③比I慢一點,可能質粒被切成線性或者開環的了
3.被切成了兩條,就這樣
㈦ 如何分析PCR擴增後的電泳圖
在電泳的時候加上DNA的分子量marker,一般16S的大小都是1.5 kb吧(很久不做了,記不太清楚)。如果有明顯的目的條帶而且大小也合適的話那就一般不會錯,如果想要確定,可以將條帶從膠中切下來,回收之後送去測序,就可以知道序列的詳細信息了。
另外你的目的如果只是判斷DNA的提取是否成功的話,那麼在提取DNA之後直接跑電泳就可以了,沒有必要做PCR擴增16S。一般細菌基因組都在15~16k大小左右。
㈧ 如何分析細菌基因組電泳圖
如何分析細菌基因組電泳圖
質粒DNA電泳會有三條帶,最遠的是線形DNA(lDNA):質粒的兩條鏈均斷裂;線性分子;中間的是開環DNA(ocDNA):質粒的一條鏈斷裂;鬆弛的環狀分子;共價閉合環狀DNA(cccDNA):質粒的兩條鏈沒有斷裂;超螺旋這是由於在質粒提取過程中,機械力、酸鹼度、試劑等的原因,使質粒DNA鏈發生斷裂.而質粒DNA相對於基因組DNA小很多,所以比較容易區分開基因組DNA電泳一般是1條帶,雖然在你抽提過程中也會發生斷裂,形成幾十至幾百kb的大片段.但是我們一般用1%的膠,無法區分不同大小的DNA,所以看起來像是一條帶.如果配成0.6%的膠再加lamda
hindIII
marker,適當延長跑膠時間,就應該會出現幾條帶了
㈨ 怎麼看蛋白質電泳分析結果圖,以及它的原理是什麼
雙向電泳就是等電聚焦電泳和SDS-PAGE的組合。
1.先進行等電聚焦電泳(按照蛋白等電點pI分離):在膠中加入雙性電解質溶液,加上電場後建立穩定PH梯度,蛋白質溶液加入後建立電場,蛋白以不同PI分離開來。
2.然後再進行SDS-PAGE(按照分子大小):將上一步的膠加上橫向電場,同一PI中聚集的蛋白,由於分子量不同而分開。
經染色(一般是銀染)得到的電泳圖是個二維分布的蛋白質圖。
二維電泳使用於蛋白組學研究,對大批量蛋白篩選鑒定中存在很大優勢,通過不同膠做對比,把不同處的膠割出來單獨鑒定。
通過對尿蛋白電泳的蛋白條帶的特徵進行分析可以判斷尿液中蛋白的分子大小,可以區分出低分子蛋白尿、中分子蛋白尿、高分子蛋白尿和混合型蛋白尿,為臨床腎臟病的診斷提供幫助。如高分子蛋白尿,分子量范圍在5萬到100萬,蛋白條帶包括白蛋白及其以上蛋白條帶,以白蛋白為主。低分子蛋白尿,分子量范圍在1萬到7萬,蛋白條帶在白蛋白和以下蛋白,以小分子蛋白質條帶為主。
㈩ DNA電泳圖結果分析
首先看第二泳道,能夠看見兩條帶,一般的質粒跑完電泳都是這種情況,因為質粒容易開鏈,變成線性的,或者是半線性半環狀,而環狀的比線性的跑的快,所以上面那條淺的應該是開鏈的質粒,下面的是環狀的質粒,不過不要緊,一般都是這樣。看第三條泳帶,說明你的目的條帶大約在750bp。再看第四個泳帶,靠近點樣孔的是你切掉了目的基因的質粒,此時為線性的質粒,能夠看見它比第二條泳道那條亮帶跑的要慢一些,這是對的結果。還是因為環狀的比線性的跑的快。而第四條泳帶下面那個淺帶,是你的目的基因,它與你PCR產物大小一樣。因此說明了你的重組質粒構建成功,目的基因已經連入質粒了。恭喜你!第一次做就能做成這樣,羨慕啊。