血細胞分析中最常用到的染色方法

㈠ 吉姆薩染色

吉姆薩（Giemsa）染色法 ：吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結果與瑞特染色法基本相同。
嗜酸性顆粒為鹼性蛋白質，與酸性染料伊紅結果，染粉紅色，稱為嗜酸性物質；細胞核蛋白和淋巴細胞 胞漿為酸性，與鹼性染料美藍或天青結合，染紫藍色，稱為嗜鹼性物質；中性顆粒呈等電狀態與伊紅和美藍均可結合，染淡紫色，稱為中性物質。
PH對細胞染色有影響。細胞各種成分均不蛋白質，由於蛋白質系兩性電解質，所帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環境中下在電荷增多，易與伊紅結合，染色偏紅；在偏三性環境中負電荷增多，易與美藍或天青結合，染色 偏藍。因此細胞染色對氫離子濃度十分敏感，染色用正經片必須清潔，無酸鹼污染。配製頊特液必須用優質甲醇，稀釋染色必須用緩沖液，沖洗用水應近中性，否則可導致各種細胞染色反應異常，以致識別困難，甚至造成錯誤。

原文連接如下
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一般性操作技術血塗片制備；細胞染色；顯微檢查；血液病診斷；染色不良；瑞特（Wright）染色法；酸性染料；伊紅；鹼性染料；亞甲藍；吸附作用；PH對細胞染色的影響；甲醇；吉姆（Giemsa）染色法春天要常用潤膚劑，它含有松香油脂酸和豐富維生素a，常用可加快皮膚血液循環，剌激面部細胞分泌，有效改善皮膚生理環境，減少氣候對皮膚的危害。
第二節 血塗片的制備和細胞染色
血塗片的顯微檢查是血液細胞學檢查的基本方法，臨床上應用極為廣泛，特別是對於各種血液病的診斷具有重要的價值，近年來血細胞分析儀的廣泛應用，血塗片的觀察也可作為判斷儀器結果的簡易方法。比台觀察10個高倍視野血塗片中白細胞和血小板數大致估計血內這些細胞的數量，藉以作為儀器結果分析後質控的參考。
但積壓塗片制備和染色不良，常使細胞鑒別發生困難，甚至導致錯誤結論。例如，血膜過厚細胞重疊縮小，血膜太薄白細胞多集中於邊緣，細胞分布不勻；染色偏酸或偏鹼均可使細胞染色反應異常。因皮製備厚薄適宜，分布均勻，染色良好的血塗片是血液學檢查的重要革本技術之一。
血塗片制備方法及注意事項將在實習指導中詳細介紹。
1．瑞特（Wright）染色法 ：為發觀察細胞內部結構，識別各種細胞及其異常變化，血塗片必須嘲行染色。血塗片的各種染色方法大多是羅氏染色法衍變來的。目前常用瑞特染色法。
（1）瑞特染料是由酸性染料伊紅和鹼性染料亞甲藍組成有復合染料。亞甲藍為四甲基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結構。通常為氯鹽，即氯化美藍。美藍容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級染料。市售美藍中部分已被氧化為天青。伊紅通常為鈉鹽。即伊紅和伊混合後，產生一種憎液性膠體伊紅美藍中性沉澱，即瑞特染料。
（2）細胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學的親和作用，各種細胞成分化學性質不同，對各種染料的親和力也不一樣。因此，用本染料液染色後，在同一血片上，可以看到各種不同的色彩，例如血紅蛋白，嗜酸性顆粒為鹼性蛋白質，與酸性染料伊紅結果，染粉紅色，稱為嗜酸性物質；細胞核蛋白和淋巴細胞 胞漿為酸性，與鹼性染料美藍或天青結合，染紫藍色，稱為嗜鹼性物質；中性顆粒呈等電狀態與伊紅和美藍均可結合，染淡紫色，稱為中性物質。
（3）PH對細胞染色有影響。細胞各種成分均不蛋白質，由於蛋白質系兩性電解質，所帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環境中下在電荷增多，易與伊紅結合，染色偏紅；在偏三性環境中負電荷增多，易與美藍或天青結合，染色 偏藍。因此細胞染色對氫離子濃度十分敏感，染色用正經片必須清潔，無酸鹼污染。配製頊特液必須用優質甲醇，稀釋染色必須用緩沖液，沖洗用水應近中性，否則可導致各種細胞染色反應異常，以致識別困難，甚至造成錯誤。
新鮮配製的染料偏鹼，須在室溫或是37℃下貯存一定時間，待染料成熟，主要是美藍逐漸轉變為天青B後才能使用，貯存時愈久，染色效果愈好。EAM GILLILAND等採用吸光度比值作為頊特染液的質量規格。rA測定方法如下：取瑞特染液15-25μl（視染液濃度而定），加甲醇10ml稀釋，混勻後以甲醇為空折管，分別以波長650nm和25nm比色。Ra=a650/a525.因為美藍吸收峰小組長為650nm，伊紅吸收峰波長為525nm ;天青B吸收峰也為650nm但吸光度A約為美藍的一半。所以新配染料rA接近2，隨著美藍逐漸氧化為天青B，RA也相應下降。RA下降到1.3±0.1時即可使用。瑞特染液貯存過程中，必須塞嚴，以防止甲醇揮發和被氧化成甲酸。有人主張在配方中加入甘油30ml，防止甲醇揮發，關可合細胞染色清晰。甲醇必須純凈，如甲醇中丙酮含量過多，染色偏酸，使白細胞著色不良。
2．吉姆薩（Giemsa）染色法 ：吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結果與瑞特染色法基本相同。但本法對細胞核和寄生蟲著色較好，結構顯示更不清晰，而胞質和中性顆粒則著色較差。為兼顧二者之長，可用復合染色法。即以稀釋吉姆薩液代替緩沖液，按瑞特染色法染10min。或先用瑞特染色法染色後，再用稀釋吉姆薩復染。

㈡ 瑞氏染色步驟

操作步驟：
1.滴加瑞氏吉姆薩A液(約0.5ml-0.8ml)塗片上，並讓染液覆蓋整個標本染色1min；
2.
再將瑞氏吉姆薩B液加於A液上面（滴加量為A液的2-3倍），以嘴或洗耳球吹出微風使液面產生漣漪狀，使兩液充分混合，染色3-10min。（染血片時間可略短，染骨髓片時間應視細胞量多少而異）
3.水洗（沖洗時不能先倒掉染液，應以流水沖去，以防有沉渣沉澱在標本上），乾燥、鏡檢。
注意事項：
1.
染色時間須視何種標本，塗片厚度，有核細胞多少，何種細胞及室溫等而定；通常染血液塗片時滴加B液後染2-4分鍾，染骨髓片則應不少於8分鍾；氣溫較低時，可適當延長染色時間。染色結果如出現嗜酸性粒細胞變鹼，則考慮是否染色時間太長所致。
2.做骨髓塗片時，因為骨髓纖維蛋白含量較高，凝固較快，所以塗片過程要快。骨髓不可用草酸鹽抗凝，否則會使血細胞核變形，核染色質緻密，胞漿空泡形成，出現草酸鹽結晶。
3.染液量需充足，勿使染液蒸發乾燥，以防染料沉著於塗片上。
4.做細胞染色時，當天氣寒冷或濕度較大時，應於37℃溫箱中保溫促干，以免細胞變形縮小或在染色時脫片。
5.染料放置時間越長，染色效果越好。
6.
本試劑應由專業人員使用。
拓展資料
Wrfeht和Giemsa都於1902年報告了各自的新的血液學染色劑，其主要特點是在制備多色性亞甲藍（主要指天青B）方面做了改進，使血細胞和瘧原蟲著色較好，操作簡便。
上述染色法均是含伊紅和亞甲基藍衍生物的復合染料。在臨床檢驗工作中，瑞氏染色法常用於血液、其他體液、分泌物和排泄物塗片中各種細胞的染色，有利於在顯微鏡下觀察細胞形態及對細胞進行分類檢查。
【染色原理】
瑞氏染色分兩相進行，第一相是酸性染料伊紅與細胞中的鹼性物質如血紅蛋白、嗜酸性顆粒等結合；鹼性染料天青B與細胞中的酸性物質如核染色質（chro－matin）、特異中性顆粒、血小板及富含核蛋白的胞質結合。第二相是天青B和伊紅在適宜條件下形成紫色的天青B一伊紅復合物（azure
B－eosin
complex），這種復合物是形成Romanowsky－Giemsa效應的基礎。
Romanowsky－Giemsa效應包括：①白細胞核染色質染成紫色，瘧原蟲的染色質染成紅色；②中性粒細胞的顆粒及血小板顆粒區染成紫色；③產生本效應必須有兩種染料參與，一種是天青B，另一種是伊紅。
Wittekind（1985）指出，天青B與DNA分子中的磷酸基結合，而伊紅既與DNA分子中的陽離子部位結合，又與天青B結合，與天青B的結合力來源於電子供一受體的電子轉移力，天青B的甲氨基（－NHCHs）與伊紅分子中的叛基（－COOH）間形成氫鍵。因此，天青B是噻嗪類染料中能與伊紅形成復合物的最佳選擇，因為擁有四個甲基側鏈的亞甲藍不能以氫鍵與伊紅結合。
甲醇除作為染料的溶劑，能將瑞氏染料解離成帶正電荷的天青B和帶負電荷伊紅外，因其具有脫水力，還可將細胞固定為一定形態，並使蛋白沉澱為顆粒狀、網狀結構，增加細胞與染料的接觸表面，增強染色效果。
細胞中的各種有機物質（特別是蛋白質）、染料等對環境的州值非常敏感。如環境偏酸，氫離子增多，降低對鹼性染料的親和力；增強伊紅著色，出現異常紅染；相反，則可出現異常藍染。最佳環境應維持在PH值6
4～6、8.因此，必須使用緩沖溶液。
參考資料：
搜狗網路_瑞氏染色
瑞氏染色原理及方法_醫學教育網

㈢ 全國臨床檢驗操作規程推薦的血細胞染色法是什麼

《全國臨床檢驗操作規程》推薦的血細胞染色法
瑞-吉復合染色

㈣ 血細胞染色方法是怎麼建立的

19世紀德國的化學工業、染料工業、制葯工業的發展十分迅速。1856年，英國化學家W.H.帕金首先發明了染料的人工合成方法。不久，德國化學家A.W.霍夫曼相繼合成了染料鹼性品紅和苯胺藍。人們在應用染料過程中發現，其不僅可以染色布料、毛皮，而且還可以染色布料、毛皮，而且還可以使動物組織著色。更有趣的是，有些染料能使某些特定的細胞而不是所有的細胞著色，還有一些染料能使一種細胞的某一部分而不是整個細胞著色。於是，染料成了科學家觀察有機體結構的一種非常有用的工具。起初，能應用於有機體染色的染料為數不多，19世紀末，隨著德國染料工業的迅速發展，生產出了各種染料，極大地拓展了科學家觀察研究的范圍。醫學家開始用特殊染料使有機體的組織和細胞染色，在顯微鏡下進行觀察研究。

德國醫學家艾利希正是在這種背景下發明血細胞染色方法的。艾利希的叔父魏格特是德國著名的病理學家和組織學家，也是細菌和組織染色方法的創立者。他發明的許多人體組織和細胞的染色方法，有些一直尚用至今。艾利希在魏格特的影響下，自幼愛好動物學和化學。在大學學習階段，他就對化學染料與有機體組織細胞染色的關系產生了極大的興趣，並開拓研究某些化學物質對動物組織的作用。他不僅對機體的化學過程充滿興趣，而且也十分關注機體中更小的成分——細胞的構造和成分。當時還很少有醫生將化學與醫學結合起來研究的，值得慶幸的是，斯特拉斯堡大學教授、艾利希的老師沃爾德耶爾恰好持有這種觀點。沃爾德耶爾贊同艾利希的研究計劃，並鼓勵這個青年人在科學研究上走自己的路。在斯特拉斯堡大學學習期間，艾利希就發表了萊於化學物質在體內的分布及其與葯物作用關系的論文。

雖然艾利希對用化學方法研究生命現象充滿興趣，但他對當時大學里死板的教學方法十分厭惡，所以艾利希經常逃課，尤其是化學課。結果是艾利希不能通過課程考試，不得不留級一年。然而，他並不懊惱，而是繼續將時間都傾注在搗弄各種染料上。由於專心研究，不修邊幅，以致於染料弄得到處都是。數年後，一位教授指著艾利希曾使用過的工作台說：「艾利希工作的痕跡實際上是不可摧毀的。」德國著名科學家羅伯特·科赫也時常提及一個有關艾利希的小故事：他去布雷斯勞大學鑒定白喉桿菌時，被邀請參觀實驗室。實驗室的負責人指著艾利希的辦公桌告訴他：這是艾利希的工作台。艾利希是一個非常出色的染料師，但考試卻經常不極格。

當時，德國學生為了獲得學位，經常在幾所大學學習。艾利希曾在布雷斯勞大學、斯特拉斯堡大學、布賴斯高地大學、弗萊堡大學和萊比錫大學等多所學校學習過。在布雷斯勞大學時，他對實驗室的工作十分感興趣，他發明的染色技術揭示了許多細胞的基本構造。剛發現炭疽桿菌的科赫在布雷斯勞大學訪問時曾與艾利希探討了染色問題，從此，艾利希和科赫結下了深厚的友誼。

艾利希不僅熱衷於實驗觀察，而且善於獨立思考。在大學學習期間，一次在觀察鉛中毒死者的組織變化時，他發現凡是生前診斷為嚴重鉛中毒病人的身體組織，在作屍體病理檢查時，把組織浸入含鉛溶液中，這些組織的細胞也最容易吸收和積蓄鉛。艾利希敏銳地意識到人體的不同組織和器官對特定的化學物質可能存在著不同的「親和力」。於是，他開始用各種染料對人體組織標本進行染色，以確定能使特定組織和細胞染色的染料及其之間的相互關系。

1878年，艾利希在萊比錫大學畢業並獲醫學博士學位。他的博士論文是關於染料應用於顯微鏡觀察的理論和實踐問題，主要內容是關於如何應用各種苯胺染料進行動物組織染色的理論和技術。這一問題包含了艾利希關於染料和染色方法的許多設想：實際上已經奠定了他今後為醫學做出巨大貢獻的思想基礎。1891年，艾利希在一本關於有機體組織對染料的不同反應的著作中，介紹了血細胞的染色方法。1898年，他與同事又合作出版了一本論貧血的著作，總結了正常和病理情況下對血液的觀察，內容包括血液觀察的方法學、正常和病理情況下的紅細胞、各種白細胞、淋巴細胞以及白血病的細胞特點等。

在研究過程中，艾利希發現染料分為酸性、鹼性和中性三類，不同的染料對於白細胞內的顆粒染色結果不同，由此他第尋次提出了白細胞的分類方法。艾利希因為這些著名的觀察和方法學的建立，被譽為現代血液學的奠基人。

㈤ 血細胞化學染色中，MPO染色和POX染色有什麼區別

急性白血病分為急性淋巴細胞白血病（簡稱急淋，ALL）和急性髓細胞白血病（包括M0、M1、M2a、M2b、M3、M4、M5、M6、M7）。由於急性白血病骨髓中是以原始和/或幼稚細胞增生為主，僅僅根據瑞氏染色下的細胞形態，容易做出錯誤的判斷，因此不論急性白血病細胞形態學表現是否典型，均應做細胞化學染色。建議急性白血病應至少做：過氧化物酶染色POX、特異性酯酶染色、非特異性酯酶染色及過碘酸-雪夫反應PAS。根據細胞形態學和細胞化學染色並不能對所有急性白血病的細胞類型做出正確的判斷，還需要結合染色體檢查、細胞免疫學檢查及分子生物學檢查等進行全面分析。

㈥ 五分類血細胞分析指的是什麼

將血液中的白細胞分成五個類別：中性桿狀核粒細胞、中性分葉核粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜鹼性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞，通過一些儀器的檢測對紅細胞、白細胞等進行分析的技術。

而其發展離不開庫爾特兄弟的庫爾特原理，因此大量血細胞分析儀在各國的實驗室里發揮著作用。常用的設備為半自動或全自動生化檢測儀。

(6)血細胞分析中最常用到的染色方法擴展閱讀

檢測方法

1、阻抗、激光散射和熒光染色技術檢測法

直流電阻抗法（DC）用於測量細胞體積大小。這種技術主要應用在Sysmex研製和開發的SE-9000、SE-9500、XE-2100、XT-1800等系列血液分析儀中，中儀康輝（北京）國際貿易有限公司為該系列產品國內部分區域分銷商。

2、電阻抗和射頻電導聯合檢測法

這種方法是分別採用四個檢測系統來檢測不同類型的細胞：淋巴細胞、單核細胞和中性粒細胞檢測系統、嗜酸性細胞和嗜鹼性細胞兩種檢測系統、幼稚細胞檢測系統。

3、多角度激光偏振光散射檢測法

採用這種技術的儀器使用鞘流液將標本血稀釋，稀釋後白細胞的內部結構近似於自然狀態，只有嗜鹼性細胞由於其吸濕的特性而使細胞結構有輕微改變。

4、採用圖像分析的單純細胞檢測法

該技術採用圖像分析法，將血片染色，用含有掃描鏡頭的顯微鏡掃描每個視野，將獲取的細胞圖像與儀器內存儲的標准圖像進行對照分析，判斷該細胞的類型。

㈦ 實驗室常用的染色方法有哪幾種

印染行業的化驗室一般的都是浸染法，就是拿染液通過染色工藝把布浸染到上色，還有扎染，卷染，

㈧ 血細胞分析儀使用的熒光染料一般有哪些

這個么…染色一般用新亞甲藍枸櫞酸鈉，全血塗片可用瑞氏染液或新亞甲枸櫞酸鈉，

㈨ 細胞染色最常見的方法是什麼

細胞染色常用方法主要包括以下幾個即：1.簡單染色法，常用鹼性染料如美藍等進行簡單染色;2.革蘭氏染色法，主要包括結晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脫色以及番紅復染四個過程;3.瑞氏染色法，瑞氏染料溶劑主要是由伊紅美藍組成;4.吉姆薩染色法，吉姆薩染色原理與結果和瑞特染色法基本相同;6.細胞免疫熒光染色法，免疫熒光染色的主要原理是利用抗原抗體之間的特異性結合。