雜交計算方法

㈠ 雜種優勢率的計算方法

所謂雜種優勢就是不同品種、品系間雜交，其雜交後代的生活力和若干生產性能平均值超過雙親平均值的部分。雜種優勢一般用雜種優勢率來表示。其計算公式為：

㈡ AaBb與aaBb雜交，兩配子的結合方式有幾種怎麼算啊

對於 Aa £ aa 配子來說有 Aa £ aa 兩種 對於Bb$Bb來說，有 BB £ Bb £ bb 三種 所以有六種組合方式

㈢ Aa雄性與1/3Aa,2/3AA雌性雜交，後代基因型及比例怎麼算最快

這一類題目你只要明白就可以了，不一定非要找到最簡單的方法，只要會分析就行，用不了太多的時間。Aa與Aa雜交，產生1/2的雜合體，Aa與AA也產生1/2的雜合體，所以產生的後代為AA，Aa，aa比值為（1/3*1/4+2/3*1/2）：（1/3*1/2+2/3*1/2）：（1/3*1/4）

㈣ 孟德爾豌豆雜交實驗習題要怎麼計算有什麼方法

不知你說的是分離定律還是自由組合
分離定律 例如；DDXdd=Dd DdXDD=DD或Dd 總之其實質便是等位基因隨染色體的分離而分離與其他的基因從新組合
自由定律和分離的差不多就是復雜些 例如；YYRRXyyrr=YyRr 可以說是把YYRR分為 即YR和YR 或是yyrr分為yr和yr 也可能是YyRr 分為YR,Yr,yr,yR 在和要結合的那基因組合成新的，其實質是同源染色體等位基因分離與非同源染色體上非等位基因結合。這么說你懂嗎？
如果是CCBBXccbb=CcBb 做法一樣的 同樣是C的基因就從中取一個大寫或小寫的與同樣是B的大寫或小寫的合為一組與對方可能產生的基因組和！！！！唉，說了一大堆，採納我的答案吧。。。。。。。

㈤ 分子雜交技術的幾種常見的雜交

分子雜交是通過各種方法將核酸分子固定在固相支持物上，然後用放射性標記的探針與被固定的分子雜交，經顯影後顯示出目的DNA或RNA分子所處的位置。根據被測定的對象，分子雜交基本可分為以下幾大類：
(1) Southern雜交:DNA片段經電泳分離後,從凝膠中轉移到硝酸纖維素濾膜或尼龍膜上,然後與探針雜交。被檢對象為DNA,探針為DNA或RNA。
(2) Northern雜交:RNA片段經電泳後,從凝膠中轉移到硝酸纖維素濾膜上,然後用探針雜交。被檢對象為RNA,探針為DNA或RNA。
根據雜交所用的方法,另外還有斑點(dot)雜交、狹槽(slot)雜交和菌落原位雜交等。有3種固相支持體可用於雜交:硝酸纖維素濾膜、尼龍膜和Whatman 541濾紙。不同商標的尼龍膜需要進行不同的處理，在DNA固定和雜交的過程中要嚴格按生產廠家的說明書來進行。Whatman 541濾紙有很高的濕強度,最早用於篩選細菌菌落。該濾紙主要用於篩選一些基因文庫。固定化DNA的雜交條件基本與使用硝酸纖維素濾膜時所建立的條件相同。Whatman 541濾紙與硝酸纖維素濾膜相比有一些優點:它更便宜,雜交中更耐用,乾燥過程中不易變形和碎裂等。然而若變性過程不小心,雜交信號的強度會明顯弱於用硝酸纖維素濾膜時所得到的信號強度。因此,常規的細菌篩選和各種雜交時仍選用硝酸纖維素濾膜作為固相支持體。 Southern雜交可用來檢測經限制性內切酶切割後的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟:
(1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶切片段,然後使DNA原位變性。
(2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。
(3) 預雜交濾膜,掩蓋濾膜上非特異性位點。
(4) 讓探針與同源DNA片段雜交,然後漂洗除去非特異性結合的探針。
(5) 通過顯影檢查目的DNA所在的位置。
Southern雜交能否檢出雜交信號取決於很多因素,包括目的DNA在總DNA中所佔的比例、探針的大小和比活性、轉移到濾膜上的DNA量以及探針與目的DNA間的配對情況等。在最佳條件下,放射自顯影曝光數天後, Southern雜交能很靈敏地檢測出低於0.1pg與32 P標記的高比活性探針的(>109 cpm/μg)互補DNA。如果將10μg基因組DNA轉移到濾膜上，並與長度為幾百個核苷酸的探針雜交,曝光過夜,則可檢測出哺乳動物基因組中1kb大小的單拷貝序列。
將DNA從凝膠中轉移到固體支持物上的方法主要有3種:(1)毛細管轉移。本方法由Southern發明,故又稱為Southern轉移(或印跡)。毛細管轉移方法的優點是簡單,不需要用其他儀器。缺點是轉移時間較長,轉移後雜交信號較弱。(2)電泳轉移。將DNA變性後,可電泳轉移至帶電荷的尼龍膜上。該法的優點是不需要脫嘌呤/水解作用,可直接轉移較大的DNA片段。缺點是轉移中電流較大,溫度難以控制。通常只有當毛細管轉移和真空轉移無效時,才採用電泳轉移。(3) 真空轉移。有多種真空轉移的商品化儀器,它們一般是將硝酸纖維素膜或尼龍膜放在真空室上面的多孔屏上,再將凝膠置於濾膜上,緩沖液從上面的一個貯液槽中流下,洗脫出凝膠中的DNA,使其沉積在濾膜上。該法的優點是快速,在30分鍾內就能從正常厚度(4-5mm)和正常瓊脂糖濃度(<1%)的凝膠中定量地轉移出來。轉移後得到的雜交信號比Southern轉移強2-3倍。缺點是如不小心，會使凝膠碎裂, 並且在洗膜不嚴格時,其背景比毛細轉移要高。
1、材料： 待檢測的DNA，已標記好的探針。
2、設備： 電泳儀，電泳槽，塑料盆，真空烤箱，放射自顯影盒，X-光片，雜交袋，硝酸纖維素濾膜或尼龍膜，濾紙。
3、試劑：
(1)10mg/ml 溴化乙錠（EB）。
(2)50×Denhardt's溶液：5g Ficoll-40, 5g PVP, 5g BSA加水至500ml,過濾除菌後於-20℃儲存。
(3)1×BLOTTO:5g脫脂奶粉，0.02%疊氮鈉，儲於4℃。
(4)預雜交溶液:6×SSC, 5×Denhardt, 0.5% SDS, 100mg/ml鮭魚精子DNA, 50%甲醯胺。
(5)雜交溶液:預雜交溶液中加入變性探針即為雜交溶液。
(6)0.2mol/L HCl。
(7)0.1% SDS。
(8)0.4mol/L NaOH。
(9)變性溶液:87.75g NaCl, 20.0g NaOH加水至1000ml。
(10)中和溶液:175.5g NaCl, 6.7g Tris·Cl, 加水至1000ml。
(11)硝酸纖維素濾膜。
(12)20×SSC: 3mol/L NaCl, 0.3mol/L檸檬酸鈉,用1mol/L HCl調節pH至7.0;
(13)2×、1×、0.5×、0.25×和0.1×SSC:用20×SSC稀釋。
4、操作步驟：
(1) 約50μl體積中酶切10pg-10μg的DNA, 然後在瓊脂糖凝膠中電泳12-24小時(包括DNA分子量標准物)。
(2) 500ml水中加入25μl 10mg/ml溴化乙錠,將凝膠放置其中染色30分鍾, 然後照相。
(3) 依次用下列溶液處理凝膠,並輕微搖動: 500ml 0.2mol/L HCl 10分鍾, 傾去溶液(如果限制性片段>10kb, 酸處理時間為20分鍾)，用水清洗數次,傾去溶液; 500ml變性溶液兩次,每次15分鍾,傾去溶液; 500ml中和溶液30分鍾。如果使用尼龍膜雜交，本步可以省略。
(4) 戴上手套,在盤中加20×SSC液,將硝酸纖維素濾膜先用無菌水完全濕透,再用20×SSC浸泡。將硝酸纖維素濾膜一次准確地蓋在凝膠上,去除氣泡。用浸過20×SSC液的3濾紙蓋住濾膜,然後加上乾的3濾紙和干紙巾,根據DNA復雜程度轉移2-12小時。當使用尼龍膜雜交時，該膜用水浸潤一次即可，轉移時用0.4mol/L NaOH代替20×SSC。簡單的印跡轉移2-3小時,對於基因組印跡,一般需要較長時間的轉移。
(5) 去除紙巾等,用藍色圓珠筆在濾膜右上角記下轉移日期,做好記號,取出濾膜,在2×SSC中洗5分鍾,涼干後在80℃中烘烤2小時。注意在使用尼龍膜雜交時，只能空氣乾燥，不得烘烤。
(6) 將濾膜放入含6-10ml預雜交液的密封小塑料袋中,將預雜交液加在袋的底部,前後擠壓小袋,使濾膜濕透。在一定溫度下(一般為37-42℃)預雜交3-12小時，棄去預雜交液。
(7) 制備同位素標記探針（參見第一節），探針煮沸變性5分鍾。
(8) 在雜交液中加入探針,混勻。如步驟（6）將混合液注入密封塑料袋中,在與預雜交相同溫度下雜交6-12小時。
(9) 取出濾膜,依次用下列溶液處理,並輕輕搖動: 在室溫下, 1×SSC/0.1% SDS, 15分鍾, 兩次。 在雜交溫度下, 0.25×SSC/0.1% SDS, 15分鍾, 兩次。
(10) 空氣乾燥硝酸纖維素濾膜,然後在X光片上曝光。通常曝光1-2天後可見DNA譜帶。對於≥108 cpm/μg從缺口平移所得探針,可很容易地從10μg哺乳DNA中檢測到10pg的單拷貝基因。 Northern雜交與Southern雜交很相似。主要區別是被檢測對象為RNA,其電泳在變性條件下進行,以去除RNA中的二級結構,保證RNA完全按分子大小分離。變性電泳主要有3種:乙二醛變性電泳、甲醛變性電泳和羥甲基汞變性電泳。電泳後的瓊脂糖凝膠用與Southern轉移相同的方法將RNA轉移到硝酸纖維素濾膜上,然後與探針雜交。
1、材料：待檢測的RNA及制備好的探針。
2、設備：電泳儀，電泳槽，塑料盆，真空烤箱，放射自顯影盒，X-光片，雜交袋，硝酸纖維素膜或尼龍膜。
3、試劑：
(1)20×SSPE:175.3g NaCl, 88.2g檸檬酸鈉，溶於800ml水中，用10mol/LNaOH調pH至7.4，定溶到1L。
(2)其他試劑：與Southern雜交試劑類似，只是所有的試劑均應用DEPC處理。
4、操作步驟：
(1)RNA經變性電泳完畢後,可立即將乙醛醯RNA轉移至硝酸纖維素濾膜上。轉移方法與轉移DNA的方法相似。
(2)轉移完畢後 ,以6×SSC溶液於室溫浸泡此膜5分鍾,以除去瓊脂糖碎片。
(3)將該雜交膜夾於兩張濾紙中間,用真空烤箱於80℃乾燥0.5-2小時。
(4) 用下列兩種溶液之一進行預雜交，時間為1-2小時。若於42℃進行,應採用: 50%甲醯胺，5×SSPE，2×Denhardt's試劑，0.1% SDS；若於68℃進行,應採用:6×SSC，2×Denhardt's試劑，0.1% SDS，（注意：BLOTTO不能用於Northern雜交）。
(5) 在預雜交液中加入變性的放射性標記探針,如欲檢測低豐度mRNA,所用探針的量至少為0.1μg,其放射性比活度應大於2×108 cpm/分·μg,放在適宜的溫度條件下雜交16-24小時。
(6) 用1×SSC、0.1% SDS於室溫洗膜20分鍾,隨後用0.2×SSC、0.1% SDS於68℃洗膜3次,每次20分鍾。
(7) 用X光片(Kodak XAR-2或與之相當的產品)進行放射自顯影,附加增感屏於-70℃曝光24-48小時。
[注意]
(1)如果瓊脂糖濃度高於1%，或凝膠厚度大於0.5cm，或待分析的RNA大於2.5kb,需用0.05mol/LNaOH浸泡凝膠20分鍾,部分水解RNA並提高轉移效率。浸泡後用經DEPC處理的水淋洗凝膠,並用20×SSC浸泡凝膠45分鍾。然後再轉移到濾膜上。
(2)在步驟(3)的操作中，如果濾膜上含有乙醛醯RNA,雜交前需用20mmol/L Tris·Cl (pH8.0)於65℃洗膜,以除去RNA上的乙二醛分子。
(3)RNA自凝膠轉移至尼龍膜所用方法，與RNA轉移至硝酸纖維素濾膜所用方法類似。
(4)含甲醛的凝膠在RNA轉移前需用經DEPC處理的水淋洗數次,以除去甲醛。當使用尼龍膜雜交時注意，有些帶正電荷的尼龍膜在鹼性溶液中具有固著核酸的能力，需用7.5mmol/LNaOH溶液洗脫瓊脂糖中的乙醛醯RNA，同時可部分水解RNA，並提高較長RNA分子(>2.3kb)轉移的速度和效率。此外，鹼可以除去mRNA分子的乙二醛加合物,免去固定後洗脫的步驟。乙醛醯RNA在鹼性條件下轉移至帶正電荷尼龍膜的操作也按DNA轉移的方法進行，但轉移緩沖液為7.5mmol/LNaOH，轉移結束後(4.5-6.0小時)，尼龍膜需用2×SSC、0.1%SDS淋洗片刻、於室溫晾乾。
(5)尼龍膜的不足之處是背景較高,用RNA探針時尤為嚴重。將濾膜長時間置於高濃度的鹼性溶液中,會導致雜交背景明顯升高,可通過提高預雜交和雜交步驟中有關阻斷試劑的量來予以解決。
(6)如用中性緩沖液進行RNA轉移,轉移結束後,將晾乾的尼龍膜夾在兩張濾紙中間,80℃干烤0.5-2小時,或者254nm波長的紫外線照射尼龍膜帶RNA的一面。後一種方法較為繁瑣,但卻優先使用,因為某些批號的帶正電荷的尼龍膜經此處理後,雜交信號可以增強。然而為獲得最佳效果,務必確保尼龍膜不被過度照射，適度照射可促進RNA上小部分鹼基與尼龍膜表面帶正電荷的胺基形成交聯結構,而過度照射卻使RNA上一部分胸腺嘧啶共價結合於尼龍膜表面,導致雜交信號減弱。 對分散在若干個瓊脂平板上的少數菌落（100-200）進行克隆篩選時，可採用本方法。將這些菌落歸並到一個瓊脂主平板以及已置於第二個瓊脂平板表面的一張硝酸纖維素濾膜上。經培養一段時間後，對菌落進行原位裂解。主平板應貯存於4℃直至得到篩選結果。
1、材料：待檢測的細菌平皿，已標記好的探針，硝酸纖維素濾膜等。
2、設備：恆溫烤箱，恆溫水浴，台式高速離心機等。
3、試劑：
(1)LB固體培養基。
(2)0.5mol/L NaOH。
(3)1mol/L Tris·Cl。
(4)1.5mol/L NaCl。
(5)0.5mol/L Tris·Cl。
(6)預洗液：5×SSC, 0.5%SDS, 1mmol/L EDTA (pH8.0)。
(7)預雜交液：50%甲醯胺，6×SSC（或6×SSPE），0.05×BLOTTO(甲醯胺可不用)。
(8)其餘試劑：與Southern雜交相同。
4、操作步驟：
1. 將少數菌落轉移到硝酸纖維素濾膜上：
(1) 在含有選擇性抗生素的瓊脂平板上放一張硝酸纖維素濾膜。
(2) 用無菌牙簽將各個菌落先轉移至濾膜上,再轉移至含有選擇性抗生素但未放濾膜的瓊脂主平板上。應按一定的格子進行劃線接種(或打點)。每菌落應分別劃線於兩個平板的相同位置上。最後，在濾膜和主平板上同時劃一個含有非重組質粒（如pBR322)的菌落。
(3) 倒置平板,於37℃培養至劃線的細菌菌落生長到0.5-1.0mm的寬度。
(4) 用已裝防水黑色繪圖墨水的注射器針頭穿透濾膜直至瓊脂,在3個以上的不對稱位置作標記。在主平板大致相同的位置上也作上標記。
(5) 用Parafilm膜封好主平板,倒置貯放於4℃,直至獲得雜交反應的結果。
(6) 裂解細菌,按本段下面所述方法,使釋放的DNA結合於硝酸纖維素濾膜。
2. 菌落的裂解及DNA結合於硝酸纖維素濾膜
(1) 在一張保鮮膜上製作一個裝有0.5mol/L NaOH的小窪(0.75ml),使菌落面朝上,將濾膜放到小窪上,展平保鮮膜,使濾膜均勻濕潤,讓濾膜留於原處2-3分鍾。
(2) 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜,用一張新的保鮮膜和新配製的0.5mol/L NaOH重復步驟(1)。
(3) 吸干濾膜,將濾膜轉移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鮮膜窪上。5分鍾後吸干濾膜, 再重復一次該步驟。
(4) 吸干濾膜,把它轉移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鮮膜小窪上5分鍾後吸干濾膜,轉移到一張乾的濾紙上,置於室溫20-30分鍾,使濾膜乾燥。
(5) 將濾膜夾在兩張乾的濾紙之間,在真空烤箱中於80℃干烤2小時,固定DNA。
(6) 將固定在膜上的DNA與32 P標記的探針雜交。
5.雜交
(1) 盛有2×SSC的塑料盤同，將干烤的濾膜飄浮在液面上,徹底浸濕5分鍾。
(2) 將濾膜轉到200ml預洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起,放於溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿,放到位於培養箱內的旋轉平台上。於50℃處理30分鍾。在這一步及以後的所有步驟中,應緩緩搖動濾膜,防止它們粘在一起。
(3) 用泡過預洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去細菌碎片,以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號的強度和清晰度。
(4) 將濾膜轉到盛有150ml預雜交液的玻璃中,在適宜溫度(即在水溶液中雜交時用68℃，而在50%甲醯胺中雜交時用42℃)下,預雜交1-2小時。
(5) 將32 P標記的雙鏈DNA探針於100℃加熱5分鍾,迅速置於冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間，盛濾膜的容器應蓋嚴，以防液體蒸發。
(6) 雜交結束後,去除雜交液,立即於室溫把濾膜放入大體積(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,輕輕振搖5分鍾，並將濾膜至少翻轉一次。重復洗 一次，同時應避免膜乾涸。
(7)68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次,每次1-1.5小時。此時已可進行放射自顯影。如背景很高或實驗要求嚴格的洗膜條件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液於68℃將濾膜浸泡60分鍾。
(8) 把濾膜放在紙巾上於室溫晾乾後,把濾膜(編號面朝上)放在一張保鮮膜上,並在保鮮膜上作幾個不對稱的標記,以使濾膜與放射性自顯影片位置對應。
(9) 用第二張保鮮膜蓋住濾膜。加X光片並加上增感屏於-70℃曝光12-16小時。
(10) 底片顯影後,在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標記陽性雜交信號的位置,同時在不對稱分布點的位置上作出標記。可從底片上取下透明紙,通過對比紙上的點與瓊脂上的點來鑒定陽性菌落。 斑點雜交是指將DNA或RNA樣品直接點在硝酸纖維素濾膜上,然後與核酸探針分子雜交，以顯示樣品中是否存在特異的DNA或RNA。同一種樣品經不同倍數的稀釋,還可以得到半定量的結果。所以它是一種簡便、快速、經濟的分析DNA或RNA的方法,在基因分析和基因診斷中經常用到,是研究基因表達的有力工具。但由於目的序列未與非目的序列分離,不能了解目的序列的長度。尤其當本底干擾較高時,難以區分目的序列信號和干擾信號。
1、材料：待分析的DNA或RNA樣品，已標記的探針。
2、設備：狹槽點樣器，真空泵，恆溫水浴，真空烤箱等。
3、試劑：
（1）100% 甲醯胺。
（2）甲醛(37%)。
（3） 20×SSC。
（4）0.1mol/L NaOH。
（5）硝酸纖維素濾膜。
（6）濾紙。
4、操作步驟：
(1) 10μl樣品與20μl 100%甲醯胺、 7μl 37%甲醛、2μl 20×SSC混合。混合置於68℃，15分鍾後置冰浴中。
(2) 用0.1mol/L NaOH清洗點樣器,再用無菌水充分沖洗。將一張經20×SSC浸潤的濾紙鋪在點樣器上,上面再鋪上一張經20×SSC浸潤1小時的硝酸纖維素濾膜，加蓋並夾緊，接通真空泵。
(3) 用10×SSC清洗各樣孔。在每一樣品中加兩倍體積的2×SSC,混合後加樣於孔中。外圍幾個孔中加2μl染料定位,緩慢抽吸。每孔用1ml 10×SSC清洗兩次。繼續抽吸5分鍾,吸干濾膜。
(4) 取出濾膜,夾在兩張濾紙中間, 80℃真空烘乾2小時。按上述Southern或Norhtern雜交所述的方法與放射性標記探針雜交。
[注意]
1、在放射自顯影時應注意濾膜必須乾燥，並覆蓋上保鮮膜，否則，濾膜將與X-光片粘在一起，使以後的操作困難。
2、在雜交過程中，整個濾膜應一直是濕潤的，不得乾涸。
第三節 雜交反應的條件及參數的優化
不同的反應條件對雜交結果的影響如下：
(1) 根據雜交液的體積確定雜交的時間：一般來說使用較小體積的雜交液比較好，因為在小體積溶液中，核酸重新配對的速度快、探針用量少，從而使濾膜上的DNA在反應中起主要作用。但在雜交中必須保證有足夠的雜交溶液覆蓋雜交膜。
(2) 根據所用的雜交溶液確定雜交的溫度：一般來說，雜交相為水溶液時,則在68℃雜交,而在50%甲醯胺溶液中時,則在42℃下雜交。
(3) 選用不同的封閉試劑：如Denhardt's試劑、肝素或一種由5%脫脂奶粉組成的BLOTTO, 這些試劑中需加入斷裂的鮭魚精子DNA或酵母DNA，並和SDS一起使用。與Denhardt's試劑相比, BLOTTO價格便宜,使用方便,同樣可獲得滿意的結果，但它不能用於RNA雜交。一般而言,尼龍膜用Denhardt's試劑比用BLOTTO能得到更高的信噪比。對硝酸纖維素濾膜而言,通常在預雜交溶液和雜交溶液中都含有封閉劑。但是對尼龍膜，經常從雜交溶液中省去封閉劑，因為高濃度的蛋白質會干擾探針和目的基因的退火。
(4)根據需要在雜交過程中選用不同的振盪方法和程度,許多雜交膜一起反應時,連續的輕微振盪可獲得較好的雜交結果。
(5) 在雜交過程中加入其他化合物, 如反應體系中加入10%硫酸葡聚糖或10% PEG, 雜交速度可增加約10倍。檢測稀有序列時常用該方法，但它們有時會導致本底較高，並由於溶液的粘稠性而使操作困難。因此，除非在濾膜上含有的目的DNA量很少,或放射性探針的量有限, 一般不用硫酸葡聚糖或PEG。
(6) 根據探針與被檢測目標之間的同源程度選擇清洗的程度,如具有很高的同源性可選用嚴緊型洗脫方式（高濃度SSC）, 反之則選用非嚴緊型洗脫方式（低濃度SSC）。洗脫通常在低於雜交體解鏈溫度12-20℃的條件下進行。解鏈溫度(melting temperature, Tm )是指在雙鏈DNA或RNA分子變性形成分開的單鏈時光吸收度增加的中點處溫度。通常富含G·C鹼基對的序列比富含A·T鹼基對序列的Tm 溫度高。有關Tm的計算方法，請參考第八章。
(7) 根據標記探針的濃度及其比活性,選擇不同的雜交條件及檢測方法。一般使用新的同位素可獲得較強的信號。
(8) 在水溶液中雜交時,用6×SSC或6×SSPE溶液的效果都一樣。但在甲醯胺溶液中雜交時,應該用具有更強緩沖能力的6×SSPE。
上述這些條件的改變，對雜交的結果有不同的影響，應根據研究的具體情況，選用適當的方法。

㈥ 分子雜交有什麼分法

通過鹼基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成並不要求兩條單鏈的鹼基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的二條單鏈之間進行。由於DNA一般都以雙鏈形式存在，因此在進行分子雜交時，應先將雙鏈DNA分子解聚成為單鏈，這一過程稱為變性，一般通過加熱或提高pH值來實現。使單鏈聚合雙鏈的過程稱為退火或復性。用分子雜交進行定性或定量分析的最有效方法是將一種核酸單鏈用同位素或非同位素標記成為探針，再與另一種核酸單鏈進行分子雜交。

核酸雜交技術基本上是Hall等1961年的工作開始的，探針與靶序列在溶液中雜交，通過平衡密度梯度離心分離雜交體。該法很慢、費力且不精確，但它開拓了核酸雜交技術的研究。Bolton等1962年設計了第一種簡單的固相雜交方法，稱為DNA-瓊脂技術。變性DNA固定在瓊脂中，DNA不能復性，但能與其它互補核酸序列雜交。典型的反應是用放射性標記的短DAN或RNA分子與膠中DNA雜交過夜，然後將膠置於柱中進行漂洗，去除游離探針，在高溫、低鹽條件下將結合的探針洗脫，洗脫液的放射性與結合的探針量呈正比。該法尤其適用於過量探針的飽和雜交實驗。60年代末，Britten等設計了另一種分析細胞基因組的方法。該法是研究液相中DNA的復性以比較不同來源核酸的復雜度，典型的方法是：從不同生物體（細菌、酵母、魚和哺乳動物等）內分離DNA，用水壓器剪切成長約450核苷酸（nt）的片段。剪切的DNA液（含0.12mol/L磷酸鹽緩沖液或0.18mol/L Na+），經煮沸使dsDNA熱變性成 ssDNA。然後冷至約60℃，在此溫度孵育過程中，測定溶液一定時間內的UV260nm的吸光度（減色效應）來監測互補鏈的復性程度。通常該實驗可比較不同來源生物DNA的復性速率，並可建立序列復雜度與動力學復雜度間的關系。

60年代中期Nygaard 等的研究為應用標記DNA或RNA探針檢測固定在硝酸纖維素（NC）膜上的DNA序列奠定了基礎。如Brown等應用這一技術評估了爪蟾rRNA基因的拷貝數。RNA在代謝過程中被3H尿嘧啶標記，並在過量的情況下與膜上固定的基因組DNA雜交，繼而用RNase處理，消化非特異性結合的RNA。漂洗後計數以測定雜交探針的量。通過計算與已知量DNA雜交的RNA量即可評估rRNA基因數。由於當時缺乏特異探針，這種方法不能用於研究其它特異基因的表達，這些早期過量探針膜雜交試驗實際上是現代膜雜交實驗的基礎。

進入70年代早期，許多重要的發展促進了核酸雜交技術的進展。例如，對特異基因轉錄產物的分析和對動力學雜交實驗又有興趣。固相化的Poly U –Sepharose和寡（dT）-纖維素使人們能從總RNA中分離Poly A+ RNA。用mRNA的經純化技術可從網織紅細胞總RNA中制備α-和β-珠蛋白mRNA混合物。這些珠蛋白mRNA首次被用於合成特異的探針以分析珠蛋白基因的表達。由於制備cDNA探針很繁瑣，所獲得cDNA的長度和純度也不穩定。所以尋求新的探針來源是使分子雜交技術進一步推廣的基礎。

70年代末期到80年代早期，分子生物學技術有了突破性進展，限制性內切酶的發展和應用使分子克隆成為可能。各種載體系統的誕生，尤其是質粒和噬菌體DAN載體的構建，使特異性DNA探針的來源變得十分豐富。人們可以從基因組DNA文庫和cDNA文庫中獲得特定基因克隆，只需培養細菌，便可提取大量的探針DNA。迄今為止，已克隆和定性了許多特異DNA探針。

由於固相化學技術和核酸自動合成儀的誕生，現在可常規制備18～100個鹼基的寡核苷酸探針。應用限制酶和Southern印跡技術，用數微克DNA就可分析特異基因。特異DNA或RNA序列的量和大小均可用Southern印跡和Northern印跡來測定 ，與以前的技術相比，大大提高了雜交水平和可信度。

盡管取得了上述重大進展，但分子雜交技術在臨床實用中仍存在不少問題，必須提高檢測單拷貝基因的敏感性，用非放射性物質代替放射性同位素標記探針以及簡化實驗操作和縮短雜交時間，這樣，就需要在以下三方面著手研究：第一，完善非放射性標記探針；第二，靶序列和探針的擴增以及信號的放大；第三，發展簡單的雜交方式，只有這樣，才能使DNA探針實驗做到簡便、快速、低廉和安全。

㈦ 什麼叫雜交常用的雜交方法有哪些

兩個或兩個以上不同品種之間進行交配，就叫做雜交。雜交的生物學特性表現在兩個方面。 第一，家兔在雜交的情況下，後代的生活力將會提高，表現出明顯的雜交優勢，具有高度的生活力，強大的適應性，堅實的體質，迅速生長的能力，良好的飼料利用率。 第二，雜交不僅可以將兩個品種的特性結合在一起，同時還可以引起各種新品質的產生，可作為選擇和培育新品種的材料。雜交種由於遺傳性很不穩定，所以在自群繁育時，常產生各種各樣性狀不同的後代，即分離現象。 因雜交有明顯的優勢出現，所以在生產中經常運用，因此就把這種利用式的雜交方法稱為生產性雜交。生產性雜交，又可分為經濟雜交和輪回雜交兩種形式。 (1)經濟雜交：利用兩個品種進行雜交，獲得一代雜種，利用其雜交優勢，增加商品生產的數量和提高其質量。 經濟雜交主要是利用第一代雜種，因此又叫利用雜交，其後代只作商品用而不適合種用。在育種工作中也有採用這種雜交方式的先例，只不過，因在Fj群繁育中，分離現象嚴重，要進行大量的淘汰，直至遺傳穩定為止。 (2)輪回雜交：和經濟雜交相似，其目的在丁獲得具有合乎兩個雜交品種之間的中間遺傳性。輪同雜交不限於櫨傅～代雜種，而可以利用少數原始雜交品種，在許多世代中獲得令人滿意的仔兔，並只在第一次雜交時才需要育成品種的母兔，而在以後的各世代中，則利用雜種母兔，只需要育成品種的公兔就行了。 此種雜交方式，可由兩個、三個或更多的品種進行輪流雜交，但每進行一個循環之後，要更換使用該品種的另一隻公兔 改造雜交：又叫吸收雜交或級進雜交(圖4)。在當地品種不能滿足人們要求的情況下，同時也無法用另外一個較好的品種來完全代替它，就採用這種雜交方法。在改造過程中，由兩個品種獲得雜交種，並使這些雜交種在連續的世代內與改良品種的公兔逐代雜交(每隻改良品種公兔，不準在 下一代改良中重復使用)，使當地被改良品種的血緣成分越來越少，改良品種的血緣成分越來越多，成為高血種(接近於純種)。 育成雜交：又叫創造雜交。由兩個或兩個以上的品種，一創造出一個嶄新的品種，使它既具有原始雜交品種的全部優良品質(即雙親共同的優點)，又具有不同於雙親的新品質。利用兩個品種進行雜交的叫簡單的育成雜交，兩個以上品種進行雜交的叫復雜的育成雜交。 育成雜交在某些方面與改造雜交很相似，但實際上是有很大區別的。改造雜交只要被改良品種吸收改良品種的優良品質即可，而育成雜交則需要獲得新品質的產品，而現有的品種均不能滿足要求，或者某些培育品種雖能滿足要求，卻不能適應當地的自然條件，只有通過創造新類型這一途徑(圖5)。 引入雜交：也叫導入雜交(圖6)。引入改良品種與被改良品種，通常只雜交一次就夠了，然後從第一代雜種中選出最好的公兔與被改良的母兔回交，而雜交的母兔與被改良品種最好的公兔回交，然後將它們的後代進行自群繁育。 引入雜交應在下列情況下採用： ①當某一新品種大體上令人滿意，不需要根本改造，而僅在生產力方面，要求保持其原有的優良品質的基礎上略加改善。 ②當地自然條件和經濟條件，遠不能符合改良品種的要求，不可用改造雜交獲得高血種時，再採用此法。

㈧ 請問AaBbCc與AaBbCC雜交，配子間結合的方式有32種，是怎麼算出來的

首先你要數一下配子的組合方式，
（1）AaBbCc 的配子有八種組合方式ABC ABc
Abc AbC aBC aBc abc abC
（2） AaBbCC的配子有四種 ABC AbC aBC abC
(3)組合方式用乘法。8*4=32中組合方式。
希望能幫到你！

㈨ 如何計算三對等位基因的雜交後代

雜交的題目一般有兩種方法：
1.如果你不熟悉的話就用網格法，就是例舉法，畫個格子全部寫出來，然後自己數……
2.稍稍熟悉了就可以這樣做：
1.Aa基因中，自交子一代與親本相同的佔1/2；Bb基因中，自交子一代與親本相同的佔1/2；Cc基因中，自交子一代與親本相同的佔1/2：故子代與親代相同的概率為(1/2)*(1/2)*(1/2)=1/8,不相同的概率為1-1/8=7/8。
2.F2中Pp概率為1/2,PP概率為1/4，F3中PP概率=(1/2)*(1/4)+(1/4)=3/8,同理，F3中RR、AA概率均為3/8，而F2代P表現型的概率為3/4，即為2倍，故F2群體至少應選表型為P-R-A-的個體=2*2*2*10=80

㈩ AaBbCc與AaBbCC雜交過程中，配子間的結合方式有多少種怎麼算

AaBbCc產生2×2×2＝8種配子,AaBbCC產生4種配子 ，所以一共有4×8＝32種結合方式