公共浴室的嗜肺军团菌检测方法

A. 嗜肺军团菌的微生物检查

一般取下呼吸道分泌物、肺活检组织或胸前积液等标本进行细菌学检查。 用BCYE培养基分离细菌，再根据肺炎特性、菌落特征、生化反应作出鉴定，但往往结果出现较晚。 可将标本用一只荧光标记抗体进行直接荧光实验，既特异又可做出快速诊断。 可用ELISA、RIA及乳胶凝集等试验检测标本中该菌特异性抗原或用PCR技术检查该菌核酸进行快速诊断。

B. 公共场所集中空调通风系统卫生规范的附录

冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌检验方法
本附录规定了集中空调通风系统冷却水、冷凝水及其形成的沉积物、软泥等样品中嗜肺军团菌的检验方法。
A1原理
待测水样经过滤膜或离心浓缩后，一部分样品经酸处理与热处理，以减少杂菌生长，一部分样品不作处理。将上述处理与未处理样品分别接种BCYE琼脂平板并进行培养，生成典型菌落并经生化培养和血清学实验鉴定确认则判定为嗜肺军团菌。
A2主要仪器设备
A2.1平皿：90mm
A2.2培养箱：35~37℃
A2.3紫外灯：波长360±2nm
A2.4滤膜滤器
A2.5滤膜：孔径0.22～0.45µm
A2.6蠕动泵
A2.7离心机
A2.8涡旋振荡器
A2.9普通光学显微镜、荧光显微镜、体式镜
A2.10水浴箱
A3采样
A3.1采样容器：可选择玻璃瓶或聚乙烯瓶，沉积物与软泥需用广口瓶，容器均需螺口或磨口，用前灭菌。
A3.2采样量：每个采样点依无菌操作取水样（或沉积物、软泥等样品）约200ml。
A3.3中和：经氯或臭氧等消毒的样品，采样容器灭菌前加入硫代硫酸钠溶液以中和样品中的氧化物。
A3.4样品运输与贮存：样品最好2天内送达实验室，不必冷冻，但要避光和防止受热，室温下贮存不得超过15天。
A4方法与步骤
A4.1样品处理
A4.1.1沉淀或离心：如有杂质可静置沉淀或1000r/min离心1min去除。
A4.1.2过滤：将经沉淀或离心的样品通过孔径0.22～0.45µm滤膜过滤，取下滤膜置于15ml灭菌水中，充分洗脱，备用。
A4.1.3热处理：取1ml洗脱样品置50℃水浴加热30min。
A4.1.4酸处理：取5ml洗脱样品，调pH至2.2，轻轻摇匀，放置5min。
A4.2接种与培养：取A4.1.2洗脱样品、A4.1.3热处理样品及A4.1.4酸处理样品各0.1ml，分别接种GVPC平板。将接种平板静置于CO2培养箱中，温度为35~37℃，CO2浓度为2.5%。无CO2培养箱可采用烛缸培养法。观察到有培养物生成时，反转平板，孵育10天，注意保湿。
A4.3观察结果：军团菌生长缓慢，易被其它菌掩盖，需每天在体式镜上观察。军团菌的菌落颜色多样，通常呈白色、灰色、蓝色或紫色，也能显深褐色、灰绿色、深红色；菌落整齐，表面光滑，呈典型毛玻璃状，在紫外灯下，有荧光。
A4.4菌落验证：从每一个平皿上挑取2个可疑菌落，接种BCYE和L－半光氨酸缺失的BCYE琼脂平板，35~37℃培养2天，凡在BCYE琼脂平板上生长而在L－半光氨酸缺失的BCYE琼脂平板不生长的则为军团菌菌落。
A4.5嗜肺军团菌型别的确定：应进行生化培养与血清学实验确定嗜肺军团菌。生化培养：氧化酶（－/弱+），硝酸盐还原－，尿素酶－，明胶液化+，水解马尿酸。血清学实验：用嗜肺军团菌诊断血清进行分型。 新风量检测方法
本附录规定了集中空调通风系统新风量的检测方法——风管法，即直接在新风管上测定新风量。
B1原理
在集中空调通风系统处于正常运行或规定的工况条件下，通过测量新风管某一断面的面积及该断面的平均风速，计算出该断面的新风量。如果一套系统有多个新风管，每个新风管均要测定风量，全部新风管风量之和即为该套系统的总新风量（立方米/小时），根据系统服务区域内的人数，便可得出新风量结果（立方米/人·小时）。
B2主要仪器
B2.1皮托管法
B2.1.1标准皮托管：=0.99±0.01，或S型皮托管=0.84±0.01。
B2.1.2微压计：精确度应不低于2%，最小读数应不大于1 Pa。
B2.1.3水银玻璃温度计或电阻温度计：最小读数应不大于1°C。
B2.2风速计法
B2.2.1热电风速仪：最小读数应不大于0.1m/s。
B2.2.2水银玻璃温度计或电阻温度计：最小读数应不大于1°C。
B3检测断面和测点
B3.1检测断面应选在气流平稳的直管段，避开弯头和断面急剧变化的部位。
B3.2测点位置和数量
B3.2.1圆形风管：将风管分成适当数量的等面积同心环，测点选在各环面积中心线与垂直的两条直径线的交点上，同心环数及测点数的确定见表B1。直径小于0.3米、流速分布比较均匀的风管，可取风管中心一点作为测点。气流分布对称和比较均匀的风管，可只取一个方向的测点进行检测。
表B1圆形风管的环数及测点数 风管直径（米） 环数（个） 测点数（两个方向共计） ≤1 1~2 4~8 >1~2 2~3 8~12 >2~3 3~4 12~16 B3.2.2矩形风管：将风管断面分成适当数量的等面积小块，各块中心即为测点。等面积小块的数量和测点数的确定见表B2。
表B2矩形风管的分块及测点数 风管断面面积（m） 等面积小块数（个） 测点数（个） ≤1 2×2 4 >1~4 3×3 9 >4~9 3×4 12 >9~16 4×4 16 B4检测步骤
B4.1风管截面面积测量
测定风管检测断面面积（F），分环或分块确定检测点。
B4.2皮托管法测定风速与风量
B4.2.1准备工作：检查微压计显示是否正常，微压计与皮托管连接是否漏气。
B4.2.2动压（Pd）的测量：将皮托管全压出口与微压计正压端连接，静压管出口与微压计负压端连接。将皮托管插入风管内，在各测点上使皮托管的全压测孔正对着气流方向，偏差不得超过10°，测出各点动压。重复测量一次，取平均值。
B4.2.3新风温度（t）的测量：一般情况下可在风管中心的一点测量。将水银玻璃温度计或电阻温度计插入风管中心测点处，封闭测孔，待温度稳定后读数。
B4.2.4新风量（Q）的计算：新风管某一断面的新风量按下式计算。
B4.3风速计法测定风速与风量
当风管内的动压值小于4 Pa时，可用热电风速仪测量风速。
B4.3.1准备工作：调节风速仪的零点与满度。
B4.3.2风管内平均风速（）的测定：将风速仪放入风管内，测定各测点风速，以全部测点风速算术平均值作为检测结果。
B4.3.3新风量（Q）的计算：新风管某一断面的新风量按下式计算。
式中：Q—新风量(m/h)
F—风管截面面积(m)
—风管中空气的平均风速(m/s) 送风中可吸入颗粒物检测方法
本附录规定了集中空调通风系统送风中可吸入颗粒物（PM10）浓度的检测方法。
C1仪器
C1.1PM10检测仪器为便携式直读仪器。
C1.1.1检测仪器颗粒物捕集特性应满足Da50=10±0.5mm，sg=1.5±0.1的要求。
Da50—仪器捕集效率为50%时所对应的颗粒物空气动力学直径
sg—仪器捕集效率的几何标准差
C1.1.2检测仪器测定的重现性误差：平均相对标准差小于7%。
C1.1.3检测仪器与称重法比较，总不确定度（ROU）不应大于25%。
ROU=∣b∣+2∣MVC∣
式中：b —重量法与仪器法配对测定PM10结果相对误差的算术平均值
MVC —仪器法测定PM10结果之间相对误差的几何平均值
C1.1.4仪器测定范围0.01~10mg/m。
C1.1.5检测仪器示值不是质量浓度的，须给出符合要求的质量浓度转换系数(K)值。
C1.2仪器使用前，应按仪器说明书要求进行检验与标定。
C2检测点布置
C2.1检测点在送风口散流器下风方向15~500px处，根据检测点数量采用对角线或梅花式均匀布置。
C2.2送风口面积小于0.1m的设置3个检测点，送风口面积在0.1m以上的设置5个检测点。
C3检测时间与频次
C3.1检测应在集中空调通风系统正常运转条件下进行。
C3.2每个检测点检测3次。
C3.3每个数据测定时间根据送风中PM10浓度、仪器灵敏度、仪器测定范围确定。
C4检测数据处理
C4.1对于非质量浓度示值的测定值，按仪器说明书要求将每次检测示值转换为质量浓度。
C=R´K
式中：C —质量浓度，mg/m
R —仪器有效示值（扣除本底值、基底值等后的示值）
K —仪器的质量浓度转换系数
C4.2送风口送风中PM10浓度的计算
第k个送风口的送风中PM10浓度（Cak）按下式计算：
式中：Cij–第j个测点、第i次检测值；
n –测点个数。
C4.3送风中PM10浓度的计算
一个系统(a)的送风中PM10浓度（Ca）按该系统全部检测的送风口PM10浓度（Cak）的算术平均值给出。 送风中微生物检验方法
本附录规定了集中空调通风系统送风中细菌总数、真菌总数和b-溶血性链球菌的检验方法。
D1送风中细菌总数
D1.1原理
用仪器法采集集中空调通风系统送风中的细菌，计数在营养琼脂培养基上经35~37℃、48小时培养所形成的菌落数，以每立方米空气中菌落形成单位（cfu/m）报告。
D1.2方法与要求
D1.2.1采样点：一般设在距送风口下风方向15~500px处。
D1.2.2采样环境条件：采样时集中空调通风系统必须在正常运转条件下，并关闭门窗1小时以上，尽量减少人员活动幅度与频率，记录室内人员数量、温湿度与天气状况等。
D1.2.3采样方法
以无菌操作，使用六级筛孔空气撞击式采样器，以空气流量为28.3L/min，在采样点采集5-15min。
D1.3培养
D1.3.1营养琼脂培养基
成分：蛋白胨10g
氯化钠5g
肉膏5g
琼脂20g
蒸馏水1000ml
制法：将蛋白胨、氯化钠、肉膏溶于蒸馏水中，校正pH值为7.2～7.6，加入琼脂，121℃20min灭菌备用。
D1.3.2方法：将采集细菌后的营养琼脂平皿置35~37℃培养48小时，计数菌落数，记录结果并换算成cfu/m。
D2送风中真菌总数
D2.1原理
用仪器法采集集中空调通风系统送风中的真菌，计数在沙氏琼脂培养基上经28℃、5～7天培养所形成的菌落数，以每立方米空气中菌落形成单位（cfu/m）报告。
D2.2方法与要求
D2.2.1采样点与D1.2.1款要求相同。
D2.2.2采样环境条件：采样时集中空调通风系统必须在正常运转条件下，并关闭门窗1小时以上，尽量减少人员活动幅度与频率，记录室内装修状况、人员数量、温湿度与天气状况等。
D2.2.3采样方法同D1.2.3
D2.3培养
D2.3.1沙氏（Sabourand’s agar）琼脂培养基
成分：蛋白胨10g
葡萄糖40g
琼脂20g
蒸馏水1,000ml
制法：将蛋白胨、葡萄糖溶于蒸馏水中，校正pH值为5.5～6.0，加入琼脂，115℃15min灭菌备用。
D2.3.2方法：将采集真菌后的沙氏琼脂培养基平皿置28℃培养5~7天，逐日观察并于第7天记录结果。若真菌数量过多可于第5天计数结果，并记录培养时间，换算成cfu/m。
D3送风中b-溶血性链球菌
D3.1原理
用仪器法采集集中空调通风系统送风中的b-溶血性链球菌，经35～37℃，24～48小时培养，在血平皿平板上形成典型菌落的为b-溶血性链球菌。以每立方米空气中菌落形成单位（cfu/m）报告。
D3.2方法与要求
D3.2.1采样点与D1.2.1款要求相同。
D3.2.2采样环境条件：采样时集中空调通风系统必须在正常运转条件下，并关闭门窗1小时以上，尽量减少人员活动幅度与频率，记录室内人员数量。
D3.3培养
D3.3.1血琼脂平板
成分：蛋白胨10g
氯化钠5g
肉膏5g
琼脂20g
脱纤维羊血5~10 ml
蒸馏水1,000ml
制法：将蛋白胨、氯化钠、肉膏加热溶化于蒸馏水中，校正pH值为7.4~7.6，加入琼脂，121℃20min灭菌。待冷却至50℃左右，以无菌操作加入脱纤维羊血，摇匀倾皿。
D3.3.2方法：采样后的血琼脂平板在35～37℃下培养24～48h。
D3.4结果观察
培养后，在血平皿平板上形成呈灰白色，表面突起直径0.5~0.7mm的细小菌落，菌落透明或半透明，表面光滑有乳光；镜检为革蓝氏阳性无芽孢球菌，圆形或卵圆形，呈链状排列（视培养与操作条件影响链可短可长4~8个细胞至几十个细胞）；菌落周围有明显的2～4mm界限分明、完全透明的无色溶血环。符合上述特征的菌落为b-溶血性链球菌。 空气净化消毒装置阻力检验方法
本附录规定了集中空调通风系统使用的空气净化消毒装置阻力的实验室检验方法。
E1原理
空气净化消毒装置在实验室空气动力学实验台的条件（按照集中空调通风系统正常运行条件将空气动力学实验台调整到相应的风速）下，分别测定装置入口处空气的全压（Pti）或静压（Psi）和出口处空气的全压（Pt0）或静压（Ps0），按下式得出装置的阻力（△P）。
当空气净化消毒装置前后风道直径相同时：
式中：装置前检测断面空气平均静压，Pa；
装置后检测断面空气平均静压，Pa；
△h —装置前测定截面到装置入口及装置出口到测定后截面的管道阻力之和，Pa。
E2设备及仪器
E2.1空气动力学实验台。
E2.2标准皮托管：系数0.99±0.01。
E2.3倾斜式微压计：最小读数应不大于1Pa。
E3方法
E3.1静压的测定：将皮托管的静压出口与微压计负压端连接，微压计正压端与大气连通；将皮托管插入风管内，皮托管的全压测孔朝向气流方向，读出静压值。
E3.2静压的计算：将静压测定值代入上式可得出装置的阻力。 空气净化消毒装置颗粒物净化效率检验方法
本附录规定了集中空调通风系统使用的空气净化消毒装置颗粒物一次通过净化效率和连续运转条件下颗粒物净化效率的实验室检验方法。
F1颗粒物一次通过净化效率
F1.1原理
空气净化消毒装置在实验室空气动力学实验台条件下，在空气净化消毒装置前段发生一定浓度的颗粒物，分别测定装置入口处管道空气中PM10颗粒物浓度（C1）和出口处管道空气中PM10颗粒物浓度（C2），按下式得出装置的颗粒物一次净化效率（hP1）。
hP1=[（C1-C2）/C1]´100%
F1.2设备及仪器
F1.2.1空气动力实验台：风速范围1~8m/s；
风速稳定性±10%设定值；
颗粒物浓度范围0.15~1.5mg/m；
浓度稳定性±10%。
F1.2.2重量法检验仪器：
PM10颗粒物采样器=10±0.5mm,sg=1.5±0.12台；
流量控制箱Q=20~60 L/min2台；
采气泵Q=50~100 L/min2台。
F1.2.3直读式检验仪器：
PM10颗粒物测定仪=10±0.5mm,sg=1.5±0.1,
精度0.01mg/m2台。
F1.3步骤
F1.3.1调整实验台的风速，使通过空气净化消毒装置的气流速度满足检验要求。
F1.3.2确定颗粒物等动力采样条件。
F1.3.3利用颗粒物发生器在空气净化消毒装置前段发生2~6微米粒径的单分散相标准粒子，其颗粒物浓度在3~10倍标准值范围内。
F1.3.4根据颗粒物浓度与空气净化消毒装置原理，选择采用重量法或直读式仪器进行检测。
F1.3.5在检测断面的中心设置一个或多个检测点，重量法仪器或直读式仪器均应在该点取样。
F1.3.6使用重量法仪器检测时，要根据颗粒物浓度、天平感量和采气流量确定采样时间，采样时间原则上不应少于30分钟。
F1.3.7使用两台直读式颗粒物浓度测定仪检测时，两台测定仪的型号和性能应相同。
F1.3.8测定仪应在读数稳定后读取结果。
F1.3.9采用重量法采样或直读式测尘仪测定，均应采样或测定3次，取3次平均值作为检测断面浓度C1和C2。
F2连续运行条件下颗粒物净化效率
F2.1原理
空气净化消毒装置在空气动力学实验台条件下，使空气净化消毒装置在PM10颗粒物浓度0.5~1.5毫克/立方米的稳定环境中连续运行24小时后，分别测定装置入口处管道空气中PM10颗粒物浓度（Ct1）和出口处管道空气中PM10颗粒物浓度（Ct2），按下式得出此时装置的颗粒物净化效率（hPt）。
hPt=[（Ct1-Ct2）/Ct1]´100%
由下式得出装置颗粒物净化效率下降的百分数。
[（hp1-hpt）/hp1]´100%
F2.2设备及仪器
与颗粒物一次通过净化效率检测时使用的设备与仪器相同。
F2.3步骤
与颗粒物一次通过净化效率检测时的步骤相同。 空气净化消毒装置微生物净化消毒效果检验方法
本附录规定了集中空调通风系统使用的空气净化消毒装置微生物一次通过净化效率或消毒效果的检验方法。
G1原理
通过测定一定状态下空气中微生物数量在空气净化消毒装置前后的变化来计算净化或消毒效率，从而评价空气净化消毒装置的净化消毒效果。
G2实验器材
G2.1试验菌：空气中的自然菌。
G2.2采样器：六级筛孔空气撞击式采样器。
G2.3磷酸盐缓冲液：0.03 mol/L，pH 7.2。
G2.4营养琼脂培养基
G2.5温度计
G2.6湿度计
G3实验方法
G3.1按空气净化消毒装置的技术要求将其安装在实验设备上。
G3.2分别将六级筛孔空气撞击式采样器置于空气净化消毒装置前后的中间位置，开启空气净化消毒装置，待运行稳定后，同时采集装置前后的空气，流量为28.3L/min，采样时间为5~15分钟。采样结束后，将平板放入培养箱中培养，同时将同批次试验用培养基置35~37℃培养箱中培养作为阴性对照，48小时记录结果。试验重复3次。
G3.3消除率的计算按下式进行：
G4评价规定
消除率均≥50%为净化合格，≥90%者为消毒合格。
阴性对照组应无菌生长；净化消毒前的菌量在500~2500cfu/m。 风管内表面积尘量检验方法
本附录规定了集中空调通风系统风管内表面积尘量的检验方法。
H1原理
采集风管内表面规定面积的全部积尘，以称重方法得出风管内表面单位面积的积尘量，表示风管清洗后的清洁程度或空调风管的污染程度。
H2器材
H2.1采样面积为50或100平方厘米。
H2.2无纺布或其它不易失重的材料。
H2.3密封袋。
H2.4采样工具或设备。
H2.5天平，精度0.0001g。
H2.6一次性塑料手套。
H3风管清洗后的清洁程度检验步骤
H3.1采样时间
采样应在风管清洗后的七日内进行。
H3.2采样点
在清洗后确定检测的每套集中空调通风系统的主风管中（如送风管、回风管、新风管）至少选择5个代表性采样点。
H3.3采样
H3.3.1将采样用的材料放在105°C恒温箱内干燥2小时然后放入干燥器内冷却4小时，或直接放入干燥器中存放24小时后，放入密封袋用天平称量出初重。
H3.3.2在风管的采样位置确定采样面积，并将采样面积内风管内壁上的残留灰尘全部取出。
H3.3.3将采样后的积尘样品放回原密封袋中保管，并进行编号。
H3.4实验室分析
H3.4.1将样品按H3.3.1处理、称量，得出终重。
H3.4.2将各采样点的积尘样品终重与初重之差作为各采样点的残留灰尘重量。
H3.4.3根据每个采样点残留灰尘重量和采样面积换算成每平方米风管内表面的残留灰尘量。
H3.5结果表示方法
取各个采样点残留灰尘量的平均值为风管清洁程度的判定指标，以g/m表示。
H3.6影像资料的制备
采用机器人对每个监测点所代表的风管区域内表面情况进行录像，并将其制作成录像带或光盘等影像资料。
H4风管污染程度的检验步骤
H4.1采样位置
在确定检测的每套集中空调通风系统的主风管上（如新风、送风和回风管）至少选择5个代表性采样点；如果无法在主风管采样时，可抽取全部送风口的5-10%且不少于5个作为采样点。
H4.2采样方法
H4.2.1在主风管采样时将维修孔、清洁孔打开或现场开孔。
H4.2.2在送风口采样时将风口拆下。
H4.2.3采样应在确定的面积内将风管表面全部积尘收集，并完好带出风管。
H4.3其它
风管污染程度检验中风管积尘量的检验器材、检验分析方法与风管清洗后的清洁程度检验相同。 风管内表面微生物检验方法
本附录规定了集中空调通风系统风管内表面细菌总数和真菌总数的检验方法。
I1采样
I1.1采样点：数量和分布同附录H 3.2。
I1.2采样面积：每一点采样面积应为1250px。
I1.3采样方法：空调风管内表面积尘较多时用刮拭法采样，积尘较少不适宜刮拭法采样时用擦拭法采样。整个采样过程应无菌操作。为避免人工采样对采样环境的影响，宜采用机器人采样。
I2样品检测
刮拭法：将采集的积尘样品无菌操作称取1g，加入到0.01% Tween-80水溶液中，做10倍梯级稀释，取适宜稀释度1ml倾注法接种平皿。
擦拭法：将擦拭物无菌操作加入到0.01% Tween-80水溶液中，做10倍梯级稀释，取适宜稀释度1ml倾注法接种平皿。
I3培养与计数
细菌和真菌培养与计数方法见附录D。

C. 军团菌的鉴定方法

1. 细菌培养法
军团菌为革兰氏阴性杆菌，专性需氧，胞内寄生菌。军团菌最初是从以军团菌病人肺组织感染的豚鼠中分离出来的。这种方法虽然有较高的可靠性，但非常昂贵，而且费时费力，不久就被平板培养法所取代 。目前标准培养基为活性碳酵母浸膏琼脂平板，也称军团菌生长平板(BCYE)。接种在 BCYE 平板上的样品在温度为35-37ºC，培养10天，在浓度为2.5% CO2 的环境下培养更有利于军团菌的生长。军团菌的菌落通常呈白色、灰色、有荧光。军团菌在 BCYE 平板上生长而在平板和半光氨酸缺失 BCYE-Cys 平板上不生长。
2.血清学玻片凝集法
军团菌感染l周左右可检测出血清中军团菌特异性IgM抗体，2周左右可检测到特异性IgG抗体。
现已发现嗜肺军团菌有15个血清型。其中，嗜肺军团菌血清1型（Lp1）与人类疾病关系最密切，其次为血清4型（Lp4）和6型（Lp6）。
3.核酸扩增法
核酸扩增技术，即聚合酶链式反应（polymerase chainreaction，PCR），其基本原理是设计、合成两条寡核苷酸，作为引物，对应于待测病原微生物某一段特异性序列的两端，然后在体外模拟DNA体内复制的过程反复扩增，使靶序列放大上万倍甚至上百万倍而被检测出来。
常规PCR：鉴定标准是通过电泳来判断是否有扩增的核酸片段以及扩增产物的大小是否正确。
实时荧光PCR：通过对实时荧光PCR反应的每一个循环产物进行荧光信号的实时监测来判断分析。

D. 哪些地方必须要检测嗜肺军团菌 legionella pneumophila

社区人员聚集多的地方，长时间在中央空调调控下的场所，尤其是有大面积的肺炎肺部感染人员聚合的场所

E. 嗜肺军团菌经生化反应有各别不符合要求如何鉴定

革兰氏染色法：可以鉴定细菌是阴细菌还是阳细菌。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：
1.涂片固定。
2.草酸铵结晶紫染1分钟。
3.自来水冲洗。
4.加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5.水洗，用吸水纸吸去水分。
6.加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7.蕃红染色液（稀）染1分钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。

F. 对嗜肺军团菌检测有没有硬性规定

对这个检测，
目前为止还没有硬性规定的，

G. 制作盲样,将嗜肺军团菌接种到水中,需要培养吗

简单的说，是。



一、1976年美国费城退伍军人协会会员中曾爆发急性发热性呼吸道疾病,经研究,发现一种细菌命名为嗜肺军团菌.随后,许多有关细菌暂被列入这一属,且追溯研究发现早在1943年即有军团人员病的病例.现已提出了超过30种军团杆菌,至少19种是人类肺炎的病原.其中最常见病原体为嗜肺军团菌(占病例的85%~90%),其次是L.micdadei(占5%~10%),再次是L.bozemanii和L.moffii.此类细菌形态相似,具有共同的生化特征,引起类似疾病。

二、疾病的范围包括：(1)无症状血清变化；(2)自限性无肺炎的流感样病态,有时叫做庞提阿克热(Pontiac fever)；(3)军团人员病为最严重和最常见到的肺炎类型；(4)局限性,罕见的软组织感染。

三、军团病占需住院治疗的社区获得性肺炎的1%~8%,占致性医院内获得性肺炎的4%左右.大多数病例为散发性,多发生于夏末和秋初.人和人之间的传播尚未得到证实.当给水系统受到污染或形成气溶胶的病原体经空调系统冷凝器的蒸发气体,或污染的淋浴喷头传播时,嗜肺军团菌则暴发流行.军团病可发生于任何年龄,但大多数人都是中年男性.已确定的危险因素包括吸烟,滥用酒精和免疫抑制,特别是由皮质类固醇引起的免疫抑制。

四、军团菌是隐藏在空调制冷装置中的致病菌，随冷风吹出浮游在空气中，吸入人体后会出现上呼吸道感染及发热的症状，严重者可导致呼吸衰竭和肾衰竭。军团菌最早是由于部队室内密闭作业，导致群体发生上呼吸道感染而得名。军团病是一种非常严重的、有时可以致命的肺炎。军团病是由军团杆菌引起，这种细菌产生在自然环境中，在温水里及潮热的地方蔓延。人工供水系统有时也能为军团杆菌的大量繁殖提供生存环境。这些系统包括淋浴器、矿泉池、喷泉以及空调设备的冷却水塔。人们通常是由于呼吸了被军团杆菌污染的水源散发的水雾而传染上军团病的。

据估计，在美国每年都有国每年都有8000~18000人感染上军团病。有些军团病感染者所表现出来的症状比较温和，甚至根本就没有得病的迹象。军团病患者通常有发烧、畏寒及干咳或咳痰等表现。部分患者还有肌肉疼痛、头痛、疲劳、食欲不振及偶尔腹泻等症状。这种病的潜伏期约为的潜天。许多病例表明，出现症状需要5~6天的时间。军团病可以用红霉素等抗生素进行治疗，越早治疗效果越好。

军团病已知的首次爆发是在发是1976年美国费城，221人感染疾病，其中亡34人。由于大多的者都是军团成员，因此称为军团病或退伍军人症。该病的第二次大爆发是1985年在英国的斯塔福德医院。这次101个被感染者中有28人亡。

H. 公共场所空气传播性疾病应急预案

公共场所预防空气传播性疾病应急预案
为了做好使用集中空调通风系统的公共场所空气传播性疾病的预防和应急处理，确保一旦发生空气传播性疾病等异常情况时，能及时有效的采取控制措施，减少损害，根据《公共场所集中空调通风系统卫生管理办法》及有关卫生法律法规，制定本预案。
一 预案适用范围
在发生空气传播性疾病时使用集中空调通风系统的公共场所。
二 组织结构和工作职责
（一）组织结构
单位成立预防空气传播性疾病应急处理小组：
组长：由单位负责人任组长
成员：由卫生管理人员及各部门负责人组成
（二）应急处理小组的主要工作职责
当本地发生空气传播性疾病时，应急处理小组成员必须迅速了解疫情，及时提出应对方法，做出紧急避险措施，尽可能的控制疾病的发生流行。
三 预案启动
当空气传播性疾病在本地区暴发流行时，公共场所经营者应当按照卫生行政部门的要求启动预防空气传播性疾病的应急预案。
四 应急处理
发生空气传播性疾病时，管理人员及员工应镇静、不慌乱，及时了解疫情，视情况对集中空调通风系统采取继续运行、部分运行或停止运行等措施：
（一）有下列情形之一的，公共场所经营者应当立即对集中空调通风系统进行清洗和消毒，待其检测、评价合格后，方可运行：
1.冷却水、冷凝水中检出嗜肺军团菌；
2.空调送风中检出嗜肺军团菌、b-溶血性链球菌等致病微生物；
3.风管积尘中检出致病微生物；
4.风管内表面细菌总数每平方厘米大于100菌落形成单位；
5.风管内表面真菌总数每平方厘米大于100菌落形成单位；
6.风管内表面积尘量每平方米大于20克；
7.卫生学评价表明需要清洗和消毒的其它情况。
（二）当空气传播性疾病在本地区暴发流行时，公共场所经营者应当按照卫生行政部门的要求启动预防空气传播性疾病的应急预案。
符合下列要求的集中空调通风系统方可继续运行：
1.采用全新风方式运行的；
2.装有空气净化消毒装置，并保证该装置有效运行的；
3.风机盘管加新风的空调系统，能确保各房间独立通风的。
对不符合上述要求的集中空调通风系统应当立即停用，进行卫生学评价，并依照卫生学评价报告采取继续停用、部分运行或其它通风方式等措施。
（三）当空气传播性疾病在本地区暴发流行时，公共场所经营者应当每周对运行的集中空调通风系统下列设备或部件进行清洗、消毒或者更换。
1.开放式冷却塔；
2.过滤网、过滤器、净化器、风口；
3.空气处理机组；
4.表冷器、加热（湿）器、冷凝水盘等。
空调系统的冷凝水和冷却水以及更换下来的部件在处置前应进行消毒处理。
（四）集中空调通风系统导致或者可能导致空气传播性疾病时，公共场所经营者应当及时关闭所涉及区域的集中空调通风系统，并按照当地疾病预防控制机构的要求对公共场所及其集中空
调通风系统进行消毒处理。消毒处理的集中空调通风系统，经卫生学评价合格后方可重新启用。
（五） 配合卫生部门积极开展卫生健康教育，积极开展场所消毒、自然通风等，消除公共场所健康危害因素。
五 保障措施
（一）根据卫生监督机构要求及时启动本预案，应急处理小组立即投入工作。
（二） 落实各项卫生管理制度，加强各岗位的协调，提高应急反应能力。各岗位负责人须熟悉本预案要求，组织部门工作人员时常学习预案，定期进行演练，时刻做好应急准备。

I. 嗜肺军团菌的鉴别要点

您好

嗜肺军团菌是一种有鞭毛，革兰氏阴性，军团菌属多形态性的短小球杆菌。二名法 Legionella

pneumophilaBrenner DJ, Steigerwalt AG, McDade JE 1979

1976年美国费城退伍军人协会会员中曾爆发急性发热性呼吸道疾病，经

嗜肺军团菌

是尿素，同时，不可参加酵解反应。嗜肺军团菌无色，也非自身荧光。氧化酶与过氧化氢酶测试阳性。β-内酰胺酶阳性。

专性需氧，在自然界可长期存活，如在蒸馏水中可存活139天，自来水中可存活369天，对热和一般消毒剂敏感。菌落特征为灰白色，有光泽，湿润，圆形，凸起，并有特殊臭味。革兰氏染色不明显，多用镀银法或Giemsa法染色。[1]