⑴ 【求助/交流】目的基因与表达载体连接时有哪些要点
2.片段和载体酶且要完全，确定大小没问题 不过有些载体本身就很很难连接！ 建议在连接时，先加入载体和目的基因，85度热浴15min,除去残留的酶和未纯化干净的杂蛋白。然后再加入酶和BUFFER。 适当延长连接时间24小时以内都没问题的！ 如果还是不行，就试试对载体去磷酸化，每一步处理都要在结束后热变性，失活残留的酶，适当加大目的基因的量（10以内），连接温度也可以在4-16度内用PCR做个梯度！不过如果有平末端的，就不用做这个梯度了。dfdxhghg(站内联系TA)我们只做医学论文，所以更专业！我们全部的工作人员均来自医学院校和附属医院，全部拥有硕士以上学历，有丰富的论文写作经验。做医学论文，我们有比其他公司无法比拟的优势！很多论文公司的人员根本不懂医学，医学论文等专业知识上面很难沟通和探讨。
⑵ 目的基因片段与载体DNA连接的主要形式呢急…再次感谢！！！
1、黏性末端DNA的连接：单酶切黏性末端、双酶切黏性末端、不规则黏性末端
2、平末端DNA的连接：直接连接法、同聚物加尾法、衔接物连接法、DNA接头连接法、PCR法引入酶切位点的连接
1、限制性内切酶链接 2、TOPO克隆（一种克隆技术） 3、网关系统（门户系统） 4、平端连接
⑶ 常用的目的基因与载体的连接方法有哪些
目前已知有三种方法可以用来在体外连接DNA片段：
第一种方法是，用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；（人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶，来源于大肠杆菌，可用于连接粘性末端；T4DNA连接酶，来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率低。） 第二种方法是，用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来； 第三种方法是，先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。 粘性末端DNA片段的连接 DNA连接酶最突出的特点是，它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用，形成重组的DNA分子。 平末端DNA片段的连接 常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。
⑷ 常用的目的基因与载体的连接方法有哪些
目前已知有三种方法可以用来在体外连接DNA片段：
第一种方法是，用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；（人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶，来源于大肠杆菌，可用于连接粘性末端；T4DNA连接酶，来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率低。）
第二种方法是，用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来；
第三种方法是，先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。
粘性末端DNA片段的连接
DNA连接酶最突出的特点是，它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用，形成重组的DNA分子。
平末端DNA片段的连接
常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。
⑸ 能将目的基因与载体的链接方法说的详细一点吗谢谢！
载体一般用质粒，质粒是环状的DNA分子。用限制酶将目的基因切下来后，用同样的限制酶去切质粒，这样质粒就变成了一个带缺口的环状DNA，又因为质粒和目的基因是用同种限制酶切下来的，所以它们的黏性末端的碱基是相同的，在DNA连接酶的作用下，碱基互补配对，DNA连接酶连接的是脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，这样，目的基因就与载体连接在一起了。
⑹ 如何将目的基因与运载体连接起来形成重组dna分子
使用限制酶。谢谢采纳。
⑺ 如何将目的基因与已经构建好的载体拼接
设计引物，引物两端带有设计好的酶切位点，找个有目的基因的细胞，提了ran，然后把目的片段p出来，然后跑胶，试剂盒回收目的片段。把载体和目的片段用同样的双酶切，再跑胶，回收切开的载体和目的片段，连接吧。
⑻ 基因工程中，载体与载体连接物，目的基因与目的基因连接物，目的基因与载体连接物分别是指什么，满意的话
经过同一种限制性内切酶切割后会产生相同的粘性末端，所以目的基因可与目的基因连接，载体可与载体连接，也有目的基因和载体连接。
用限制性内切酶切了以后，让片段自己连接，就会出现三种连接方式，然后我们选择出来需要的重组片段
⑼ 目的基因与载体连接不上，为什么
如果只用一种限制酶有可能倒叙相连，而这样在筛选的时候会被认为没有插入目的基因
⑽ 要将目的基因与载体连接起来,在基因操作上应选用啥
相同的限制性核酸内切酶及DNA连接酶 前者在供体和受体上分别进行切割 使目的基因的两端与运载体有相同的粘性末端 DNA连接酶则将其连接
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