脂质过氧化研究方法

1. 我奶奶有糖尿病，求糖尿病的最佳疗法！！

希望这个能难你有所帮助：

SOD对糖尿病患者的治疗效果论证

一、糖尿病患者血清中SOD含量与血糖之间的关系

大量临床医学数据和糖尿病患者服用SOD含片后的血糖指标检测表明，提高糖尿病患者体内SOD含量，可以有效降低血糖，缓减糖尿病及其并发症导致的身体不适感。同时，糖尿病患者血清中SOD含量在很多情况作为降糖药对糖尿病患者是否有效的重要医学指标。

糖尿病患者服用降糖药或注射胰岛素以后，可在患者体内提高SOD的活性，降低血糖。可加强抗氧化、达到清除自由基作用，提高对氧自由基的清除率，阻止脂质过氧化产物对血管内皮细胞的损伤以及组织损伤，来达到降糖的治疗效果。

二、糖尿病患者血清中SOD含量与降糖药功效评估

【数据资料来源1】

为获得糖尿病患者体内SOD的活性变化情况，我们从科学文献数据库中收集了123个案例，所收集的医学案例数据表明，随着糖尿病患者血糖的升高，体内SOD含量逐渐降低，从临床数据上获得了提高患者体内SOD含量，能有效降低患者血糖的这样一个结论。

【数据来源】 检验医学与临床;2016年10月第13卷第19期

【临床资料】选取上海中医药大学附属曙光医院内分泌科和肾病科2014年1月至2015年12月123例II型糖尿病患者纳入II型糖尿病组,均符合2007年版《中国2型糖尿病防治指南》制定的诊断标准,并排除合并恶性肿瘤、血液系统疾病,其他急慢性肾脏疾病、肝功能不全等,并根据美国糖尿病协会(ADA)对UACR（清蛋白尿）不同程度的划分将123例II型糖尿病患者分为3组:正常清蛋白尿(轻微糖尿病)组(UACR<30mg/g)40例,微量清蛋白尿(中度糖尿病)组(UACR为30~<300mg/g)40例、大量清蛋白尿(严重糖尿病)组(UACR≥300mg/g)43例;同时以42例体检健康者为对照组,均无急慢性感染、肝肾功能不全糖尿病糖尿病等疾病。

【检测方法】所有研究对象均在清晨空腹状态下抽血检测。TBIL（总胆红素）采用重氮法检测,SOD（超氧化物歧化酶）采用胶乳邻苯三酚比色法检测。TNF-a（肿瘤坏死因子）采用化学发光法,通过 Immulite1000化学发光仪进行检测。

2. 滇橄榄的栽培技术

种子采收
余甘子一般4～6月开花，种子于11～12月成熟，果皮变红时就可采种，应选择生长迅速、成年健壮、抗性强、无病虫害的优良树作为采种树，果实采回后捣烂、搓洗净后阴干，用麻袋或布袋贮藏。
苗地选择
苗圃地应选择坡度在8度以下的半阳坡地或平地，土质疏松、土壤肥沃、透气良好、有灌溉条件、排水良好及交通方便的地方。育苗时，细致整地，做高床，苗床宽1m，长度依地形和管理方便为宜。床面要整平，土块要敲细，床面的熟土应集干一旁作营养土的配料。
种子处理
⑴催芽 选择排水良好、背阴的地方做沙床，用河沙作基质，用0.5%的高锰酸钾溶液消毒后，将余甘子种子按l:2的比例与湿沙混合拌匀后置入沙床内，摊平，再盖上一层湿沙，厚度以种子不裸露为宜，上面再盖一层草席，每天浇少量水保湿，进行催芽处理，至种子露白即可播种。
⑵播种 将经过催芽处理的余甘子种子均匀撒播在苗床内，播种后覆盖厚度为0.5cm左右的细土，最后盖上草席，浇透水。播种后应每天浇水1次，使苗床保持湿润。10～15d后，苗木开始出土，此时应逐步去掉草席；20d左右，苗木基本出齐，应及时移栽。
袋苗培育
⑴营养土配制及装袋 采用2份已腐熟的农家肥和3份腐殖质土，再加4份苗圃地的熟土和1份细沙混匀，或在苗圃地的熟土中加入3%～5%的普钙或l0%的农家肥拌匀，配制成营养土。然后，将营养土装入营养袋，营养袋规格一般为l8cm×20cm，厚度6丝以上，装满后按每行l0袋摆放在苗床上，四周用土埋好（埋土与营养袋齐平为宜）。
⑵移苗 苗高达5～6cm，2片子叶打开而真叶又未长时，是移栽的最佳时节。此时移栽成活率可达95%。移栽应选择阴天或晴天早晚进行。移栽前，应把苗床和营养袋浇湿；移栽时，小心取苗，尽量保持苗木根系的完好。移栽的方法是用削尖的小木棍在营养袋内戳一个圆孔，将苗木根系垂直植干圆孔内，深度以覆土至苗根部以上lcm为宜，用手指压实空隙，浇透水即可。
⑶点播 培育余甘子幼苗也可直接在营养袋内点播（但点播成活率只达90%）。将经过催芽处理后的种子点播于营养袋中，盖土厚度以1cm为宜，再用草席覆盖。点种后，应加强水分管理；20d后，苗木基本出齐；此后，应做好查缺补苗工作。
苗木管理
⑴移苗后管理 移植的幼苗要盖上遮荫网，等幼苗成活并长高达10～15cm时，方可撤去。
⑵查缺补苗 苗木移栽后，可能还有5%～10%的空袋率，应及时补齐，后补的苗木应加强水分管理，防止再次缺水死亡。
⑶除草 发现杂草及时拔除，以“除早、除小、除了”为原则。
⑷水肥管理 幼苗长定后，应视情况浇水，以保持苗地及袋土的湿润。整个幼苗期应施肥2～3次，可采用叶面喷施0.3%的尿素和磷酸二氢钾，也可采用0.6%复合肥液进行根外追肥。la后，苗高30～40cm，即可出圃造林。 果实含鞣质，其中有葡萄糖没食子鞣甙（glucogallin），没食子酸（gallic acid），并没食子酸（ellagic acid），鞣料云实精（corilagin），原诃子酸（terchebin），诃黎勒酸（chebulagic acid），诃子酸（chebulinic acid），诃子次酸（chebulic acid），3，6-二没食子酰葡萄糖（3，6-digalloylglucose），干果含粘酸（mucic acid）4%-9%。果皮含没食子酸，油柑酸（phyllemblic acid），余甘子酚（emblicol）。种子含固定油约26%，油中含亚麻酸（linolenic acid）8.8%，亚油酸（linoleic acid）44%，油酸（oleic acid）28.4 %，硬脂酸（stearic acid）2.2%，棕榈酸（palmitic acid）3.0%，肉豆蔻酸（myristic acid）1%等。
1.2 黄酮类化合物
余甘子果实中含有黄酮类化合物，1994 年日本学者用甲醇和水提取余甘子果实，从中得到槲皮素，山 奈 酚-3-O-葡 萄 糖 甙(Kaempferol-3-0-glucoside)，槲 皮 素-3-O-葡 萄 糖 甙 (Quercetin-3-0-glucoside)，无色飞燕草素leucodelphinidin。
1.3 生物碱类
1976年，Ram等从余甘子中分离出了生物碱zeatin.
1.4 萜、甾醇和苷类
1978年，Ram等从余甘子中分离出二萜类成分，giberellinA-1, giberellinA-3,giberellinA-4, giberellinA-7, giberellinA-9。2001年，Zhang YJ 等从余甘子根部分离出了三种没药烷型倍半萜类成分，phyllaemblic acid B， phyllaemblic acid C，phyllaemblicin D及苷类：2-羧甲基酚-1-O--D-吡喃葡萄糖苷（2-carboxylmethylphenol 1-0-beta-D-gluranoside）及2，6-二甲氧基-4-（2-羟乙基）酚-1-O--D-吡喃葡萄糖苷(2,6-dimethoxy-4-(2-hydroxyethyl)phenol 1-0-beta-D-gluranoside)。余甘子中还含有甾醇类化合物β-谷甾醇（β-sitosterol）。
1.5 维生素
余甘子果实中含维生素C，维生素B1，维生素B2 ,胡萝卜素，维生素A,维生素pp 等，尤其富含维生素C，其含量可达 0.6%～0.92%,春季果实含量最高，有时甚至可达 1.82%，该含量是苹果维C 含量的 160 倍，同时也是柑橘含量的100倍,仅次于水果维生素C 之王的刺梨 。
1.6 氨基酸
余甘子果实中含 17 种氨基酸，包括了人体所需的 8 种氨基酸，其氨基酸总含量达 185mg/100g，主要有谷氨酸，脯氨酸，天冬氨酸，丙氨酸 赖氨酸。
1.7 微量元素
余甘子果实中含有多种微量元素，其含量比苹果丰富，主要有硒、锌、钙、磷、铁、钾等。
1.8 脂肪酸
余甘子种子含脂肪酸26%，主要包括：亚麻酸，亚油酸，油酸，硬脂酸，棕榈酸，肉豆蔻酸等。

成分特点
滇橄榄含有大量的Vc、VP、碳水化合物、有机酸、单宁，还含有蛋白质、脂肪、维生素B1、B2、A，胡萝卜素、纤维素、果胶、生物碱和钙、磷、铁、钾、钠等。特别是维生素C的含量高达每百克果肉540～1714mg，更具价值的是所含Vc在高温下十分稳定，在加工中．以100℃4小时，8O℃8小时，60℃13小时的烘烤或日晒后．其维生素C仍保存7O%一93%。滇橄榄果实因含有17%以上的单宁，故酸涩味重，鲜食量十分有限，但通过加工，可以生产出不同的产品，可去除多余的酸涩味，并保留其甘甜的回味。
医学研究
国外学者对滇橄榄的研究认为．滇橄榄可治低血糖，有滤尿与降压作用，有治肝炎及抗放射线损伤的作用。我国医学界和科研部门经过反复试验和不断研究，证明滇橄榄具有明显的抗衰老作用；对强致癌物N-亚硝基化合物在动物及人体内的合成有明显的阻断作用，阻断率达90.11%以上。上海和福建两家医院用滇橄榄复方治疗乙型肝炎，总有效率达89.9% ，治愈率达46.6% 。上海华东医院运用滇橄榄汁治疗高血压和高血脂病，其有效率分别为82.4%和100%。
用连苯三酚自氧化法测定滇橄榄系列产品清除O2的活力，结果都比较高，尤以滇橄榄粉的活力最高，达25241u/g老年人饮用滇橄榄汁2个月后，血液中红细胞超氧化歧化酶（SOD）活力提高1.3倍，血浆中脂质过氧化物（LPO）含量下降11%，小鼠皮夫试验证明，滇橄榄中的有效物质能透过小鼠皮肤，清除皮肤内部的自由基，果蝇试验表明，可延长寿命。 2.1 抗艾滋病逆转录酶(HIV-1 RT)作用
对 HIV-1 RT的抑制作用可以预防艾滋病，1995年日本学者对41种埃及草药提取物测试抗HIV-IRT活性，在对余甘子的研究中，分离得到鞣质Putranjivain A对HIV-1RT有很强抑制作用，其ID50为3.9&micro;M。
2.2 防癌作用
余甘子果实提取物不论体内还是体外，均能够阻断强致癌物N-亚硝基化合物的合成，其阻断率在 90%以上，比同浓度的Vc 高 3～5 倍，表明余甘子具有防癌作用。在体外余甘子的酚酸类成分能抑制人癌细胞株erythromyeloid K562, B-lymphoid Raji, T-lymphoid Jurkat, erythroleukemic HEL.的增生。
2.3 抗诱变、抗致畸作用
余甘子水提物能明显减弱由重金属盐 Pb(NO3 )2和Al 2(SO4 )3.18H2O所引起的
小鼠骨髓细胞的细胞毒作用(400mg/Kg dry weight,P<0.001),水提物和Vc 有协同作用，共同饲养小鼠，可以降低有害物质氯化锌，间胺黄和乙酰类杀虫剂对小鼠骨髓细胞的全面破坏作用，可以抗镍、镉、铯等引起的诱变。
2.4 抗炎作用
余甘子能显着抑制大鼠琼脂性足跖肿胀和二甲苯所致小鼠耳缘肿胀，显着抑制组胺所致的毛细血管通透性增强和白细胞游出。表明余甘子有显着的抗炎和抗渗出作用。抗炎作用随剂量增大而增强。余甘子能显着抑制急性炎症的发展，改善和缓解炎性症状，对慢性增生性炎症作用不明显 。
2.5 降血脂及抗动脉粥样硬化作用
余甘子是一种较好的天然降脂药物，用于治疗糖尿病脂代谢紊乱所引起的高血脂有良好的效果，其疗效高于维生素E，对微血管病变和神经系统并发症也有一定的疗效。由其鲜果汁精制而成的安摩乐口服液与胶囊有降脂降压的作用，可治疗高脂血症及单纯性肥胖症，临床检测无毒副作用。
余甘子果汁可抗动脉粥样硬化作用，对实验性高胆固醇血症疗效最好。余甘子能使饲喂高胆固醇动物的血清胆固醇，甘油三脂，磷脂及LDL水平分别降低 80%，66%，77%及 90%，还可明显抑制主动脉内膜斑块的形成，并能加速胆固醇及磷脂从粪便中排泄，说明其降脂作用可能与干扰胆固醇的吸收有关。
2.6 抗氧化作用
脂质过氧化（Lpo）损伤与肿瘤、衰老、心脑血管病、自身免疫疾病、休克、炎症、辐射损伤等的发生发展密切相关，汕头大学学者参考Rieba HCB方法，建立Fe2+诱发脂蛋白PUFA 过氧化体系，用于评价余甘子果汁的AOA(抗氧
化性)，经检测表明余甘子有抗氧化作用。通过测定余甘子果汁粉对实验性高胆固醇血症家兔血脂、丙二醛水平、动脉粥样斑块形成及内皮素-1表达的影响，证明余甘子具有较强的抗脂质过氧化作用，能提高机体抗氧化能力，具有保护血管内皮功能的作用。
2.7 抗衰老作用
衰老的主要根源是自由基过多，而脂质过氧化物(LPO)含量增高，说明自由基反应增强；超氧化物岐化酶(SOD)有清除超氧自由基，保护细胞发挥其抗衰老作用。余甘子果实提取物能抑制连苯三酚和肾上腺素的自氧化作用，表明其中含有这一对人体有益的活性物质SOD，每克鲜果含SOD活力为482.14U。
用比较研究方法观察不同浓度余甘子对大、小鼠红细胞SOD、血清Lpo、Zn、Cu和体重量的影响，结果说明余甘子影响大、小鼠体内的自由基反应，降低Lpo含量，提高红细胞 SOD 活性及相关的Zn,Cu水平。临床研究表明余甘子使红细胞SOD活力明显增加，高于服用前(P<0.01)，上升率 100%，血浆中Lpo含量下降，下降率为 73%，表明余甘子可能具有延缓、拮抗衰老进程的作用。
2.8 保肝作用
余甘子的水提醇沉物对扑热息痛、硫代乙酰胺所致的急性肝损伤具有预防作用，对 D-半乳糖胺所致的急性肝损伤具有明显的保护作用，对四氯化碳引起的的慢性肝损伤具有保护肝细胞，减少肝损伤，抗肝纤维化作用。50%乙醇提取物余甘子能明显降低血清 SGPT，胆固醇和脂质体(P<0.005)，从而达到保肝效果。
2.9 对胃肠道的作用
2.9.1 抗溃疡作用
余甘子果实水提物的丁醇部分有抗溃疡作用。余甘子丁醇部分对消炎痛所致实验性胃粘膜损伤有明显的保护作用，能使消炎痛所致的小鼠的溃疡面胃粘膜分泌物及氨基己糖增多（P<0.001），其对胃粘膜的保护作用可能与其抗氧化作用有关。
2.9.2 抗腹泻作用
余甘果汁合剂对小儿腹泻具有良好的效果。其对部分病原菌有杀灭和抑制作用，尤其适用于小儿病毒性肠炎，对一般的细菌性肠炎有抗生素之效，治疗组和对照组对比有极显着意义（P<0.001），但对毒性较强的致病菌痢疾杆菌无效。因此，对一般的小儿腹泻用余甘子治疗颇为适宜。
2.10 免疫调节作用
2.10.1 对非特异性免疫功能的调节作用
余甘子能增强天然杀伤细胞的活性并有抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC）效应。余甘子能增强接种了DLA肿瘤三天后小鼠脾脏的天然杀伤细胞（NK）的活性，其效果在接种后3，5，7，9天尤为显着。其ADCC效应在用药后3，7，9，11，13天表现突出。可见，余甘子能增强肿瘤动物的NK 细胞或K 细胞的活性。
余甘子还能诱生人白细胞干扰素。采用细胞病毒抑制法测 IFN-X效价，对照观察余甘子促诱生人白细胞干扰素的作用，结果表明，不同含量余甘子液均有促诱生人白细胞干扰素的作用(P<0.05或0.01),含量为0.08g/ml 时，促诱生作用最强，提高率为45.9%，其强度比黄芪弱，比板蓝根略强。
2.10.2 对特异性免疫功能的增强作用
余甘子在体外对人体淋巴细胞无诱发DNA和染色体损伤作用，有提高细胞免疫和抑制细胞增殖的作用。余甘子在一定剂量范围内有促进人体细胞免疫功能的作用。细胞周期比率（尤其是第三周期比率）和增殖率指数反映了细胞有丝分裂的强弱，增殖能力的好坏。在一定剂量范围内，细胞周期比率（尤其是第三周期比率）和增殖率指数均随余甘子剂量增加而下降，并存在一定剂量-效应关系，说明余甘子对人体细胞的增殖能力有一定的抑制作用。
由此可见，余甘子能增强机体免疫功能，提高人体抗病能力。
2.11 解毒作用
余甘子有解金属毒作用。《本草纲目》载“李旬曰：为末点汤服，解金石毒。宗爽曰：黄金得余甘则体柔，亦物类相感相伏也，故能解金石之毒。”重金属离子能与人体内含巯基的酶类相结合而使其失去活性，致使人体代谢发生障碍而中毒。近代研究表明，余甘子对铜，镍，钙，锌，铯，亚铁等金属有对抗作用，可以排除体内铜、镍等有毒金属。
其对抗作用可能与余甘子内含有的维生素C及没食子酸，并没食子酸，鞣质等成分有关。维生素C 是一种广泛的抗癌，抗畸变，抗裂变的有效成分。同时也是一种抗氧化剂，可以抑制化学变异。并能使体内的氧化型谷胱甘肽（GSSG）还原成还原型的谷胱甘肽（GSH）。GSH可与重金属离子结合而排出体外。没食子酸，并没食子酸，鞣质等成分具有酚酸性，易与某些金属相结合而对该金属起到清除作用。
2.12 其他作用
2.12.1 余甘子有抗菌作用
余甘子果实先用80%醇提取，再用醚提取，以盐酸酸化处理后，对葡萄球菌，伤寒杆菌，副伤寒杆菌，大肠杆菌及痢疾杆菌均有抑制作用而对真菌无作用。
2.14 毒性
2.14.1 急性毒性：余甘子62.4g/kg，分4 次，24 小时内给完，观察7 天，除前3 天内有3 只小鼠活动减少有竖毛现象外，其余均无异常反应。
2.14.2 长期毒性：余甘子 3.6,7.2,10.8g/kg，灌胃大鼠，连续给药 6 天，肝肾功能无异常，表明余甘子连续给药对大鼠无任何明显的毒副反应。
其它用途
滇橄榄极喜光，耐干热瘠薄环境，萌芽力强，根系发达，可保持水土，可作产区荒山荒地酸性土造林的先锋树种。树姿优美，可作庭园风景树，亦可栽培为果树。叶晒干供枕芯用料。种子含油量16% ，供制肥皂。树皮、叶、幼果可提制栲胶。木材棕红褐色，坚硬，结构细致，有弹性，耐水湿，供农具和家具用材，又为优良的薪炭柴。

3. 怎么从基因表达水平看脂质过氧化

当人类基因体定序计划的重要里程碑完成之后，生命科学正式迈入了一个后基因体时代，基因芯片(microarray)的出现让研究人员得以宏观的视野来探讨分子机转。不过分析是相当复杂的学问，正因为基因芯片成千上万的信息使得分析数据量庞大，更需要应用到生物统计与生物信息相关软件的协助。要取得一完整的数据结果，除了前端的实验设计与操作的无暇外，如何以精确的分析取得可信数据，运筹帷幄于方寸之间，更是画龙点睛的关键。�0�2基因芯片的应用基因芯片可以同时针对生物体内数以千计的基因进行表现量分析，对于科学研究者而言，不论是细胞的生命周期、生化调控路径、蛋白质交互作用关系等等研究，或是药物研发中对于药物作用目标基因的筛选，到临床的疾病诊断预测，都为基因芯片可以发挥功用的范畴。�0�2基因表现图谱抓取了时间点当下所有的动态基因表现情形，将所有的探针所代表的基因与荧光强度转换成基本数据(rawdata)后，仿如尚未解密前的达文西密码，隐藏的奥秘由丝丝的线索串联绵延，有待专家抽丝剥茧，如剥洋葱般从外而内层层解析出数千数万数据下的隐晦含义。�0�2要获得有意义的分析结果，恐怕不能如泼墨画般洒脱随兴所致。从rawdata取得后，需要一连贯的分析流程(图一)，经过许多统计方法，才能条清理明的将rawdata整理出一初步的分析数据，当处理到取得实验组除以对照组的对数值后(log2ratio)，大约完成初步的统计工作，可进展到下一步的进阶分析阶段。

4. 脂肪检测的原理是什么实验操作流程

脂肪检测方法可用索式提取法：

一、索式提取法（经典方法）

1、原理：

样品经前处理后，放入圆筒滤纸内，将滤纸筒置于索式提取管中，利用乙醚或石油醚在水浴中加热回流，使样品中的脂肪进入溶剂中，回收溶剂后所得到的残留物，即为脂肪（粗脂肪）
采用这种方法测出游离态脂，此外还含有磷脂、色素、蜡状物、挥发油、糖脂等物质，所以用索氏提取法测得的脂肪为粗脂肪。

2、 适用范围与特点

索氏提取法适用于脂类含量较高，结合态的脂类含量较少，能烘干磨细，不宜吸湿结块的样品的测定。此法只能测定游离态脂肪，而结合态脂肪无法测出，要想测出结合态脂肪需在一定条件下水解后变成为游离态的脂肪方能测出。

另外此法是经典方法，对大多数样品结果比较可靠，但需要周期长，溶剂量大。

二、实验操作流程

1、滤纸筒的制备

将滤纸剪成长方形8×375px ，卷成圆筒，直径为150px，将圆筒底部封好，最好放一些脱脂棉，避免向外漏样。

2、称取样品，将样品烘干磨细，称取一定量与纸筒封好上口，最好用测定水的样品。

3、索式抽提器的准备

索氏抽提器由三部分组成，回流冷凝管、提取管、提脂瓶组成。提脂瓶在使用前需烘干并称至恒重。其它要干燥。

4、抽提

将装好样的纸筒放入抽提管 ， 倒入乙醚，乙醚的量从提取管加入，加入的量为提取瓶体积的2/3 接上冷凝装置，在恒温水浴中抽提，水浴温度大约为55℃左右，可用滤纸检验，理论值抽提6-8小时，实际值3-4小时，但也根据样品性质来决定。
5、回收乙醚

当乙醚在提取管内即将虹吸时立即取下提取管，将其下口放到乙醚回收瓶内，使之倾斜，然后将提取瓶放到100-150℃烘箱烘至恒重。

6、计算

脂肪%= (W2-W1)/W x 100

W2——瓶和样品重（g）W1——瓶子重量（g） W——样品重量（g）

或：脂肪%=（抽提后滤纸与样品重量—抽提前滤纸重量）/样品重量 × 100

滤纸筒应事先放入烧杯与100-105℃烘箱烘至恒重。

(4)脂质过氧化研究方法扩展阅读：

索式提取法注意事项

（1）样品应干燥后研细，装样品的滤纸筒一定要紧密，不能往外漏样品，否则重做。

（2）放入滤纸筒的高度不能超过回流弯管，否则乙醚不易穿透样品，使脂肪不能全部提出，造成误差。

（3） 碰到含多糖及糊精的样品要先以冷水处理，等其干燥后连同滤纸一起放入提取器内。

（4） 提取时水浴温度不能过高，一般使乙醚刚开始沸腾即可（约45℃左右），回流速度以8-12次/时为宜。

（5） 所用乙醚必需是无水乙醚，如含有水分则可能将样品中的糖以及无机物抽出，造成误差。

（6） 若用干样品测定脂肪，可按下式计算原来样品脂肪的含量

脂肪（%）= （W1-W2）(100-A) / W

A— 100克样品中水分的含量（g）

(7) 冷凝管上端最好连接一个氯化钙干燥管，这样不仅可以防止空气中水分进入，而且还可以避免乙醚挥发在空气中。这样可防止实验室微小环境空气的污染，如无此装置，塞一团干脱脂棉球亦可。

（8）如果没有无水乙醚可以自己制备，制备方法如下：在100ml乙醚中，加入无水石膏50克，振摇数次，静止10小时以上，蒸馏，收集35℃以下的蒸馏液，即可应用。

（9）将提取瓶放在烘箱内干燥时，瓶口向一侧倾斜45度防止挥发物乙醚易与空气形成对流，这样干燥迅速。

（10）如果没有乙醚或无水乙醇时，可以用石油醚提取，石油醚沸点30-60℃为好。

（11）使用挥发乙醚或石油醚时，切忌直接用火源加热，应用电热套、电水浴、电灯泡等。

（12） 这里恒重的概念有区别，它表示最初达到的最低重量，即溶剂和水分完全挥发时的恒重，此后若在继续加热，则因油脂氧化等原因会导致重量增加。

（13） 在干燥器中的冷却时间一般要一致。

5. 中药药理作用研究的具体方法

1 血清药理学方法学研究
在中药药理学研究中，有相当一部分药理活性实验和作用机理是在体外进行的，而利用中药粗提物直接进行体外实验，其结果的真实性和可靠性都受到很大影响。中药血清药理学研究方法是指给动物经口用药后一定的时间采血，取含药血清进行体外实验的一种研究方法，该方法由日本学者田代真一提出，95年前后国内即陆续开展。国家自然科学基金委员会曾于1996年资助重点项目：中药复方体外实验的方法学研究，在含药血清药理作用强度与体内给药的量效关系研究、给药方案研究、反应体系中含药物血清加入量的确定、采血时间的确定及时效关系研究、含药血清低温保存和血清灭活对效应的影响等方面做了大量卓有成效的工作。在以含头风饮(川芎、天麻为主)药物血清抗血小板释放5-HT和阻滞内皮细胞钙通 道作用为指标的实验中证实：在一定范围内，动物给药量与吸收入血的药物量及含药血清的体外药理效应呈正相关〔1〕；含药血清的药物浓度除与给药剂量有关外，还与给药方案 (如一日内给药次数及给药天数等)直接相关〔2〕；体外实验体系中含药血清加入量 的多少对药理效应产生明显的影响，因而对最佳反应体系的探索具有重要意义〔3〕 ；在采用血清药理学方法进行实验前，进行时效关系研究，找出给药后最佳采血时间是十分 必要的〔4〕；含药血清低温保存和血清灭活可能对药理效应产生明显影响，应以使 用新鲜血清或保存时间较短的血清
为宜〔 5〕。鉴于目前多数中药或复方有效成分尚不明确，成为制约中药现代研究的瓶颈，近年 进行了中药血清药化学与血清药理学协同研究的尝试，以揭示产生药效的物质基础。提出在 建立血清化学成分指纹图谱并测定相应含药血清药理效应强度后，进行药物效应成分分析， 如果含药血清的药理效应强度与其血清指纹图谱中某成分指纹峰大小相一致，则说明该成分 与所观察药理作用密切相关〔6〕。中药血清药理学针对中药及其复方复杂多样的化 学成分的特点，结合化学、微生物学、分子生物学等多学科的先进技术手段，将有可能成为 中药药理学研究的一种新的方法体系。
2 单味药药理研究
常用单味中药药理研究是中药药理研究的重要内容。近年仍以对整体动物 药理效应观察及对器官、组织、细胞的影响等为主，现代生物技术如分子生物学研究方法 也受到广泛关注和应用。研究的药味相对集中，以补益药、活血化瘀药居多，不少常用中药 的新药理作用机理被揭示。
研究发现黄芪对自然衰老大鼠脑皮质、海马、纹状体3个脑区降低的M胆碱受体和M1亚型受体密度有显着的上调作用，并可调节老年大鼠血浆环核苷酸含量〔7〕；衰老大鼠心肌 β受体密度及T3、T4、皮质醇含量均降低，黄芪、人参、枸杞子可 升高之〔8，9〕；对肝硬化大鼠存在的下丘脑血管加压素系统异常有改善作用 〔10〕；可以明显提高肾病综合征大鼠血浆白蛋白水平，改善肾小球滤过率和尿钠排泄 〔11〕；对环磷酰胺所致免疫功能抑制小鼠细胞毒活性有显着增强作用，并可能
通过调控巨噬细胞C1q的分泌功能来增强免疫和抗肿瘤作用〔12，13〕；还发现 黄芪煎剂及含黄芪小鼠血清均对小鼠脾淋巴细胞增殖、混合淋巴细胞培养反应及IL-2的产生有促进作用〔14〕。冬虫夏草水提液能降低正常心肌细胞内Ca2＋ 的浓度，减轻缺氧再给氧时细胞内Ca2＋超载现象，并明显减轻缺氧再给氧时细胞 内脂质过氧化〔15，16〕。红参在预防高血压性视网膜动 脉硬化起重要作用，能使内皮细胞膜的光整性、细胞器的结构及内皮细胞分泌各种血管舒缩 物质保持正常，抑制平滑肌细胞的异常增生，还有扩张血管、减少外周阻力及调节血压的作 用〔17〕。生地黄可明显抑制皮质酮致“阴虚”模型小鼠巨噬细胞Ia抗原 的高水平表达，降低其提呈抗原能力，从而表现出一定的免疫抑制作用〔18〕。丹参注射液可明显降低缺血再灌注引起的大鼠脑水肿，减少脑皮层及海马组织丙二醛含量，提高过氧化氢酶、超氧化物歧化酶活性和还原型谷胱甘肽、三磷酸腺苷的含量〔19〕。
3 有效部位、有效单体药理研究
随着中药化学成分提取、分离技术的进步，中药药理学与中药化学学科结合更为密切， 中药 有效部位、有效单体的药理研究日益增多。近年研究涉及的有效部位和有效单体有数十种， 研究较多、较深入的有人参皂甙、雷公藤多甙、三七皂甙、淫羊藿总黄酮、川芎嗪、天花粉 蛋白、牛膝多糖、地黄多糖等。有效部位、有效单体药理作用的深入研究，有助于揭示中药 治疗疾病的机理。研究发现，人参皂甙对辐射引起的细胞膜损伤有防护作用〔20〕 ；人参二醇皂甙对心肌缺血再灌注犬心脏功能具有保护作用〔21〕；人参根总皂甙 具有明显抗DNA损伤及抗突变效应〔22〕；人参皂甙Rb1对应激性性行为低下有保护 作用，其机制可能与抑制应激动物血浆皮质酮升高和提高睾酮水平有关〔23〕。雷 公藤多甙具有抗炎和免疫抑制作用，能显着降低人工晶体表面、虹膜和睫状体的炎症反应 〔24，25〕；对哮喘豚鼠肺组织的磷脂酶A2有明显抑制作用 〔26〕。三七总皂甙显着提高心肌细胞内肌浆网膜钙泵活性，减少心肌细胞Ca2 ＋〔27〕，对犬心肌缺血再灌注损伤有保护作用〔28〕。天花粉蛋白能 明显抑制小鼠黑色素瘤细胞S期DNA合成，通过抑制瘤细胞分裂增殖以及诱导瘤细胞凋亡而 抗肿瘤〔29〕。
4 复方药理研究
复方是中医用药的主要形式，以中医药理论为指导，运用现代科学手段，对古方和现代经验方进行多指标的系统药理研究，可以在更深的层次揭示方剂的治疗原理，有效地指导临床用药和中药新产品研创。近年来，中药复方在药效学、药代动力学和分子药理研究等方面取得了较好的进展。
近年古方的药理研究有数十首，其中桂枝汤、六味地黄汤、四君子汤、四物汤、大承气汤、 补中益气汤、当归补血汤等研究较多。在古方研究中较多地探讨了方剂的作用机制，给方剂 的传统功效描述赋予现代药理学内容。如桂枝汤可能通过影响兴奋胃肠运动的胃泌素、胃动素、P物质以及抑制胃肠运动的生长抑素、 血管活性肠肽等在下丘脑和胃肠道中的含量来调节胃肠运动〔30～33〕；桂枝汤 对与呼吸道感染有关的10株病毒致细胞病变均有不同程度的抑制作用，其含 药血清能抑制单纯疱疹病毒等4株病毒对Hep-2细胞的增殖〔34〕。当归补血汤 含药血清随给药剂量增加可使造血祖细胞集落数明显增多〔35〕。将六味地黄汤 方视为一个整体，以活性评价为导向，从六味地黄汤中定向追踪分离 ，获得了具有调节免疫功能的活性部位，该部位对TH及TC的功能有调节 作用〔36〕。这些研究都在一定程度上说明了方剂的作用原理。经验方的药理研究 开展得更为广泛，其研究内容多结合新药研究的有关要求，着重于药效及安全性评价，不少 方剂已经或即将开发为新药。
配伍是中医用药的特点和优势所在，用药理研究方法观察方剂配伍与药理效应变化之间的关系，探讨方剂的配伍规律，仍然是复方药理研究的重要内容。近年虽然还是以方剂药味加减 、正交设计等方法为主，但在应用中也有明显提高，采用一些新方法来更好地分析方剂的配伍问题〔37〕。关于复方配伍规律的基础研究99年纳入国家自然科学基金重点研究 项目，强调运用高新技术手段探讨方剂的物质基础，综合分析配伍-化学成分变化-药理效 应三者之间的联系，阐明配伍内涵，成为新的探索方向。生脉散复方化学动态变化与药效关 系研究表明，各药配伍后药效的变化可能与产生新物质有关〔38〕。以方剂的物质 基础研究为核心，注重方剂配伍理论与现代药理交互作用理论结合，物质基础分析与药理效 应观察相结合，从组成方剂的单味药、方剂的化学部分以及化学成分三个层次探讨方剂的配 伍与物质基础的变化的关系，在整体动物、器官组织、细胞亚细胞及分子生物学四个水平上 探讨方剂的配伍、物质基础的变化与药理效应间的联系，已成为复方配伍研究的基本思路 〔39〕。
5 药代动力学研究
药代动力学研究机体对药物的处理规律，对于深入了解药物的作用机理，指导临床合理用药 ，制定适宜的用药方案等均有重要意义。中药药代动力学尤其是方剂的药代动力学研究尚 无很好的方法和手段，目前主要采用体内药物浓度法、药物累积法(动物急性死亡率法)、药理效应法、微生物指标法等，但因受到诸多因素的制约，尚待进一步完善。近年进行了黄 芩 甙、葛根素、苦参碱、芸香甙、绿原酸、钩藤碱、马钱子碱、千金藤素等成分在动物体内的 药代动力学研究，但单一有效成分的药代参数显然还难以反映含有该成分的单味中药或复方 的药代动力学过程。1991年黄熙等提出复方效应成分动力学假说，将中药复方看作是一个整 体的药物，研究方剂效应成分在体内的命运。认为所谓“复方效应成分”可以是母方中的原 形单体，也可以是母方中不含有的新成分，既可能是一个，也可能是多个化学成分(组成)； “效应”既可以是活性效应，也可以是毒性效应〔40〕。有人提出综合运用中药有 效成分药动学-药效学同步分析统一模型、血清药理学方法及高效毛细管电泳、二维及三维 高效液相色谱法、液质联用或质质联用技术等，进行中药及复方的药代动力学研究〔4 1〕。

6. 膜脂质过氧化进一步分解膜磷脂为什么可以增加自由基生成

答
情况参与代谢氧数与氢结合水4－5％氧酶所催化形超氧阴离者形氧化氢都属于自由基自由基种,氧自由基羟自由基 ,指些外层电轨道含配电原、离或自由基具高度氧化性极稳定,性极高,攻击细胞膜、线粒体膜,与膜饱脂肪酸反应造脂质氧化增强脂质氧化产物（mda等)解更自由基引起自由基连锁反应膜结构完整性受破坏引起肌肉、肝细胞、线粒体、DNA、RNA等广泛损伤引起各种疾病,诸炎症、癌症 、扩张性肌病、性白内障、 哮喘等疾患 故自由基体疾病、衰死亡直接参与制造者 听说抗氧化剂体健康着密切关系根据医研究维命、矿物质及酵素具保护身体、防止自由基（free radicals）形功能者称作抗氧化剂 我身体自产自由基清除者抑制自由基形外身体自制造酵素自由基除些酵素我由饮食摄取抗氧化剂例 ：维命A、C、E及硒协助体内清除自由基体系统自由基充斥自产自由基清除者应付健康亮起红灯平应通饮食摄取抗氧化剂或服用些补充品协助身体破坏自由基号称第六命元素壳寡糖完全净化自由基使自由基失性达抵御疾病延缓衰作用1991际术议美欧等许家科家致壳寡糖与蛋白质、脂肪、糖类、维素、矿物质并列誉体第六命要素壳寡糖能降血脂、降血压、能抗癌现代文明病惊防治作用壳寡糖机体清道夫能排除体内自由基提高机体免疫力减肥美肤延缓衰 ============================ 健康寿杀手--氧自由基 我富含氧气空气离氧气我命能存氧气体害面候能杀死健康细胞甚至致于死直接杀死细胞并氧气本身由产种叫氧自由基害物质体代谢产物造物膜系统损伤及细胞内氧化磷酸化障碍体疾病、衰死亡直接参与者体健康寿危害非 我知道细胞经呼吸获取氧其98％与细胞器内葡萄糖脂肪相结合转化能量满足细胞需要另外2％氧则转化氧自由基由于种物质非跃几乎与各种物质发作用引起系列细胞具破坏性连锁反应 般情况细胞遭种杀手杀害我体细胞存着量氧自由基克星——抗氧化剂比脂溶性维素E、水溶性维素C及些酶类等等些抗氧化剂能够与氧自由基发氧化原反应使氧自由基彻底清除某些情况氧自由基才致细胞甚至肌体于死 体遭受外伤、毒或者手术流血等重创候组织处于缺氧状态能量代谢发障碍细胞色素氧化酶力氧原水便氧原夺电由害氧变具杀伤力性氧自由基氧自由基氧化杀伤主要破坏细胞膜结构功能破坏线粒体断绝细胞能源毁坏溶酶体使细胞自溶同体非细胞结构危害作用使血管壁粘合剂遭受破坏使完整密封血管变千疮百孔发漏血、渗液进导致水肿紫癜等等同供应脏血液冠状脉突发痉挛候肌细胞由于缺氧发系列代谢改变肌细胞内抗氧化剂含量减少使氧自由基化反应由于缺氧相加快冠状脉痉挛切除刹肌细胞突重新血液灌注随量氧转化氧自由基同由于抗氧化剂相足能够清除氧自由基结使具高度杀伤性氧自由基严重损伤肌细胞膜量离由肌细胞内溢者扰乱控制脏搏电流信号引起室颤导致死亡 氧自由基使体衰呢近研究发现氧自由基化性质跃能够攻击细胞膜脂肪酸产氧化物些物质毒性强种物质侵害体内核酸、蛋白质等等引起系列细胞破坏作用体内氧自由基积累越衰进程越快我见脸寿斑由于脂类受氧自由基氧化解作用形丙二醛所致 氧自由基与衰关且许衰关疾病关系比脉硬化症、高血压、骨关节炎、白内障及帕金森氏病等等 至于付氧自由基办目前已经发现许氧自由基克星氧自由清除剂或者抑制剂其作用机理直接提供电使氧自由基原增强抗氧化酶性迅速消灭自由基比超氧化物岐化酶氧化氢酶存于体组织清除氧自由基重要酶系统另外谷胱甘肽、别嘌呤醇维素C、E等都具清除或者抑制氧自由基作用 根据营养流行病研究发现经食用新鲜蔬菜与水延缓衰作用降低肿瘤特别消化道肿瘤发病率蔬菜清除氧自由基主要前身产物超氧负离超氧负离减少氧自由基相应减少由延缓衰营养家研究发现水、蔬菜数都具清除超氧负离蔬菜荠菜、青菜、蒜、黄芽菜强另外经吃富含维素A花菜、胡萝卜、菠菜、甘薯富含维素C葡萄、桔、青椒含维素E柠檬、豌豆、未加工麦胚芽、葵花籽油含硒卷菜、洋葱、燕麦片、海产品等等都帮助

7. 影红细胞是什么

影红细胞一般指红细胞影，它是一种研究生物膜的脂质过氧化，影泡的成分远比脂质体复杂的方法。生物体在病理过戳例如化学中毒、大气污染的毒害、辐射损伤、化学致癌、溶血性贫血、抽烟等和正常的生理过程，例如吞噬作用、衰老等，都会产生脂质过氧化。

脂质过氧化作用主要发生在生物膜的类脂中,因为它含有多量的不饱和脂肪酸。完整的细胞含有胞质、核、亚细胞器，成分复杂，影响生物膜脂质过氧化的因素很多。近年来，研究生物膜结构和功能，大多选用红细胞影泡为材料。

(7)脂质过氧化研究方法扩展阅读

红细胞影存在有抗氧化剂系统，因而只有低水平的、自发的化学发光，即低水平的脂质过氧化，

H_2O_2能激烈地刺激影泡的脂质过氧化,破坏抗氧化剂体系，增强化学发光。受激的化学发光强度与影泡的浓度成正比。一万拉特以上的γ射线照射，可以加速影泡的脂质过氧化，表现出化学发光明显增强化。

化学发光的增强与照射剂量成正比，而与剂量率成反比。超氧化物歧化酶可明显地抑制脂质过氧化，从而明显地降低化学发光的强度。