1. 常用的细胞克隆化方法有哪些
克隆化培养方法
1．有限稀释法克隆培养
通过有限稀释，使细胞密度低至一定程度再接种培养在适宜于单细胞生长的培养液中，形成单独的细胞克隆。细胞克隆是指1个细胞来源．经过细胞分裂形成独立的细胞集落。此法进行的克隆化培养，建议使用平底96孔细胞培养板。接种密度控制在10~200个／ml。在计数准确，细胞活性正常的情况下，一般稀释为20个／ml，每孔接种200μl，这样每孔落人细胞数平均为1，获得单克隆生长孔的概率最大，数量最多。
有些细胞的克隆化培养效果不理想的原因与它们在低密度下没有能力生存有关。要使细胞在克隆化培养环境下低密度目标细胞能正常生存，可以模拟高细胞密度的环境，就是让目标细胞在含饲养细胞的培养体系中培养。饲养细胞是一类不能连续分裂的细胞，或者说是一类不能长期存活的细胞，一般存活不超过1~2周。
在小鼠杂交瘤细胞做克隆化培养时，通常建议使用健康小鼠的腹腔细胞做饲养细胞，使用时，调整饲养细胞在培养体系中的密度为2~4×104个／ml。另外，也有使用小鼠肾细胞做饲养细胞的例子。
2．琼脂中的克隆化培养
在铺有底层琼脂的培养孔中进行，由于琼脂凝胶的稳定性使得子代细胞不容易脱落细胞集落。温度高时琼脂呈液态，37℃时成凝胶状态。目标细胞事先短暂地悬浮在55℃的液态琼脂溶液中进行快速铺板操作，待琼脂凝固后进行培养，形成散在的独立克隆，方便分离克隆。如果琼脂形成凝胶的温度比较低，可以经过4℃形成凝胶后再进行培养。
建议使用培养皿、6 孔细胞培养板做此类克隆化培养。培养皿或6孔细胞培养板无需经TC处理。
根据生长速度、细胞形态、集落形态等特征选择所需的克隆。事先标注克隆的相对位置，挑选时可以使用长丝滴管或微量移液器吸嘴直接吸取，为避免受到周边其他克隆的干扰，建议先去除多数培养液后再吸取克隆。
2. 有限稀释法为什么克隆化培养一段时间之后再进行抗体检测
因为杂交瘤要反复克隆2-3次后才能达到百分之百的细胞阳性率。
有限稀释法是一种常用的克隆方法，将需要再克隆的细胞株自培养孔内吸出并作细胞计数，计出1mL的细胞数。
实验原理是克隆化培养即单细胞培养技术，用有限稀释法进行杂交瘤细胞克隆化培养，可以及时确定阳性杂交瘤细胞株，同时淘汰因发生染色体丢失或抗体的轻、重链基因分离而出现无抗体分泌阴性细胞株。