放射免疫分析标记方法

⑴ 放射免疫分析的标记物是用

正确答案:A
解析：放射免疫分析使用核素标记抗原，标记物为限量使用；免疫放射分析使用核素标记抗体；标记物为过量使用
。

⑵ 免疫分析方法有哪些

（1）放射免疫分析法（radioimmunoassay，RIA）。RIA技术是使用以放射性同位素（如125I、32P、3H等）作标记的抗原或抗体，用γ－射线探测仪或液体闪烁计数器测定γ－射线或β－射线的放射性强度，来测定抗体或抗原量的技术。它包括以标记抗原为特点的放射免疫分析和以标记抗体为特点的免疫放射分析（immunoradiometricassay，IRMA）。前者以液相竞争结合法居多，既测大分子抗原又测小分子抗原；后者以固相法测大分子抗原为主。

RIA在早期建立的农药免疫分析方法中占了很大比重，建立了狄氏剂、艾氏剂、2，4－D和2，4，5－T、对硫磷和百草枯等农药的放射免疫分析法。尽管该方法灵敏度非常敏锐（RIA通常为10-9g、10-12g，甚至10-15g），应用范围广，但进行RIA需使用昂贵的计数器，也存在放射线辐射和污染等问题，因此在农药残留检测领域的应用和发展受到了一定的限制，并逐步为其他免疫分析方法所取代。

（2）酶免疫分析法（enzymeimmunoassay，EIA）。EIA是继RIA之后发展起来的一项免疫分析技术。其检测原理与放射免疫法类似，但所用的标记物为酶，它将抗原、抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来，通过测定结合于固相的酶的活力来测定被测定物的量。用做标记物的酶有辣根过氧化物酶（horseradishperoxidase，HRP）和碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，AKP）、葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase，GO）、脲酶（urease）等。酶标记反应的固相支持物有聚苯乙烯塑料管、膜等。目前大多数采用96孔酶标板（MTP）作为固相支持物。这种板的检测容量大，样本数量多，只需有台简单的酶标仪就可得出准确的检测数据。也有学者采用磁珠作为固相材料进行EIA研究，其原理是将高分子材料（聚苯乙烯、聚氯乙烯等）包裹到金属小颗粒（Fe2O3，Fe3O4）外面，再通过化学方法键合上氨基（－NH2）、羧基（－COOH）、羟基（－OH）等活性基团，再与抗体或抗原耦联，制成免疫性微珠。该方法的优点是微珠比表面积大，吸附能力强，能悬浮在液相中快速均匀的捕获样品中的待测物，通过外加磁场后能够实现微珠与样品液的快速分离，从而减少检测时间、提高检测灵敏度。

由于酶标试剂制备容易、稳定、价廉，酶免疫分析的灵敏度接近放射免疫技术，故近年来EIA技术发展很快，已开发了多种EIA方法。其中酶联免疫法（，ELISA）是目前农药残留检测中应用最广泛的酶免疫分析技术。

（3）荧光免疫分析法（fluorescenceimmunoassay，FIA）。FIA检测的基本原理是将抗原抗体的高度特异性与荧光的敏感可测性有机地结合，以荧光物质作为示踪剂标记抗体、抗原或半抗原分子，制备高质量的特异性荧光试剂。当抗原抗体结合物中的荧光物质受到紫外光或蓝光照射时，能够吸收光能进入激发态。当其从激发态回复基态时，能以电磁辐射形式放射出所吸收的光能，产生荧光。绘制农药浓度－荧光强度曲线，可以定性、定量检测样品中的农药残留量。

适用于抗体、抗原或半抗原分子标记的荧光素须符合要求：①应具有能与蛋白质分子形成稳定共价键的化学基团，或易转变成这类反应形式而不破坏其荧光结构；②标记后，荧光素与抗体或抗原各自的化学结构和性质均不发生改变；③荧光效率高，与蛋白质结合的需要量很少；④荧光素与蛋白质结合的过程简单、快速，游离的荧光素及其降解产物容易除去；⑤结合物在一般储存条件下性能稳定，可保存使用较长时间。

（4）化学发光免疫分析法（luminescentimmunoassay，LCIA）。LCIA又可分为化学发光免疫测定（chemiluminescentimmunoassay，CLCIA）和生物发光免疫测定（bio-luminescentImmunoassay，BLCIA）。

1976年，Shroeder首先用生物素（B）－亲和素（A）系统建立了均相化学发光免疫测定技术，尔后Halman和Velan又将其引伸到非均相体系，现已渗入到生物学研究的各个领域。其原理是以发光指示抗原与抗体的结合，当发光标记物与相应的抗体或抗原结合后，底物与酶作用，或与发光剂产生氧化还原反应，或使荧光物质（例如红荧烯等）激发，释放光能。最后用光度计测定其发光强度，进行定量分析。常用发光标记物有辣根过氧化物酶（HRP）、鲁米诺（luminol）、异鲁米诺（isoluminol）、咯粉碱（lophine）、光泽精（lucigen）、双（2、4、6－三氯苯）草酸酯、联苯三酚和6[N-（4－二氨基丁基）－N－乙基]－氨基-2，3－二氢吩嗪-1，4－二酮（ABEI）等。用上述发光标记物标记的抗体（或抗原）在一定的pH缓冲溶液中与相应的抗原（或抗体）结合时，在协同因子（例如H2O2等）的作用下发光，其发光强度与被测物的浓度成正比，故可以用于定量分析。

发光免疫测定具有特异性强、灵敏度高（检测限量达10-15mol/L）、快速（1～3h）、发光材料易得等优点。但其发光过程和强度常受到发光物质本身的化学结构、介质的pH、协同发光物质和金属离子杂质等影响。

（5）金免疫层析分析法（goldimmuno-chromatographyassay，GICA）。GICA检测原理是将配体（抗体或抗原）以线状包被固化于硝酸纤维素膜等微孔薄膜上，胶体金标记另以配体或其他物质并以干态固定在吸水材料上，通过毛细作用，使样品溶液在层析条上泳动，当泳动至胶体金标记物处时，如样品中含有待检受体，则发生第一步高度特异性的免疫反应，形成的免疫复合物继续泳动至线状包被区时，发生第二步高度特异性的免疫反应，形成的免疫复合物被截留在包被的线状区，通过标记的胶体金而显红色条带（检测带），而游离的标记物则越过检测带，与结合的标记物自动分离。通过检测带上颜色的有无或色泽深浅来实现定性或定量测定2。

2金标试纸条检测

GICA法具有快速（5～20min）、廉价、结果明确、无需复杂操作技巧和特殊设备、携带方便等优点。但相对于其他免疫分析方法，该方法检测灵敏度稍低，主要适合现场快速定性或半定量测定。目前该方法已被应用于医学和生物学等众多研究领域，尤其在发达国家已经得到了广泛的应用。

（6）免疫分析与仪器分析技术的联用技术。使用单一的IA技术进行农药残留分析获得的信息量少，而理化分析方法的选择性又比较差。Kramer等人将免疫分析法和液相色谱法（LC）联合起来使用，从而简化了分析方法，提高了检测效率。LC-IA的联用，将LC的高分离能力和IA的高灵敏性和高特异性融为一体。该分析法尤其适合多组分残留分析和微量分析。免疫分析与气相色谱/质谱（GC/MS）的联用可减少结构相似的农药或代谢产物分析中的交叉反应，以降低假阳性。

⑶ 放射免疫分析法的原理

使放射性标记抗原和未标记抗原（待测物）与不足量的特异性抗体竞争性地结合，反应后分离并测量放射性而求得未标记抗原的量。用反应式表示为：
*Ag为同位素标记的抗原,与未标记的抗原Ag有相同的免疫活性，两者以竞争性的方式与抗体Ab结合，形成*Ag-Ab或Ag-Ab复合物,在一定反应时间后达到动态平衡。如果反应系统内加入的*Ag和Ab的量是恒定的,且*Ag和Ag的总和大于Ab有效结合点时,则*Ag-Ab生成量受Ag量的限制。Ag增多时，Ag-Ab生成量也增多，而*Ag-Ab生成量则相对地减少,同时游离*Ag也增多。因此,*Ag-Ab与Ag的含量呈一定的函数关系。如采用一种有效的分离方法，将*Ag-Ab和Ag-Ab复合物 (以 B表示)与*Ag、Ag(以F表示)分离,并测定B和F的放射性,可有以下规律:如样品中Ag增多，则B的放射性降低，F的放射性增高，即Ag与B成反比。计算B/F或B/T值 (T=B+F),即可算出样品中Ag的含量。由于 RIA是以放射性标记与非标记抗原竞争性地与抗体结合为理论基础，故又称为竞争性放射饱和分析法。

⑷ 免疫标记技术标记物-2020医疗卫生检验学

在临床免疫学检验中有很多的检测方式，其中最重要的一大类就是免疫标记技术。免疫标记技术指用荧光素、酶、放射性同位素或电子致密物质等标记抗原或抗体进行的抗原抗体反应。免疫标记技术有三种基本类型：免疫荧光法、免疫酶技术和放射免疫技术。 天津卫生人才网 专家带大家一起来学习一下它们的标记物。

荧光免疫技术(FIA)最早发展使用的标记技术，是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上，与其相应的抗原(或抗体)结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应，该技术主要特点是可以进行原位定位分析。

常用荧光素有：

异硫氰酸荧光素(FITC)，呈黄绿色荧光;

四乙基罗丹明(RB200)，呈明亮橙色荧光;

四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC)，呈橙红色荧光;

酶免疫技术(EIA)是以“酶”作为示踪物质，用于标记抗体/抗原。酶标记的抗体/抗原在保留其免疫学活性的同时，又保留了酶对其底物的催化活性。酶标记的抗体/抗原与其相应的抗原/抗体进行特异性反应后，再加入酶的底物,通过酶对底物的显色反应，进行对待测抗原/抗体进行定位、定性或定量分析。

常用标记酶及底物有：

辣根过氧化物酶(HRP最常用)，底物为TMB(最常用)、DAB(组化底物)等;

碱性磷酸酶(AP)，底物为p-NPP;

β-D-半乳糖苷酶，底物为4-MUG;

放射免疫技术(RIA)是将抗原抗体反应的高特异性与放射性核素信号的高灵敏性相结合而建立的一种超微量分析技术。根据放射性核素标记抗原或抗体的不同分为放射免疫分析(RIA)和免疫放射分析(IRMA)。

目前常用的是γ放射性核素如125I、131I、51Cr，其中125I最常用，用γ计数器测定。β放射性核素和以3H最常用，用液体闪烁计数仪进行测定。

⑸ 什么是放免法

放免法是放射免疫分析法的简称。即用放射性核素标记待检测物质，通过仪器对放射性物质的接收来对待测物质进行定性或者定量。该方法检测价格比较昂贵，收费也高。

⑹ 甲肝抗体检测

什么是甲肝抗体检测？甲肝抗体检测指的是通过放射免疫分析、酶联免疫吸附测定等方法检测甲肝病毒抗lgM和IgG抗体。

什么是甲肝抗体检测

甲肝抗体检测，是明确诊断受检者是否患上甲型肝炎的检查手段。甲肝抗体检测方法主要有放射免疫分析法（RIA）和酶联免疫吸附法（ELISA），临床上多用酶联免疫吸附法（ELISA）查抗。

甲型肝炎是甲肝病毒造成的一种肝脏疾病。病毒因未受感染者(或未接种疫苗者)摄入由甲肝病毒感染者的粪便污染的食物或水传播。该疾病与不安全的水、卫生条件差和不良个人卫生习惯有紧密联系。在血清型方面，能感染人的甲肝血清型只有1个，因此只有1个抗原抗体系统。甲肝感染后早期产生IgM型抗体，一般持续8-12周，少数可延续6个月，IgG型抗体可长期存在。IgM是近期感染的标志，IgG则是过去感染的标志。

甲肝抗体检测方法

1、放射免疫分析法（RIA）

放射免疫分析法是以放射性核素为标记物的标记免疫分析法，用于定量测定受检标本中的抗原，有极高的灵敏度，常用于测定微量物质。但由于这种检测方法无法测出失去免疫活性的物质，而且对体内某些含量特别低的物质尚不能测定。所以临床上常采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测甲肝病毒。

2、酶联免疫吸附法（ELISA）

它是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体，如甲肝病毒抗lgM和IgG抗体。

甲肝抗体检测项目

1、人抗甲型肝炎病毒IgM抗体（抗HAVIgM）：抗HAVIgM在发病后数天即可为阳性，早期诊断甲肝最简便而可靠的血清学标志，在流行病学上是新近感染的证据。

2、人抗甲型肝炎病毒IgG抗体（抗HAVIgG）：抗HAVIgG出现稍晚，于感染后2-3个月时达到高峰，可持续多年，甚至终身。在急性后期和恢复期可有抗HAVIgM和抗HAVIgG同时阳性的现象。

甲肝抗体检测正常值

1、人抗甲型肝炎病毒IgM抗体（抗HAVIgM）：阴性。

2、人抗甲型肝炎病毒IgG抗体（抗HAVIgG）：阴性。

甲肝抗体阳性

甲肝抗体检测只有出现抗IgM抗体阳性即可以确诊感染甲肝。甲肝抗体检测阳性表示有两种可能：

1、急性感染或复发。

抗IgM抗体是感染甲肝病毒后最早出现的抗体，约在发病后1周内出现。其检出阳性表示新近感染，即甲型肝炎早期，是急性感染的标志。抗IgG抗体为晚期感染的指征，在感染早期为阴性，在急性后期和恢复期则为阳性。

2、既往感染或者接种过疫苗，现在已有抗体。

抗IgG抗体是保护性抗体。如果抗IgM抗体阴性，那么抗IgG抗体阳性则提示既往曾经感染甲肝，但现在已经治愈或接种过甲肝疫苗，对甲肝有免疫力。

甲肝抗体阴性

甲肝抗体阴性，说明既没有感染过甲肝病毒，也没有接种过甲肝疫苗，体内没有产生可以对抗甲肝病毒的抗体，建议及时到正规医院接种甲肝疫苗，积极预防甲肝。

各种研究表明，甲型肝炎是性传播疾病，甲肝抗体阴性的男性同性恋易感者中，甲型肝炎的年发病率为22%，而甲肝抗体阴性的异性恋易感者中，无一例发病。因此，认为甲肝病毒感染主要与同性恋的口肛接触有关。

甲肝抗体检测注意事项

抗IgG抗体出现较晚，而持续时间较长，在感染初期常为阴性，常用以流行病学调查。抗IgM抗体阳性可诊断为甲型肝炎，若检得低滴度时，应隔2周复测，但应注意风湿因子所致假阳性。抗IgG抗体阳性提示曾受过甲肝感染，但双份抗IgG抗体滴度4倍以上增长，也有诊断意义。

⑺ 放射免疫分析直接标记法与间接标记法的说法正确的是

正确答案:A
解析：采用放射性碘制备标志物的基本原理是以放射性碘原子通过取代反应置换被标志物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子
。因此，凡蛋白质、肽类等化合物在结构上含有上述基团，均可用[SB125
.gif]I直接标记
。而对那些不含上述基团的甾体激素或药物分子则必须在分子结构上连接相应基团才能用于放射性碘标记(间接标记法)
。

⑻ 标记免疫分析技术的种类，有何区别

免疫标记分析技术主要包括：放射物标记、酶标记、发光标记、荧光标记和金标记方法。
1 放射物标记分析：

用放射物标记抗原或抗体发展的放射免疫分析(radio immunoassay, RIA)是美国科学Yalow

和Berson于1959年创立的一种微量分析法,它是将具有高灵敏度的放射性核素示踪技术和特异性免疫化学技术相结合而建立的新方法。该技术利用核素标记物的放大效应,改善了待测物的检测下限,同时以抗体或抗原作为结合试剂,大大提高了检测方法的特异性。
2 荧光标记分析：

以荧光标记的荧光免疫分析(fluorescein immunoassay, FIA)是由Conn等首创于20世纪40年代的一种标记免疫学技术,其所用标记物是荧光素和荧光染料,是将抗原或抗体标记以荧光物质与相应抗原或抗体结合,在荧光显微镜或紫外线照射下,检测荧光强度和荧光现象的一种检测方法。荧光标记免疫法灵敏度高,但荧光素常会产生生物学毒性,导致抗体或抗原的灵敏度和选择性下降
3.酶标记分析技术：
是继免疫荧光抗体技术和放射免疫分析之后发展起来的一大新型的血清学技术。1966年，Nakane等和Avrameas等分别报道用酶代替荧光素标记抗体，建立了酶标抗体技术(enzyme-labelled antibody technique)，用于生物组织中抗原的定位和鉴定。1971年，Engvall Van Weemen等报道了酶联免疫吸附试验，从而建立了酶标抗体的定量检测技术。20世纪80年代，基于酶标记抗体检测和鉴定蛋白质分子的免疫转印技术问世。目前，免疫酶标记技术已成为免疫诊断、检测和分子生物学研究中应用最广泛的免疫学方法之一。
4.发光标记分析

20世纪80年代末,国外开始用化学发光试剂来标记抗原或抗体,从而建立了发光免疫分析技术。狭义的发光免疫分析( luminescence immunoassay,LIA )主要是指化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay, CLIA)。另外,还有酶放大化学发光免疫分析和电化学发光免疫分析( electrochemiluminescence immunoassay , ECLIA)。CLIA是Sohrocler和Halman在20世纪70年代末期建立的,该方法兼有发光分析的高灵敏度和免疫反应的特异性。其基本原理同酶标记分析法,是用化学发光反应的试剂(可以是发光剂或催化剂等)标记抗原或抗体,

标记后的抗原和抗体与待测物经过一系列的免疫反应和理化步骤(如离心分离、洗涤等),最后以测定发光强度形式测定。
5 超顺磁微粒标记分析

以磁性粒子标记的磁性免疫分析技术(Magnetic Immuno Chromatofraphic Tes,tMICT)是现代物理学与生物技术结合研发生产的磁性分析检测技术,最早应用于基础医学领域[13,14]。与其它标记技术不同,该技术一个显着的优点就是用磁性粒子标记不受有色杂质干扰,可用于直接测量血液、食品、污水等有色样品。其原理是利用超顺磁性纳米微粒作为标记物,由高灵敏度磁性检测仪器测定结合在免疫复合物上的磁性微粒所产生的局部磁场效应,从而得出所测分析物的定量结果。

⑼ 大家谁知道放射免疫法详细的实验步骤吗，拜托大家了

(一)液相放射免疫测定
1．抗原一抗体反应
将抗原(标准品和受检标本)、标记抗原和抗血清按顺序定量加入小试管中，在一定温度下反应一定时间，使竞争抑制反应达到平衡。不同质量的抗体和不同含量的抗原对温育的温度和时间有不同的要求。
2．B、F分离技术
在RIA反应中，标记抗原和特异性抗体的含量极微，形成的结合态标记抗原(B)不能自行沉淀，因此需用一种合适的沉淀剂使它彻底沉淀，以完成与游离标记抗原(F)的分离。另外对小分子量的抗原也可采取吸附法使B与F分离。
(1)第二抗体沉淀法 这是RIA中最常用的一种沉淀方法。将产生特异性抗体(第一抗体)的动物(例如兔)的IgG，制得羊抗兔IgG血清(第二抗体)。由于在本反应系统中采用第一、第二两种抗体，故称为双抗体法。在抗原与特异性抗体反应后加入第二抗体，形成由抗原一第一抗体一第二抗体组成的双抗体复合物。但因第一抗体浓度甚低，其复合物也极少，无法进行离心分离，为此在分离时加入一定量的与第一抗体同种动物的血清或Ig，使之与第二抗体形成可见的沉淀物。与上述抗原的双抗体复合物形成共沉淀。经离心即可使含有结合态标记抗原(B)的沉淀物沉淀，与上清液中的游离标记抗原(F)分离。
(2)聚乙二醇(PEG)沉淀法 最近各种RIA反应系统逐渐采用了PEG溶液代替第二抗体作沉淀剂。PE(；沉淀剂的主要优点是制备方便，沉淀完全。缺点是非特异性结合率比用第二抗体高，且温度高于30~C：时沉淀物容易复溶。
此外，B、F分离技术还有PR试剂法和活性炭吸附法等。 ．
3．放射性强度的测定
B、F分离后，即可进行放射性强度的测定。测量仪器有两类，即液体闪烁计数仪和晶体闪烁计数仪。
计数单位是探测器输出的电脉冲数，单位为cpm(计数／min)，也可用cps(计数／s)表示。如果知道这个测量系统的效率，还可算出放射源的强度，即dpm(衰变／min)或dps(衰变／s)。
每次测定均需作标准曲线图，以标准抗原的不同浓度为横坐标，以在测定中得到的相应放射性强度为纵坐标作图。放射性强度可任选B或F，也可用计算值B／(B+F)、B／F和B／B0。标本应作双份测定，取其平均值，在制作的标准曲线上查出相应的受检抗原浓度。
(二)固相放射免疫测定方法(以双层非竞争法为例)
1．抗体的包被
先将抗体吸附于固相载体表面，制成免疫吸附剂。常用的固相载体为聚苯乙烯，形状有管、微管、小圆片、扁圆片和微球等。还可根据自己的工作设计新的形状，以适应特殊的需要。
2．抗原抗体反应
免疫吸附剂与标本一起温育时，标本中的抗原与固相载体上的抗体发生免疫反应。当加入标记的抗体后，由于抗原有多个结合点，又同标记抗体结合，最终在固相载体表面形成抗体一抗原一标记抗体免疫复合物。
3．B、F分离
用缓冲液洗涤除去游离的标记抗体，使B、F分离。
4．放射性强度的测定
测定固相所带的放射性计数率(cpm)：设样品cpm值为P，阴性对照标本cpm值为N，P／N≥2．1为阳性反应。标本中的抗原越多，最终结合到固相载体上的标记抗体越多，其pm值也就越大；反之则小。当标本中不存在抗原时；其cpm值应接近于仪器的本底计数。

⑽ 放射免疫分析法的简介

Radioimmunoassay RIA
利用同位素标记的与未标记的抗原同抗体发生竞争性抑制反应的放射性同位素体外微量分析方法。又称竞争性饱和分析法。1960年美国化学家R.S.耶洛和S.A.贝尔森提出此法，耶洛因此于1977年获得诺贝尔生理学或医学奖。
耶洛1921年生于纽约。父母都是犹太人，她从小酷爱自然科学。在大学里，她热衷于物理学，却致力于医学研究，她工作于纽约市布隆克斯区退伍军人医院，致力于“胜太荷尔蒙的放射免疫分析”。居里夫人自传和核子物理学家美籍意大利人费米的讲演，对她后来的事业产生了很大的影响。她渴望从事科学研究工作。然而，当时的美国，哪个大学也不同意将一笔物理学奖金给一个女人。她主动给一位杰出的化学家当非全日制秘书。由于工作出色，几个月后，伊利诺依大学给了她一份奖学金，并给了她一个助理研究员的位置。从1941年到1945年，她把主要精力都用在三项活动上：教学、钻研高深课题和准备核物理博士论文。她于1945年获得博士学位。从1945年起，她边授课，边研究，边着书立说，并在勃隆克斯医院筹备和开发新的放射性同位素应用工作。
早在得奖的二十多年，耶洛便在一个偶然的机会里，发现猪胰脏的胰岛素可用来治疗糖尿病，可以使病人产生抗体。这种发现与当时的治疗理论不太合适。因为治疗药物能引起抗体是不可思议的事，因此其发现并不为当时的人所接受。然而，这个发现却引导近代内分泌学的研究进入了新的境界，更由此而推展，使得已往不易测定的身体中的物质得以测定。这个方法就是放射免疫测定法，又叫放射免疫测定法（radioimmunoassav，简称RIA）。80年代初，应用此法测定的生物活性物质已达300种以上。