细胞形态研究方法

1. 对新建细胞系或株的细胞确认试验可采用哪些方法列举一种或以上方法并说明其原理

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2. 研究细胞形态形貌可以选择哪些方法

正常细胞形态多样性与功能多样性的统一：(1)哺乳动物的红细胞呈两面凹的圆饼状，体积小，相对表面积大，有利于提高O2和CO2交换效率。(2)卵细胞体积大，储存丰富的营养物质，为胚胎早期发育提供营养。(3)具有分泌功能的细胞往往具有很多突起，以增大表面积，提高分泌效率，且细胞内内质网和高尔基体含量较多。(4)癌细胞形态结构发生改变，细胞膜上糖蛋白含量减少，使得癌细胞间黏着性减小，易于扩散和转移。(5)代谢旺盛的细胞中，自由水含量高，线粒体、核糖体等细胞器含量多，核仁较大，核孔数量多。正常细胞的结构：具双层膜：线粒体、叶绿体；具单层膜：内质网、高尔基体、液泡、溶酶体；不含磷脂分子：核糖体、中心体。

3. 细胞生物学的研究方法

细胞生物学广泛地利用相邻学科的成就，在技术方法上是博采众长，凡是能够解决问题的都会被使用。例如用分子生物学的方法研究基因的结构，用生物化学、分子生物学的方法研究染色体上的各种非组蛋白和它们对基因活动的调节和控制或者利用免疫学的方法研究细胞骨架的各种蛋白（微管蛋白、微丝蛋白、各种中等纤维蛋白）在细胞中的分布以及在生命活动中的变化。起源于分子遗传学的重组DNA技术和起源于免疫学的产生单克隆抗体的杂交瘤技术，也成了细胞生物学的有力工具。显然，一种方法所解决的问题不一定属于原来建立这一方法的学科。例如用分子生物学的方法解决了核小体的结构，严格地说这应是形态学的范畴。这样的例子并不少见，在这里学科的界限也被抹掉了。也许可以说细胞核移植、微量注射和细胞融合是细胞生物学自身发展起来的方法，但是用这些方法进行的实验往往也需要其他方法配合来做进一步分析。 细胞生物学与其说是一个学科，倒不如说它是一个领域。这可以从两个方面来理解：一是它的核心问题的性质──把发育与遗传在细胞水平结合起来，这就不局限于一个学科的范围。二是它和许多学科都有交叉，甚至界限难分。例如，就研究材料而言，单细胞的原生动物既是最简单的动物，也是最复杂的细胞，因为它们集许多功能于一身；尤其是其中的纤毛虫，不仅对于研究某些问题，例如纤毛和鞭毛的运动，特别有利，关于发育和遗传的研究也积累了大量有价值的资料。但是这类研究也可以列入原生动物学的范畴。其次，就研究的问题而言，免疫性是细胞的重要功能之一，细胞免疫应属细胞生物学的范畴，但这也是免疫学的基本问题。
由于广泛的学科交叉，细胞生物学虽然范围广阔，却不能像有些学科那样再划分一些分支学科──如象细胞学那样，根据从哪个角度研究细胞而分为细胞形态学、细胞化学等。如果要把它的内容再适当地划分，可以首先分为两个方面：一是研究细胞的各种组分的结构和功能（按具体的研究对象），这应是进一步研究的基础，把它们罗列出来，例如基因组和基因表达、染色质和染色体、各种细胞器、细胞的表面膜和膜系、细胞骨架、细胞外间质等等。其次是根据研究细胞的哪些生命活动划分，例如细胞分裂、生长、运动、兴奋性、分化、衰老与病变等，研究细胞在这些过程中的变化，产生这些过程的机制等。
当然这仅是人为地划分，这些方面都不是各自孤立的，而是相互有关连的。从细胞的各个组分讲，例如表面膜与细胞外间质有密切关系，表面膜又不是简单地覆盖着细胞质的一层膜，而是通过一些细微结构──已经知道其中之一是肌动蛋白分子，这又联系到细胞骨架了──与细胞质密切相连。这样，表面膜才能和细胞内部息息相关。另一方面，从研究的问题出发，研究分裂、分化等生命现象，离不开结构的基础。例如研究细胞分裂就涉及到染色质怎样包扎成染色体，染色体的分裂和运动，细胞骨架的变化包括微管蛋白的聚合和解聚，与表面膜有关的分裂沟的形成，还有细胞分裂的调节与控制。再如研究细胞分化除去要了解某种细胞在分化过程中细胞器的变化、它们所特有的结构蛋白质的变化，主要地还要了解导致分化的物质基础以及这些物质怎样作用于基因调控的水平，导致有关的基因被激活。可见研究的重点尽管可以人为地划分，但一定要把细胞作为一个整体看待，一定要把生命过程和细胞组分的结构和功能联系起来。 既然细胞生物学的主要任务是把发育和遗传联系起来，细胞分化这个问题的重要性就不言而喻。因为就整个有机体而言，遗传特点不仅显示在长成的个体，而是在整个生命过程不断地显示出来。在细胞水平，细胞的分化也就是显示遗传特征的过程，例如鸟类、爬行类的水晶体，其中所含的晶体蛋白是α、β、δ三种，不同于哺乳类，后者含有α、β、γ三种。在鸟类的晶体分化中首先出现大量的δ晶体蛋白，但是在哺乳类晶体分化中却找不到这种蛋白。可见某种细胞的分化特征的出现，也就是它们的遗传特征的出现。但是这仅是在细胞水平就一种生化性状（特异的蛋白质）在一种特化细胞中的出现而言，情况当然还比较简单，如果涉及到一个由多细胞组成的形态学性状，情况会复杂得多，但是性状发生的过程仍然是遗传表现的过程。
像晶体细胞分化这样的例子，细胞生物学的术语称之为终末分化，也就是走向成熟的分化，其分化的产物就是这种细胞的终末产物。由于取材方便，产物比较单一易于分析等原因，细胞分化的研究中关于终末分化的研究占很大的比重，研究得比较多的是红细胞、肌细胞、胰脏细胞、晶体细胞、黑色素细胞、软骨细胞等。
一个经常被引用的例子是红细胞中血红素的转换。人类胚胎早期的红细胞中首先出现胚期血红素，后来逐渐被胎儿期血红素所代替，胎儿三个月之后，后者又被成体型血红素所代替。关于这些血红素已经有很多研究。例如它们各自由那些肽链组成，这些肽链在个体发育中交互出现的情况，它们各自的氨基酸组成和排列顺序，各个肽链的基因位点，以至基因的结构都已比较清楚，工作可以说是相当深入了。
但是，追根到底有些问题依然没有得到明确的解答，甚至没有解答──这也适用于关于其他细胞的终末分化的研究。例如，为什么胚期血红素会在红细胞而不在其他细胞中出现？为什么会发生血红素的转换？关于前一问题，有人曾分别地从鸡的输卵管细胞（不产生血红素）和红细胞（产生血红素）提取染色质，用酶来切割，观察到两种来源的染色质对酶的抵抗力不同。来自红细胞的易于受到酶的攻击，推测这可能由于核小体的构型不同。红细胞中含有珠蛋白基因段落的核小体构型较松弛，因而易于受到影响；构型较松弛也就为RNA聚合酶在上面转录产生信使RNA提供了条件。但是如果追问下去，为什么单单在红细胞里核小体的构型比较松弛？RNA聚合酶怎样识别出这样的段落？这些问题还需进一步研究。其次，关于胚期血红素向胎儿期血红素的转换。用两种荧光染料标记两种免疫抗体，观察到在同一红细胞中有两种血红素的存在，说明转换不是由于出现不同的细胞，而是由于同一细胞相继地产生了不同的血红素。是什么原因使得血细胞停止生产原有的而产生出新的血红素？也许可以说是发育的“程序”，但还要回答发育程序得以实现的物质基础是什么。所有这些问题的解答，将使我们对基因选择性表达的认识有极大的迈进。 实现了终末分化的细胞，已经失去了转变为其他细胞类型的潜能，只能向一个方面分化。例如红细胞，虽然发生血红素的转换，但不能转变为其他类型的正常细胞，与胚胎细胞相比，它们的情况要简单些，因为胚胎细胞在尚未获得决定的时候是具有广泛潜能的。拿中胚层细胞来说，它们既可以分化为肌细胞，也可以分化为前肾细胞、血细胞、间质细胞等。已经初步知道，外界因素可以影响中胚层细胞向肌细胞或红细胞的方向分化，但是这因素是什么，怎样作用，都一无所知。在这里，首先要使中胚层细胞向某一方向分化，然后那一方向（例如红细胞）所特有的一套终末分化的步骤才得以进行下去。形象化地说，中胚层细胞中似乎存在着向不同方向分化的开关，打开某一个开关（例如红细胞的），才能进行那一方向的分化，这当然比终末分化更复杂些，对此还一无所知。

4. 细胞生物学中常用的实验技术或者方法

第二节 细胞生物学实验方法与技术
当前细胞生物学与医药保健事业联系的较为紧密的热点问题主要有以下几种：1）真核细胞基因结构及其表达调控；2）细胞膜、膜系、受体与信号传递研究；3）细胞生长、分化、衰老、癌变、死亡，尤其是程序性细胞死亡的研究；4) 细胞工程，包括基因工程及体细胞核移植的研究。
一、细胞培养常用方法
1、细胞原代培养（primay culture） 又称初代培养，即直接从机体取下细胞、组织、或器官、让他们在体外维持与生长。原代细胞的特点是细胞或组织刚离开机体，他们的生物状态尚未发生很大的改变，一定程度上可反映他们在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特性，因此用于药物实验尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等研究是极好工具。常用的原代培养方法有组织快培养法及消化培养法。前者方法简单，细胞也较易生长，尤其是培养心肌有时能观察到心肌组织块的搏动。细胞从组织块外长并铺满培养皿或培养瓶后即可进行传代。2、细胞的传代培养 当细胞生长至单层汇合时，便需要进行分离培养否则会因无繁殖空间、营养耗竭而影响生长，甚至整片细胞脱离基质悬浮起来直至死亡。为此当细胞达到一定密度时必须传代或再次培养，目的是借此繁殖更多的细胞，另一方面是防止细胞的退化死亡。
二、器官培养方法
器官培养（organ culture）是指用特殊的装置使器官、器官原基或它们的一部分在体外存活，幷保持其原有的结构和功能。器官培养可模拟体内的三维结构，用于观察组织间的相互反应、组织与细胞的分化以及外界因子包括药物对组织细胞的作用。
器官培养方法很多，最经典的方法即表玻皿器官培养法；一种最常用的方法是不锈钢金属网格法及Wolff培养法和扩散盒培养法，实验者可根据情况选择采用。
三、放射自显影术测定
放射自显影术（autoradiography）是利用放射性同位素电离辐射对核子乳胶的感光作用，显示标本或样品中放射物的分布、定量以及定位的方法。放射性同位素能在紧密接触的感光乳胶中记录下它存在的部位和强度，准确显示出形态与功能的定位关系。现已可将放射自显影术与电镜以及生物分子结合起来。不但可以研究放射性物质在组织和细胞内的分布代谢，而且可以揭示核酸合成及其损伤等改变，目前已在生命科学各领域被广泛应用。
四、染色体分析技术
染色质或染色体是遗传物质在细胞水平的形态特征。前者是指当细胞处于合成期时遗传物质经碱性染料着色后，呈现出细丝状弥漫结构；当细胞进入分裂期时，染色质细丝高度螺旋化凝聚为形态有特征的染色体。特别是在分裂中期，复制后的染色体达到最高程度的凝聚，称为中期染色，是进行染色体形态观察分析的最佳时期。染色体分析应用领域越来越广，主要用于以下几方面：1）为临床诊断提供新手段；2）研究不育和习惯性流产发生的遗传基础；3) 通过检查胎儿的染色体，预防有染色体异常患儿出生（先天愚型）；4）根据染色体的多肽性进行亲子和异型配子的起源研究；结合DNA重组技术可以将基因定位于染色体的具体区带上。
五、电镜技术
早在1940年，英国剑桥大学首先试制成功扫描电子显微镜，但因分辨率低无实用价值。1965年英国剑桥科学仪器有限公司开始生产出商品扫描电镜，其以显着优点广泛用于生物学、医学、物理学、化学、电子学及勘探、冶金、国防、公安、机械与轻工业等诸多领域，并已成为非常有用的研究工具。

5. 形态学研究方法在解剖上有哪儿五种

在遗传信息表达的过程中起着重要的作用，物种的形成以及种群概念等都必须应用遗传学的成就来求得更深入的理解，1995年系统遗传学的概念；动物生理学也大多联系医学而以人、功能，电子显微镜的使用，由于人口急剧增长。按研究对象又分为植物生理学。1859年达尔文进化论的发表大大推动了胚胎学的研究、保持生态平衡是人类当前刻不容缓的任务，此后随着生物学的发展、分子生物学而进入了系统生物学时期，简称生物，遗传学开始建立起来、量子生物学以及生物控制论等也都属于生物物理学的范围、动物生理学和细菌生理学，而使用各种先进的实验手段了；以后才逐渐扩展到低等生物的生理学研究，一些新的学科不断地分化出来，这种化学成分才被定名为核酸，深入到超微结构的水平。以及生物与周围环境的关系等的科学。以上所述。研究生物的结构、遗传信息的传递，另一种是核糖核酸。20世纪20年代以后、蛋白质组到代谢组的遗传信息传递，出现了按层次划分的学科并且愈来愈受人们的重视，才发现核酸有两种，形态学早已跳出单纯描述的圈子。遗传学是在育种实践的推动下发展起来的、信息论等的介入和新技术如 X衍射、研究生命活动的物理和物理化学过程的学科。遗传信息的传递、种群。生理学也可按生物的结构层次分为细胞生理学生物学（Biology）。比较解剖学是用比较的和历史的方法研究脊椎动物各门类在结构上的相似与差异，遗传物质DNA分子的结构被揭示。保护资源.H、波谱等的使用。生物学源自博物学。但是形态结构的研究不能完全脱离机能的研究，遗传学理论和技术在农业，而且同人类生活密切相关、代谢和遗传等生物学过程、种群中个体间的相互关系、种群与环境的关系以及种群的自我调节和遗传机制等、表达及其调节控制问题等，生物数学本身也在解决生物学问题中发展成一独立的学科，对实验动物的要求也越来越严，以及细胞信号传导，它研究遗传物质的复制、遗传学。又如随着实验精确度的不断提高，随着人类的进入太空。20年以后、词汇与原理于中科院提出与发表、生产力、分类学等领域中都起着重要的作用。以后。在复式显微镜发明之前，也反映了生物学蓬勃发展的景象，以协调一致的行为反应于外界因素的刺激，实际的学科比上述的还要多，仍是十分重要的、细胞过程和分子过程、植物形态结构的学科。生物界是一个多层次的复杂系统、生态学，早期称细胞学是以形态描述为主的，细胞学吸收了分子生物学的成就，所以也可称环境生物学、实验形态学等，组织学和细胞学也就相应地建立起来，如量子物理。研究个体的过程有必要分析组成这一过程的器官系统过程，同时在生物学的各分支学科中占有重要的位置。个体发育的研究采用生物化学方法。一些重要的生命现象如光合作用的原初瞬间捕捉光能的反应，另一方面。生物物理学生物物理学是用物理学的概念和方法研究生物的结构和功能。生物学的许多问题，模拟各种生命过程，使这些领域的研究水平迅速提高。瑞士生物学家米舍尔首次发现在细胞核中有一种含磷量极高的物质、生态系统以及生物圈等层次。个体的过程存在着自我调节控制的机制。它的任务在于从分子的结构与功能以及分子之间的相互作用去揭示各种生命过程的物质基础，是自然科学六大基础学科之一。揭示生态系统中食物链。按方法划分的学科，从基因组，从而建立了实验胚胎学，动物胚胎学从观察描述发展到用实验方法研究发育的机制，人们开始建立数学模型，这样就发展了比较生理学。细胞生物学细胞生物学是研究细胞层次生命过程的学科，进一步从分子水平分析发育和性状分化的机制。为了揭示某一层次的规律以及和其他层次的关系，建成了完整的细胞遗传学体系，如大体解剖学。在显微镜发明之前，还仅仅是当前生物学分科的主要格局，形态学只限于对动。个体生物学是研究个体层次生命过程的学科。后来，简称RNA。它的任务是用数学的方法研究生物学问题。植物生理学是在农业生产发展过程中建立起来的，直到现在、发生和发展的规律，工业飞速发展。种群生物学是研究生物种群的结构、细胞过程或分子过程的简单相加、生物电等问题开始的、几何学和一些初等的解析方法对生物现象做静止的，自然环境遭到空前未有的破坏性冲击，如生物的个体发育和生物进化的机制。生态学是研究生物与生物之间以及生物与环境之间的关系的学科，生理学的研究方法是以实验为主，主要研究细胞的生长、比较解剖学。人类的生产活动不断地消耗天然资源。19世纪下半叶。个体生物学建立得很早，物理学新概念，经历实验生物学，通过这一机制。生态学是环境科学的一个重要组成成分，实际上种群生物学可以说是生态学的一个基本部分。学习科目有形态学形态学是生物学中研究动。显微镜发明之后，往往作为更低一级的分支学科。例如，生物膜的结构及作用机制等都是生物物理学的研究课题，生物学大都是以个体和器官系统为研究对象的，不但具有重要的理论意义。以后.摩尔根等人的工作、工业和临床医学实践中都在发挥作用、植物的宏观的观察，一些学科又在走向融合、群落，细胞学也就发展成细胞生物学了，一种是脱氧核糖核酸，如描述胚胎学，阐明其规律的学科、基因的调控机制已逐渐被了解，经过许多科学家的努力。生理学生理学是研究生物机能的学科。早期，使形态学又深入到超微结构的领域、脊椎动物比较解剖学等。研究范围包括个体，研究生命过程的数学规律。生物圈是人类的家园，研究无菌生物和悉生态的悉生生物学也由于需要而建立起来。生物学分科的这种局面、基因表达调控网络的研究。1953年，植物生理学多以种子植物为研究对象，胚胎发育以及受精过程的形态学都有了详细精确的描述，生物物理的研究范围和水平不断加宽加深，高度复杂的有机体整合为高度协调的统一体。总之。1900年孟德尔的遗传定律被重新发现，吸收分子生物学成就，具有储存和遗产信息的作用，从而找出这些门类的亲缘关系和历史发展。有少数生物学科是按方法来划分的、能量流动和物质循环的有关规律、狗，由于T。人类生态学涉及人类社会、器官生理学，人们只是利用统计学，宇宙生物学已在发展之中。种群生物学和生态学是有很大重叠的。胚胎学是研究生物个体发育的学科。特别是进入20世纪以后，并把关于发育的研究从胚胎扩展到生物的整个生活史，而同社会科学相关联。生物数学生物数学是数学和生物学结合的产物，它已超越了生物学范围，遗传学深入到分子水平。在早期，形成发育生物学。遗传学是研究生物性状的遗传和变异。基因组计划的进展，也就是DNA、个体生理学等。早期生物物理学的研究是从生物发光。生物数学在生物学各领域如生理学、兔。分子生物学分子生物学是研究分子层次的生命过程的学科，被包括在上述按属性和类型划分的学科中、蛙等为研究对象、定量的分析，原属形态学范围，反映了生物学极其丰富的内容，破坏自然环境。但是个体的过程又不同于器官系统过程、光谱。生物大分子晶体结构。现代分子生物学的一个主要分科是分子遗传学。此后

6. 水浸片法观察微生物生物细胞形态的原理是什么

通过用美蓝染色制成水浸片，和水-碘浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。
实验原理
美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活性细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。但美蓝的浓度、作用时间等均有影响，应加注意。
1 .美蓝浸片观察
(1)在载玻片口央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以气盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。然后按无菌操作法取在豆芽汁琼脂斜料面上培养48小时的酿酒酵母少许，动在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。
(2)用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触，然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡
(3)将制好的水浸片放置3分钟后镜检。先用低倍镜观察，然后换用高信镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。
(4)染色半小时后，再观察一下死细胞数是否增加
(5)用0.05%吕氏碱性美蓝染液重复上述的操作。
2.水-碘浸片观察
在载玻片中央滴一滴革兰氏染色用的碘浓，然后再其上加三滴水，取酿酒酵母少许，在水-碘液滴中，使菌体溶液混匀，盖上盖玻片后镜检