血球計數板使用方法

① 血球計數板使用方法

血球計數板是用於測定微生物數量的精密工具。在進行操作前，應將待測菌懸液稀釋至適當濃度，一般斜面稀釋100倍，以確保每小格內的菌體數量可計數。

接著，准備一塊潔凈的血球計數板，用蓋玻片覆蓋計數區。將菌懸液均勻搖勻後，用滴管吸取適量液體，從計數板中間平台兩側的溝槽內沿蓋玻片邊緣滴入，讓菌懸液自行填滿計數區，注意避免氣泡產生，並用吸水紙吸去多餘液體。

等待一段時間，讓細胞沉降，不再隨液體漂移。然後，將血球計數板置於顯微鏡下，先使用低倍鏡找到計數區，再切換至高倍鏡進行觀察與計數。在觀察時，應適度減弱光線強度，以便更清晰地識別細胞。

對於16中方格組成的計數區，需計數左上、左下、右上、右下的4個中方格（共100個小格）內的菌數。若計數區有25中方格，則還需計入中央1中方格的菌數（共80個小格）。為確保計數准確性，應統一規定如何處理位於格線上的細胞。例如，如果菌體位於大方格的線上，僅計數上線不計下線，僅計數左線不計右線，以減少誤差。

對於出芽的酵母菌，當芽體達到母細胞大小的一半時，可將其作為兩個菌體計算。每個樣品應重復計數2-3次（每次數值不應相差過大，否則應重新操作），並根據公式計算出每毫升（克）菌懸液所含細胞數量。

完成計數後，小心取下蓋玻片，用清水沖洗血球計數板，避免使用硬物洗刷或抹擦，以保護網格刻度。將血球計數板自然晾乾或用吹風機吹乾後，存放在盒內。

血球計數板被用以對人體內紅、白血球進行顯微計數之用，也常用於計算一些細菌、真菌、酵母等微生物的數量，是一種常見的生物學工具

② 血球計數板的使用方法

使用方法如下：

1.視待測菌懸液濃度，加無菌水適當稀釋（斜面一般稀釋100倍），以每小格的菌數可數為度。

2．取潔凈的血球計數板一塊，在計數區上蓋上一塊蓋玻片。

3．將菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計數板中間平台兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴（不宜過多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數區，勿使氣泡產生，並用吸水紙吸去溝槽中流出的多餘菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數區上（不要使計數區兩邊平台沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片後，造成計數區深度的升高），然後加蓋蓋玻片（勿使產生氣泡）。

4．靜置片刻，使細胞沉降到計數板上，不再隨液體漂移。將血球計數板放置於顯微鏡的載物台上夾穩，先在低倍鏡下找到計數區後，再轉換高倍鏡觀察並計數。由於生活細胞的折光率和水的折光率相近，觀察時應減弱光照的強度。

5．計數時若計數區是由16個中方格組成，按對角線方位，數左上、左下、右上、右下的4個中方格（即100小格）的菌數。如果是25個中方格組成的計數區，除數上述四個中方格外，還需數中央1個中方格的。

菌數（即80個小格）。為了保證計數的准確性，避免重復計數和漏記，在計數時，對沉降在格線上的細胞的統計應有統一的規定。如菌體位於大方格的雙線上，計數時則數上線不數下線，數左線不數右線，以減少誤差。即位於本格上線和左線上的細胞計入本格，本格的下線和右線上的細胞按規定計入相應的格中。見右圖：即本格中計數細胞為3個。

6．對於出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數2-3次（每次數值不應相差過大，否則應重新操作），按公式計算出每mL（g）菌懸液所含細胞數量。

7．測數完畢，取下蓋玻片，用水將血球計數板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網格刻度。洗凈後自行晾乾或用吹風機吹乾，放入盒內保存。

(2)血球計數板使用方法擴展閱讀:

計數公式

紅細胞數(RBCs)/L=N/5×25×10×106×200

N為：五個中方格的RBC總數

N/5為：5個中方格（粉紅色區域）的平均RBC數量（然後推及至中央大方格中每一個中方格RBC的數量）

N/5×25為：中央大方格RBC總數（即：0.1mm3（ul）的RBC總數）

N/5×25×10為：1mm3（ul）RBC總數

N/5×25×10×106為：1L的RBC總數

200為：血液的稀釋倍數

公式簡化後：紅細胞數/L=N×5×107×稀釋倍數

公式前面部分都是換算成每微升血多少該計數細胞；最後都是由微升換算到升，乘以10的6次方

(1)目鏡測微尺每格長度=兩個重疊刻度間物鏡測微尺格數×10/兩個重疊刻度間目鏡測微尺格數

(2)以同樣方法,分別在不同倍率的物鏡下測定測微尺上每格的實際長度.

(3)如此測定後的目鏡測微尺的尺度,僅適用於測定時所用的顯微鏡的目鏡和物鏡的放大倍數.若更換物鏡,目鏡的放大倍數時,必須再進行校正標定.

參考資料:血球計數板-網路