1. 常用的細胞克隆化方法有哪些
克隆化培養方法
1．有限稀釋法克隆培養
通過有限稀釋，使細胞密度低至一定程度再接種培養在適宜於單細胞生長的培養液中，形成單獨的細胞克隆。細胞克隆是指1個細胞來源．經過細胞分裂形成獨立的細胞集落。此法進行的克隆化培養，建議使用平底96孔細胞培養板。接種密度控制在10~200個／ml。在計數准確，細胞活性正常的情況下，一般稀釋為20個／ml，每孔接種200μl，這樣每孔落人細胞數平均為1，獲得單克隆生長孔的概率最大，數量最多。
有些細胞的克隆化培養效果不理想的原因與它們在低密度下沒有能力生存有關。要使細胞在克隆化培養環境下低密度目標細胞能正常生存，可以模擬高細胞密度的環境，就是讓目標細胞在含飼養細胞的培養體系中培養。飼養細胞是一類不能連續分裂的細胞，或者說是一類不能長期存活的細胞，一般存活不超過1~2周。
在小鼠雜交瘤細胞做克隆化培養時，通常建議使用健康小鼠的腹腔細胞做飼養細胞，使用時，調整飼養細胞在培養體系中的密度為2~4×104個／ml。另外，也有使用小鼠腎細胞做飼養細胞的例子。
2．瓊脂中的克隆化培養
在鋪有底層瓊脂的培養孔中進行，由於瓊脂凝膠的穩定性使得子代細胞不容易脫落細胞集落。溫度高時瓊脂呈液態，37℃時成凝膠狀態。目標細胞事先短暫地懸浮在55℃的液態瓊脂溶液中進行快速鋪板操作，待瓊脂凝固後進行培養，形成散在的獨立克隆，方便分離克隆。如果瓊脂形成凝膠的溫度比較低，可以經過4℃形成凝膠後再進行培養。
建議使用培養皿、6 孔細胞培養板做此類克隆化培養。培養皿或6孔細胞培養板無需經TC處理。
根據生長速度、細胞形態、集落形態等特徵選擇所需的克隆。事先標注克隆的相對位置，挑選時可以使用長絲滴管或微量移液器吸嘴直接吸取，為避免受到周邊其他克隆的干擾，建議先去除多數培養液後再吸取克隆。
2. 有限稀釋法為什麼克隆化培養一段時間之後再進行抗體檢測
因為雜交瘤要反復克隆2-3次後才能達到百分之百的細胞陽性率。
有限稀釋法是一種常用的克隆方法，將需要再克隆的細胞株自培養孔內吸出並作細胞計數，計出1mL的細胞數。
實驗原理是克隆化培養即單細胞培養技術，用有限稀釋法進行雜交瘤細胞克隆化培養，可以及時確定陽性雜交瘤細胞株，同時淘汰因發生染色體丟失或抗體的輕、重鏈基因分離而出現無抗體分泌陰性細胞株。