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電泳條帶拖尾解決方法

發布時間:2022-10-25 12:35:33

❶ 跑dna電泳出現拖尾現象,不知道為何

你的情況,應該從以下兩個方面找原因:
1.一般來說,marker除了能檢測DNA的分子質量外,還可以側面反應你的膠是否制的成功,從你的圖上看,膠的問題比較大一些,膠的濃度和你溶膠的時間以及最後的溶解情況都有一些關系,跑過pcr後分子大小等出現了變化,也可能是受到了空氣的污染等,為了檢測你的maker是否有問題,可以在同塊膠上點上別的MAKER,或者請別人幫你制膠後再跑一下。

2.鎂離子的濃度問題,鎂離子濃度不合適本身就很容易拖尾,前8個樣在跑PCR的時候都加了鎂離子,而總DNA沒有,這也是他們的區別,也可以從這點找找原因。

❷ 酶切電泳條帶拖尾的原因

建議你做如下改進:
1.原始質粒上樣2ul,電泳檢測,確定質粒質量沒問題;
2.所有酶切體系均改為10ul,其中質粒2ul,酶0.1ul (雙酶切時另一種酶也加0.1ul ),buffer終濃度為 1×,剩下為去離子水.酶切時間為4小時左右.
3.電泳用的凝膠最好為新鮮配製的,濃度視質粒大小而定,一般為1%;
電泳的緩沖液最好也是新鮮配製的,電泳電壓適當.
1KB的條帶拖尾嚴重,可能是凝膠不新鮮,或者是電泳時電壓過高,或者是酶切時間過長.上述建議中已經給出解決方法.
至於你說的奇怪現象,可能質粒已經降解,也可能是酶切過久導致降解,也可能是槍頭或者離心管等器材污染,總之保證一切是新鮮的,再做一次.

如何解決PCR產物電泳拖尾現象

這個可能與DNA降解有關,導致了DNA不純 所以會拖尾
解決方案 加電壓 跑得快 避免與手接觸 要去除核酸酶 加些SDS吧

這只是理論看法 未經實踐 希望對你有幫助 如果有條件 就試一試 記得告訴我結果 謝啦^ ^

❹ 總DNA電泳拖尾嚴重是什麼原因

現在實驗室大多用的是提取試劑盒,如果自製溶液鹼性過強會有可能出現拖尾現象,蛋白沉降步驟不完全也會有可能導致基因組dna降解出現拖尾現象。類似於溶液方面的問題一般比較容易排除,而且比較容易改正。
電泳結果拖尾大部分原因與實驗操作有關,在加入鹼性溶液裂解細胞後操作需要輕柔,靜置時間不宜過長,劇烈震盪以及靜置時間過長均可導致質粒dna斷裂,電泳結果中出現拖尾現象。
有什麼問題可以繼續追問,歡迎交流。

❺ 電泳DNA時,拖尾現象很嚴重,造成這種現象的原因有哪些

電泳出現拖尾現象,英文成為smear,就是彌散.其原因,主要從以下兩個方面考慮:
1、PCR產物自身原因:
往往由於酶量過多或酶的質量差,dNTP濃度過高,Mg2+濃度過高,退火溫度過低,循環次數過多,而造成PCR的非特異性產物 過多.
對策:①減少Taq酶的量,或調換另一來源的酶.②減少dNTP的濃度.③適當降低Mg2+濃度.④增加模板量,減少引物的用量 ,減少循環次數,提高退火溫度.
2、電泳體系的問題:
(1)電泳緩沖液TAE或者TBE的污染,建議更換緩沖液.(2)上樣時樣品漂了,建議增加上樣緩沖液的用量,以及小心加樣.(3)電壓太高.(4)適當把你的膠的濃度加大.(根據你的片斷大小而定)(5)觀察你的marker是否也存在拖尾現象,作為對照.

❻ PCR產物跑電泳時發生拖尾,這是什麼原因造成的

PCR產物電泳拖尾,可能有如下原因: a.模板不純。b.退火溫度偏低。c.酶量過多,dNTP、Mg2+濃度偏高。d.循環次數過多。 解決辦法:a.純化模板。b.適當提高退火溫度。c.降低酶量,適當降低dNTP和鎂離子的濃度。d.減少循環次數

❼ 電泳圖如下,marker有拖尾現象,是怎麼回事

  1. 很可能是膠沒煮好!煮的時候要沸騰三次,搖勻,不然膠的密度不均一。

  2. 電壓,電壓過高也會拖帶

  3. 可以適當提高電泳槽裡面的緩沖液濃度。

  4. 如果還是不好,可以換一個稍微寬一點的梳子,一般效果會好很多。

❽ 如何防止DNA電泳拖尾

PCR擴增有時出現塗抹帶或片狀帶或地毯樣帶。

其原因往往由於酶量過多或酶的質量差或酶的專一性不夠,DNA模板量過大,dNTP濃度過高,Mg2 濃度過高,退火溫度過低,循環次數過多,模板長於3kd所引起。

  1. 減少酶量(一般以2單位Taq DNA聚合酶為基點,分梯度上下調一調,其他酶也差不多如此濃度,可以參考說明書);加強DNA聚合酶的專一性或調換另一來源的專一性更好的DNA聚合酶。

  2. 增加DNA聚合酶的專一性。

    (1)改用專一性更強的DNA聚合酶,或者使用兩種不同的DNA聚合酶,減低酶量或調換另一來源的專一性高的酶。更換DNA聚合酶時,酶量不要太大,以免出現特異性擴增。 (2)酶制劑中的甘油可能也是干擾因素。可以加入反應體系之前用超濾去除酶制劑中的甘油,若此操作引起酶的濃度過高,可以適當加雙蒸餾水稀釋。

    (3)為了加強Taq DNA聚合酶的專一性。 的專一性,可在反應體系中加入:1-1.5mol/L的甜菜鹼或者5%的DMSO可以提高PCR擴增效率,兩者可以增加Taq DNA聚合酶的穩定性。

  3. 適當減少dNTP的濃度;減少dNTP的濃度一般需要與降低Mg2 濃度同方向偶聯進行,但是不必按同樣的比例。

  4. 適當降低Mg2 濃 度,可以採用梯度遞減方式,以每次0.5mol/L遞減,但是Mg2 的終濃度不要低於1.0mol/L。

  5. 縮短PCR反應的退火溫度時間或調高復性溫度。沒有重新設計引物之前,不要大范圍地變動反應體系的復性溫度,要在引物的Tm少5-10度的范圍內變動。如果出現非特異性擴增,則在引物的Tm少5-10度的范圍內把PCR反應的復性溫度提高1-3度。

  6. 使用梯度降低PCR。在以基因組DNA為模板進行PCR擴增時,非特異性擴增較多,這時,最初的退火溫度選用比Tm高5-10度。然後每隔1個循環,退火溫度降低1-2度,直至到達正常的Tm附近的退火溫度。

  7. 採用使用專一性更強的梯度降低PCR、熱啟動PCR和巢式PCR。使用熱啟動模式。使用熱啟動時可以購買商用的PCR熱啟動酶,也可以用石蠟隔離模式。巢式PCR也有現成的試劑盒可以購買。

  8. 保證PCR反應的DNA模板的質量,要用電泳檢測一下分子量和純度,質量不好則要重新提取和純化DNA模板;適當增加DNA模板量,減少循環次數。

  9. 以上措施都不行時,最後就只能重新設計引物,加強引物的專一性。

  10. 適當減少DNA模板量。

  11. 適當減少循環次數,一般也就循環25次就差不多了。

❾ 這是我的pcr產物凝膠電泳圖,哪位大神可以解答一下,為什麼會出現前後拖帶怎樣解決這個問題

正常現象,沒必要大驚小怪,你如果是用基因組作為模板的話,出現拖尾是很正常的現象,畢竟基因組序列那麼大,出現一些與引物部分序列互補的序列區間也是可能的,如果是其他的DNA作為模板,則有可能是你的模板不純造成的,另外體系中有些物質,比如SDS也可能顯示一些假帶,造成判帶困擾,所以你可以無視這種現象,只關心你的目的條帶是否擴增出來即可

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