哪種方法可用於細菌檢測

㈠ 進行菌種質量檢測的常用方法有哪些

1、直接觀察。對引進菌種觀察包裝是否合乎要求，棉塞有無松動，試管、玻璃瓶和塑料袋有無破損，棉塞和管、瓶或袋中有無病蟲侵染，菌絲色澤是否正常，有無發生變化。然後在瓶塞邊作深吸氣，聞其是否具備特有的香味。原種和栽培種可取出小塊菌絲體觀察其顏色和均勻度，並用手指捏料塊檢驗含水量是否符合標准。

2、顯微鏡檢驗。若菌絲透明，呈分枝狀、有橫隔、鎖狀聯合明顯，再加上具有不同品種固有的特徵，則可認為是合格菌種。

3、觀察菌絲長速。將供測的菌種接入新配製的試管斜面培養基上，置於最適宜的溫、濕度條件下進行培養，如果菌絲生長迅速、整齊濃密、健壯有力，則表明是優良菌種，否則即是劣質菌種。

優質菌種的標准

食用菌的種類雖然繁多，但從總體上看，每一個優良菌種均有＂純、正、壯、潤、香＂的共性。其標準是：

1、菌種的純度要高，不能有雜菌感染，也不能有其他類似的菌種。

2、菌絲色澤要純正，多數種類的菌絲應純白、有光澤，原種、栽培種菌絲應連結成塊，無老化變色現象。

3、菌絲要粗壯，分枝多而密，接種到培養基吃料塊，生長旺盛。

4、培養體要濕潤，與試管（瓶）壁緊貼而不幹縮，含水適宜。

5、具有每品種特有的清香味，不可有霉、腐氣味。

㈡ 細菌學有哪些檢驗方法

直接塗片檢查：取混勻新鮮尿塗片，健康人的尿塗片無細菌。若每個油鏡視野下可見1條或以上的細菌，提示為菌尿。並可行革蘭氏染色，初步確定尿路感染細菌是陽性球菌或陰性桿菌。細菌培養：目前多採用定量接種環法，培養24h，計數菌落。陰性桿菌分裂快，菌落數>l〇5cfo/ml，提示菌尿，菌落數104〜105cfo/ml為可疑。陽性球菌分裂慢，菌落數>103cfU/ml為菌尿。結核菌檢查：尿結核菌檢查是確定有無泌尿系結核的重要方法，尿沉渣塗片抗酸染色較簡單，陽性率為50%〜70%;清晨第1次尿送檢則陽性率高。尿結核菌培養陽性率可達90%，但結核菌生長緩慢。使用改良羅氏培養基，一般需4〜8周始能報告結果。近年常用聚合酶鏈反應（PCR)方法，使含微量結核菌DNA擴增，40條結核菌即可有陽性結果，此法特異性強，2d可有結果，但時有假陽性或假陰性的情況。菌尿的輔助檢查亞硝酸鹽試驗：革蘭陰性桿菌如大腸、副大腸桿菌能將尿中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，而球菌和結核菌無還原硝酸鹽的能力，因此亞硝酸鹽試驗陽性，提示革蘭陰性桿菌的感染。氯化三苯四氮唑試驗（TTC試驗）；大部分革蘭陰性活桿菌能將無色TTC還原為紅色的三苯甲替，而球菌及變形桿菌則呈陰性。故可用以初步判定是哪一類細菌感染。尿抗體包裹細菌（ACB):腎盂腎炎為腎實質感染，在細菌抗原作用下，機體可產生相應抗體，抗體將致病菌包裹，在熒光鏡下觀察用熒光素標記的抗人體蛋白抗體處理的尿細菌，若表面有熒光抗體包裹則大多屬腎盂腎炎，膀胱炎為黏膜淺表感染，故細菌表面無熒光抗體包裹。用ACB法有助於上、下尿路感染的定位診斷。但在前列腺炎患者，其ACB試驗亦呈陽性，應注意鑒別。其他：另外還有過氧化物酶試驗、葡萄糖氧化酶試驗、鱟試驗及尿氧壓測定均可幫助診斷尿路感染，但目前臨床上應用較少。

㈢ 可以通過什麼方法觀察細菌(除放大法）

觀察細菌個體的主要方法是染色法,一般會用到革蘭氏染色法,然後顯微鏡觀察.
觀察細菌的群落一般是直接觀察法,一般觀察其菌落形狀,大小,顏色,邊緣光滑與否,表面濕潤與否,這是判斷細菌種類的重要方法.
另外如果要觀察細菌的超微結構,就要用到電子顯微鏡（當然這也是放大的范疇）
廣義上的觀察,也可以通過檢測細菌相應的一些次級代謝產物進行.

㈣ 簡述細菌檢測的方法及優缺點

簡述細菌檢測的方法及優缺點：
可以直接用顯微鏡觀察其運動情況。另外，鞭毛是細菌的運動器官，因此還可以通過檢測細菌鞭毛的存在來間接判斷細菌是否具有動力。記憶中的方法有這些：

1.使用顯微鏡
可以用普通的光學顯微鏡，通過一些特殊的方法觀察菌液中細菌的活動情況。有條件的話還可以使用一些比較高端的顯微鏡，比如相差顯微鏡等。
2.使用半固體培養基進行培養
有鞭毛的細菌可沿穿刺線擴散生長，穿刺線周圍會變模糊；無鞭毛的細菌只能沿穿刺線生長，周圍澄清透明。
3.鞭毛染色
使用特殊染料染色，以方便在顯微鏡下觀察。
4.免疫學方法
通過抗原抗體反應，檢測細菌鞭毛的存在。

㈤ 細菌鑒定辦法有哪些，常見細菌的鑒定辦法就可以

細菌的鑒定通過分離培養獲得的病原菌，必須達到不含有其他微生物的純培養程度，才能進行系統鑒定。系統鑒定就是通過病原菌的形態結構、生長特性、抗原性和病原性等檢測，並用已知標准免疫血清確定分離細菌的屬、種和型。微生物鑒定的程序通常是根據其形態，生長、生化特性等定種，最後根據抗原的免疫血清學檢查定型。(一)形態學檢查各種細菌的形態，在適宜的環境下是相對穩定的。但環境的改變，如培養基條件的改變，抗生素和化學葯品的作用等，均可使細菌產生不規則的形態，並可出現細胞壁的缺陷和多樣性。為此，在作細菌形態鑒定時，必須按被檢菌的生長要求，選擇適宜的培養基和培養條件，以及適宜的培養時間和檢查方法，才能作出正確的形態學鑒定。形態學檢查一般包括二方面：肉眼觀察和顯微鏡檢查。1.肉眼觀察肉眼觀察主要觀察細菌在固體、液體、半固體，鑒別培養基上的生長情況。在固體培養基上要觀察菌落形態、大小、顏色是否均勻一致，表面是光滑濕潤，還是乾燥無光或呈皺紋狀，邊緣是整齊還是不規則，菌落是隆起、扁平，還是乳頭樣，是透明、半透明或不透明。在液體培養基中，要觀察培養基是否呈均勻渾濁，管底有無沉澱，液面有無菌膜，是否產氣等。在半固體培養基上應觀察細菌是否沿著接種線生長，是呈毛刷樣生長還是均勻生長，上下生長是否一致。在鑒別培養基上，應觀察其生長情況是否與預期的相一致，在血瓊脂培養基上還要觀察是否溶血及溶血圈的特點，在某些培養基上還要注意是否有臭味等。2.顯微鏡觀察在作細菌個體形態學檢查時，要根據被檢菌的種類和檢查項目，選用相應的染色方法，同時要注意選擇適合的培養基以及細菌培養的時間，才能達到預期的目的。一般以18－24小時（生長時間長的細菌除外）的幼嫩培養菌為宜。例如，作革蘭氏染色檢查時，培養時間長的陳舊細菌，可能由陽性變為陰性。作細菌運動性檢查時，液體培養基的幼嫩培養物（幾小時到十幾小時）最為適宜。作炭疽莢膜染色時，因炭疽桿菌在一般培養基上不形成莢膜，而在動物體內形成明顯的莢膜，因此，應先接種小鼠，取死亡動物的病料作塗片標本鏡檢。作鞭毛染色時，以液體培養基為宜。芽胞的形成，因細菌種類不同，往往對培養條件如培養基、空氣和培養時間等而異，但一般均要求較長時間。鏡檢時除注意其基本形態結構和大小（要用測微計測量）外，還應注意其排列狀態、菌端形狀、有無兩極染色、有無形成芽胞和莢胞等。必要時可用電鏡觀察其微細結構。3.常用的幾種染色方法塗片用的載玻片需用清潔液洗凈、擦乾、不留油質，否則培養物不能均勻地推開。被檢材料如果是肉湯培養物，用鉑金耳環取一滴，均勻塗抹於載玻片上，塗抹的范圍約有手指甲大即可。隨後，在酒精燈火焰上加熱使之固定（即火焰固定）；被檢材料如果是固體培養物，先滴一滴水（常用生理鹽水）於載玻片上，用鉑金耳環取少許培養物，在水滴中混勻，培養物不宜太多，菌體看不清楚。膿汁、淋巴液、乳汁也按同樣方法制備抹片。血液和病變組織，直接塗抹在載玻片上，組織抹片也不能太厚，否則看不見細菌，細菌培養物抹片用火焰固定，組織抹片常用甲醇或甲醛固定。

㈥ 細菌總數的檢驗方法是什麼

細菌總數是水質參數之一，指單位體積水中的細菌總量。其檢驗方法是:在玻璃平皿內,接種一毫升水樣或稀釋水樣於加熱液化的營養瓊脂培養基中，冷卻凝固後在37°C培養24小時，培養基上的菌落數或乘以水樣的稀釋倍數即為細菌總數。有的國家把培養溫度定為35°C或其他溫度，也有把培養時間定為48小時的。

㈦ 食品安全檢驗中細菌總數的測定有哪幾中方法

現在一般是用平板計數法，以前的標準是用營養瓊脂，新標准時用平板計數瓊脂。還可以用快速測試紙檢驗。前者比較普遍。

㈧ 歸納概括細菌檢驗方法

10種常用的細菌檢測方法

一、[3H]脫氧胸苷攝入法測定細胞數：
1、用RPMI-1640培養液洗滌對數生長期（培養3天）的CTLL-2細胞兩次，每次250×g離心10分鍾，洗去培養液中殘存的IL-2。
2、用台盼藍（1% Trypan blue）染色法計數細胞並決定細胞的活力，用10%小牛血清的RPMI-1640培養液懸浮細胞至1×105/ml。
3、在96孔細胞培養板中每孔加0.1ml倍比稀釋的標准IL-2或待測樣品，每個稀釋度三個復孔，標准IL-2從40 IU/ml稀釋到0.019 IU/ml（8～10個稀釋度），陰性對照孔不加IL-2。
4、每孔加0.1ml細胞懸液，在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養18～24小時。每孔加10μl（0.5μCi或1.85×104Bq）[3H]脫氧胸苷，繼續培養4小時。
5、用多頭細胞收集器將細胞收集到玻璃纖維濾紙上，用3%醋酸水溶液濾紙3次，洗去游離的[3H]TdR。將濾紙置液體閃爍瓶中，加入5ml閃爍液。在液體閃爍儀上計數細胞攝入的同位素活性（每分鍾放射性計數，cpm），根據儀器效率換算成dpm（每分鍾衰變數）。
6、用dpm值對樣品稀釋倍數作圖。在圖上，標准IL-2的曲線與待測樣品的曲線應當呈平行的S型，說明是同樣的分子反應。比較同樣dpm處的不同稀釋倍數，決定待測樣品的相應濃度。
二、MTT檢測法：
1、取96孔細胞培養板，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶細胞的培養液（含10%小牛血清的RPMI-1640培養液），在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養2～3小時讓細胞帖壁（如果是懸浮細胞可直接進行下一步）
2、用RPMI-1640培養液2～10倍遞次稀釋細胞因子標准品，根據情況2～5倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加0.1ml稀釋的標准品和待檢樣品，每個稀釋度3個重復孔。對照孔6個：3個陽性對照孔，每孔加0.1ml含大劑量細胞因子的RPMI-1640培養液，3個陰性對照孔，每孔加0.1ml RPMI-1640培養液。在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養24～48小時或預定的時間。
3、吸去培養液，用PBS洗滌一次（如為懸浮細胞，應在吸去上清液前離心培養板）。
4、每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液，在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養4～6小時。
5、每孔加0.1ml酸化異丙醇，也可用含10% SDS的10mmol/L HCl代替酸化異丙醇，在振盪器上振盪混勻，讓還原產物充分溶解。置酶聯檢測儀上測定光密度（OD）值，檢測波長570nm，參考波長630nm。以OD值對樣品稀釋度作圖，比較標准曲線和待測樣品曲線即可求得待測樣品中細胞因子的含量。
三、XTT檢測法：
用XTT代替MTT可省去溶解還原產物結晶的步驟，XTT可以被活細胞中的代謝酶還原成黃色水溶性的代謝產物（formazan）。代謝產物在OD450處有吸收峰。
四、MTS檢測法：
1、培養IL-2依賴細胞株CTLL-2細胞或HT-2細胞（檢測IL-2），或者IL-3依賴細胞株FDC-P1細胞或FL5.12細胞（檢測IL-3）到對數生長期。
2、取96孔細胞培養板，每孔加0.1ml含1×104～2×104上述細胞之一的DMEM培養液（加10%小牛血清）。
3、每孔加0.1ml系列稀釋的待測細胞因子（IL-2或IL-3）樣品或細胞因子標准品，在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養24小時。
4、每孔加20μl MTS/PMS混合液，繼續培養3～4小時顯色。
5、檢測前搖晃培養板10秒鍾，混勻顏色。在酶聯檢測儀上，波長570nm（或490nm，或570nm和690nm）處檢測各孔的光吸收值（OD）。用樣品稀釋度對OD值（OD570、OD490或OD570/OD690）繪制劑量-反應曲線，根據標准品曲線計算樣品中細胞因子的量。
五、NAG檢測法：
1、按MTT檢測法培養細胞和用不同稀釋度的細胞因子處理細胞。
2、吸去培養液，用PBS洗滌兩次（如為懸浮細胞，應在吸去上清液前先離心）。
3、每孔加60μl NAG染液，在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養4小時。
4、每孔加90μl終止液，混勻後置酶聯檢測儀上測定光密度（OD）值，檢測波長402nm。以OD值對樣品稀釋度作圖，比較標准曲線和待測樣品曲線即可求得待測樣品中細胞因子的含量。
六、AlamarBlueTM攝入法：
1、按MTT檢測法培養細胞和用不同稀釋度的細胞因子處理細胞。
2、在培養結束前24小時加入Alamar Blue染料，96孔細胞培養板每孔20μl。
3、在培養結束後，直接在酶聯檢測儀上測定光吸收值。氧化型Alamar Blue的最大光吸收在570nm，用OD570減去OD600即為活細胞還原的Alamar Blue染料，顏色深淺與活細胞數成正比。
七、鹼性磷酸酶檢測法（AKP法）：
1、按MTT法用細胞因子處理靶細胞適當時間，用PBS洗去死亡細胞，洗兩次。
2、向96孔細胞培養板各孔中加0.2ml新鮮配製的底物液（0.2mol/L 硼酸，1mmol/L MgCl2，1.2mmol/L甲傘基磷酸）。在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養3小時。
3、在熒光計數儀上測定熒光的量。根據測定已知不同數目細胞的熒光量作出標准曲線，根據標准曲線可得到各孔中的活細胞數。
八、三磷酸腺苷檢測法（ATP法）：
1、ATP反應液（Bio-Orbit）是粉末狀混合物，含有熒光素、熒光素酶、0.5mmol醋酸鎂、50mg BSA和0.1μmol無機焦磷酸。在4℃可以保存1個月。用前用10ml含2mmol/L EDTA的0.1mol/L pH7.75 Tris-醋酸緩沖液稀釋。稀釋液分裝後可在－20℃長期保存。
2、在已經完成促增殖或抑生長試驗後的96孔細胞培養板中（每孔含100μL細胞培養液），每孔加0.1ml ATP釋放因子，室溫中反應5分鍾。取另一塊96孔細胞培養板，從第一塊板的各孔中吸0.1ml細胞溶解物到第二塊板的相應各孔。
3、在低於25℃中，將第二塊板置自動多孔熒光檢測儀中。用自動加樣器，每孔加入20μl ATP反應液，立即檢測10秒鍾的熒光強度。溫度升高，檢測敏感性就下降。
4、用RLU（Y軸）對細胞因子標准品的稀釋度（X軸）作標准曲線，根據標准曲線確定待測樣品中細胞因子的含量。
九、染料染色法測定細胞數：
1）結晶紫檢測法：
1、在96孔細胞培養板各孔中加0.1ml含5×104～10×4 WEHI-164細胞的培養液（含10%小牛血清的RPMI-1640培養液），37℃ 5% CO2的二氧化碳培養箱中培養2～3小時，讓細胞帖壁。
2、用RPMI-1640培養液10倍遞次稀釋TNF標准品，根據需要3～5倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加0.1ml稀釋的標准品或待檢樣品，每個稀釋度3個重復孔。對照孔6個，3個陽性對照孔各加0.1ml含4μg TNF的RPMI-1640培養液，3個陰性對照孔各加100μl RPMI-1640培養液。繼續培養18～24小時。
3、甩去培養液，用PBS小心洗滌一次，每孔加0.1ml 10%甲醇溶液固定細胞30秒鍾。
4、吸去甲醇溶液，每孔加0.1ml結晶紫染液，室溫中放置20分鍾。
5、輕輕甩去染色液，用蒸餾水洗滌各孔，將培養板倒置於吸水紙上吸干水分。自然乾燥或37℃烘乾。此板可以在室溫中長期保存。
6、測定前，每孔加0.1ml 33%醋酸脫色，充分振盪後在570nm處測定光吸收度。用光吸收度（OD）值對樣品稀釋度作圖，比較標准品曲線和待檢樣品曲線即可得到待測樣品中的細胞因子活性
2）NBB檢測法：
1、在用細胞因子處理靶細胞以後傾去培養液，倒置培養板於吸水紙上吸干培養液。再用100μl磷酸緩沖鹽水小心洗去死細胞，用吸水紙吸干培養液。
2、每孔加100μl NBB染液，室溫中染色30分鍾。輕輕染液。用吸水紙吸干染液。</P< p>
3、每孔加100μl福爾馬林固定液固定15分鍾。用自來水輕輕洗去固定液，倒置培養板，用吸水紙吸干染液。
4、每孔加150μl 50mmol/L氫氧化鈉。輕輕振盪培養板直到染料全部溶解並均勻分布。在分光光度計上讀取各孔在620nm處的光密度（OD）值。計算TNF的活性。
3）美藍染色檢測法：
1、用細胞因子處理靶細胞，在含100μL細胞培養液的檢測孔中，每孔加0.02ml 25%戊二醛固定活細胞15分鍾，用自來水緩緩洗去死細胞和固定液。
2、每孔加0.1ml 0.05%美藍染液，染色20分鍾，用自來水緩緩沖凈染液，晾乾。
3、每孔加0.2ml 0.33mol/L鹽酸溶解美藍，振盪混勻。在665nm波長處測定光吸收度。計算TNF的活性。
4）中性紅染色檢測法：
1、用細胞因子處理靶細胞，在含100μL細胞培養液的檢測孔中，每孔加50μl 5%中性紅染液。繼續培養2小時。
2、小心倒去培養液。用200μl Hanks液洗滌細胞1次。小心倒去培養液，減少細胞丟失。
3、每孔加100μl脫色液，在搖床中輕輕搖晃溶解30分鍾。在550nm波長處測定OD值。
十、直接計數細胞：
1、如果靶細胞是帖壁細胞，在細胞因子作用適當時間後，用生理鹽水洗去死亡細胞，用0.25%胰蛋白酶液消化細胞。加適量生理鹽水吹打，使細胞分散成單個細胞。直接在血細胞計數板上計數細胞。
2、如果靶細胞是懸浮細胞，則需要用染色劑區分死細胞和活細胞然後再計數。通常用台盼藍染色細胞，活細胞可以排除進入細胞的台盼藍而不著染，死細胞著染呈深藍色。
3、計數血細胞計數板上4個大方格中的全部活細胞，按下式計算活細胞數：活細胞數（個/ml）＝計數的全部活細胞數×10 000×2×1/4。

㈨ 細菌檢測最簡單的方法

一.使用細菌總數測試片,只需要購買細菌總數測試片,再按要求使用,有說明書.
二.紅細胞計數法
首先要了解這個方法的原理.把N個紅細胞與細菌均勻混合,再數出一小塊區域內的紅細胞數n和細菌數m.因為細胞已經均均勻混合,所以,局部的細胞數比和整體的細胞數比是接近相同的.即 n/m=N/M (n為局部紅細胞數,N為總紅細胞數,m為局部細菌數,M為總細菌數）n,m已數出.N又已知.所以總細菌數N就可以算出來.再取幾個局部,算平均值,就能得到較精確的細菌數目.
如果這樣做,只要數出一小塊區域內的細菌數就可以知道總細菌數.如果不加紅細胞,一個一個數,用要數到何年何月啊!細菌可是對數增長.加入紅細胞的作用就像比例尺一樣,地圖上總有1：XXX的比例尺,你在顯微鏡的一個是視野里看到的紅細胞數目就像地圖上你測得的距離,數清一個是視野的菌數後,乘以相應分散度就可以了,分散度時用紅細胞算的,具體的教材上應該有.不用也可以,不過要換成相應大小別的東西代替,總之用光學顯微鏡差菌數,這是不可缺少的.
這里運用了樣方法,就是在若干樣方中計數全部個體,然後將其平均數推廣,來估計種群總體數量的方法.樣方法相關知識：
①樣 方：樣方也叫樣本,從研究對象的總體中抽取出來的部分個體的集合,叫做樣方.
②隨機取樣：在抽樣時如果總體中每一個個體被抽選的機會均等,且每一個個體被選與其他個體間無任何牽連,那麼,這種既滿足隨機性,又滿足獨立性的抽樣,就叫做隨機取樣(或叫做簡單隨機取樣).隨機取樣不允許摻入任何主觀性,否則,就難以避免調查人員想獲得調查屬性的心理作用,往往使調查結果偏大.
③適用范圍：植物種群密度,昆蟲卵的密度 ,蚜蟲、跳蝻的密度,細菌數量測量等.
樣方法取樣方法
①點狀取樣法點狀取樣法中常用的為五點取樣法,如圖A,當調查的總體為非長條形時,可用此法取樣.在總體中按梅花形取5個樣方,每個樣方的長和寬要求一致.這種方法適用於調查植物個體分布比較均勻的情況.
②等距取樣法當調查的總體為長條形時,可用等距取樣法,如圖B,先將調查總體分成若乾等份,由抽樣比率決定距離或間隔,然後按這一相等的距離或間隔抽取樣方的方法,叫做等距取樣法.例如,長條形的總體為100 m長,如果要等距抽取10樣方,那麼抽樣的比率為1/10,抽樣距離為10 m,然後可再按需要在每10 m的前1 m內進行取樣,樣方大小要求一致.
樣方法的兩種邊角統計方式如下圖（紅色為需統計邊線）
樣方法具體步驟如下：
①確定調查對象；
②選取樣方：必須選擇一個該種群分布較均勻的地塊,使其具良好的代表性；
③計數：計數每個樣方內該種群數量；
樣方法的兩種邊角統計方式
④計算：取各樣方平均數.