引流液澱粉酶檢測方法

① 澱粉酶比活力測定

穀物種子萌發時澱粉酶活力的測定

幾乎所有植物中都存在澱粉酶，尤其是萌發的禾穀類種子，澱粉酶活性最強。主要是α-澱粉酶和β-澱粉酶。種子萌發時，澱粉酶活性隨萌發時間迅速增加，將澱粉分解成小分子糖類，供幼苗生長。α-澱粉酶隨機水解澱粉的α-1，4-糖苷鍵，作為澱粉分解的起始酶而起主要作用；其水解產物為麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原性糖；β-澱粉酶水解非還原端的第二個α-1，4-糖苷鍵，水解產物為麥芽糖，並能使一部分糊精糖化。本實驗以萌發種子為材料，測定其中α-澱粉酶和β-澱粉酶活性的差異。

【原理】

兩種澱粉酶具有不同理化特性，α-澱粉酶不耐酸，在PH3�6以下迅速鈍化；β-澱粉酶不耐熱，在70℃下15Min則被鈍化。據此，在測定時鈍化其中之一，就可以測定出另一種酶的活力，本實驗採用加熱鈍化β-澱粉酶測出α-澱粉酶活力，再與非鈍化條件下測得的總澱粉酶活力比較，求出β-澱粉酶活力。澱粉的水解產物麥芽糖及其他還原性糖能與3，5-二硝基水楊酸試劑反應，使其還原生成紅色3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內，其顏色深淺與澱粉酶水解產物的濃度成正比，可用麥芽糖(或葡萄糖)濃度表示，用比色法測定澱粉生成的還原糖的量，以單位重量樣品在一定時間內生成的麥芽糖的量表示酶活力。

【儀器與用具】

分光光度計；離心機；恆溫水浴器；研缽；具塞刻度試管25Ml 13支，刻度吸管1ml、2ml、5Ml各1支；容量瓶50Ml 2支。

【試劑】

麥芽糖標准液(1Mg／Ml)：稱取100Mg麥芽糖，用蒸餾水溶解並定容至100Ml。

DNS試劑(3，5-二硝基水楊酸)：精確稱取3，5-二硝基水楊酸1g，溶於20Ml 12Mol／L NAOH溶液中，加入50Ml蒸餾水，再加入30g酒石酸鉀鈉，待溶解後用蒸餾水定容至100Ml。蓋緊瓶塞，勿使CO2進入。若溶液混濁，可過濾後使用。

0�1Mol／L PH5�6的檸檬酸緩沖液：A液(0�1Mol／L檸檬酸)：稱取分析純檸檬酸21�01g，用蒸餾水溶解並定容至1L；B液（0�1Mol／L檸檬酸鈉）：稱取檸檬酸鈉29�41g用蒸餾水溶解並定容至1L；取A液55Ml與B液145Ml混勻，即為0�1Mol／L PH5�6的檸檬酸緩沖液。

1％澱粉溶液：稱取1g澱粉溶於100Ml 0�1Mol／L PH5�6的檸檬酸緩沖液中。

【方法】

1.酶液提取稱取25℃下萌發3～4天的小麥種子1�0g(芽長1�0～1�5CM)，置研缽中，加少量石英砂和2Ml蒸餾水，研磨成勻漿後轉入離心管中，用7Ml蒸餾水分次將殘渣洗入離心管，提取液在室溫下放置提取15～20Min，每隔數分鍾攪動1次，使其充分提取。然後在3000r／Min轉速下離心10Min，將上清液倒入50Ml容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，即為澱粉酶原液。吸取上述澱粉酶原液5Ml，放入50Ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度搖勻，即為澱粉酶稀釋液。

2�麥芽糖標准曲線製作取7支幹凈的具塞刻度試管，編號，按表18-1加入試劑：

表18-1製作麥芽糖標准曲線配方表

試劑管號1234567麥芽糖標准液（ml)00.20.40.81.21.62.0蒸餾水（ml)2.01.81.61.20.80.40麥芽糖含量（mg)00.20.40.81.21.62.03,5-二硝基水楊酸（ml)2222222搖勻，置沸水浴中煮沸5Min。取出後流水冷卻，加蒸餾水定容至20Ml。以1號管作為空白調零點，在540nM波長下比色測定。以麥芽糖含量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標准曲線。

3�酶活力的測定取6支幹凈的具塞刻度試管，編號，按表18-2進行操作。

表18-2酶活力的測定配方表

操作項目管號Ⅰ-1Ⅰ-2Ⅰ-3Ⅱ-1Ⅱ-2Ⅱ-3澱粉酶原液（ml)1.01.01.0000鈍化β-澱粉酶置70℃水浴中15Min,取出後在流水中冷卻澱粉酶稀釋液（ml)000111DNS試劑（ml)2.0002.000預保溫40℃恆溫水浴中保溫10Min1%澱粉溶液（ml)(40℃)1.01.01.01.01.01.0保溫40℃恆溫水浴中准確保溫5MinDNS試劑（ml)02.02.002.02.0搖勻，置沸水浴中5Min，取出後冷卻，加蒸餾水至20Ml，搖勻，在540nM波長下比色，記錄測定結果。

4�結果計算 用Ⅰ-2、Ⅰ-3吸光度平均值與Ⅰ-1吸光度值之差，在標准曲線上查出相應的麥芽糖含量(Mg)，再按下式計算α-澱粉酶的活力(Aα)，澱粉酶活性以每克鮮重所含麥芽糖毫克數(Mg／g·Min)表示：

Aα＝CαVTFW×t×V1（18-1）

Ⅱ-2、Ⅱ-3吸光度平均值與Ⅱ-1吸光度值之差，在標准曲線上查出相應的麥芽糖含量(Mg)，按式18-1計算(α＋β)-澱粉酶的活性AT�

AT＝CT×VTFW×t×V1

式中A:澱粉酶活性，Aα為α-澱粉酶的活性，AT為澱粉酶總活性，主要是α、β-澱粉酶的活性；

Cα:α-澱粉酶水解澱粉生成的麥芽糖量(查標准曲線求值，以下同)；

CT:(α＋β)澱粉酶共同水解澱粉生成的麥芽糖量；

V1:顯色所用酶液體積(Ml)；

T:酶作用時間(Min)；

VT:樣品稀釋液總體積(α-澱粉酶為50Ml，α＋β澱粉酶為500Ml)；

FW:樣品鮮重(g)。

【思考題】

1.萌發種子和干種子α-澱粉酶和β-澱粉酶活力有何差異�這種變化有何生物學意義�

2�實驗中設置對照的意義何在�

3�α-澱粉酶和β-澱粉酶性質有何不同�作用特點有何不同

② 胰腺炎症，或者是胰腺癌，用什麼方法能檢查出來。最精確的

朋友你好，以下闡述僅供參考，如需詳詢請網路嗨我。胰腺炎症，或者是胰腺癌，比較常規的檢查是加強CT、B超，血生化（相關血清酶。周六標志物等）以及血常規，單靠一種檢查很難確診的。
胰腺炎的檢查：
（一）白細胞計數 多有白細胞增多及中性粒細胞核左移。
（二）血、尿澱粉酶測定 血清（胰）澱粉酶在起病後6～12小時開始升高，48小時開始下降，持續3～5天。血清澱粉酶超過正常值3倍可確診為本病。澱粉酶的高低不一定反映病情輕重，出血壞死型胰腺炎澱粉酶值可正常或低於止常。其他急腹症如消化性潰瘍穿孔、膽石症、膽囊炎、腸梗阻等都可有血清澱粉酶升高，但一般不超過正常值2倍。尿澱粉酶升高較晚，在發病後12～14小時開始升高，下降緩慢，持續1～2周，但尿澱粉酶值受患者尿量的影響。胰源性腹水和胸水中的澱粉酶值亦明顯增高。
（三）血清脂肪酶測定 血清脂肪酶常在起病後24～72小時開始上升，持續7～10天，對病後就診較晚的急性胰腺炎患者有診斷價值，且特異性也較高。
（四）C-反應蛋白(CRP) CRP是組織損傷和炎症的非特異性標志物。有助於評估與監測急性胰腺炎的嚴重性，在胰腺壞死時CRP明顯升高。
（五）生化檢查 暫時性血糖升高常見，可能與胰島素釋放減少和胰高血糖素釋放增加有關。持久的空腹血糖高於10mmol/L反映胰腺壞死，提示預後不良。高膽紅素血症可見於少數患者，多於發病後4～7天恢復正常。血清AST、LDH可增加。暫時性低鈣血症(＜:2mmol/L)常見於重症急性胰腺炎，低血鈣程度與臨床嚴重程度平行，若血鈣低於1.5mmol/L以下提示預後不良。急性胰腺炎時可出現高甘油三酯血症，這種情況可能是病因或是後果，後者在急性期過後可恢復正常。
（六）影像學檢查
1．腹部平片可排除其他急腹症，如內臟穿孔等。「哨兵袢」和「結腸切割征」為胰腺炎的間接指征。彌漫性模糊影、腰大肌邊緣不清，提示存在腹水。可發現腸麻痹或麻痹性腸梗阻征。
2．腹部B超應作為常規初篩檢查。急性胰腺炎B超可見胰腺腫大，胰內及胰周圍回聲異常;亦可了解膽囊和膽道情況；後期對膿腫及假性囊腫有診斷意義。但因患者腹脹常影響其觀察。
3．CT顯像CT根據胰腺組織的影像改變進行分級，對急性胰腺炎的診斷和鑒別診斷、評估其嚴重程度，特別是對鑒別輕和重症胰腺炎，以及附近器官是否累及具有重要價值。輕症可見胰腺非特異性增大和增厚，胰周圍邊緣不規則；重症可見胰周圍區消失；網膜囊和網膜脂肪變性，密度增加;胸腹膜腔積液。增強CT是診斷胰腺壞死的最佳方法，疑有壞死合並感染者可行CT引導下穿刺。

胰腺癌的檢查：
（一）血液、尿、糞檢查 ：黃疸時血清膽紅素升高，以結合膽紅素為主。血清鹼性磷酸酶、GGT、LDH、亮氨酸氨基肽酶、乳鐵蛋白、血清核糖核酸、5』核苷酸酶等可增高。胰管梗阻或並發胰腺炎時，血清澱粉酶和脂肪酶可升高。葡萄糖耐量不正常或有高血糖和糖尿。重度黃疽時尿膽紅素陽性，尿膽原陰性，糞便可呈灰白色，糞膽原減少或消失。有吸收不良時糞中可見脂肪滴。縮膽囊素胰酶泌素(CCK-PZ)和胰泌素試驗，胰腺癌患者十二指腸引流液的澱粉酶值和碳酸氫鹽濃度均顯著減低。
（二）腫瘤標志物檢測 ：為篩選出無症狀的早期患者，胰腺癌腫瘤標記物的研究近年有較大進展。但尚無一種理想篩選早期胰腺癌的腫瘤標志物。目前認為糖抗原(CA199)聯合監測可提高對於胰腺癌診斷的特異性與准確性。從糞便、血液、胰液中突變K-γαs基因檢測為胰腺癌的診斷提供了新的輔助性檢查手段，但其臨床價值仍有待進一步研究與證實。
（三）影像學檢查
1．B型超聲顯像首選篩查方法。B超對晚期胰腺癌的診斷陽性率可達90%，可顯示>2cm的胰腺腫瘤。可顯示胰腺局限性增大，邊緣回聲不整齊，典型病變邊緣呈火焰狀，同聲光點減弱、增加或不均勻，聲影衰減明顯，胰管不規則狹窄、擴張或中斷，膽囊腫大，侵及周圍大血管時表現血管邊緣粗糙及被腫瘤壓迫等現象。 2．X線鋇餐造影 可間接反映癌的位置、大小及胃腸受壓情況，胰頭癌可見十二指腸曲擴大或十二指腸降段內側呈反「3」形等徵象。如用十二指腸低張造影則觀察更滿意。
3．經十二指腸鏡逆行胰膽管造影(ERCP) 除能直接觀察十二指腸壁和壺腹有無癌腫浸潤情況外，插管造影主要顯示：胰膽管受壓以及主胰管充盈缺損、移位、瘤腔形成，胰管阻塞、突然變細或中斷，斷端變鈍或呈鼠尾狀、杯口狀，狹窄處管壁僵硬、不規則的部位和范圍等。診斷正確率可達90%。直接收集胰液做細胞學檢查及壺腹部活檢做病理檢查，可提高診斷率。必要時可同時放置膽道內支架，引流減輕黃疽為手術做准備。少數病例在ERCP檢查後可發生注射性急性胰腺炎和胰膽管感染。
4．磁共振胰膽管成像( MRCP) 是無創性、無需造影劑即可顯示胰膽系統的檢查手段，顯示主胰管與膽總管病變的效果基本與ERCP相同。但缺點是無法了解壺腹等病變，亦不能放置膽道內支架引流減輕黃疽為手術做准備。
5．經皮肝穿刺膽道造影(PTC) ERCP插管失敗或膽總管下段梗阻不能插管時，可以通過PTC顯示膽管系統。胰頭癌累及膽總管，引起膽總管梗阻、擴張和阻塞，梗阻處可見偏心性壓迫性狹窄。還常見膽總管的圍管性浸潤，造成對稱性膽總管狹窄或不規則胰管。PTC還用於術前插管引流，減輕黃疸。
6．CT可顯示>2cm的腫瘤，可見胰腺形態變異、局限性腫大、胰周脂肪消失、胰管擴張或狹窄、大血管受壓、淋巴結或肝轉移等，診斷准確率可達80%以上。
7．選擇性動脈造影經腹腔動脈做腸系膜上動脈、肝動脈、脾動脈選擇性動脈造影，對顯示胰體尾癌可能比B超和CT更有效。其顯示胰腺腫塊和血管推壓移位徵象，對於小胰癌(<2cm)診斷准確性可達88%。有助於判斷病變范圍和手術切除的可能性。
8．超聲內鏡檢查超聲胃鏡在胃內檢查，可見胃後壁外有局限性低回聲區，凹凸不規整的邊緣，內部回聲的不均勻；超聲腹腔鏡的探頭可置於肝左葉與胃小彎處或直接通過小網膜置於胰腺表面探查。結合腹腔鏡在網膜腔內直接觀察胰腺或胰腺的間接徵象，並行穿刺活檢，胰腺癌檢出率將近100%。
（四）組織病理學和細胞學檢查 ：在CT、B超定位和引導下，或在剖腹探查中用細針穿刺作多處細胞學或活體組織檢查，確診率高。
以上闡述僅供參考，祝好運，如需詳詢請網路嗨我。

③ 如何提取澱粉酶。。。單一的澱粉酶就行了。。。及其檢驗的方法

你好，如果是馬上需要使用的話建議從網上的生物公司直接購買澱粉酶成品。想自己製作的話建議採集自己的唾液，裡面就有唾液澱粉酶。不要將唾液加溫，以免酶失活。檢驗方法可用澱粉遇碘變色的原理，用分光光度計測定酶是否存在，若酶存在，加入澱粉與碘的混合溶液後，因澱粉被澱粉酶分解成糊精，藍色將會有所消退。若需提取單一的純澱粉酶，可以使用電泳法確定唾液澱粉酶蛋白質的分子質量，再用柱層析法將它層析出來。這是一個很麻煩的過程，需要大量的實驗，如果只是為了達成消化澱粉的目的的話，不妨直接使用唾液。如果需要考慮溫度和消化質量的話，買成品是比較省時間的選擇。
如還有問題，歡迎追問

④ 澱粉酶的測定方法有哪些

植物中的澱粉酶能將貯藏的澱粉水解成麥芽糖。澱粉酶幾乎存在於所有植物中，其中以禾穀類種子的澱粉酶活性最強。植物中有α–澱粉酶和β–澱粉酶，其活性因植物的生長發育時期不同而有所變化。通過本實驗掌握澱粉酶的提取和測定方法。
原理：
α–澱粉酶和β–澱粉酶，各有其一定的特性，如β–澱粉酶不耐熱，在高溫下易鈍化，而α–澱粉酶不耐酸，在pH3.6以下則發生鈍化。通常提取液中同時有兩種澱粉酶存在，測定時，可根據它們的特性分別加以處理，鈍化其中之一，即可測出另一酶的活性。將提取液加熱到70℃維持15 min以鈍化β–澱粉酶，便可測定α–澱粉酶的活性。或者將提取液用pH3.6之醋酸在0℃加以處理，鈍化α–澱粉酶，以求出β–澱粉酶的活性。
澱粉酶水解澱粉生成的麥芽糖，可用3，5–二硝基水楊酸試劑測定。由於麥芽糖能將後者還原生成3–氨基–5–硝基水楊酸的顯色基團，在一定范圍內其顏色的深淺與糖的濃度成正比，故可求出麥芽糖的含量。以單位重量樣品在一定時間內生成的麥芽糖的量表示酶活力。

⑤ 澱粉酶測定方法

植物中的澱粉酶能將貯藏的澱粉水解成麥芽糖。澱粉酶幾乎存在於所有植物中，其中以禾穀類種子的澱粉酶活性最強。植物中有α–澱粉酶和β–澱粉酶，其活性因植物的生長發育時期不同而有所變化。通過本實驗掌握澱粉酶的提取和測定方法。
原理：
α–澱粉酶和β–澱粉酶，各有其一定的特性，如β–澱粉酶不耐熱，在高溫下易鈍化，而α–澱粉酶不耐酸，在pH3.6以下則發生鈍化。通常提取液中同時有兩種澱粉酶存在，測定時，可根據它們的特性分別加以處理，鈍化其中之一，即可測出另一酶的活性。將提取液加熱到70℃維持15 min以鈍化β–澱粉酶，便可測定α–澱粉酶的活性。或者將提取液用pH3.6之醋酸在0℃加以處理，鈍化α–澱粉酶，以求出β–澱粉酶的活性。
澱粉酶水解澱粉生成的麥芽糖，可用3，5–二硝基水楊酸試劑測定。由於麥芽糖能將後者還原生成3–氨基–5–硝基水楊酸的顯色基團，在一定范圍內其顏色的深淺與糖的濃度成正比，故可求出麥芽糖的含量。以單位重量樣品在一定時間內生成的麥芽糖的量表示酶活力。

⑥ 澱粉酶活力測定還有哪些方法

澱粉酶可以催化澱粉分解成葡萄糖，所以首先建立已知濃度的葡萄糖標准曲線(葡糖濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標)，然後令澱粉酶在一定條件下催化一定量澱粉反應，反應結束後檢測反應完成液的吸光度(一般需染色劑染色)，對比標准曲線即可換算出產物葡糖的量，然後可以計算出澱粉酶的活力

⑦ 唾液澱粉酶活力的測定方法

實驗原理：

唾液澱粉酶能催化水解澱粉，生成分子較小的糊精和麥芽糖。本實驗利用碘的呈色反應來測定唾液澱粉酶水解澱粉作用的速度，從而測定唾液澱粉酶活力的大小。
實驗儀器和試劑：
1.儀器(1)多孔白瓷板(2) 50mL三角瓶(3)恆溫水浴鍋(4)燒杯(5) 500mL容量瓶(6) 100mL容量瓶(7)漏斗(8)吸管
2.試劑（1) 原碘液:稱取碘11g、碘化鉀22g，加少量蒸餾水完全溶解後，定容至500mL，於棕色瓶中保存。（2)稀碘液:吸取原碘液2mL，加碘化鉀20g，用蒸餾水溶解，定容至500mL，於棕色瓶保存。
(3) 標准「終點色」溶液
①准確稱取氯化鈷40.2439g、重鉻酸鉀0.4878g，加蒸餾水溶解並定容至500mL。
②准確稱取鉻黑T 40mg,加蒸餾水溶解並定容至100mL。取①液80mL與②液10mL混合，即為終點色。冰箱保存。
(4) 2%可溶性澱粉溶液:稱取烘乾可溶性澱粉2.00g,先以少許蒸餾水混勻,傾入80ml沸水中，繼續煮沸至透明，冷卻後用蒸餾水定容至100mL。(需新鮮配製)
(5)稀釋100倍的唾液用蒸餾水漱口，以清除食物殘渣,然後讓唾液流入量筒並稀釋100倍,混合備用。
(6) 0.02mol/L、 pH6.8磷酸氫= _鈉-檸檬酸緩沖溶液:稱取磷酸氫二鈉45.23g和檸檬酸8.07g，用蒸餾水溶解後定容至1000mL，配好後用酸度計或精密試紙校正pH。
操作步驟：
(1) 將「標准色」溶液滴於白瓷板的左.上角空穴內，作為比較終點色的標准。
(2)在50ml 的三角瓶中，加入2%可溶性澱粉溶液20mL，加緩沖液5mL在37°C水浴中平衡約10min,加入0. 5mL稀釋唾液，立即記錄時間，充分搖勻。定時用滴管取出反應液約0.25mL，滴於預先充滿此稀碘液(約0.75mL)的調色板空穴內，當空穴顏色由紫色變為棕紅色，與標准色相同時,即為反應終點，記錄時間T (min) 。

⑧ 澱粉酶活力的測定有幾種方法

第一種：相同條件下，分別將等物質的量的酶加入適宜條件的澱粉中，然後用碘液測定
第二種：相同條件下，分別將等物質的量的酶加入適宜條件的澱粉中，然後用斐林試劑進行還原糖的測定

⑨ 尿澱粉酶留取方法

尿澱粉酶留取方法如下：

早上需要收集樣本來清潔中間的尿液樣本。收集尿樣前，需要用肥皂水清洗會陰和尿道口。清潔時，女性應分開大陰唇，男性應翻轉包皮，然後用碧泉清潔尿道口周圍。

然後開始排尿，丟棄前面的尿液，將中間的尿液直接排入尿培養燒瓶，並送去檢查。尿液需要直接排入培養瓶，不能溶解在其他容器中，如內部，然後倒入培養瓶。

晨尿或隨機尿取中段尿在10ml左右避開月經、陰道分泌物、糞便、清潔劑等的污染。採集器保證清潔，避免化學物或細菌的污染。

(9)引流液澱粉酶檢測方法擴展閱讀：

尿澱粉酶的正常值

健康值 ：蘇氏法(Somogyi法)：80~300U/L；佛爾格穆特法：16~64U/L；溫斯羅法：8~32U/L
檢查介紹 ：血清胰澱粉酶P—AMY [參考值] <115U/L

尿澱粉酶 UAMY [參考值]100--330U/L

就尿澱粉酶的正常值就有好多 ，正常0-1200U/L ,還有正常尿澱粉酶為80－300蘇氏單位/小時，超過300單位/小時有診斷價值 ,還有正常值：<1000u/l。