轉基因檢測技術方法

A. 轉基因檢測方法有哪些

目前世界上常用的轉基因檢測方法主要有兩種 一是檢測有無來自其他生物成分即以外源結構基因表達出的蛋白質為目的蛋白質檢測方法 另一種是檢測非轉基因植物所不擁有的啟動子 終止子 標記基因的DNA檢測方法 由於蛋白質檢測方法對含量低及深加工的轉基因產品無法檢測 故DNA檢測方法應用范圍相對要廣

B. 轉基因的植株要怎樣檢測

在植物遺傳轉化中，外源基因導入植物細胞的頻率是相當低的。在數量龐大的受體細胞群體中，通常只有為數不多的一小部分細胞獲得了外源DNA，而目的整合到基因組並實現表達的轉化細胞則更少。

因此，必須採用一定的檢測方法，才能篩選和鑒定出含有目的基因的重組體。目前已發展出一系列的轉基因植物的篩選和鑒定方法。在這些鑒定和篩選方法，根據檢測的基因功能來劃分，可分為調控基因（包括啟動子終止子等）檢測、選擇標記基因檢測和目的基因直接檢測。

根據檢測的不同階段區分，有整合水平檢測和表達水平的檢測，基因整合檢測方法主要有Southern雜交、PCR、PCR-Southern雜交、原位雜交和DNA分子標記技術法，表達水平的檢測包括轉錄水平檢測和翻譯水平檢測，轉錄水平的檢測法有Northern雜交和反轉錄PCR（reverse：transcribed：PCR，RT-PCR）檢測，翻譯水平的檢測有酶聯免疫吸附法（enzyme：linked：immuno：sorbent：assay，ELISA）和Western雜交等，其中最簡便和使用廣泛的表達水平的檢測是報告基因檢測法。由於這些方法的具體操作已在其他章節（課程）介紹過，這里只側重介紹基於選擇標記基因和報告基因的篩選和鑒定方法。

C. 轉基因的檢測方法比較

目前常用的轉基因檢測方法有試紙條法、普通聚合酶鏈式反應（PCR）、實時熒光定量PCR、恆溫熒光PCR、數字PCR
試紙條：簡單、快速，但對於深加工食品不適用
普通聚合酶鏈式反應（PCR）：准確度較高，靈敏度高，價格低，缺點是專業性要求高，電泳的染料對人體有害，只能檢測一個指標
實時熒光定量PCR：靈敏度高、准確度高、高通量、可實時監控，可定量判斷、自動化程度高，缺點是儀器價格高昂、操作復雜、配套產品少、維護費用高
恆溫熒光PCR：靈敏度高、特異性強、快速還可實時監控，儀器性價比高，利於推廣
數字PCR：准確度高、重現性好、可絕對定量、檢測通量高、靈敏度好，但儀器價格昂貴

D. 常用的轉基因檢測方法有哪些

常用的轉基因方法包括農桿菌轉化法、基因槍轉化法和顯微注射法3種。

E. 轉基因作物檢測方法有哪些

轉基因作物檢測大體分為兩種：一是檢測是否含有外源蛋白,即外源基因表達產物,主要採用酶聯免疫吸附法和試紙條法；二是檢測是否含有外源基因(DNA),主要有Southern雜交技術、基因晶元法和PCR檢測法.

F. 轉基因農產品的檢測方法有哪些具體點，謝謝

從發展來看轉基因食品的檢測技術根據檢測的直接對象可分為三類：(1)利用導入外源基因所表達的特殊性狀直接鑒定；(2)針對導入外源基因表達的蛋白質的鑒定方法；(3)以導入外源基因的特定DNA序列為檢測對象的檢測技術。其中目前用的比較多的是PCR技術、ELISA技術(酶聯免疫法)和生物晶元技術三種。

G. 怎樣檢測轉基因食品

目前對轉基因食品的檢測按原理主要分為針對外源蛋白質和針對外源DNA兩種鑒定技術。
外源蛋白質的測定
即從蛋白質水平對轉基因食品進行檢測，實際應用中主要採用的是免疫學檢測法，即Western雜交、酶聯免疫吸附法(ELISA)和試紙條法。免疫學檢測法可以檢測具有抗原性的蛋白質類表達產物的存在，它是通過抗原抗體特異反應來實現的。
Western雜交 Western雜交是將蛋白質電泳、印跡、免疫測定融為一體的特異蛋白質檢測方法，具有很高的靈敏性，可以從植物細胞總蛋白中檢測出50ng的特異蛋白。Western雜交檢測的關鍵是抗體的制備。
酶聯免疫吸附法 ELISA建立了固-液抗原抗體反應體系，並採用酶標記，抗體與抗原的結合通過酶反應來檢測。由於酶的放大作用，使測定的靈敏度極高，可檢測出1pg的目標物，同時酶反應還具有很強的特異性。它的檢測原理和過程基本與Western雜交檢測相似。
試紙條法 此法是在最近15年發展起來的，之前主要用於醫學領域。與ELISA相似，這種測定方法是將特異的抗體交聯到試紙條上和有顏色的物質上，當紙上抗體和特異抗原結合後，再和帶有顏色的特異抗體進行反應，就形成了帶有顏色的三明治結構，並且固定在試紙條上，如果沒有抗原，則沒有顏色。因此整個操作相對簡單一些。目前市場上也出現了一些此類測試的試紙盒。
外源蛋白質檢測法快速，具有一定的靈敏度，也能進行半定量，尤其是試紙條法，不需要特殊的儀器設備，適用於現場檢驗或初篩。但外源蛋白質檢測法有三方面的局限性：(1)由於抗原抗體反應的專一性，每種轉基因產品都要開發和建立專門的檢測試劑和方法，而轉基因產品種類繁多，要建立所有轉基因產品的蛋白質檢測法工作量很大;(2)對於加工過的轉基因食品，其蛋白質很容易被破壞，從而影響檢測結果的准確行;(3)有些插入基因還具有表達部位特異性，這些金銀的表達並不像DNA那樣存在轉基因作物的任何部位，甚至有的轉基因產品的插入基因根本不表達或表達量很低。這些都會影響檢測結果。
外源DNA的檢測
目前對於外源基因的檢測主要是通過對轉入的外源基因進行PCR擴增，然後進行紫外或熒光檢測。PCR技術全稱「聚合酶鏈反應技術」，是一種在體外由引物引導的DNA聚合酶催化的聚合反應，能在短時間內准確地將目的序列大量復制。在轉基因食品檢測方面，主要是用於從DNA即基因水平來鑒定被測食品。由於它的快速、靈敏、費用低、檢測僅需微量的DNA並且可以同時檢測多個樣品，正成為這一領域日趨成熟的方法之一。
定性PCR 轉基因食品重組DNA的基本機構包括啟動子、目的基因、終止子和標記基因。由於目的基因種類繁多，所以先用轉基因食品最常用的轉錄啟動子CaMV35S、轉錄終止子NOS及抗生素抗體基因NPTII三個序列來設計引物進行PCR反應，對結果陽性者可再檢測目的基因。
定量PCR PCR反應具有高度特異性和敏感性，但對實驗技術的要求很高，其結果易受許多因素的干擾而產生誤差，一般PCR只用作轉基因食品的定性篩選檢測。針對所存在的問題，研究人員在實驗設計中引入內部參照反應，以消除檢測時的干擾，並與已知含量的序列GMO標准樣的PCR結果進行比較，從而可以半定量地檢測待測樣品的GMO含量。
近年來定量競爭PCR和實時熒光定量PCR都已用於轉基因食品的定量檢測。競爭性定量的基本原理是用人工設計的競爭模板以不同稀釋度與標本共同擴增，以競爭模板的稀釋度和結果做標准曲線，判斷標本中待測核酸的量。
實時熒光PCR技術是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時檢測整個PCR進程，最後通過標准曲線對未知模板進行定量的方法。這種檢測方法採用獨特全封閉反應，只須在加樣時打開一次蓋子，減少了污染，具有高度的靈敏性。
PCR-ELISA 這是一種將PCR的高效性與ELISA高特異性結合在一起的檢測方法，它利用地高辛或生物素等標記引物，將PCR擴增產物與固相板上特異的探針結合，再加入抗地高辛或生物素的酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物，最後使底物顯色，在酶標儀上讀取數值。利用PCR-ELISA法對轉基因大豆檢測，靈敏度比歐盟推薦的PCR方法高5-10倍。它快速方便，避免了有毒物質EB的使用，適合大批量自動檢測。

H. 如何檢測轉基因生物的表達效果

檢測方法：通過核酸擴增將物質的遺傳物質進行擴增，通過特定引物對所需要的DNA或RNA進行合成，如能成功合成，則代表所要得到的DNA或者RNA是存在的。轉基因檢測既是對轉入的特定基因進行檢測，通過引物將特定的啟動子和終止子合成，並在之後檢測中表現出來，所使用的方法通常是凝膠PCR、RTPCR、LAMP、NASBA等等。

轉基因原理
轉基因技術的原理是將人工分離和修飾過的優質基因，導入到生物體基因組中，從而達到改造生物的目的。由於導入基因的表達，引起生物體的性狀，可遺傳的修飾改變，這一技術稱之為人工轉基因技術（Transgene technology）。
人工轉基因技術就是把一個生物體的基因轉移到另一個生物體DNA中的生物技術。具有不確定性。常用的方法和工具包括顯微注射、基因槍、電破法、脂質體等。轉基因最初用於研究基因的功能，即把外源基因導入受體生物體基因組內（一般為模式生物，如擬南芥或斑馬魚等），觀察生物體表現出的性狀，達到揭示基因功能的目的。

I. 轉基因的具體步驟，從目的基因的獲得到最後的鑒定，謝謝

1:目的基因的獲取。有三種方法（1）從基因文庫中獲取（2）利用PCR技術擴增目的基因（3）人工合成
2：基因表達載體的構建。這個載體一般是質粒。
3：將目的基因導入受體細胞。這個導入植物細胞一般用農桿菌轉化法，也可用基因槍法或花粉管通道法。
導入動物細胞一般用顯微注射法。
導入微生物細胞一般用感受態細胞吸收DNA分子的方法。
4：目的基因的檢測與鑒定。這個分為4步：（1）用DNA分子雜交技術檢測目的基因是否進入受體細胞（2）用分子雜交技術檢測目的基因是否轉錄出RNA（3）用抗原抗體雜交技術檢測目的基因是否翻譯出蛋白質（4）進行生物個體水平的鑒定（這步不是一定的，也可不進行）。進行生物個體水平的鑒定舉個例子就是比如讓蟲子去啃食導入抗蟲基因的植株，看是否抗蟲。