DNA的連接方法

① DNA的片段之間有哪些連接

（1）具互補黏性末端片段之間的連接：連接反應可用emphasis：role=italicE.coliemphasis：DNA連接酶，也可用T4：DNA連接酶。待連接的兩個DNA片段的末端如果是用同一種限制性內切核酸酶酶切的，連接後仍保留原限制性內切核酸酶的識別序列。如果是用兩種同尾酶酶切的，雖然產生相同的互補黏性末端，可以有效地進行連接，但是獲得的重組DNA分子往往消失了原來用於酶切的那兩種限制性內切核酸酶的識別序列。

（2）具平末端DNA片段之間的連接：連接反應必須用T4：DNA連接酶。只要兩個DNA片段的末端是平末端的，不管是用什麼限制性內切核酸酶酶切後產生的，還是用其他方法產生的，都同樣可以進行連接。如果用兩種不同限制性內切核酸酶酶切後產生的平末端DNA片段之間進行連接，連接後的DNA分子失去了那兩種限制性內切核酸酶的識別序列。如果兩個DNA片段的末端是用同一種限制性內切核酸酶酶切後產生的，連接後的DNA分子仍保留那種酶的識別序列，有的還出現另一種新的限制性內切核酸酶識別序列。

（3）DNA片段末端修飾後進行連接：待連接的兩個DNA片段經過不同限制性內切核酸酶酶切後，產生的末端未必是互補黏性末端，或者未必都是平末端，因此無法進行連接。在這種情況下，連接之前必須對兩個末端或一個末端進行修飾。修飾的方式主要是採用核酸外切酶Ⅶ（exonuclease：Ⅶ，Exo：Ⅶ）將黏性末端修飾成平末端；採用末端脫氧核苷酸轉移酶（簡稱末端轉移酶）將平末端修飾成互補黏性末端。有時為了避免待連接的兩個DNA片段自行連接成環形DNA，或自行連接成二聚體或多聚體，可採用鹼性膦酸酯酶將其中一種DNA片段5′-P修飾成-OH。

（4）DNA片段加連桿後連接：如果要連接既不具互補黏性末端又不具平末端的兩種DNA片段，除了上述用修飾一種或兩種DNA片段末端後進行連接的方法外，還可以採用人工合成的連桿（linker）或銜接頭（adaptor）。先將連桿連接到待連接的一種或兩種DNA片段的末端，然後用合適的限制性內切核酸酶酶切連桿，使待連接的兩種DNA片段具互補黏性末端，最後在DNA連接酶催化下使兩種DNA片段連接，產生重組DNA分子。此外，也可以根據兩DNA片段的末端，選用合適的銜接頭直接把兩DNA片段連接在一起。

② dna是由什麼連接而成的長鏈

dna是由脫氧核糖核酸連接而成的長鏈。

脫氧核糖核酸(DNA)是存儲遺傳信息的主要分子，是生物體發育和正常運作必不可少的生物大分子之一。它由四種鹼基(腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶和鱒氨酸)以及磷酸、脫氧核糖組成。

脫氧核糖核酸是一種由核苷酸重復排列組成的長鏈聚合物，寬度約22到24埃(2.2到2.4納米)，每一個核苷酸單位則大約長3.3埃(0.33納米)。在整個脫氧核糖核酸聚合物中，可能含有數百萬個相連的核苷酸。

這種兩側不對稱的共價鍵位置，使每一條脫氧核糖核酸長鏈皆具方向性。雙螺旋中的兩股核苷酸互以相反方向排列，這種排列方式稱為反平行。

脫氧核糖核酸鏈上互不對稱的兩末端一邊叫做5'端，另一邊則稱3'端。脫氧核糖核酸與RNA最主要的差異之一，在於組成糖分子的不同，DNA為2-脫氧核糖，RNA則為核糖。