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細胞活力分析儀分析方法

發布時間:2023-02-24 23:12:59

『壹』 鑒定培養細胞活力有多種方法,fda是主要方法之一,其原理是什麼

細胞活力鑒定的方法:
1、相差顯微鏡觀察法 2、FDA染色法 3、伊凡藍染色法

FDA染色法:是測定原生質體活性的一種方法,即熒光素雙醋酸酯染色,FDA本身無熒光,
進入原生質體後便產生熒光素,它不能自由進入原生質體膜,因此有活力的細胞便產生熒光。

原生質分離,酶,纖維素酶,離析酶。
步驟:葉片表面消毒→去除表皮→葉碎片漂浮在含有酶和滲透壓穩定劑的溶液中→培育→原
生質體沉到培養皿底部→除去酶溶液→將原生質體移入CPW清洗→離心→清洗基質兩次
→重懸浮於培養基→除去小的個體,用血球計計數→調整到合適的密度重懸浮於培養基。
原生質體的培養:
培養基,MS+NAA 2.0ppm+BA 0.5ppm+3%蔗糖+9%甘露醇
注意:
1、原生質體分離後,非常脆弱,需要滲透壓保護劑的保護直到細胞壁形成。
2、針對不同的研究對象,培養基中生長素和細胞分裂素的水平要做適當調整。
影響原生質體培養的因素,營養需求(NH4+不能過多)滲壓劑,培養密度(105/mL)
貯藏條件(通常在黑暗處)。
培養方法:液體基質培養法,半液體基質培養法,固體基質培養法,看護培養。
固體培養的步驟,原生質體移入培養基→1體積含原生質體的培養基與1體積含瓊脂糖
(40℃)的培養基混和→倒轉培養皿在25℃下培養→原生質體重新產生細胞壁並分裂成細
胞團→細胞團於瓊脂糖基質中傳代培養,培養基中應減少滲壓劑以利於愈傷組織的形成→誘
導分化成植物的根莖。
原生質體分離培養的意義:
1、除去了細胞壁為植物細胞之間的融合掃平了障礙,同時葉為製造新雜種開辟了道路。
2、原生質體可攝入外源DNA,細胞器、細菌或病毒顆粒,這些特性與植物全能性相結合為高等植物的遺傳飾變打下基礎。
3、獲得細胞無性系和選育突變體的優良起始材料。
取洗滌過的原生質體懸浮液 0.5ml置於10×100mm的小試管中,加入 FDA溶液使其最終濃度為 0.01混勻、置於室溫5min後用熒光顯微鏡觀察。激發光濾光片用QB24壓制濾光片用JB8。發綠色熒光的原生質體為有活力的,不產生榮光的為無活力的。由於葉綠素的關系,葉肉原生質發黃綠色熒光的為有活力的,發紅色熒光的為無活力的。

『貳』 全自動血液細胞分析儀 怎樣使用

全自動血球儀使用很簡單的
一般分為三種模式
不知道你的有幾種
一、全血模式
就是你用的樣本是
靜脈血
用抗凝管採好靜脈血把抗凝管皮塞拿下直接放到血球儀的探針下按個測量鍵
機器就可以自動進樣測量了
二、預稀釋模式
這個用到的是
末梢血
也就是指尖血或者耳垂血
先把血球儀調到該模式下,用一樣本至於探針下,按下測量鍵或者稀釋鍵(各家不一樣)探針自動打入一定量試劑,然後取相應血量
一般採用患者的第二滴血
,儀器一般用量
:13微升--20微升
左右
放入樣杯中再放於探針下
按測量鍵即可
三、穿刺模式
該模式只有高檔機有,就是不用把抗凝管的皮塞拔下只要把取好血的抗凝管放進去按測量即可,比較安全,污染率低,價格當然也比較貴
目前進口的品牌高端一些多數都有該功能,國內只有少數幾家,像邁瑞、普朗好像優利特也有。
基本就這樣
你看著用
或者和廠家聯系下
讓他們給你培訓下
畢竟要測人的。

『叄』 細胞活力測定常用的簡便方法

MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)並沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞碸(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤葯物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
缺點:由於MTT經還原所產生的甲瓚產物不溶於水,需被溶解後才能檢測。這不僅使工作量增加,也會對實驗結果的准確性產生影響,而且溶解甲瓚的有機溶劑對實驗者也有損害。
細胞活力常用百分比表示,活力的大小對試驗結果有很大影響。細胞活力的測定有許多方法,最簡便常用的方法是台盼藍(trypanblue)染色法。台盼藍又稱錐藍,是一種陰離子型染料,這種染料不能透過活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不著色,但死亡細胞的細胞膜通透性增加,可使染料通過細胞膜進入細胞內,使死細胞著色呈藍色。

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