gc定量方法需具備什麼條件

1. 細菌總DNA的GC含量怎麼測

水煮模板法——主要用於PCR反應1、接種單菌落於LB或腦心平板，連續畫線，37攝氏度培養18－24小時。2、刮取1~2接種環菌苔加入150微升三蒸水中，混勻，100攝氏度煮沸10分鍾。3、12000轉/分鍾離心10分鍾，取上清，－20攝氏度保存備用。操作最簡便，對試劑條件要求低。缺點是純度不夠高，可能會含有RNA、蛋白等雜質。但是作為一般檢測目的的PCR反應模板已經足夠了。有人稱擴增4kb以下片段都可用此種方法製取模版，編者用此類模板PCR可以擴增到3500bp的片段。編者建議：此法得到的模版保存時間短，強烈建議每月重新製作一次。

2. 何種條件下適於使用恆溫GC法或程序升溫GC法

1.一般的氣相色譜實驗均採用恆溫法。2.對於沸點范圍很寬的混合物，往往採用程序升溫法進行分析。（因為：程序升溫，色譜柱的溫度按照組分沸程設置的程序連續地隨時間線性或非線性逐漸升高，使柱溫與組分的沸點相互對應，以使低沸點組分和高沸點組分在色譜柱中都有適宜的保留、色譜峰分布均勻且峰形對稱。各組分的保留值可用色譜峰最高處的相應溫度即保留溫度表示。）色譜柱溫的確定要作綜合考慮，即要照顧到固定相的使用溫度范圍、分析時間長短、便於定性和定量測定等因素。最好能在恆溫下操作，沸程很寬的樣品才採用程序升溫操作。滿意的操作溫度須由實驗求得。

3. 氣相色譜的方法

頂空進樣法是氣相色譜特有的一種進樣方法。適用於揮發性大的組分分析。測定時，精密稱取標准溶液和供試品溶液各3-5 ml分別置於容積為8 ml的頂空取樣瓶中。將各瓶在60攝氏度的水浴中加熱30-40 min，使殘留溶劑揮發達到飽和，再用在同一水浴中的空試管中加熱的注射器抽取頂空氣適量（通常為1 ml）。進樣，重復進樣3次，按溶劑直接進樣法進行計算與處理。
頂空進樣法使待測物揮發後進樣，可免去樣品萃取、濃集等步驟，還可避免供試品種非揮發組分對柱色譜的污染，但要求待測物具有足夠的揮發性。
頂空分析是通過樣品基質上方的氣體成分來測定這些組分在原樣品中的含量。其基本理論依據是在一定條件下氣相和凝聚相（液相和固相）之間存在著分配平衡。所以，氣相的組成能反映凝聚相的組成。可以把頂空分析看作是一種氣相萃取方法，即用氣體做「溶劑」來萃取樣品中的揮發性成分，因而，頂空分析就是一種理想的樣品凈化方法。傳統的液液萃取以及SPE都是將樣品溶在液體里，不可避免地會有一些共萃取物的干擾分析。況且溶劑本身的純度也是一個問題，這在痕量分析中尤為重要。而其做溶劑可避免不必要的干擾，因為高純度氣體很容易得到，且成本較低。這也是頂空氣相被廣泛採用的一個原因。
作為一種分析方法，頂空分析首先簡單，它只取氣體部分進行分析，大大減少了樣品本身可能對分析的干擾或污染。作為GC分析的樣品處理方法，頂空是最為簡便的。其次，是可以使氣化後進樣，頂空分析有不同模式，可以通過優化操作參數而適合於各種樣品。第三，頂空分析的靈敏度能夠滿足法規的要求。第四，頂空進樣可相對的減少用於溶解樣品的沸點較高的溶劑的進樣量，縮短分析時間，但對溶劑的純度要求較高，尤其不能含有低沸點的雜質，否則會嚴重干擾測定。最後，與GC的定量分析能力相結合，頂空GC完全能夠進行准確的定量分析。 根據取樣和進樣方式的不同，頂空分析有動態和靜態之分。所謂靜態頂空就是將樣品密封在一個容器中，在一定溫度下放置一段時間使氣液兩相達到平衡。然後取氣相部分帶入GC分析。所以靜態頂空GC又稱為平衡頂空GC，或叫做一次氣相萃取。如果再取第二次樣，結果就會不同於第一次取樣的分析結果，因為第一次取樣後樣品組分已經發生了變化。與此不同的是連續氣相萃取，即多次取樣，直到樣品中揮發性組分完全萃取出來。這就是所謂的動態頂空GC。常用的方法是在樣品中連續通入惰性氣體，如氦氣，揮發性成分即隨該萃取氣體從樣品中逸出，然後通過一個吸附裝置（捕集器）將樣品濃縮，最後再將樣品解析進入GC進行分析。這種方法通常被稱為吹掃-捕集分析方法。

4. GC測甲醇的方法

GC方法一般都不要面積歸一化法，而是採用外標。就是購買一瓶色譜純的甲醇，然後稱量，定量稀釋。因為氣相方法里沒辦法檢出水，所以外標比較准確。
方法通常是FID檢測器，柱子范圍很寬，弱極性、強極性似乎都可以檢出的。

5. 氣相色譜有幾種定量方法各有何特點及使用范圍

氣相色譜的定量方法主要有：歸一化法、外標法、內標法、內標校正曲線、內標對比法和內加法等。

（1）歸一法：優點是簡便，定量結果與進樣量無關、操作條作變化時對結果影響較小，缺點時必須所有組分在一個分析周期內都能流出色譜柱，而且檢測器對它們都產生信號。該法不能用於微量雜質的合量測定。

（2）外標法：分為校正曲線法和外標一點法。外標法不必加內標物，常用於控制分析，分析結果的准確度主要取決於進樣的准確性和操作條件的穩定程度。

（3）內標法：由於操作條件變化面引起的誤差都將同時反映在內標物及欲測組分上而得到抵清，所以該法分析結果准確度高，對進樣量准確度的要求相對較低，可測定微量組分。但實際工作中，內標物的選擇需花費大量時間，樣品的配製也比較繁瑣。

（4）內標校正曲線法：該法消除了某些操作條件的影響，也不需嚴格要求進樣體積准確。

（5）標准加入法：在難以找到合適內標物或色譜圖上難以插入內標時可採用該法。

(5)gc定量方法需具備什麼條件擴展閱讀

原理

GC主要是利用物質的沸點、極性及吸附性質的差異來實現混合物的分離，其過程如圖氣相分析流程圖所示。

待分析樣品在汽化室汽化後被惰性氣體（即載氣，也叫流動相）帶入色譜柱，柱內含有液體或固體固定相，由於樣品中各組分的沸點、極性或吸附性能不同，每種組分都傾向於在流動相和固定相之間形成分配或吸附平衡。但由於載氣是流動的，這種平衡實際上很難建立起來。

也正是由於載氣的流動，使樣品組分在運動中進行反復多次的分配或吸附/解吸附，結果是在載氣中濃度大的組分先流出色譜柱，而在固定相中分配濃度大的組分後流出。

當組分流出色譜柱後，立即進入檢測器。檢測器能夠將樣品組分轉變為電信號，而電信號的大小與被測組分的量或濃度成正比。當將這些信號放大並記錄下來時，就是氣相色譜圖了。

6. GC, GC/MS, LS, LC/MS, ICP-MS, IR, UV, RMN分別是什麼測試方法~主要測試什麼~~~球高人指點~~謝謝

GC ：Gas Chromatography 氣相色譜法 用氣體作為移動相的色譜法。根據所用固定相的不同可分為兩類：固定相是固體的，稱為氣固色譜法；固定相是液體的則稱為氣液色譜法 氣相色譜系統由盛在管柱內的吸附劑或惰性固體上塗著液體的固定相和不斷通過管柱的氣體的流動相組成。將欲分離、分析的樣品從管柱一端加入後，由於固定相對樣品中各組分吸附或溶解能力不同，即各組分在固定相和流動相之間的分配系數有差別，當組分在兩相中反復多次進行分配並隨移動相向前移動時，各組分沿管柱運動的速度就不同，分配系數小的組分被固定相滯留的時間短，能較快地從色譜柱末端流出
GC-MS是氣相色譜和質譜聯用，GC分離，MS檢測;GPC是凝膠滲透色譜，LC分離，一般情況是UV檢測。前者是GC，後者是LC。
其次GC-MS是用MS檢測分子離子峰，從而推斷分子量；GPC是做大分子物質的，比如蛋白質、多肽，是根據分子量和空間幾何形狀來分離的（先大後小），得到的是一個順序（從大到小），或一個范圍（要加Mark）
質譜儀的聯用技術
質譜儀可以與其他儀器聯用，如氣相色譜-質譜聯用（GC/MS）、
高效液相色譜-質譜聯用（HPLC/MS）；也可以質譜-質譜聯用（MS-MS）。
（1） GC/MS、HPLC/MS 儀：
基於色譜和質譜的儀器靈敏度相當，加之使分離效果好的色譜成
為質譜的進樣器，而速度快、分離好、應用廣的質譜儀作為色譜的鑒
定器，使它們成為目前最好的用於分析微量的有機混合物的儀器。
（2）液質聯用與氣質聯用的區別:
氣質聯用儀(GC-MS)是最早商品化的聯用儀器，適宜分析小分
子、易揮發、熱穩定、能氣化的化合物；用電子轟擊方式（EI）
得到的譜圖，可與標准譜庫對比。
液質聯用(LC-MS)主要可解決如下幾方面的問題：不揮發性化合
物分析測定；極性化合物的分析測定；熱不穩定化合物的分析
測定；大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析
測定；一般沒有商品化的譜庫可對比查詢，只能自己建庫或自
己解析譜圖。 所以目前液質聯用在環境領域主要應用於有標准
物質參照情況下的定性分析。
電感耦合等離子體質譜ICP-MS 所用電離源是感應耦合等離子體（ICP），它與原子發射光譜儀所用的ICP是一樣的，其主體是一個由三層石英套管組成的炬管，炬管上端繞有負載線圈，三層管從里到外分別通載氣，輔助氣和冷卻氣，負載線圈由高頻電源耦合供電，產生垂直於線圈平面的磁場。如果通過高頻裝置使氬氣電離，則氬離子和電子在電磁場作用下又會與其它氬原子碰撞產生更多的離子和電子，形成渦流。強大的電流產生高溫，瞬間使氬氣形成溫度可達10000k的等離子焰炬。樣品由載氣帶入等離子體焰炬會發生蒸發、分解、激發和電離，輔助氣用來維持等離子體，需要量大約為1L/min。冷卻氣以切線方向引入外管，產生螺旋形氣流，使負載線圈處外管的內壁得到冷卻，冷卻氣流量為10-15L/min
IR，紅外光譜
當一束具有連續波長的紅外光通過物質，物質分子中某個基團的振動頻率或轉動頻率和紅外光的頻率一樣時，分子就吸收能量由原來的基態振(轉)動能級躍遷到能量較高的振(轉)動能級，分子吸收紅外輻射後發生振動和轉動能級的躍遷，該處波長的光就被物質吸收。所以，紅外 紅外光譜
光譜法實質上是一種根據分子內部原子間的相對振動和分子轉動等信息來確定物質分子結構和鑒別化合物的分析方法
應用： 紅外光譜對樣品的適用性相當廣泛，固態、液態或氣態樣品都能應用，無機、有機、高分子化合物都可檢測。此外，紅外光譜還具有測試迅速，操作方便，重復性好，靈敏度高，試樣用量少，儀器結構簡單等特點，因此，它已成為現代結構化學和分析化學最常用和不可缺少的工具。紅外光譜在高聚物的構型、構象、力學性質的研究以及物理、天文、氣象、遙感、生物、醫學等領域也有廣泛的應用。
紅外吸收峰的位置與強度反映了分子結構上的特點，可以用來鑒別未知 液態水的紅外光譜物的結構組成或確定其化學基團；而吸收譜帶的吸收強度與化學基團的含量有關，可用於進行定量分析和純度鑒定。另外，在化學反應的機理研究上，紅外光譜也發揮了一定的作用。但其應用最廣的還是未知化合物的結構鑒定

UV，紫外光譜：配合物組成及其穩定常數的測定 定量分析結構分析定性分析應用范圍定義紫外光譜是分子中某些價電子吸收了一定波長的電磁波,由低能級躍近到高能級而產生的一種光譜
當分子中的電子吸收能量後會從基態躍遷到激發態，然後放出能量（輻射出特徵譜線）。回到基態 而輻射出特徵普線的波長在紫外區中就叫做紫外光譜
定性分析
在有機化合物的定性分析中，紫外－可見光譜適用於不飽和有機化合物，尤其是共軛體系的鑒定，以此推斷未知物的骨架結構。此外，可配合紅外光譜、核磁共振波譜法和質譜法進行定性鑒定和結構分析，因此它仍不失為是一種有用的輔助方法。一般有兩種定性分析方法，比較吸收光譜曲線和用經驗規則計算最大吸收波長λmax，然後與實測值進行比較。
結構分析
結構分析可用來確定化合物的構型和構象。如辨別順反異構體和互變異構體。
定量分析
紫外－可見分光光度定量分析的依據是Lambert-Beer定律，即在一定波長處被測定物質的吸光度與它的溶度呈線性關系。應此，通過測定溶液對一定波長入射光的吸光度可求出該物質在溶液中的濃度和含量。種常用的測定方法有：單組分定量法、多組分定量法、雙波長法、示差分光光度法和導數光譜法等。
配合物組成及其穩定常數的測定
測量配合物組成的常用方法有兩種：摩爾比法（又稱飽和法）和等摩爾連續變化法（又稱Job法）。
酸鹼離解常數的測定
光度法是測定分析化學中應用的指示劑或顯色劑離解常數的常用方法，該法特別適用於溶解度較小的弱酸或弱鹼。

NMR，核磁共振波譜
核磁共振波譜分析法(NMR)是分析分子內各官能團如何連接的確切結構的強有力的工具。 磁場中所處的不同能量狀態（磁能級）。原子核由質子、中子組成，它們也具有自旋現象。描述核自旋運動特性的是核自旋量子數I。不同的核在一個外加的高場強的靜磁場（現代NMR儀器由充電的螺旋超導體產生）中將分裂成2I＋1個核自旋能級（核磁能級），其能量間隔為ΔE。對於指定的核素再施加一頻率為ν的屬於射頻區的無線電短波，其輻射能量hν恰好與該核的磁能級間隔ΔE相等時，核體系將吸收輻射而產生能級躍遷，這就是核磁共振現象。
核磁譜在蛋白質研究上的應用
利用核磁譜研究蛋白質，已經成為結構生物學領域的一項重要技術手段。X射線單晶衍射和核磁都可獲得高解析度的蛋白質三維結構，不過核磁常局限於35kDa以下的小分子蛋白，盡管隨著技術的進步，稍大的蛋白質結構也可以被核磁解析出來。另外，獲得本質上非結構化（Intrinsically Unstructured）的蛋白質的高解析度信息，通常只有核磁能夠做到。 蛋白質分子量大，結構復雜，一維核磁譜常顯得重疊擁擠而無法進行解析，使用二維，三維甚至四維核磁譜，並採用13C和15N標記可以簡化解析過程。另外，NOESY是最重要的蛋白質結構解析方法之一，人們通過NOESY獲得蛋白質分子內官能團間距，之後通過電腦模擬得到分子的三維結構。

7. 氣相色譜固定溶液的選擇原則是什麼，gc常用的定量方法有哪些

定性依據是：標准物質進行對照定性。（在一定色譜系統和操作條件下，每種物質都有確定的保留值，比較樣品組分與已知組分的保留值，即可鑒定每個色譜峰各代表何種物質）。還可以用相對保留值定性，化學反應條件定性，兩譜聯用定性。定量依據是：在實驗條件一定時，峰面積或峰高與組分的含量成正比，因此可以利用峰面積或峰高定量。其定量方法有歸一化法，內標法和外標法。

8. GC：什麼叫內標法怎樣選擇內標物

什麼叫內標法?怎樣選擇內標物?內標法是一種間接或相對的校準方法。在分析測定樣品中某組分含量時，加入一種內標物質以校誰和消除出於操作條件的波動而對分析結果產生的影響，以提高分析結果的准確度。內標法在氣相色譜定量分析中是一種重要的技術。使用內標法時，在樣品中加入一定量的標准物質，它可被色譜拄所分離，又不受試樣中其它組分峰的干擾，只要測定內標物和待測組分的峰面積與相對響應值，即可求出待測組分在樣品中的百分含量。採用內標法定量時，內標物的選擇是一項十分重要的工作。理想地說，內標物應當是一個能得到純樣的己知化合物，這樣它能以准確、已知的量加到樣品中去，它應當和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學性質(如化學結構、極性、揮發度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應特徵，最好是被分析物質的一個同系物。當然，在色譜分析條什下，內標物必須能與樣品中各組分充分分離。需要指出的是，在少數情況下，分析人員可能比較關心化台物在一個復雜過程中所得到的回收率，此時，他可以使用一種在這種過程中很容易被完全回收的化台物作內標，來測定感興趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所說的選擇原則。 在使用內標法定量時，有哪些因素會影響內標和被測組分的峰高或峰面積的比值? 影響內標和被測組分峰高或峰面積比值的因素主要有化學方面的、色譜方面的和儀器方面的三類。由化學方面的原因產生的面積比的變化常常在分析重復樣品時出現。化學方面的因素包括：1、內標物在樣品里混合不好；2、內標物和樣品組分之間發生反應，3、內標物純度可變等。對於一個比較成熟的方法來說，色譜方面的問題發生的可能性更大一些，色譜上常見的一些問題(如滲漏)對絕對面積的影響比較大，對面積比的影響則要小一些，但如果絕對面積的變化已大到足以使面積比發生顯著變化的程度，那麼一定有某個重要的色譜問題存在，比如進樣量改變太大，樣品組分濃度和內標濃度之間有很大的差別，檢測器非線性等。進樣量應足夠小並保持不變，這樣才不致於造成檢測器和積分裝置飽和。如果認為方法比較可靠，而色譜固看來也是正常的話，應著重檢查積分裝置和設置、斜率和峰寬定位。對積分裝置發生懷疑的最有力的證據是：面積比可變，而峰高比保持相對恆定， 在製作內標標准曲線時應注意什麼? 在用內標法做色譜定量分析時，先配製一定重量比的被測組分和內標樣品的混合物做色譜分析，測量峰面積，做重量比和面積比的關系曲線，此曲線即為標准曲線。在實際樣品分析時所採用的色譜條件應盡可能與製作標准曲線時所用的條件一致，因此，在製作標准曲線時，不僅要註明色譜條件(如固定相、柱溫、載氣流速等)，還應註明進樣體積和內標物濃度。

9. GC的定性定量分析

從色譜圖可以看到，色譜峰是組分在色譜柱運行的結果，它是判斷組分是什麼物質及其含量的依據，色譜法就是依據色譜峰的移動速度和大小來取得組分的定性和定量分析結果的。
定性分析 在給定的條件下，表示組分在色譜柱內移動速度的調整保留時間是判斷組分是什麼物質的指標，即某組分在給定條件下的t惱值必定是某一數值（圖 1）。為了盡量免除載氣流速、柱長、固定液用量等操作條件的改變對使用t惱值作定性分析指標時產生的不方便，可進一步用組分相對保留值α或組分的保留指數來進行定性分析。計算組分 i在給定的柱溫和固定相時的保留指數Ii的公式為：
式中n與n+1是緊靠在組分i前後流出的正構烷烴的碳原子數，是這兩個正構烷烴的調整保留時間。
將樣品進行色譜分析後，按同樣的實驗條件用純物質作實驗，或者查閱文獻，把兩者所得的定性指標（α值、t惱值或I值）相比較，如果樣品和純物質都有定性指標數值一致的色譜峰，則此樣品中有此物質。
由於只能說相同物質具有相同保留值的色譜峰，而不能說相同保留值的色譜峰都是一種物質，所以為了更好地對色譜峰進行定性分析，還常採用其他手段來直接定性，例如採用氣相色譜和質譜或光譜聯用，使用選擇性的色譜檢測器，用化學試劑檢測和利用化學反應等。
定量分析 色譜峰的大小由峰的高度或峰的面積確定。可用手工的方法測量峰高，和以峰高h與峰高一半處的峰寬ω┩的乘積表示峰面積。A=hω┩。新型的色譜儀都有積分儀或微處理機給出更精確的色譜峰高或面積。應該注意，組分進入檢測器產生的相應的色譜信號大小（峰高或峰面積）隨所用檢測器類別和載氣的不同而異，有時甚至受到物質濃度和儀器結構的影響。所以須將所得的色譜信號予以校正，才能與組分的量一致，即需要用下式校正組分的重量：
W=f′A式中f′為該組分的定量校正因子。依上式從色譜峰面積（或峰高）可得到相應組分的重量，進一步用下述方法之一計算出組分i在樣品中的含量Wi：①歸一化法，將組分的色譜峰面積乘以各自的定量校正因子，然後按下式計算：
此法的優點是方法簡便，進樣量與載氣流速的影響不大；缺點是樣品中的組分必須在色譜圖中都能給出各自的峰面積，還必須知道各組分的校正因子。
② 內標法，向樣品中加入被稱為內標物的某物質後，進行色譜分析，然後用它對組分進行定量分析。例如稱取樣品Wm克，將內標物Wφ克加入其中，進行色譜分析後，得到欲測定的組分與內標物的色譜峰面積分別為Ai和Aφ，則可導出：
此方法沒有歸一化法的缺點，不足之處是要求准確稱取樣品和內標物的重量，選擇合適的內標物。
③ 外標法，在進樣量、色譜儀器和操作等分析條件嚴格固定不變的情況下，先用組分含量不同的純樣等量進樣，進行色譜分析，求得含量與色譜峰面積的關系，用下式進行計算：
式中k媴是組分 i單位峰面積百分含量校正值。此法適用於工廠控制分析，特別是氣體分析；缺點是難以做到進樣量固定和操作條件穩定。

10. 如何用GC/MS進行定量分析

做標准曲線，看你選擇什麼方法做定量，內標還是外標？選擇適合的標定物。