A. elisa實驗原理是什麼
ELISA實驗原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價結合,此種結合不會改變抗體的免疫學特性,也不影響酶的生物學活性。酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發生特異性結合。滴加底物溶液後,底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色氧化型,出現顏色反應。
因此,可通過底物的顏色反應來判定有無相應的免疫反應,顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應可通過ELISA檢測儀進行定量測定,這樣就將酶化學反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結合起來,使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。
ELISA實驗基本方法
ELISA實驗基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面,使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法,前者用於檢測大分子抗原,後者用於測定特異抗體。
ELISA方法已被廣泛應用於多種細菌和病毒等疾病的診斷。在動物檢疫方面,ELISA在豬傳染性胃腸炎、牛副結核病、牛傳染性鼻氣管炎、豬偽狂犬病、藍舌病等的診斷中已為廣泛採用的標准方法。
B. 酶聯免疫反應(ELISA)是用來測什麼的
ELISA法是現代醫學臨床免疫診斷的重要方法,它的基本原理是:使抗原或抗體結合到某種固相載體表面,並保持其免疫活性,再使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測定時,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開,最後結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物後,底物被酶催化變為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據顏色反應的深淺刊物定性或定量分析。由於酶的催化頻率很高,故可極大地地放大反應效果,從而使測定方法達到很高的敏感度。ELISA可用於測定各類抗原,也可用於測定抗體。比如現代檢測的各類病毒、寄生蟲等抗原抗體、激素、腫瘤標志物還有一些毒物葯物都是通過該項技術進行測定的。在這種測定方法中有3種必要的試劑: 固相的抗原或抗體、酶標記的抗原或抗體和酶作用的底物。
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C. ELISA檢測方法的原理及其優缺點是什麼
1.
直接法(direct
elisa)
將抗原直接固定在固相載體上,參加酶符號的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。
優勢:操作手續簡略,因無須運用二抗可防止交互反響。
缺陷:實驗中的一抗都得用酶符號,但不是每種抗體都適合做符號,費用相對進步。
2.間接法(indirect
elisa)
此測定辦法與直接法相似,不一樣在於一級抗體沒有酶符號,改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。
優勢:二抗能夠加強信號,並且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它最多的免疫反響性。
缺陷:交互反響發作的機率較高。
3.雙抗體夾心法(sandwich
elisa)
被檢測的抗原包被在兩個抗體之間,其間一個抗體將抗原固定於固相載體上,即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體,此抗體可用酶符號後直接測定抗原的量;或不符號,再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當心選擇,才可防止交互反響或競爭一樣的抗原聯系部位。
優勢:高活絡、高專一性,抗原無須事前純化。
缺陷:抗原必定得具有兩個以上的抗體聯系部位。
4.競爭法(competitive
elisa)
樣本里的抗原(自在抗原)和純化並固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競爭一樣的抗體,當樣品里的自在抗原越多,就能夠聯系越多的抗體,而固定抗原就只能聯繫到較少的抗體,反之亦然。經清潔過程,洗去自在抗原和抗體的復合物,只留下固定抗原和抗體的復合物,拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬,依據呈色區別就可計算出樣品里的抗原含量。
優勢:可適用比擬不純的樣本,並且數據再現性很高。
缺陷:全體的敏感性和專一性都較差。
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D. ELISA的目的是什麼
ELISA可以用來檢測血清樣本,看有還是沒有某個抗原或抗體,也可以看該抗原或抗體是多還是少,可以比較不同血清樣本之間該抗原/抗體的含量高低。
如果該抗原是一個病原,或該抗體是一個對某病原具有特異性的抗體,則ELISA檢測該抗原或該抗體的結果,可以用來幫助判斷,提供血清的個體,是否感染或曾經感染過這個病原。
E. ELISA有些什麼方法各有啥優缺點
ELISA是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術。酶聯免疫吸附試驗的標准程序,通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(capture Ab)固定在固相載體上,再加入一級檢測抗體(primarydetection Ab),形成一個抗原抗體的復合物。如果該抗體已經用酶(enzyme)標記了,即可用來直接測定抗原的量,若無,則可利用另一個酶標記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質(substrate),作用後產生出現的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關系,依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度。
1.直接法(direct ELISA)
將抗原直接固定在固相載體上,加入酶標記的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。
優勢:操作手續簡短,因無須使用二抗可避免交互反應。
缺點:試驗中的一抗都得用酶標記,但不是每種抗體都適合做標記,費用相對提高。
2.間接法(indirect ELISA)
此測定方法與直接法類似,差別在於一級抗體沒有酶標記,改用酶標記的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。
優勢:二抗可以加強信號,而且有多種選擇能做不同的測定分析。不加酶標記的一級抗體則能保留它最多的免疫反應性。
缺點:交互反應發生的機率較高。
3.雙抗體夾心法(sandwich ELISA)
被檢測的抗原包被在兩個抗體之間,其中一個抗體將抗原固定於固相載體上,即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體,此抗體可用酶標記後直接測定抗原的量;或不標記,再透過酶標記的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體必須小心選取,才可避免交互反應或競爭相同的抗原結合部位。
優勢:高靈敏、高專一性,抗原無須事先純化。
缺點:抗原一定得擁有兩個以上的抗體結合部位。
4.競爭法(competitive ELISA)
樣本里的抗原(自由抗原)和純化並固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一起競爭相同的抗體,當樣品里的自由抗原越多,就可以結合越多的抗體,而固定抗原就只能結合到較少的抗體,反之亦然。經清洗步驟,洗去自由抗原和抗體的復合物,只留下固定抗原和抗體的復合物,拿來與只有固定抗原的對照組結果相比較,根據呈色差異就可計算出樣品里的抗原含量。
優勢:可適用比較不純的樣本,而且數據再現性很高。
缺點:整體的敏感性和專一性都較差。
5.最新ELISA技術:
基於細胞法(cell-based ELISA):
是一種新的定性蛋白檢測技術,將細胞直接在微孔板里培養,待檢測時,不需抽提蛋白和裂解細胞,便可直接測量微孔板里蛋白經刺激或抑製作用後的變化。
優勢:無需裂解細胞,所以目標蛋白損失最少,可測定完整細胞、黏附細胞、還有非粘附細胞。
缺點:不能測定抗原量。
F. 什麼叫ELISA法
1971年瑞典學者Engvail和Perlmann,荷蘭學者Van
Weerman和Schuurs分別報道將免疫技術發展為檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法,即酶聯免疫吸附測定法
(enzyme-linked
immunosorbent
assay
,
ELISA)
。ELISA已成為分析化學領域中的前沿課題
,它是一種特殊的試劑分析方法,是在免疫酶技術(
immunoenzymatic
techniques
)
的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術
。
G. 請問在hiv檢測中ELISA是什麼檢測法,幾代試劑
ELISA就是我們常說的酶聯法。
現在國內最差也是用3代試劑,有些地方會用4代試劑。
4代試劑(檢查抗原+抗體)——窗口期為4周。因為抗原於3-4周達到復制的峰值,此時通過4代試劑檢查,如果感染了HIV,抗原/抗體至少有一個為陽性,如果都是陰就排除了。
3代試劑(只查抗體)——窗口期為6周。
以上為理論分析+臨床經驗的結果,可以說是99.9%的准確度。
但是目前FDA、CDC和試劑生產商統一達成的共識,也就是針對普通人,最保守的窗口期是3個月。無論什麼試劑,3個月都100%排除。
H. ELISA是什麼
1971年瑞典學者Engvail和Perlmann,荷蘭學者Van Weerman和Schuurs分別報道將免疫技術發展為檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法,即酶聯免疫吸附測定法 (enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA) 。ELISA已成為分析化學領域中的前沿課題 ,它是一種特殊的試劑分析方法,是在免疫酶技術( immunoenzymatic techniques ) 的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術 。
它採用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接,然後通過酶與底物產生顏色反應,用於定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。
在這種測定方法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑) ②酶標記的抗原或抗體(標記物)③酶作用的底物(顯色劑)
測量時,抗原(抗體)先結合在固相載體上,但仍保留其免疫活性,然後加一種抗體(抗原)與酶結合成的偶聯物(標記物),此偶聯物仍保留其原免疫活性與酶活性,當偶聯物與固相載體上的抗原(抗體)反應結合後,再加上酶的相應底物,即起催化水解或氧化還原反應而呈顏色。
其所生成的顏色深淺與欲測的抗原(抗體)含量成正比。 這種有色產物可用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡觀察,也可以用分光光度計(酶標儀)加以測定。其方法簡單,方便迅速,特異性強
I. 醫學上ELISA,是什麼意思。
酶聯免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay,簡寫ELISA)
指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體特異性結合進行免疫反應的定性和定量檢測方法;酶聯免疫吸附測定(ELISA)為免疫學中的經典實驗。
基本原理為:使抗原或抗體結合到某種固相載體表面,並保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。
(9)elisa是什麼檢測方法擴展閱讀
結果判斷——
1、定性測定:
定性測定的結果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答,分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標本在該測定系統中有反應。"陰性"則為無反應。
2、定量測定:
ELISA操作步驟復雜,影響反應因素較多,特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致,因此在定量測定中,每批測試均須用一系列不同濃度的參考標准品在相同的條件下製作標准曲線。
J. 什麼是ELISA
ELISA即酶聯免疫吸附測定,指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體結合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。
ELISA應用的范圍很廣,而且正在不斷地擴大,原則上ELISA可用於檢測一切抗原、抗體及半抗原,可以直接定量測定體液中的可溶性抗原。在實際應用方面可用於疾病的臨床診斷、疾病監察、疾病普查、法醫檢查、獸醫及農業上的植物病害的診斷檢定等。
(10)elisa是什麼檢測方法擴展閱讀 :
ELISA操作步驟復雜,影響反應因素較多,特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致,因此在定量測定中,每批測試均須用一系列不同濃度的參考標准品在相同的條件下製作標准曲線。
測定大分子量物質的夾心法ELISA,標准曲線的范圍一般較寬,曲線最高點的吸光度可接近2.0,繪制時常用半對數值,以檢測物的濃度為橫坐標,以吸光度為縱坐標,將各濃度的值逐點連接,所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨於平坦,中央較呈直線的部分是最理想的檢測區域。
ELISA也可應用於病毒抗體檢測:流感病毒、腮腺炎病毒、麻診、風疹、輪狀病毒、皰疹病毒、巨細胞病毒、EB病毒、腺病毒、腸道病毒、腦炎病毒、黃熱病毒、狂犬病毒和脊髓灰質炎病毒等,其敏感性都超過目前常用的檢測方法。此外,還可用於鑒定病毒型別,例如皰疹病毒。
參考資料:網路-ELISA