活螺旋体标本染色最常用的方法

❶ 螺旋体的种类介绍

梅毒螺旋体细长，5～15×0.1～0.2um，形似细密的弹簧，螺旋弯曲规则，平均8～14个，两端尖直。电镜下显示梅毒螺旋体结构复杂，从外向内分为：外膜（主要由蛋白质、糖及类脂组成）、轴丝（主要由蛋白质组成）、圆柱形菌体（包括细胞壁、细胞膜及胞浆内容物）；一般染料不易着色。梅毒螺旋体有生活发育周期，分为颗粒期、球形体期及螺旋体期，平均约30小时增殖一代，发育周期与所致疾病周期、隐伏发作及慢性病程有关。梅素螺旋体抗原分为三类：
1．螺旋体表面特异性抗原：刺激机体产生特异的凝集抗体及密螺旋体制动或溶解抗体，后者加补体可溶解螺旋体。
2．螺旋体内类属抗原：可产生补体结合抗体，与非病原性螺旋体有交叉反应。
3，螺旋体与宿主组织磷脂形成的复合抗原：当螺旋体侵入组织后，组织中的磷脂可粘附在螺旋体上，形成复合抗原，此种复合抗原可刺激机体产生抗磷脂的自身免疫抗体，称为反应素（Aegagin），可与牛心肌或其他正常动物心肌提取的类脂质抗原起沉淀反应（康氏试验）或补体结合反应（华氏试验）。
1981年，Fieldsteel等采用棉尾兔单层上皮细胞，在微氧条件下培养成功，在人工培养基上尚不能培养。
梅素螺旋体对温度、干燥均特别敏感，离体干燥1～2小时死亡，41℃中1小时死亡，对化学消毒剂敏感，1～2%石炭酸中数分钟死亡，对青霉素、四环素、砷剂等敏感。 人是梅毒的唯一传染源，由于感染方式不同可分先天性梅毒和后天性梅毒。前者是患梅毒的孕妇经胎盘传染给胎儿的；后者是出生后感染的，其中95%是由性交直接感染，少数通过输血等间接途径感染。
先天性梅毒又称胎传梅毒。梅毒螺旋体经胎盘进入胎儿血循环，引起胎儿全身感染，螺旋体在胎内儿脏（肝、脾、肺及肾上腺）及组织中大量繁殖，造成流产或死胎，如胎儿不死则称为梅毒儿，会出皮肤梅毒瘤、骨膜炎、锯齿形牙、神经性耳聋等症状。
后天获得性梅毒表现复杂，依其传染过程可分为三期：
初期梅毒：梅毒螺旋体侵入皮肤粘膜约三周后，在侵入局部出现无痛性硬结及溃疡，称硬性下疳。局部组织镜检可见淋巴细胞及巨噬细胞浸润。下疳多发生于外生殖器，其溃疡渗出物含有大量梅毒螺旋体，传染性极强。下疳常可自然愈合，约2～3个月无症状的隐伏期后进入第二期。
二期梅毒：此期的主要表现为全身皮肤粘膜出现梅毒疹，全身淋巴结肿大，有时亦累及骨、关节、眼及其他器官。在梅毒疹及淋巴结中有大量螺旋体。不经治疗症状一般可在3周～3个月后自然消退而全愈；部分病例经隐伏3～12个月后可再发作。二期梅毒因治疗不当，经过5年或更久的反复发作，而进入三期。
三期梅毒：主要表现为皮肤粘膜的溃疡性损害或内脏器官的肉芽肿样病变（梅毒瘤），严重者在经过10～15年后引起心血管及中枢神经系统损害，导致动脉瘤、脊髓痨及全身麻痹等，此期的病灶中螺旋体很少，不易检出。
一、二期梅毒又统称为早期梅毒，此期传染性强而破坏性小。三期梅毒又称为晚期梅毒，该期传染性小，病程长、而破坏性大。
目前尚未证明梅毒螺旋体内毒素或分泌外毒素，其致病机理尚不清楚，可能与螺旋体对宿主细胞的直接损害及Ⅲ、Ⅳ型变态反应有关。
梅毒的免疫是有菌免疫，以细胞免疫为主，体液免疫只有一定的辅助防御作用，意义不大。当螺旋体从体内清除后仍可再感染梅毒，而且仍可出现一期梅毒症状。此病周期性潜伏与再发的原因可能与体内产生的免疫力有关，如机体免疫力强，螺旋体能变成颗粒形或球形，在体内一些部位潜伏起来，一旦机体免疫力下降，螺旋体又可侵犯体内某些部位而复发。 （一）检查螺旋体，采取初期及二期梅毒硬性下疳、梅毒疹的渗出物等，用暗视野或墨汁显影，如查见有运动活泼的密螺旋体即可诊断。
（二）血清学检查
1．非螺旋体抗原试验：是用正常牛心肌的心类脂（Cardiolipin）作为抗原，检测病人血清中的反应素。国际上常用性病研究实验室（UDRL）的玻片试验法；该法是一种简单的玻片沉淀试验，试剂及对照已标准化。另外，还可用不加热血清反应素试验（USR），其抗原是UDRL抗原的改良，敏感性和特异性与UDRL相似。反应素在第一期梅毒病变出现后1～2周就可测出，第二期阳性率几乎达100，第三期阳性率较低。本试验所用抗原是非特异的，检测的抗体时应排除假阳性反应，结合病史，临床表现及多次的试验结果进行分析。
2．螺旋体抗原试验：抗原为梅毒旋体，以检测血清中的特异性抗体，该试验特异性高，目前常用下述两种方法。
（1）荧光密螺旋体抗体吸收试验（FTA～ABS）：为间接荧光抗体法，其敏感性及特异性均高，常用于梅毒的早期诊断。
（2）梅毒螺旋体制运试验（TPI）：用来检测血清中是否存在抑制螺旋体活动的特异性抗体。用活梅毒螺旋体（Nichol株）加病人新鲜血清，35℃培养16小时，同法作正常血清对照，然后用暗视野显微镜观察活动的螺旋体数目，如试验标本活动的螺旋体数目小于或等于对照血清标本内的40%，即为阳性。 钩端螺旋体病是一种由钩端螺旋体属细菌引起的疾病，可感染人类和动物。这种细菌在全世界广泛存在，尤其是在降雨量多的热带国家。它可在淡水、潮湿的土壤、植物和淤泥存活很久。大雨后的洪水有助将细菌在周围环境传播。
钩端螺旋体病对户外工作或需接触动物的人士构成职业病风险，对游玩人士亦会造成威胁，包括露营、在受污染的湖和河流进行水上运动，例如游泳、涉水和乘筏子的旅客。
疾病潜伏期是2天到4个星期。病情可持续几天到3个星期或更久。征状包括发高烧、严重头痛、冷颤、肌肉疼痛和呕吐，亦可能出现黄疸(眼球和皮肤呈黄色)、红眼、肚痛、腹泻或出疹。如果病人不及早接受治理，可能会出现肾脏损伤、脑膜炎、肝脏功能衰竭和呼吸困难；有些罕见的例子更会导致死亡。
1．早期（钩体血症期），此期临床症状似流感，出现发热；肌肉疼痛；头痛、周身乏力；眼结膜充血；腓肠肌压痛；浅表淋巴结肿大与压痛，持续3天。 2．中期（器官损伤期），此期由于损害器官不同临床症状各异。神经外损害可有肺出血、肾功能不全、肝脏损害。神经系统损害：于起病后2～3日左右，出现剧烈头痛、频繁呕吐、颈项强直等脑膜刺激征；严重病例脑实质损害，表现为嗜睡、谵妄或昏迷，部分患者有抽搐、瘫痪、锥体束征，甚至脑干损害等。 3．后期（恢复期），大部分病人恢复，部分病人出现后发神经系统并发症。 ①后发脑膜炎 多是由于变态反应所致，表现为头痛、恶心、呕吐、脑膜刺激征。脑脊液压力增高，蛋白增高，抗钩端螺旋体抗体阳性。 ②脑动脉炎 是钩体病神经系统损害最常见最严重的神经系统后发症，多由于变态反应引起多发性动脉炎，动脉内膜增厚，血管闭塞。病人在钩体感染后半月到半年发病，表现为急性脑梗死、TIA发作或进展性卒中。有报道钩体感染引起脊髓炎和多发性神经炎，比较少见。 抗生素可治疗端螺旋体病，患者应尽快接受治疗。病情严重者或须留院治理，接受抗生素静脉注射和其它支援治理。
1、病因治疗：钩体对多种抗菌药物敏感，如青霉素、链霉素、庆大霉素、四环素、氯霉素、头孢噻吩，以及合成的盐酸甲唑醇（methimidol）和咪唑酸酯。国内首选青霉素G，疗程7～10天，应用青霉素后由于虫体破坏，释放毒素，可出现病情一过性加重。青霉素过敏者改用四环素类或氨基糖甙类药物。 2、神经系统并发症治疗：应用糖皮质激素减轻免疫反应；高颅压者应用甘露醇、甘油果糖、速尿等脱水降颅压；合并脑动脉炎脑梗死病人加用扩血管、抗血小板等治疗。

❷ 液体培养基中的细菌如何染色

细菌用革兰氏染色就可以了（某些特殊的细菌可以用其他染色法）

先用接种环在酒精灯上灼烧灭菌，然后伸入液体培养基中降温，并挑取一环在玻片上待其自然干燥。如果含菌量太大，可以用生理盐水稀释。之后在火焰上略微加热固定，后面的就和一般的革兰氏染色方法相同了。