基因的操作方法有哪些

① 基因检测的步骤是什么

基因检测口腔拭子采集,具体步骤：
1．基因检测准备棉签（单头）,伸进口腔,从口腔内侧两颊粘膜处（腮帮子内侧）反复擦拭20次以上,取出采样拭子棉签,放在干净白纸上阴干。
2．以同样的方法采集5根拭子棉签。阴凉干燥后干净的纸质信封内保存
3．请不要忘记对样本做好标记。不要和其他人物质互相接触。以免接触其他dna, 上述方法采集的样本,可以在干燥环境下保存2-3个月。不管采集什么样本,鉴定结果的准确性是一样的。因为样本采集只是从中提取dna,而每个人的dna是终身不变的,所以即使采集不同的样本,鉴定结果的准确性是一样的。口腔拭子dna提取的方法口腔拭子dna提取可以用商业化的试剂盒,方便简单易操作,用华晨阳的配套dna提取试剂盒,主要是针对口腔脱落细胞dna提取的。口腔拭子在哪里买？

② 简述基因工程操作的几个步骤

基因工程一般包括四个步骤:一是取得符合人们要求的DNA()片段,这种DNA()片段被称为“目的基因”;二是将目的基因与质粒或病毒DNA连接成重组
DNA;三是把重组DNA引入某种细胞;四是把目的基因能表达的受体细胞挑选出来。

③ 基因工程的操作一般包括以下四个步骤：提取目的基因、___、将目的基因导入受体细胞、___．

基因工程的基本操作步骤主要包括四步：
①目的基因的获取；
②基因表达载体的构建；
③将目的基因导入受体细胞；
④目的基因的检测与表达．
其中，基因表达载体的构建是基因工程的核心．
故答案为：
基因表达载体的构建   目的基因的检测与表达

④ 微生物代谢工程中的常用基因操作技术有哪些

微生物的基因操作技术有：核酸的凝胶电泳、核酸的分子杂交技术、DNA 序列分析、基 因的定点诱变、细菌的转化、利用 DNA 与蛋白质的相互作用进行核酸研究、PCR 技术等。
基因定点突变(site-directed mutagenesis)：通过改变基因特定位点核苷酸序列来改变所编 码的氨基酸序列，用于研究氨基酸残基对蛋白质的结构、催化活性以及结合配体能力的影响， 也可用于改造 DNA 调控元件特征序列、修饰表达载体、引入新的酶切位点等。主要采用两 种 PCR 方法，包括重叠延伸技术和大引物诱变法。在硫化细菌核苷水解酶对底物专一性的研 究中，采用定点突变技术，对编码 221 位和 228 位氨基酸的 DNA 序列进行突变，改变两个位点的氨基酸，从而研究氨基酸残基对底物结合的影响。
基因敲除(gene knock-out)：又称基因打靶，通过外源 DNA 与染色体 DNA 之间的同源重 组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强、染色体 DNA 可与目的片段共同稳定 遗传等特点，可分为完全基因敲除和条件型基因敲除。在谷氨酸棒杆菌生产缬氨酸的研究中，采用基因敲除的方法进行高产菌株构建。如 ilvA 基因敲除，使苏氨酸脱氨酶的合成减少，降低异亮氨酸合成的前体，从而减少异亮氨酸的合成，增加缬氨酸的生成。

⑤ 基因克隆的基本步骤有哪些

基因克隆的基本步骤流程如下：

一、目的DNA片段的获得：

DNA克隆的第一步是获得包含目的基因在内的一群DNA分子，这些DNA分子或来自于目的生物基因组DNA或来自目的细胞mRNA逆转录合成的双链 cDNA分子。

由于基因组DNA较大，不利于克隆，因此有必要将其处理成适合克隆的DNA小片段，常用的方法有机械切割和核酸限制性内切酶消化。若是基因序列已知而且比较小就可用人工化学直接合成。如果基因的两端部分序列已知，根据已知序列设计引物，从基因组DNA 或cDNA中通过PCR技术可以获得目的基因。

二、载体的选择：

基因克隆常用的载体有：质粒载体、噬菌体载体、柯斯质粒载体、单链DNA噬菌体载体、噬粒载体及酵母人工染色体等。从总体上讲，根据载体的使用目的，载体可以分为克隆载体、表达载体、测序载体、穿梭载体等。

三、体外重组：

体外重组即体外将目的片断和载体分子连接的过程。大多数核酸限制性内切酶能够切割DNA分子形成有黏性末端，用同一种酶或同尾酶切割适当载体的多克隆位点便可获得相同的黏性末端，黏性末端彼此退火，通过T4 DNA连接酶的作用便可形成重组体，此为黏末端连接。

当目的DNA片断为平端，可以直接与带有平端载体相连，此为平末端连接，但连接效率比黏端相连差些。有时为了不同的克隆目的，如将平端DNA分子插入到带有黏末端的表达载体实现表达时，则要将平端DNA分子通过一些修饰；

如同聚物加尾，加衔接物或人工接头，PCR法引入酶切位点等，可以获得相应的黏末端，然后进行连接，此为修饰黏末端连接。

四、导入受体细胞：

载体DNA分子上具有能被原核宿主细胞识别的复制起始位点，因此可以在原核细胞如大肠杆菌中复制，重组载体中的目的基因随同载体一起被扩增，最终获得大量同一的重组DNA分子。

五、重组子的筛选：

从不同的重组DNA分子获得的转化子中鉴定出含有目的基因的转化子即阳性克隆的过程就是筛选。发展起来的成熟筛选方法如下：

（1）插入失活法：外源DNA片段插入到位于筛选标记基因（抗生素基因或β-半乳糖苷酶基因）的多克隆位点后，会造成标记基因失活，表现出转化子相应的抗生素抗性消失或转化子颜色改变，通过这些可以初步鉴定出转化子是重组子或非重组子。常用的是β-半乳糖苷酶显色法即蓝白筛选法（白色菌落是重组质粒）。

（2）PCR筛选和限制酶酶切法：提取转化子中的重组DNA分子作模板，根据目的基因已知的两端序列设计特异引物，通过PCR技术筛选阳性克隆。PCR法筛选出的阳性克隆，用限制性内切酶酶切法进一步鉴定插入片段的大小。

（3）核酸分子杂交法：制备目的基因特异的核酸探针，通过核酸分子杂交法从众多的转化子中筛选目的克隆。目的基因特异的核酸探针可以是已获得的部分目的基因片段,或目的基因表达蛋白的部分序列反推得到的一群寡聚核苷酸,或其它物种的同源基因。

（4）免疫学筛选法：获得目的基因表达的蛋白抗体，就可以采用免疫学筛选法获得目的基因克隆。这些抗体即可是从生物本身纯化出目的基因表达蛋白抗体，也可从目的基因部分ORF片段克隆在表达载体中获得表达蛋白的抗体。

(5)基因的操作方法有哪些扩展阅读：

基因克隆的注意事项：

1、平端连接：DNA连接酶可催化相同和不同限制性核酸内切酶切割的平端之间的连接。原则上讲，限制酶切割DNA后产生的平端也属配伍末端，可彼此相互连接；若产生的粘性末端经特殊酶处理，使单链突出处被补齐或削平，变为平端，也可实行平端连接。

2、加尾连接：同聚物加尾连接是利用同聚物序列，如多聚A与多聚T之间的退火作用完成连接。在末端转移酶作用下，在DNA片段端制造出粘性末端，而后进行粘性末端连接。这是一种人工提高连接效率的方法，也属于粘性末端连接的一种特殊形式。

3、人工接头连接：对平端DNA片段或载体DNA，可在连接前将磷酸化的接头(linker)或适当分子连到平端，使产生新的限制性内切酶位点。再用识别新位点的限制性内切酶切除接头的远端，产生粘性末端。

⑥ 基因工程的过程是怎样操作的

基因工程所涉及的过程可用“分（或合成）、切、连、转、选、鉴”六个字表示。

分（或合成）是指DNA的制备，包括从生物体中分离或人工合成；切是在体外将DNA进行切割，使之片段化或线性化；连是在体外将不同来源的DNA分子重新连接起来，构建重组DNA分子；转是将重组连接的DNA分子通过一定的方法重新送入细胞中进行扩增和表达；选是从转化的群体中将所需要的目的克隆挑选出来；鉴就是对筛选出来的重组体进行鉴定。

图4-1：基因工程的操作过程

⑦ 基因工程的操作过程的主要步骤包括哪些

基因工程的操作过程的主要步骤：

切、接、转、增、筛（检）

1. 切：获得DNA片段，取得目的基因；载体的选择制备。

   方法：从生物基因组中分离得到——基因组DNA——>酶切产物

   从总RNA重分离得到mRNA,再逆转录得到cDNA

   人工合成——化学合成；PCR（聚合酶链式反应）

2. 接：DNA片段和载体DNA在体外链接，形成重组子。

3. 转：将重组的DNA进入宿主细胞。

   方法：转化——某一基因型细胞从周围介入中吸收另一基因型细胞的DNA，而使其基因型和表型发生相应变化的形象；转染——出去蛋白质外壳的病毒核酸感染细胞或原生质体的过程；转导——用噬菌体做载体，将一个细胞的基因传递给另一个细胞的过程。还有显微注射等。

4. 增：培养已转化细胞，使目的基因在其中进行复制，扩增，并将其整合到手提细胞的基因组中。

5. 筛、检：重组子的筛选与鉴定。筛选和鉴定转化细胞，获得外援基因高效表达的基因工程菌或细胞。
   

⑧ 简述基因工程操作的几个步骤

基因操作的基本步骤
进行基因操作一般要经历四个基本步骤，也就是基因操作的“四步曲”。
提取目的基因
基因操作的第一步，是取得人们所需要的特定基因，也就是目的基因(如图)。如前
面提到的苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因，还有植物的抗病(抗病毒、抗细菌)基因、
种子的贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等，都是目的基因。
要从浩瀚的“基因海洋”中获得特定的目的基因，犹如大海捞针，是十分不易的。科学家们经过不懈地探索，想出了许多办法，概括地说，主要有两条途径：一条是从供体细胞的dna中直接分离基因；另一条是人工合成基因。
直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。这种方法犹如用猎枪发射的散弹打鸟，无论哪一颗弹粒击中目标，都能把鸟打下来。鸟枪法的具体做法是：用限制酶将供体细胞中的dna切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞所提供的dna(外源dna)的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制(在遗传学中叫做扩增)，从中找出含有目的基因的细胞，再用一定的方法把带有目的基因的dna片段分离出来。如许多抗虫、抗病毒的基因都可以用上述方法获得。
用“鸟枪法”获取目的基因的缺点是工作量大，具有一定的盲目胜。又由于真核细胞的基因含有不表达的dna片段，不能直接用于基因的扩增和表达，因此，在获取真核细胞中的目的基因时，一般是用人工合成基因的方法。
目前人工合成基因的方法主要有两条途径。一条途径是以目的基因转录成的信使rna为模板，反转录成互补的单链dna，然后在酶的作用下合成双链dna，从而获得所需要的基因。另一条途径是根据已知的蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使rna序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学的方法，以单核苷酸为原料合成目的基因(如图)。如人的血红蛋白基因、胰岛素基因等就可以通过人工合成基因的方法获得。

⑨ 基因工程的基因操作步骤

①．从细胞和组织中分离DNA；
②．限制性内切酶酶切DNA分子，制备DNA片段；
③．将酶切DNA分子与载体DNA连接，构建能在宿主细胞内自我复制的重组DNA分子；
④．把重组DNA分子导入宿主受体细胞，复制；
⑤．重组DNA随宿主细胞的分裂而分配到子细胞，建立无性繁殖系(clone)或发育成个体；
⑥．从细胞群体中选出所需要的无性繁殖系，并使外源基因在受体细胞中正常表达，翻译成蛋白质等基因产物、回收；或筛选出获得定向性状变异的个体。
简单理解就是
目的基因的获取——适当基因表达载体的构建——目的基因的导入受体——转化受体的转基因检测