⑴ 细胞内DNA、RNA、蛋白质常用的分子生物学检测方法shi
细胞内DNA用甲基绿检测,而rna用吡罗红检测,蛋白质则用双缩脲试剂检测。
⑵ 高分子材料的检测方法
各种方法,热分析,核磁,红外·······LZ这个太多了
⑶ 蛋白分子量检测方法有哪些 除sds wb之外的技术
最小分子量法、渗透压法、沉降法、层析法
⑷ 常用的分子生物学检验技术有哪些
分子诊断学的研究范畴包括:利用遗传学、病理学、免疫学、生物化学、基因组学、蛋白质组学和分子生物学的理论和方法探讨疾病发生和发展的分子机制。为整个疾病过程寻求特异的分子诊断指标,以及利用分子生物学技术为这些分子诊断指标建立临床实用的检测方法。
⑸ 实验室测定蛋白质分子量的方法有哪些
测定蛋白质分子量的常用方法:
粘度法、凝胶过滤层析法、凝胶渗透色谱法、SDS-凝胶电泳、渗透压法、质谱法包括电喷雾离子化质谱技术和基质辅助激光解吸电离质谱技术、光散射法(多角度激光散射)、沉降法(超速离心法)。
1、粘度法
一定温度条件下,高聚物稀溶液的粘度与其分子量之间呈正相关性,随着分子量的增大,聚合物溶液的粘度增大。通过测定高聚物稀溶液粘度随浓度的变化,即可计算出其平均分子量(粘均分子量)。
如果高聚物分子的分子量愈大,则它与溶剂间的接触表面也愈大,摩擦就大,表现出的特性粘度也大。特性粘度和分子量之间的经验关系式为:
8、电喷雾离子化质谱技术
电喷雾离子化质谱技术(ESI-MS)是在毛细管的出口处施加一高电压,所产生的高电场使从毛细管流出的液体雾化成细小的带电液滴,随着溶剂蒸发,液滴表面的电荷强度逐渐增大,最后液滴崩解为大量带一个或多个电荷的离子,致使分析物以单电荷或多电荷离子的形式进入气相的质谱技术。ESI-MS 测定蛋白质大分子是根据一簇多电荷的质谱峰群,通过解卷积的方式计算得到蛋白质的分子量,由于ESI-MS可以产生多电荷峰,因此使得测试的分子质量范围大大扩大。
优缺点:(1)对样品的消耗少,不会造成样品的大量浪费;(2)对样品分子质量测试灵敏度、分辨力和准确度都相当高;(3)能够方便地与多种分离技术联用,如毛细管电泳、高效液相色谱等,是解决非挥发性、热不稳定性、极性强的复杂组分化合物的定性定量的高灵敏度检测方法。
9、基质辅助激光解吸电离质谱技术
基质辅助激光解吸电离质谱技术(MALDI-MS)是将待测物悬浮或溶解在一个基体中,基体与待测物形成混晶,当基体吸收激光的能量后,均匀传递给待测物,使待测物瞬间气化并离子化。基体的作用在于保护待测物不会因过强的激光能量导致化合物被破坏。MALDI的原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜,基质从激光中吸收能量传递给生物分子,而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子,而使生物分子电离的过程。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道,根据到达检测器的飞行时间不同而被检测即测定离子的质荷比(M/Z)与离子的飞行时间成正比,检测离子。
优缺点:(1)同ESI-MS 一样对样品的消耗很少;(2)随着质量分析器的不断改进、新的基质的不断发现和应用以及延迟萃取技术的使用,使得MALDI-MS 的最高分辨率不断提高,甚至超过ESI-MS;(3)MALDI-MS 单电荷峰占主要部分,碎片峰少,非常有利于对复杂混合物的分析,且能忍受较高浓度的盐、缓冲剂和其他难挥发成分,降低了对样品预处理的要求;(4)MALDI-TOF 质谱对生物大分子分子量的测定范围是所有测试技术中最广的。
⑹ 1.写出基因工程第四个步骤中,要从分子水平上检测的内容及采用的检测方法
从分子水平上检测有DNA分子杂交技术,分子杂交技术和抗原-抗体杂交技术。
1.DNA分子杂交技术检测的是转基因生物的DNA是否插入了目的基因。将转基因生物的基因组DNA提取出来,在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作标记,以此作为探针,使探针与基因组DNA杂交,如果显出杂交带,就表明目的基因已插入染色体DNA中。
2.分子杂交技术检测目的基因是否转入出了mRNA。从转基因生物中提取出mRNA,用标记的目的基因作为探针,与mRNA杂交,如果显出杂交带,则表明目的基因转入出了mRNA。
3.抗原-抗体杂交检测目的基因是否翻译成蛋白质。从转基因生物中提取蛋白质,用相应的抗体进行抗原-抗体杂交,若有杂交带出现,表明目的基因已形成蛋白质产物。
⑺ 与其他分子生物学方法相比,用荧光探针RT-PCR法检测诺如病毒有什么优势
方法包括等温核酸扩增(NASBA)、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、荧光染料RT-PCR、荧光探针RT-PCR、多重RT-PCR等,是目前检测诺如病毒应用最广泛的方法,被称为检测诺如病毒的“金标准”。
NASBA直接扩增RNA来进行检测,仪器相对简便,通过琼脂糖凝胶电泳、印迹杂交或者荧光检测来鉴定结果,灵敏度低于RT-PCR;RT-PCR通过逆转录RNA模板、PCR扩增特异性产物,使用琼脂糖凝胶电泳来鉴定结果;荧光染料RT-PCR通过向RT-PCR反应体系中添加非特异性的荧光染料,可以在反应过程中监测扩增产物的生成量,但需要做熔解曲线分析来确定反应的特异性;荧光探针RT-PCR通过特异性的荧光探针与引物,可实时监控反应过程中特异性产物的变化,并且可以实现同一管中多个基因的检测(多重),特异性较好,假阳性率低,检测灵敏度可达10-100拷贝/反应,可用于取代普通RT-PCR。
⑻ 分子病理检测包括哪些
分子病理检测主要包括费氏检测以及荧光定量PCR检测、一代基因测序、二代基因测序检测。病理检测由原先的形态学为基础的检测,现在逐步进入到细胞和分子水平,即分子病理检测。分子病理检测主要包括费氏检测以及荧光定量PCR检测、一代基因测序、二代基因测序检测。荧光定量PCR检测主要为AM式方法,主要用于肺癌的EGFR和KRAS检测,用于指导肺癌病人的靶向治疗。
⑼ 分子互作检测方法有哪些
生物分子的相互作用可通过多种检测手段进行检测,如荧光能量共振转移(FRET),荧光偏振(FP),时间分辨荧光(TRF)均相时间分辨荧光(HTRF),Western-Blot等, 而这些检测技术均可在酶标仪中实现。
⑽ 细菌分子鉴定的方法有哪些
一般从DNA、RNA和蛋白质这三个方面鉴定。将三种物质分别提取出来,各自进行鉴定。鉴定的方法可以用你提到的这些。
1.核酸杂交:简单的说,就是将需检测的核酸与标记的分子结合使得未知核酸可以被检测到。
2.脉冲场凝胶电泳:利用电场让不同大小的带电DNA分子以不同的速度移动,从而将不同大小的分子分开。可分离10kb--10mb的DNA分子。
3.16S rRNA :16S rRNA所对应的 16S rDNA基因在微生物基因组中具有高度保守性;对16S rDNA而言,如果出现3个碱基以上的差异就可以断定细菌不属于同一种属。它具有高度的灵敏性,而且不需要培养,检测指标也很单一。可以快速检测未知微生物或致病微生物。
4.RAPD:对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术。先进行PCR扩增,然后电泳分离染色,在紫外透视仪上检测多态性。
5.质粒质谱分析法:我只了解过蛋白质的质谱分析技术,质粒的没有了解过。
蛋白质:将蛋白质酶解成小肽段并混合基质,用激光将呈离子化气体状态的待测物喷射,经电场到达检测器,根据到达的时间分析肽段的分子质量。