3m试纸检测菌落读数方法

⑴ 微生物实验 3m快速检测片 检测大肠杆菌 10^3次方稀释比10^1稀释得出来的菌落数多 这是为什么

可能是因为稀释的不够，10^3的浓度比10^1的浓度小是一定的，但是菌落可能聚集在一起，没有分开……

⑵ 食品车间设备菌落总数怎么测定 标准是什么

SN/T 1897-2007食品中菌落总数的测定也可以用于与食品接触的设备表面的。附录A。
另有自定的
例一：
物体表面采样及检查方法
采样面积
被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。
采样方法
用5×5cm2的标准灭菌规格板；放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次；并随之转动棉拭于。连续采样1～4个规格板面积；剪去手接触部分，将棉拭于放入装10ml采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。
培养（略）
例二：
空气及与食品接触面微生物检验方法、检验标准
1、 目的：
检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。
2、 参照标准：
中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979－1995、《HACCP原理与实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》GB/T 18204.1－2000、中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、 出入境检验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。
3、 采样与检测方法：
3.1空气的采样与测试方法
3.1.1样品采集：
(1)取样频率：
a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫生清扫消毒情况。
b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行采样。
c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点，整改后再进行采样检验。
d)实验性新产品，按客户规定频率采样检验。
e)正常生产状态的采样，每周一次。
（2）采样方法
在动态下进行，室内面积不超过30 m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1 m；室内面积超过30 m2，设东、西、南、北、中五点，周围4点距墙1 m。采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9 cm)置采样点(约桌面高度)，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min。采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。
3.1.2菌落培养：
（1）在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃ 培养24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。
（2）将已采集样品的培养基在6 h内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。
（3）菌落计算：
a) 记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不可遗漏。
b) 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2 个或2个以上菌落计数。
3.2工作台（机械器具）表面与工人手表面采样与测试方法：
3.2.1样品采集：
(1)取样频率：
a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行擦拭检验，以便了解车间卫生清扫消毒情况。
b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行全面擦拭检验。
c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验不合格点，整改后再进行擦拭检验。
d)实验新产品，按客户规定擦拭频率擦拭检验。
e)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。
f)正常生产状态的擦拭，每周一次。
（2） 采样方法：
a) 工作台（机械器具）：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取与食品直接接触或有一定影响的表面）取25cm2 的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。
b) 工人手：被检人五指并拢，用浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。
（3）采样注意事项：
擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。对每个擦拭点应详细记录所在分场的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间
3.2.2 细菌•大肠菌群的检测培养:
样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。此液为1：10稀释液。如污染严重，可十倍递增稀释，吸取1ml 1：10样液加9ml无菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液。
3.2.2.1 细菌总数：
（1）以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿（平行样），将已融化冷至45℃左右的平板计数琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml，充分混合。
（2）待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃ 培养48 h后计数。
（3）结果报告：报告每25cm2食品接触面中或每只手的菌落数
3.2.2.2大肠菌群：
（1）平板法:
a) 以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿（平行样），将已融化冷至45℃左右的去氧胆酸盐琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml，充分混合。待琼脂凝固后,再覆盖一层培养基，约3-5 ml。
b) 待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃ 培养24h后计数。
c) 结果计算： 以平板上出现紫红色菌落的个数乘以稀释倍数得出。
d) 结果报告：报告每25cm2食品接触面中或每只手的菌落数
（2）试管法:
a) 以无菌操作，选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到BGLB肉汤培养基中，每个稀释度接种三管。
b) 置BGLB肉汤管于36℃±1℃培养48±2h。记录所有BGLB肉汤管的产气管数。
c) 结果报告：按BGLB肉汤管产气管数，查MPN表报告每25cm2食品接触面中或每只手的大肠菌群值。
3.2.3 金黄色葡萄球菌检测
（1）定性检测
a) 取1ml 稀释液注入灭菌的平皿内，倾注15-20ml的B-P培养基，（或是吸取0.1稀释液，用L棒涂布于表面干燥的B-P琼脂平板），放进36±1℃的恒温箱内培养48±2小时。
b) 从每个平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌的菌落作血浆凝固酶实验。
c) 结果报告：B-P琼脂平板的可疑菌落作血浆凝固酶实验为阳性，即报告手（工器具）上有金黄色葡萄球菌存在。
（2）定量检测
a) 以无菌操作，选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到含10％氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤培养基中，每个稀释度接种三管。
b) 置肉汤管于36±1℃的恒温箱内培养48小时。划线接种于表面干燥的B-P琼脂平板，置36℃±1℃ 培养45～48小时。
c) 从B-P琼脂平板上，挑取典型或可疑金黄色葡萄球菌菌落接种肉汤培养基，36℃±1℃培养20～24小时。
d) 取肉汤培养物做血浆凝固酶试验，记录试验结果。
e) 报告结果：根据凝固酶试验结果，查MPN表报告每25 cm2食品接触面中或每只手的金黄色葡萄球菌值。
3.3工厂环境中病原体的检测计划与方法
检测计划：为了保证食品安全，工厂应该对生产环境中的病原微生物进行检测和评估，检测项目包括李斯特菌，沙门氏菌等病原体微生物，化验室应该按照一定的计划对生产场所环境中的病原体进行检测，其中包括地面、下水道、 排水沟、墙壁、天花板、设备框架、运输的支架，冷藏装置、速冻机、传送带、设备的螺丝、维修工具等部位。当某个点检测到病员微生物时，应该对环境中的相似点加大检测频率；在把所有的预定点检测完后，应该对环境中的病原微生物的存在状况进行全面评估，在下一次环境检测循环过程中加强检测容易出现病原体的环境点，达到持续改进的目的。
检测频率: 每月两次,每次每个区域至少选取5个检测点,分别进行检测。
3.3.1 环境李斯特菌的检测方法（3MTM PetrifilmTM 环境李斯特菌的测试片）
3.3.1.1 用涂抹棒，海绵或者其他采样设备收集环境样本。
3.3.1.2 将收集的样本添加10毫升灭菌的缓冲蛋白胨水，将样本与缓冲蛋白胨混合1分钟，将样品置于室温（20-30℃）1小时，最久不超过1.5小时，以修复损伤的李斯特菌。
3.3.1.3 将测试片放在平坦处，掀起上层膜。
3.3.1.4 用移液器垂直滴加3毫升样品到下层膜中央，将上层膜缓慢盖下，以免产生气泡。
3.3.1.5 轻轻将塑料压板放在位于接种区上层膜上，不要压，扭转或者滑动压板。提起压板等至少十分钟，以使胶体凝固。
3.3.1.6 将测试片透明面朝上，可叠放至十片，在37℃±1℃培养26-30小时，可以用标准菌落记数器或者其他光学放大器判读，不要记数圆形轮廓上的菌落，因为他们不受选择性培养基的影响。
3.3.1.7 对于定性检测，根据紫红色菌落是否存在，结果记为检出或者未检出。
3.3.2 环境中沙门氏菌的检测方法
3.3.2.1采样地点: 选取采样点时因尽量选取微生物容易滋生的地方
3.3.2.2 操作步骤
3.3.2.2.1采样应在生产开始后进行，用已浸润过的棉拭在选定的被测表面旋转涂抹约100cm2的面积，然后将棉拭放回涂抹试管并盖紧。
3.3.2.2.2将样品带回实验室，每5个点混合成一个样品, 登记编号,按照SN0170-92标准及时检测，若有阳性结果出现，应逐步对所混合的每个点分别检测。

⑶ 菌落总数检测的注意事项与快速检测技术！

食品安全事件频发，民众对食品安全的关注度日益提高，确保食品安全的关键在于建立科学的食品安全检测技术。检测方法的规范性是保障食品安全的重要环节，它要求检测数据具有高准确度和可信度。食品中菌落总数反映了食品在生产过程中的卫生状况，是判断食品被细菌污染程度的重要指标。本文将分析国标法微生物检测中菌落总数测定的传统方法的注意事项，并重点介绍快速检测技术在菌落总数检测中的应用。

一、传统检测方法

在传统检测方法中，菌落总数的检测流程和注意事项如下：

1. **流程图**：具体流程图请参考相关文献或资料。
2. **注意事项**：
- **器皿及稀释液**：所有用于检验的玻璃器皿必须彻底灭菌，并在灭菌前清洗干净，避免残留抑菌物质。每批样品稀释液需有空白对照，以检测平皿、培养基或空气污染的可能性。
- **样品稀释**：
- 样品应无菌称取或量取，并与灭菌稀释液混合，充分振摇，制成1:10的稀释液。对于固体样品，最好剪碎后与稀释液研匀。
- 根据食品卫生标准要求，将1:10稀释液进行10倍系列稀释，每一步都应确保菌体均匀分散，特别是在酸度较高的样品中，需先调节PH值至中性。
- **平板接种与培养**：选择适宜的稀释度，将稀释液加至灭菌平皿内，培养温度应根据食品种类而定，一般为37℃或30℃，培养时间为48±2小时。
- **菌落计数**：在计数时应区分样品残渣与菌落，可向培养基中添加TTC染剂，便于观测和计数，但浓度不宜过高，以免抑制菌落生长。
- **结果报告**：依据不同情况，报告平均菌落数乘以稀释倍数，或根据菌落分布情况作相应调整。

二、快速检测新技术

1. **3M测试片快速分析技术**：
- **概念**：3M测试片是一种便捷可再生的水化干膜，适用于细菌和真菌的计数。
- **检测步骤**：只需三步即可实现快速准确测定，例如，通过计算红色菌落的数量来评估菌落数。
- **结果判读**：测试片上菌落的数量、分布及颜色深浅用于计数，包括无菌落、少量菌落、菌落数在特定范围内的计数、菌落数超过计数范围时的处理方法。
- **特点**：
- **工作效率提升**：显着提高实验室工作效率，带来生产力的提升和效益的增加。
- **标准化方法**：品质稳定的快速测试片克服传统方法的差异性。
- **国际认证**：得到全球权威机构的认可，确保检测结果的可靠性和广泛认可。
- **快速响应**：缩短检测时间，快速提供测试结果。
- **HACCP认证**：适用于食品生产工艺中的关键控制点检测，提供全面的解决方案。

2. **ATP荧光法**：
- **检测原理**：利用生物发光法检测总菌落数，基于萤火虫的发光反应原理。
- **特点**：成本低、操作简单、响应速度快，已广泛应用于食品中菌落总数的测定。

3. **MTT法**：
- **检测原理**：基于活体微生物线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原MTT形成结晶，间接反映活菌细胞数量。
- **应用实例**：用于巴氏消毒奶中活菌素的快速检测，操作快速、灵敏度高。
- **特点**：检测快速、灵敏度高。

4. **流式细胞术**：
- **检测原理**：通过激光照射标记后的细胞产生特异荧光信号，对这些信号进行检测和定量计算得出菌群总数。
- **特点**：快速、便捷、结果可靠、易于操作。

总结**：菌落总数检测在食品安全中占据重要地位，传统方法虽基础但繁琐，快速检测技术提供了更为便捷、高效、经济的解决方案。不同方法各有优势，适用于不同场景，应根据实际情况选择最适合的检测技术。积极关注新技术的应用，将有助于实现检测的精确、经济、便捷和可靠。

⑷ RNA的提取方法

1、酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速离心后取上清，所得DNA大小为100-150kb

2、甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

3、玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

4、异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）

5、表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。

6、加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。

7、碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。

(4)3m试纸检测菌落读数方法扩展阅读：

DNA提取原则：

1、保证核酸一级结构的完整性；

2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；

3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；

4、其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。

⑸ 牛奶原奶出厂检验标准是什么

1感官检验
1.1色泽和组织状态：取适量式样于50ml烧杯中，在自然光下观察色泽和组织状态
1.2滋味和气味：取牛乳50ml于250ml三角瓶中置电炉上煮沸，冷却至70-80℃，保持瓶口与鼻子之间的距离在10cm左右，用手煽动瓶口上方的气体，使空气吸向自己，闻其气味。冷却至25℃时，用温水漱口，品尝其滋味。

2理化检验

2.1全脂乳固体
2.1.1仲裁检验按GB5409中规定的方法
2.1.2验收检验按本标准4.2.1.2.1～4.2.1.2.2进行
2.1.1.1仪器：FT120型（或S50型）全组份分析仪、50ml烧杯
2.1.2.2方法:取约40ml、20～40℃经过滤、混匀的牛乳样品于烧杯中，将烧杯放在全组份分析仪的吸样管下，选择相应的检测程序，按检测键，待电脑显示屏出现检测结果时，即可读数。

2.2脂肪：按GB/T5413.3检验。取样量为10克。

2.3蛋白质：按GB/T5413.1检验。取样量为4克。

2.4酸度：按GB/T5409检验。

2.5杂质度：按GB/T5413.30检验。

2.6乳糖：按GB/T5413.5检验
2.7牛奶温度：取样后，立即将校准过的温度计插入样品中，待温度计温度不再变化时（一般为1分钟左右），读取读数。

3卫生检验
3.1抗生素：按GB/T4789.27检验。

3.2六六六、滴滴涕：按GB/T5009.19检验。

3.3黄曲霉毒素：按GB/T5009.24检验。

3.4铅：按GB/T5009.12检验。

3.5汞：按GB/T5009.17检验。

3.6无机砷：按GB/T5009.11检验。

3.7锡：按GB/T5009.16检验。

3.8铬：按GB14962检验。
3.9马拉硫磷：按GB/T5009.36检验。

3.10倍硫磷：按GB/T5009.20检验。

3.11甲胺磷：按GB/T14876检验。
3.12菌落总数：按GB/T4789.2、GB/T4789.18检验；平板法按3MPetrifilm细菌总数检测法检验

3.13耐热芽孢
3.13.1仪器和材料:生化培养箱(36℃±1℃)、高压蒸汽灭菌锅、恒温水浴锅（46℃±1℃）、天平、电炉吸管（1ml和10ml，标有0.1ml单位的刻度）、三角瓶（容量为250ml、300ml）、平皿（皿底直径为9cm）、试管（15mm×150mm）、酒精灯、试管架、试管筐、灭菌刀或剪刀、灭菌镊子、酒精棉球、记号笔、白瓷缸(用于煮开水)、温度计（1℃～100℃）、超净工作台

3.13.2培养基和试剂
3.13.2.1营养琼脂培养基：营养琼脂按说明分装于300ml三角瓶中，高压灭菌（121℃、15分钟）。

3.13.2.2生理盐水：8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，分装、高压灭菌（121℃、15分钟～20分钟）。

3.13.3方法
3.13.3.1用10ml灭菌吸管吸取5ml乳样加入灭菌试管中。

3.13.3.2在另一支试管中加入与乳样等量的水。

3.13.3.3在装水的试管中插一根温度计。
3.13.3.4将装有乳样和水的试管同时放入热水中(在电炉上用白瓷缸把水煮至有小气泡时)。

3.13.3.5直至“装水试管”的温度达到80℃，计时，保温10分钟。

3.13.3.610分钟后，取出试管，用冷却水冷却奶样至室温。
3.13.3.7用1ml灭菌吸管分别吸1ml冷却后混匀的乳样于两个灭菌平皿中。
3.13.3.8及时将凉至46℃的营养琼脂注入平皿约15ml，并转动平皿使之混匀；同时做环境对照试验。

3.13.3.9待营养琼脂凝固后，翻转平板。置于36℃±1℃的培养箱内培养72h±2h，取出计数（同菌落总数测定计数方法）。

3.14耐热芽孢的测定
3.14.1设备和材料:生化培养箱(55℃±1℃)、高压蒸汽灭菌锅、恒温水浴锅（46℃±1℃）、天平、电炉、吸管（1ml和10ml，标有0.1ml单位的刻度）、三角瓶、平皿（皿底直径为9cm）、试管（15×150mm）、酒精灯、试管架、试管筐、灭菌刀或剪刀、灭菌镊子、酒精棉球、记号笔、白瓷缸(用于煮开水)、温度计（1-100℃）、超净工作台

3.14.2培养基和试剂
3.14.2.1营养琼脂培养基：营养琼脂按说明制备、分装于300ml三角瓶中，高压灭菌（121℃、15分钟）。

3.14.2.2生理盐水：8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，分装后高压灭菌121℃、15分钟。4.3.14.3方法
3.14.3.1用10ml灭菌吸管吸取5ml乳样加入灭菌试管中。

3.14.3.2在另一支试管中加入与乳样等量的水。

3.14.3.3在装水的试管中插一根温度计。
3.14.3.4将装有乳样和水的试管同时放入沸水浴中(在电炉上用白瓷缸把水煮沸，并保持沸腾)。

3.14.3.5直至“装水试管”的温度达到100℃，计时10分钟（如果水不到100℃就沸腾，则等候时间需延长；或在水中加入盐以提高沸点温度，但要避免奶样沸腾）。

3.14.3.610分钟后，取出试管，用冷水冷却乳样至室温。
3.14.3.7用1ml灭菌吸管分别吸1ml冷却后混匀的乳样于两个灭菌平皿中。
3.14.3.8及时将凉至46℃的营养琼脂注入平皿约15ml，并转动平皿使之混匀；同时做环境对照试验。

3.14.3.9待营养琼脂凝固后，翻转平板。置于55℃±1℃的培养箱内培养72h±2h，取出计数（同细菌菌落测定计数方法）。
3.15嗜冷菌：按IDF101A：1991检验。

4掺假

4.1掺碱的检出
4.1.1仲裁按GB/T5409中2.8检验。
4.1.2验收检验按本标准中4.1.2.1～4.1.2.4进行
4.1.2.1原理：鲜奶中如掺碱，可使指示剂变色，根据颜色的不同，粗略判断加碱量的多少。

4.1.2.2试剂配制：玫瑰红酸（0.05%乙醇溶液）：称取0.05g玫瑰红酸溶于100ml95%的乙醇中。

4.1.2.3检验方法：于盛有2ml牛乳的试管中加入2ml玫瑰红酸溶液，摇匀，观察颜色变化。

4.1.2.4结果判定：