❶ 跑dna电泳出现拖尾现象,不知道为何
你的情况,应该从以下两个方面找原因:
1.一般来说,marker除了能检测DNA的分子质量外,还可以侧面反应你的胶是否制的成功,从你的图上看,胶的问题比较大一些,胶的浓度和你溶胶的时间以及最后的溶解情况都有一些关系,跑过pcr后分子大小等出现了变化,也可能是受到了空气的污染等,为了检测你的maker是否有问题,可以在同块胶上点上别的MAKER,或者请别人帮你制胶后再跑一下。
2.镁离子的浓度问题,镁离子浓度不合适本身就很容易拖尾,前8个样在跑PCR的时候都加了镁离子,而总DNA没有,这也是他们的区别,也可以从这点找找原因。
❷ 酶切电泳条带拖尾的原因
建议你做如下改进:
1.原始质粒上样2ul,电泳检测,确定质粒质量没问题;
2.所有酶切体系均改为10ul,其中质粒2ul,酶0.1ul (双酶切时另一种酶也加0.1ul ),buffer终浓度为 1×,剩下为去离子水.酶切时间为4小时左右.
3.电泳用的凝胶最好为新鲜配制的,浓度视质粒大小而定,一般为1%;
电泳的缓冲液最好也是新鲜配制的,电泳电压适当.
1KB的条带拖尾严重,可能是凝胶不新鲜,或者是电泳时电压过高,或者是酶切时间过长.上述建议中已经给出解决方法.
至于你说的奇怪现象,可能质粒已经降解,也可能是酶切过久导致降解,也可能是枪头或者离心管等器材污染,总之保证一切是新鲜的,再做一次.
❸ 如何解决PCR产物电泳拖尾现象
这个可能与DNA降解有关,导致了DNA不纯 所以会拖尾
解决方案 加电压 跑得快 避免与手接触 要去除核酸酶 加些SDS吧
这只是理论看法 未经实践 希望对你有帮助 如果有条件 就试一试 记得告诉我结果 谢啦^ ^
❹ 总DNA电泳拖尾严重是什么原因
现在实验室大多用的是提取试剂盒,如果自制溶液碱性过强会有可能出现拖尾现象,蛋白沉降步骤不完全也会有可能导致基因组dna降解出现拖尾现象。类似于溶液方面的问题一般比较容易排除,而且比较容易改正。
电泳结果拖尾大部分原因与实验操作有关,在加入碱性溶液裂解细胞后操作需要轻柔,静置时间不宜过长,剧烈震荡以及静置时间过长均可导致质粒dna断裂,电泳结果中出现拖尾现象。
有什么问题可以继续追问,欢迎交流。
❺ 电泳DNA时,拖尾现象很严重,造成这种现象的原因有哪些
电泳出现拖尾现象,英文成为smear,就是弥散.其原因,主要从以下两个方面考虑:
1、PCR产物自身原因:
往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多.
对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶.②减少dNTP的浓度.③适当降低Mg2+浓度.④增加模板量,减少引物的用量 ,减少循环次数,提高退火温度.
2、电泳体系的问题:
(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液.(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样.(3)电压太高.(4)适当把你的胶的浓度加大.(根据你的片断大小而定)(5)观察你的marker是否也存在拖尾现象,作为对照.
❻ PCR产物跑电泳时发生拖尾,这是什么原因造成的
PCR产物电泳拖尾,可能有如下原因: a.模板不纯。b.退火温度偏低。c.酶量过多,dNTP、Mg2+浓度偏高。d.循环次数过多。 解决办法:a.纯化模板。b.适当提高退火温度。c.降低酶量,适当降低dNTP和镁离子的浓度。d.减少循环次数
❼ 电泳图如下,marker有拖尾现象,是怎么回事
很可能是胶没煮好!煮的时候要沸腾三次,摇匀,不然胶的密度不均一。
电压,电压过高也会拖带
可以适当提高电泳槽里面的缓冲液浓度。
如果还是不好,可以换一个稍微宽一点的梳子,一般效果会好很多。
❽ 如何防止DNA电泳拖尾
PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。
其原因往往由于酶量过多或酶的质量差或酶的专一性不够,DNA模板量过大,dNTP浓度过高,Mg2 浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,模板长于3kd所引起。
减少酶量(一般以2单位Taq DNA聚合酶为基点,分梯度上下调一调,其他酶也差不多如此浓度,可以参考说明书);加强DNA聚合酶的专一性或调换另一来源的专一性更好的DNA聚合酶。
增加DNA聚合酶的专一性。
(1)改用专一性更强的DNA聚合酶,或者使用两种不同的DNA聚合酶,减低酶量或调换另一来源的专一性高的酶。更换DNA聚合酶时,酶量不要太大,以免出现特异性扩增。 (2)酶制剂中的甘油可能也是干扰因素。可以加入反应体系之前用超滤去除酶制剂中的甘油,若此操作引起酶的浓度过高,可以适当加双蒸馏水稀释。
(3)为了加强Taq DNA聚合酶的专一性。 的专一性,可在反应体系中加入:1-1.5mol/L的甜菜碱或者5%的DMSO可以提高PCR扩增效率,两者可以增加Taq DNA聚合酶的稳定性。
适当减少dNTP的浓度;减少dNTP的浓度一般需要与降低Mg2 浓度同方向偶联进行,但是不必按同样的比例。
适当降低Mg2 浓 度,可以采用梯度递减方式,以每次0.5mol/L递减,但是Mg2 的终浓度不要低于1.0mol/L。
缩短PCR反应的退火温度时间或调高复性温度。没有重新设计引物之前,不要大范围地变动反应体系的复性温度,要在引物的Tm少5-10度的范围内变动。如果出现非特异性扩增,则在引物的Tm少5-10度的范围内把PCR反应的复性温度提高1-3度。
使用梯度降低PCR。在以基因组DNA为模板进行PCR扩增时,非特异性扩增较多,这时,最初的退火温度选用比Tm高5-10度。然后每隔1个循环,退火温度降低1-2度,直至到达正常的Tm附近的退火温度。
采用使用专一性更强的梯度降低PCR、热启动PCR和巢式PCR。使用热启动模式。使用热启动时可以购买商用的PCR热启动酶,也可以用石蜡隔离模式。巢式PCR也有现成的试剂盒可以购买。
保证PCR反应的DNA模板的质量,要用电泳检测一下分子量和纯度,质量不好则要重新提取和纯化DNA模板;适当增加DNA模板量,减少循环次数。
以上措施都不行时,最后就只能重新设计引物,加强引物的专一性。
适当减少DNA模板量。
适当减少循环次数,一般也就循环25次就差不多了。
❾ 这是我的pcr产物凝胶电泳图,哪位大神可以解答一下,为什么会出现前后拖带怎样解决这个问题
正常现象,没必要大惊小怪,你如果是用基因组作为模板的话,出现拖尾是很正常的现象,毕竟基因组序列那么大,出现一些与引物部分序列互补的序列区间也是可能的,如果是其他的DNA作为模板,则有可能是你的模板不纯造成的,另外体系中有些物质,比如SDS也可能显示一些假带,造成判带困扰,所以你可以无视这种现象,只关心你的目的条带是否扩增出来即可