⑴ 如何测量氨基酸的排列顺序
测定肽或蛋白质中各氨基酸的排列顺序
在分析氨基酸后下一步就是要测定肽链或蛋白质中氨基酸的结合顺序，通常可由下列几种方法配合使用分析推测出来：
（1）N-端氨基酸单元的分析：最常用的有下列两种方法：
（a）桑格尔方法：
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这项方法首先是桑格尔（Sauger，F．）提出的，他利用氨基很容易和2，4-二硝基氟氯苯（DNP）发生芳香亲核取代反应，如用一个肽和2,4-二硝基氟苯反应，显然键的N-端游离氨基和它反应，然后把这个N-端带有2,4-二硝基苯基的肽链彻底水解，在水解物中，只有一个氨基酸的α-氨基的氢被DNP取代，各种氨基酸的DNP标记化合物都是黄色的，并且都各有一个Rf值，因此很容易鉴别；所以通过这个方法，很容易辨认出肽中的N-端是哪一个氨基酸。
（b）艾德满方法：
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另一种标记N-端的氨基方法叫作文德满（Edman.P.）方法，用异硫氰酸苯酯和N-端的氨基反应，生成苯胺基硫代甲酸衍生物。该化合物在无水氯化氢作用下，发生一种关环作用，形成一个苯基乙内酰硫脲的衍生物，从肽链上断裂下来，而肽链中的酰氨键不受影响。
一个肽链经上列的反应后，其结果是失去一个N-端的氨基酸，这个氨基酸可以作为取代苯基乙内酸硫脲进行鉴定。失去一个氨基酸的肽键还可以收回，再重复上面的反应，进行第二个N-端的标记。这种方法已经可以自动化。假若肽键不是太长的话，一般讲这个方法是可靠的。
（2）c-端氨基酸单元的分析：
c-端的氨基酸单元可以通过羧肽酶催化水解，羧肽酶可以选择性切断游离羧基相邻的肽键，在溶液中切断下来的氨基酸是C-端位置的，已切断了c-端氨基酸的肽键。再与羧肽酶作用，如此不断进行，可以使整个多肽或蛋白质水解为氨基酸。根据氨基酸出现的时间，可以推断C-端氨基酸的排列顺序。实际上此法最多只能鉴定3～4个氨基酸，因此对于长链用处不大，可用于小肽（二肽、三肽等）C-端氨基酸顺序鉴定。
（3）用酶催化使肽键部分水解:
测定肽键氨基顺序的一个关键是部分分解，将一个长的肽键分解为许多小肽，然后将这些小肽分离，再进行氨基酸分析，N-端基标记，这样多次地重复下去，最终得到整个肽链氨基酸的顺序。许多消化道内分泌出来的酶可以使肽键水解。有些酶的专一性并不很强，但是有些酶的水解是具有高度专一性的，不同的酶只能分解不同氨基酸的肽键。
⑵ 检验氨基酸用什么方法
你若是问蛋白质，我可以直接告诉你又双缩脲试剂（中学阶段），但氨基酸的检验比蛋白质麻烦多了。 一、氨基酸的分离和检测氨基酸的分离和检测手段，以往用化学分析法、层析法、比色法、气相色谱法、氨基酸自动分析仪。随着高效液相色谱及填料的发展，HPLC在氨基酸检测方面显示了其特有的优越性。但大多数氨基酸无紫外吸收和荧光发射特性，为提高分析检测灵敏度和分离选择特性，通常将氨基酸衍生，衍生方式有柱前衍生法与柱后衍生法。HPLC与各种衍生相结合的氨基酸分析技术，构成了具有广泛适用性的现代氨基酸分析技术。
二、鉴定是哪种氨基酸，不同的氨基酸要用不同的方法。1、茚三酮反应 （ninhydrin reaction） 茚三酮（弱酸环境加热） 紫色（脯氨酸、羟脯氨酸为黄色） （检验α－氨基）
2、坂口反应 （Sakaguchi reaction） 丙氨酸
α-萘酚+碱性次溴酸钠 红色 （检验胍基 精氨酸有此反应）
3、米隆反应（又称米伦氏反应） HgNO3+HNO3+热 红色 （检验酚基 酪氨酸有此反应，未加热则为白色）
4、Folin-Ciocalteau反应（酚试剂反应） 磷钨酸-磷钳酸 蓝色 （检验酚基 酪氨酸有此反应）
5、黄蛋白反应 浓硝酸煮沸 黄色 （检验苯环 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反应）
6、Hopkin-Cole反应（乙醛酸反应） 加入乙醛酸混合后徐徐加入浓硫酸 乙醛与浓硫酸接触面处产生紫红色环 （检验吲哚基 色氨酸有此反应）
7、Ehrlich反应 P-二甲氨基苯甲醛+浓盐酸 蓝色 （检验吲哚基 色氨酸有此反应）
8、硝普盐试验 Na2(NO)Fe(CN)2*2H2O+稀氨水 红色 （检验巯基 半胱氨酸有此反应）
9、Sulliwan反应 1，2萘醌、4磺酸钠+Na2SO3 红色 （检验巯基 半胱氨酸有此反应）
10、Folin反应 1，2萘醌、4磺酸钠在碱性溶液 深红色 （检验α－氨基酸）
三、关于氨基酸态氮的测定：（定量分析）1.双指示剂甲醛滴定法2.电位滴定法 另请参阅： http://www.docin.com/p-69133358.html
⑶ 请教：氨基酸序列的测定方法
有两种方法，一是直接测序列法，常用Edman降解法，在弱碱性条件下多肽连N端氨基酸（阿尔发）与PITC反应，标记为苯氨基硫代甲酰蛋白质。肽链中的第一个肽键变弱，在无水酸的存在下发发生降解，第一个氨基酸（AA1）经过分子重排成为PTH-AA1结合层析技术即可确定氨基酸的性质。C端氨基酸残基分析，可用；羧基肽酶，肼解法；二是串联质谱测定多肽链氨基酸测序。
氨基酸（amino
acid）：含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。是含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物。氨基连在α-碳上的为α-氨基酸。组成蛋白质的氨基酸均为α-氨基酸。
⑷ 测定氨基酸序列的氨肽酶法 羧肽酶法的原理是什么
氨基酸测序分为N端测序和C端测序，原理是用氨肽酶（N端测序法）或羧肽酶（C端测序法）将肽链从一端依次切下，并在一段时间内检测切下的氨基酸的种类（时间过长则会出现多种氨基酸），并且重复该过程。
1. 分光光度法氨基酸检测：主要是利用氨基酸与衍生剂发生化学反应，产生蓝紫色化合物，该化合物在某一波长处有最大吸收峰，根据吸收值大小得到氨基酸含量。常用的衍生剂为茚三酮。
2. 毛细管电泳法氨基酸检测：根据分离原理的不同，可分为毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等电电泳、毛细管等速电泳以及胶束电动力学毛细管电泳。其中，毛细管区带电泳和胶束电动力学毛细管电泳可用于氨基酸检测。
3. 近红外光谱法氨基酸检测：利用有机化合物的含氢基团在特定波长区域跃迁，产生光谱的变化，结合统计学方法间接地实现氨基酸的定量检测。
4. 气相色谱法氨基酸检测：将氨基酸衍生化处理变为容易气化的物质，根据气态样品中各组分在流动相和固定相中的分配系数的不同，实现对氨基酸的定量分析。
5. 高效液相色谱法氨基酸检测：是最常用的一种氨基酸检测方法。由于大多数氨基酸本身没有紫外吸收和荧光反应，因此需要对样品进行衍生化处理将其转化为有紫外吸收和发射荧光的物质，衍生可分为柱前衍生和柱后衍生。
⑹ 亲们 急需氨基酸序列的测序方法及原理 谢谢！
有两种：
测末端氨基酸残基，只能测十多个。
打断通过质谱测MASS，然后通过与已知氨基酸比对得到序列。
⑺ 一个未知蛋白质,在不测全部氨基酸序列情况下,如何测出它的氨基酸序列
(1):蛋白质样品预处理 用于序列测定的样品必须纯化并测定相对分子质量，再加入含巯基乙醇的高浓度尿素溶液，使蛋白质分子中的二硫键和非共价键断开
(2):测定氨基酸的组成 通常将蛋白质样品用6摩尔每升盐酸在110摄氏度水解24小时，再用氨基酸自动分析仪测定。
(3):肽链末端氨基酸的测定
(4):专一性部分裂解 将长的肽链专一性裂解成若干小的肽片段，每种样品至少用两种方法裂解
(5):肽片段的分离纯化 用电泳或高效液相层析将部分裂解的样品分离纯化，得到两套或几套肽片段
(6):各个肽段的氨基酸序列测定 目前主要用Edman 降解法或序列仪进行测定
(7):确定整个肽链的氨基酸序列
⑻ 测定氨基酸序列的氨肽酶法 羧肽酶法的原理是什么
氨肽酶法：氨肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶,能从多肽链的N端逐个地向里切.根据不同的反应时间测出酶水解释放的氨基酸种类和数量,按反应时间和残基释放量作动力学曲线,就能知道该蛋白质的N端残基序列.
羧肽酶法：是一类肽链外切酶,专一的从肽链的C―末端开始逐个降解,释放出游离的氨基酸.被释放的氨基酸数目与种类随反应时间的而变化.根据释放的氨基酸量（摩尔数）与反应时间的关系,便可以知道该肽链的C―末端氨基酸序列.
⑼ 氨基酸检测
你若是问蛋白质,我可以直接告诉你又双缩脲试剂（中学阶段）,但氨基酸的检验比蛋白质麻烦多了.一、氨基酸的分离和检测氨基酸的分离和检测手段,以往用化学分析法、层析法、比色法、气相色谱法、氨基酸自动分析仪.随着高效液相色谱及填料的发展,HPLC在氨基酸检测方面显示了其特有的优越性.但大多数氨基酸无紫外吸收和荧光发射特性,为提高分析检测灵敏度和分离选择特性,通常将氨基酸衍生,衍生方式有柱前衍生法与柱后衍生法.HPLC与各种衍生相结合的氨基酸分析技术,构成了具有广泛适用性的现代氨基酸分析技术.\x0d二、鉴定是哪种氨基酸,不同的氨基酸要用不同的方法.1、茚三酮反应 （ninhydrin reaction） 茚三酮（弱酸环境加热） 紫色（脯氨酸、羟脯氨酸为黄色） （检验α－氨基）\x0d2、坂口反应 （Sakaguchi reaction） 丙氨酸\x0dα-萘酚+碱性次溴酸钠 红色 （检验胍基 精氨酸有此反应）\x0d3、米隆反应（又称米伦氏反应） HgNO3+HNO3+热 红色 （检验酚基 酪氨酸有此反应,未加热则为白色）\x0d4、Folin-Ciocalteau反应（酚试剂反应） 磷钨酸-磷钳酸 蓝色 （检验酚基 酪氨酸有此反应）\x0d5、黄蛋白反应 浓硝酸煮沸 黄色 （检验苯环 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反应）\x0d6、Hopkin-Cole反应（乙醛酸反应） 加入乙醛酸混合后徐徐加入浓硫酸 乙醛与浓硫酸接触面处产生紫红色环 （检验吲哚基 色氨酸有此反应）\x0d7、Ehrlich反应 P-二甲氨基苯甲醛+浓盐酸 蓝色 （检验吲哚基 色氨酸有此反应）\x0d8、硝普盐试验 Na2(NO)Fe(CN)2*2H2O+稀氨水 红色 （检验巯基 半胱氨酸有此反应）
⑽ 请教：氨基酸序列的测定方法
有两种方法，一是直接测序列法，常用Edman降解法，在弱碱性条件下多肽连N端氨基酸（阿尔发）与PITC反应，标记为苯氨基硫代甲酰蛋白质。肽链中的第一个肽键变弱，在无水酸的存在下发发生降解，第一个氨基酸（AA1）经过分子重排成为PTH-AA1结合层析技术即可确定氨基酸的性质。C端氨基酸残基分析，可用；羧基肽酶，肼解法；二是串联质谱测定多肽链氨基酸测序。
氨基酸（amino acid）：含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。是含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物。氨基连在α-碳上的为α-氨基酸。组成蛋白质的氨基酸均为α-氨基酸。