核酸浓度纯度分析方法

㈠ 紫外吸收法为什么能测定核酸的含量和纯度

采用紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验原理：
（1）蛋白质可作定量分析的原因：蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，所以蛋白质溶液在275 280nm具有一个吸收紫外吸收高峰。在一定浓度范围内，蛋白质溶液在最大吸收波长处的吸光度与其浓度成正比，服从朗伯-比耳定律，因此可作定量分析。该法测定蛋白质的浓度范围为0.1—1.0mg/mL。

（2）此种方法测量的准确度差一点的原因：由于不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含量不同，所处的微环境也不同，所以不同蛋白质溶液在280nm的光吸收职也不同。据初步统计，浓度为1.0 mg/mL的1800种蛋白质及蛋白质亚基在280nm的吸光度在0.3—3.0之间，平均值为1.25+/-0.51。所以此种方法测量的准确度差一点。

㈡ 紫外吸收检测DNA的浓度和纯度原理是什么

核酸的最大吸收波长为260nm，蛋白质为280nm，在波长260nm时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml，单链寡核苷酸的含量为30μg/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280），估计核酸的纯度。纯净DNA的比值为1.8,
RNA为2.0。若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。
紫外分光光度法只能用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法。
生物帮上面有这方面的详细介绍，
http://www.bio1000.com/zt/experiment/hesuan.html
核苷酸,核糖核酸,脱氧核糖核酸,核酸酶,核苷酸的作用。

㈢ 核酸含量的测定方法及原理都有哪些

核酸检测的主要原理其实是反转录和聚合酶链式扩增反应。也叫做RT-PCR。目前对新型冠状病毒进行的核酸检测也主要采用此种方式。简单来说就是采取患者鼻咽拭子、痰和其他下呼吸道分泌物、血液、粪便，检测人员通过。核酸提取试剂盒提取患者标本里边儿的核酸，然后把提取到的核酸放进检测试剂中进行复制扩增。然后再根据检测结果进行判断如果是阴性代表没有感染，如果是阳性代表有感染。目前对新型冠状病毒核酸检测会存在假阴性的可能，所以可以选择多次测量。如果连续两次核酸检测为阴性，同时没有临床症状可以排除感染，并且对已经感染了新型冠状病毒肺炎的患者，如果连续两次检测核酸为阴性，注意间隔时间必须大于一天，同时临床症状缓解，影像学好转也可以解除隔离。

㈣ 核酸分析技术有哪些

总的来说包括了核酸的分离、提纯，核酸的扩增，检测，定性与定量分析等。下面以DNA为例说一下相关的概念。

1、DNA的分离提纯就那些试剂，那些步骤，网上一大堆视频的，自己去找吧。

2、扩增一般指的是PCR，需提供引物（引物具有特异性，比如说乙肝病毒基因的引物只能扩增乙肝病毒基因）、酶、底物等，三个流程一个循环：变性、复性、延长。

3、检测一般有紫外分光光度法，电泳分析，杂交分析。

（1）紫外分光光度法：此法的原理涉及到一些光学的知识，可以查询相关书籍以能更好的理解，可以做定量分析，分为单组份分析和多组分分析。

单组份分析有：

1）标准曲线法：用不通浓度的标准溶液，同一条件下测定吸光度A，以吸光度A为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，根据测得的待测样品吸光度，从标准曲线中便可知溶液浓度。

2）标准对照法：标准溶液浓度a，吸光度A，待测样品吸光度B，则根据朗-比定律有待测样品浓度为：B*a/A。

3）吸光系数法：吸光系数K，测得待测样品吸光度A，溶液的厚度d，根据朗-比定律，则待测样品的浓度为：A/(K*d)。

多组分分析没研究过了，自己查查相关资料吧。

（2）电泳分析是根据DNA的分子量和结构不同而在电场中的移动速度不同的原理，电泳的时候需要加MARKER或者已知的基因的片段进行测量。说说MARKER的概念吧，MARKER是由一些列一定梯度的基因片段组成的基因混合物，梯度一般有100bp，200bp，500bp等，MARKER电泳过后便形成很多条距离相等的条带，每两条条带之间的距离为前面提到的梯度值，MARKER用来做标准参考，具有标尺的作用

㈤ 核酸含量的测定方法及原理都有哪些

核酸定量常用方法及原理如下：

1、光吸收法：核酸中碱基共轭结构在近紫外光波长260nm处有最大吸收，吸收强度与核酸浓度成正比，因此可以用于核酸定量。

2、定P法：核酸中P含量约为9.5%，因此可以通过测定样品中的有机P量来进行核酸定量。

㈥ 为什么用OD260/OD280评定核酸纯度

核酸的最大吸收波长是260nm，这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。

在波长260nm紫外线下，1 OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50μg/ml；单链DNA或RNA为40μg/ml；寡核苷酸为20μg/ml。可以此来计算核酸样品的浓度。

通过测定在260nm和280nm的紫外线吸收值的比值（A260/A280）可以估计核酸的纯度。纯DNA的比值为1.8，纯RNA的比值为2.0。若DNA比值高于1.8，说明制剂中RNA尚未除尽。RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白质将导致比值降低。样品中如混有RNA比值上升。

(6)核酸浓度纯度分析方法扩展阅读

显示DNA的传统方法是富尔根（Feulgen）反应，切片先用稀盐酸处理，DNA经弱酸（1mol/L HCL）水解后，在60℃条件下使DNA分子中脱氧核糖与嘌呤之间的连接打开，脱氧核糖的一端释放出醛基，并在原位与Schiff试剂反应生成紫红色产物。

原理同PAS反应，使细胞核DNA显紫红色。在此过程中RNA不受影响，故染色具有DNA特异性。准确的温度和盐酸浓度，适宜的水解时间是成功的关键。水解过度或不足均降低染色强度。

核酸可分为脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）和核糖核酸（ribonucleic acid，RNA）。

核酸不但是一切生物细胞的基本成分，还对生物体的生长、发育、繁殖、遗传及变异等重大生命现象起主宰作用。它在生物科学的地位，可用“没有核酸就没有生命”这句话来概括。

参考资料来源：网络-核酸

参考资料来源：网络-核酸显示法

参考资料来源：网络-OD260/280比值

㈦ 如何判定核酸样品的纯度

您好！
① 如果是看DNA或者RNA的纯度，可以通过OD260/OD280比值来衡量，DNA OD260/OD280比值在1.8-2.0；RNA ＞2.0。如果比值＜1.8，说明有蛋白质残留。
② 如果是多个核酸样品混合物，则通过电泳来看目的条带在混合物中比例。

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㈧ 检测核酸纯度方法

紫外吸收检测DNA浓度与纯度2007年11月13日 星期二 11:40目的： 了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理，掌握测定方法。

原理： 核酸的最大吸收波长为260nm，蛋白质为280nm，在波长260nm时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml，单链

寡核苷酸的含量为30μg/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值

（OD260/OD280），估计核酸的纯度。纯净DNA的比值为1.8, RNA为2.0。若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除

尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。 紫外分光光度法只能用于测定浓度

大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法。

试剂与仪器： 提取的质粒DNA，紫外分光光度仪。

操作步骤：
1) 分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零。
2) 取质粒DNA样品2μl，用水稀释100倍，转入分光光度计的石英比色杯中。
3) 在260nm和280nm分别读出样品光密度值。如果样品浓度单位为μg/μl，则样品DNA浓度为OD 值的10倍，即如

OD<SUB>260</SUB>=0.1，则样品浓度即为1μg/μl。
4) 若OD<SUB>260</SUB>/OD<SUB>280</SUB>大于1.8，说明仍有RNA，可以考虑用RNA酶处理样品，若小于1.8，说

明样品中含有蛋白质或酚，应再用酚/氯仿抽提，以乙醇沉淀纯化DNA。

㈨ 如何使用简单的实验方法检测DNA纯度

实验原理

DNA/RNA在260nm处有最大的吸收峰，蛋白质在280nm处有最大的吸收峰，盐和小分子则集中在230nm处。因此，可以用260nm波长进行分光测定DNA浓度，OD值为1相当于大约50μg/ml双链DNA。如用25px光径，用 H2O稀释DNA/RNA样品n倍并以H2O为空白对照，根据此时读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度：

DNA（ug/ml）=50×OD260读数×稀释倍数。

RNA（ug/ml）=40×OD260读数×稀释倍数。
DNA/RNA纯品的OD260/OD280为1.8或2.0，故根据OD260/OD280的值可以估计DNA的纯度。若比值较高说明含有RNA，比值较低说明有残余蛋白质存在。OD230/OD260的比值应在0.4-0.5之间，若比值较高说明有残余的盐存在.本实验室机器显示是OD260\OD230，则比值应在2-2.5之间，偏小则说明有残余盐剩余。

实验步骤
1. 将制备的DNA悬浮溶解于TE缓冲液中[pH8.O, 1Ommo1/L的Tris缓冲液,内含〈1mmol/L EDTA〉]或悬浮溶解在灭菌水中(依据DNA含量加水)。
2. 用可扫描的紫外分光光度计测定制备的DNA/RNA的紫外吸收曲线，测定OD260和OD280，并计算比值：OD260/OD280，纯DNA的此比值约为1.8～2.0。纯RNA的此比值约为大于2.0。
3. 根据：每毫升1微克的纯DNA的OD260值= 0.020，计算所得DNA的纯度；
每毫升1微克的纯RNA的OD260值= 0.025，计算所得RNA的纯度；

并讨论纯度较低的原因和解决办法。
260、320、230、280nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的，只看OD260/OD280（Ratio，R）。

DNA: OD260/OD280比值应接近1.80，若R值大于1.8。说明存在RNA，可重新用RNaseA处理,酚:氯仿:异戊醇(23:24:1)抽提。若R值小于1.8，则说明有蛋白质等杂质存在，需再用蛋白酶K、SDS及盼、氯仿、异戊醇重新对DNA进行纯化（也可加入1/8体积的3M NaAc(pH5.2)与冷乙醇一同促使DNA沉淀析出。

RNA: OD260/OD280比值在1.8-2.0时，认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会大于2（一般应该是<2.2的）。当R<1.8时，溶液中蛋白或者时其他有机物的污染比较明显，你可以根据自己的需要决定这份RNA的命运。当R>2.2时，说明RNA已经水解成单核酸了。

注意事项：
1. 有用品均需要高温高压，以灭活残余的DNA酶/RNA酶。

2. 所有试剂均用高压灭菌双蒸水配制，RNA均用DEPC处理的水。

3. 用大口滴管或吸头操作，以尽量减少打断DNA的可能性。