三酰甘油的测量方法

A. 甘油三酯的测定方法

血清甘油三酯/三酰甘油（TG）是一项重要的临床血脂常规测定指标，特别是随着对其致动脉粥样硬化（AS）作用研究的深入，TG作为冠心病的一项独立的危险因素日益受到重视。但是血清TG测定及其临床应用尚存在很多问题，如生物学变异、游离甘油对测定的影响、测定的标准化系统不完善等等。本文仅对TG的生物化学、测定方法与标准化、临床意义等方面的近况作一简述。 血清TG测定方法一般可分为化学法、酶法和色谱法3大类。早期测定方法是以总脂质与胆固醇和磷脂之差估算。化学法用有机溶剂抽提标本中的TG，去除抽提液中磷脂等干扰物后，用碱水解（皂化）TG，以过碘酸氧化甘油生成甲醛，然后用显色反应测甲醛。比较准确的是二氯甲烷-硅酸-变色酸法（Van Handel-Caslson法），此法抽提完全、能去除磷脂及甘油干扰、变色酸显色灵敏度高、显色稳定，至今还是美国疾病控制与预防中心（CDC）的内部参考方法。但因操作步骤繁多、技术要求高而不适于常规工作应用。核素稀释/气相色谱/质谱技术（ID/GC/MS）主要用作参考系统中决定性方法的建立及参考物质的制备与定值，此法费用昂贵，样品处理复杂，难以推广应用。
所有的临床实验室都用酶法检测血清TG水平，虽然方法各异，但一般都包括3个基本步骤[3,5～7]：用最合适的LPL水解TG生成甘油和FFA；接着是转化，该步骤一般只用一种酶，例如甘油激酶，将甘油磷酸化以进行下一步反应，或者生成中间待测物；最后是有色染料（常为醌亚胺等）或者紫外吸收物质的形成，再通过分光光度法计算相应的TG浓度。如脂蛋白脂肪酶-甘油磷酸氧化酶- 过氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法（GPO-PAP 法）等。此法具有简便快速、微量、精密度高的优点，且特异性强，易于达到终点，线性范围宽。用一步法测定的是血清总甘油酯（定义为TG和FG及少量甘油二酯、甘油一酯之和，习惯统称为TG）。为了消除FG的干扰，中华医学会检验分会曾推荐GPO-PAP 法的两步酶法作为血清TG常规测定方法[7]，该法不增加试剂成本和工作量，适合自动化分析，由于试剂分成两部分加入，对正确设置分析测定参数有较高要求。对此法能否去净游离甘油方面有人提出质疑。针对这一情况，中华医学会检验分会在《关于临床血脂测定的建议》文件中建议酶法如GPO-PAP 法作为临床实验室测定血清TG的常规方法。普通临床常规实验室可采用一步GPO-PAP法，有条件的实验室（如三级以上医院）应考虑开展游离甘油的测定。
血清FG对TG测定结果的影响一直是临床十分关注的问题。国外资料显示，正常人体血清FG含量为0.06～0.22mmol/L，约占总TG的6%～14%[3]。国内的研究结果与此相近，中国正常人血清FG 水平平均约为0.08mmol/L（0.02～ 0.33mmol/L），约占总TG7.19%（0.81% ～21.64%）。虽然临床标本中FG显着升高者很少见，但有些异常或病理情况下如应激反应（肾上腺素激活LPL促进体内脂肪水解），剧烈运动，服用含甘油的药物如硝酸甘油，静脉输入含甘油的营养液，肝素治疗，某些严重的糖尿病、肝病与肾病，取血器材或试管塞上带有甘油等时，可见血清FG显着升高，并给临床决策带来误导[3]。因此，可采取测定“真”TG的方法减少其影响：一种是同时测定总甘油和FG，两个结果的差值反应了真TG浓度（外空白法），另一种是用上文所述的两步酶法直接测定TG（内空白法）。前者国内外应用较少，后者国外（如日本）使用较多，已有许多临床实验室开展。
对于FG空白的设置建议采取如下措施：
⑴临床实验室应备有可以做FG空白的检测系统，在任何情况下都可以做FG空白；
⑵TG报告单中应标明是否为FG空白结果，实验室应告知临床医生FG空白的意义；
⑶临床及基础研究、参加CDC脂质标准化计划的实验室都要做FG空白；
⑷住院病人中内源性甘油过高群体的标本都应做FG空白；
⑸体检及门诊患者可以不做FG空白，但糖尿病或其他特殊门诊例外；
⑹FG>2.3mmol/L者最好做FG空白；
⑺对某些可疑情况，如TG高而血清不混浊应排除高FG的可能。
此外，一些物质如抗氧化物质（维生素C等）、黄疸、溶血、脂血等对酶法测定TG有干扰，可采用设置血清空白予以消除。
在应用自动生化分析仪进行临床常规TG测定时，还要特别注意交叉污染和基质效应。最易对TG测定产生交叉污染的是总蛋白和铁试剂，因其还原物质浓度可影响Trinder反应。如果接着TG测定直接胆红素，也会因表面活性剂的导入产生误差。铁测定对TG的影响与亚铁氰化钾的量有关。此外，还要注意常规酶法测定TG对制备物的基质效应。Halani等用24份新鲜血清为对照，对5份CAP制备的冻干血清及9份CDC冰冻混合血清进行了评价。以3种商品TG酶试剂测定，以CDC参考方法为对比方法，校正游离甘油后，2种商品试剂对CAP及CDC血清均无基质效应，另一种商品试剂对4份CAP血清有基质效应。也有资料表明，各种质控血清中FG占TG的12%～85%。我们的研究也发现，临床使用的各种TG检测试剂盒、不同的测定/校准系统、质控血清之间存在明显的基质效应，因此对于不同方法/试剂的选择，如选用两步酶法试剂和质控物时要注意其反应的通用性与适用性。 TG测定的结果受取样时个体生物学变异（CVb）和分析不精密度（CVa）的影响[3]。一般情况下，CVa相对较小（约为3%），而CVb占总变异的90%多[6]。即使严格按美国胆固醇教育计划（NCEP）要求控制的个体，在2周内2次所测的TG结果差异百分比约为胆固醇的5倍，75%以上的个体在两周内的变异大于10%。李健斋等[9]研究发现，中国人群血清TG个体间变异为28%，居所有血脂项目之首。国外资料表明，空腹2.5月的人群TG变异约25%，非空腹状态的变异更大，日间约为6.3%～65%，月内为12.9%～34.8%，一年为12.9% ～39.9%，以上数据均为正常个体稳定饮食状态的结果，某些病理状态下的波动会更大。
为减少上述变异对TG测定的影响，NCEP建议受试者在两月内分次测定，两次间至少间隔一周，测定结果取均值。但当血脂水平远离医学决定水平时，则无需多次取样。标本采集要求受检者在前三周内不改变饮食习惯，采血前至少12h不进食，72h不饮酒。抽血后应尽快检测，某些含有高活性LPL的标本，如用肝素治疗的病人标本，TG常会过度水解。标本最好放在冰浴中，2h内分离血清。室温放置1天TG下降达34%。Eberly等研究发现非空腹高TG血症的发生明显多于空腹，而两种状态高TG血症所致冠心病的危险基本相同，因此测非空腹TG更有利于冠心病危险预测。
临床上常见到肉眼脂血标本，这常与一些潜在的错误有关。其中之一是LPL水解TG时产生的“清除效应”。在用血清而非试剂作空白时，大颗粒TRL散射引起假性高基线吸收。随着反应的进行，TG被水解，脂蛋白颗粒变小，浊度也减小，总的效应是在吸光度上升（产生NADH）的反应中，结果轻微偏低。这种误差所占比率较小，且只发生于高浓度TG标本中，其误差通常是可接受的。另外，肉眼脂血标本特别是CM含量过高者，由于CM漂到样品杯上层使标本成为多相。因此对于肉眼脂血标本，应充分混匀且尽快检测。TG水解产生大量脂肪酸，特别是脂血标本，由于其浊度和产物的抑制作用，对分析也有影响。在反应的缓冲液中加入牛血清白蛋白或α-环式糊精可以避免上述情况。 美国的TG测定的参考系统较为完善，其推荐的决定性方法是由美国国家标准与技术研究所（NIST）建立的ID/GC/MS法，以13C3甘油三软脂酸酯为内标，可测总甘油酯和“净”TG，一级参考物质为NIST的SRM1595（三软脂酸甘油酯）；参考方法为CDC的二氯甲烷-硅酸-变色酸法，一直被用作美国CDC-NHLBI血脂标准化计划中的参考方法，该法用Supelco的三油酸酯和NIST的三软脂酸甘油酯标准物质SRM 1595的2：1混合物作标准，测定值不仅是TG，还包括（或部分包括）甘油二酯和甘油一酯。二级参考物质有NIST的SRM1951a、CAP RM026及CDC的多种冰冻血清。此法此参考方法步骤繁琐，实验室间进行方法学转移比较困难，CDC拟对其进行改进，以期在胆固醇参考方法实验室网络（CRMLN）建立一个结合提取、水解步骤的酶法作为“指定参考方法”。
国内陈文祥等建立了高效液相色谱（HPLC）测定总甘油和游离甘油的方法，测定总甘油酯的相对不精密度小于2%，游离甘油小于4%，总甘油平均回收率100.0%，游离甘油99.7%，与ID/GC/MS法相对偏差不大于±2%。此法拟推荐为中国TG测定的参考方法。
血脂测定标准化并非要求统一测定方法，而是要求实验室测定结果达到所制定的技术目标。对于TG测定，国内外要求不精密度（用CV表示）应不大于5%，不准确度（用偏差表示）应不大于±5%，总误差应不大于15%。总误差=偏差%+1.96CV（与参考血清的靶值比较）。特别值得一提的是卫生部北京老年医学研究所血脂实验室已于2002年3月被接纳CDC的CRMLN成员（全球共12家），在血脂测定的标准化方面积累了丰富的经验，中国TG测定的参考系统正在建立之中。

B. 血清三酰甘油的含量测定怎样操作

三酰甘油的主要生理功能是储能和供能，主要分布在皮下、腹腔大网膜、肠系膜、内脏周围等脂肪组织中。在血清中，内源性三酰甘油主要以VLDL的形式运输，外源性三酰甘油主要以CM的形式运输。在正常成人空腹血脂中，三酰甘油的含量为0.11～1.69(均值为1.13)。血脂的含量受膳食、种族、性别、年龄、职业、运动状况、生理状态以及激素水平等多因素影响，波动范围较大。例如：青年人血浆胆固醇水平低于老年人，某些疾病时，血脂含量有很大变化，如糖尿病和动脉粥样硬化的患者，血脂一般都明显升高。因此，测定血脂的含量在临床上具有重要的意义。
用正庚烷-异丙醇联合抽提血中的三酰甘油，再用KOH皂化抽提液，生成甘油，然后用过碘酸钠氧化甘油，生成甲醛，最后甲醛与乙酰丙酮及氨缩合，生成带黄色荧光的3,5
—二乙酰—1,4—双氢二甲基吡啶。
你可以到生物帮上面详细了解一下操作步骤，
http://www.bio.com/
生物问答

C. 什么是三酰甘油正常指标是多少

甘油三酯（Triglyceride，缩写TG）是3分子长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子。甘油三酯是人体内含量最多的脂类，大部分组织均可以利用甘油三酯分解产物供给能量，同时肝脏、脂肪等组织还可以进行甘油三酯的合成，在脂肪组织中贮存。理想的甘油三酯水平应低于1.70mmol/L，超过1.70mmol/L则需要改变生活方式，控制饮食，增加运动，高于2.26mmol则表示甘油三酯偏高，需要吃药，以防病变。

D. 三脂酰甘油的具体性质

水解和皂化
① 水解：三酰甘油在酶、酸的作用下可水解生成甘油和脂肪酸。
② 皂化：如用碱液水解三酰甘油，则生成一分子甘油和三分子脂肪酸盐（即肥皂），这种反应称为皂化作用。【皂化反应】
皂化值：水解一克三酰甘油所需氢氧化钾的毫克数,称之为皂化值。皂化值愈大，表示三酰甘油中的脂肪酸的平均分子量愈小。
在肠内，钙与游离脂肪酸结合可生成不溶性的脂肪酸钙盐。
2．氢化和碘化
含有不饱和脂肪酸的三脂酰甘油，其不饱和脂肪酸的双键，可在催化剂存在下加氢（氢化）或直接碘化。
不饱和的液态三脂酰甘油（加棉子油）加氢成为饱和的固态三酰甘油，有利于运输。用加碘的方法可以测定三酰甘仙中脂肪酸所含双键的多寡。

3． 酸败作用
若将三脂酰甘油久置于潮湿及闷热的空气中，可发生水解、氧化等反应。水解可产生某些有臭味的脂肪酸，如丁酸。在脂肪酸的双键处氧化生成不稳定的过氧化物，经分解可生成醛。这些变化总称为酸败作用。天然油脂中所含的脂溶性维生素亦常因酸败而被破坏。三脂酰甘油是由一分于甘油和三分子脂肪酸构成的酯。

E. 甘油三酯偏高的检测方法

光照检测
中性脂肪即甘油三酯，是高血压和心脏病的主要原因。日本产业技术综合研究所日前宣布，该所开发出一种新装置，只需用近红外光照射指尖几秒钟，就能检测出血液里中性脂肪的浓度。
研究人员注意到，波长介于可见光和红外线之间的近红外光具有不容易被人体吸收的性质，因此通过向手指尖端照射近红外光，然后分析透过手指的光，就能检测血液内中性脂肪的浓度。
现有的近红外光测试装置灵敏度很低，为确保透过身体组织的光的强度，需要长时间照射，既不方便又有安全问题。新的分光装置能在更广范围内收集很微弱的光，其灵敏度达到以前水平的1000倍，从而能进行快速准确的检测。

F. 甘油三酯的检测

因为每个医院的标准是有那么点差别的，他们的仪器是有误差的
这也是必然的
不用担心，只要在正常范围内就好了

G. 甘油三酯低

你的低密度脂蛋白 3.24 偏高，属于高脂血症。
血脂的检查，常用的检查项目一般包括以下几类：
①总胆固醇(Tch或TC)和胆固醇酯(chE)测定。
②三酰甘油(TG)测定。
③脂蛋白组分和亚组分测定。又可再分为高密度脂蛋白(HDL，亦称为高密度胆固醇，HDL-C)，低密度脂蛋白(LDL，亦称为低密度胆固醇，LDL-C)和极低密度脂蛋白 (VLDL，亦称为极低密度胆固醇，VLD-C)三类。
④磷脂(PL)，主要是磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和神经磷脂等测定。
⑤非脂化脂肪酸(又称游离脂肪酸，FFA)测定。
⑥微量的类固醇激素和脂溶性维生素测定。
⑦载脂蛋白测定。甘油三酯和总胆固醇。
治疗上主要是饮食控制。
1、限制高脂肪食品：严格选择胆固醇含量低的食品，如蔬菜、豆制品、瘦肉、海蜇等，尤其是多吃含纤维素多的蔬菜，可以减少肠内胆固醇的吸收。不过，不能片面强调限制高脂肪的摄入，因为一些必需脂肪酸的摄入对身体是有益的。适量的摄入含较多不饱和脂肪酸（控制饱和脂肪酸）的饮食是合理的。各种植物油类，如花生油、豆油、菜籽油等均含有丰富的多不饱和脂肪酸，而动物油类，如猪油、羊油、牛油则主要含饱和脂肪酸。食物的胆固醇全部来自动物油食品，蛋黄、动物内脏、鱼子和脑等，含胆固醇较高，应忌用或少用。
2、改变做菜方式：做菜少放油,尽量以蒸,煮,凉泮为主。少吃煎炸食品。
3、限制甜食：糖可在肝脏中转化为内源性甘油三酯，使血浆中甘油三酯的浓度增高，所以应限制甜食的摄入。
4、减轻体重：对体重超过正常标准的人，应在医生指导下逐步减轻体重，以每月减重1～2公斤为宜。降体重时的饮食原则是低脂肪、低糖、足够的蛋白质。
5、加强体力活动和体育锻炼：体力活动不仅能增加热能的消耗，而且可以增强机体代谢，提高体内某些酶，尤其是脂蛋白酯酶的活性，有利于甘油三酯的运输和分解，从而降低血中的脂质。
6、戒烟，少饮酒：适量饮酒，可使血清中高密度脂蛋白明显增高，低密度脂蛋白水平降低。因此，适量饮酒可使冠心病的患病率下降。酗酒或长期饮酒，则可以刺激肝脏合成更多的内源性甘油三酯，使血液中低密度脂蛋白的浓度增高引起高胆固醇血症。因此，中年人还是以不饮酒为好。嗜烟者冠心病的发病率和病死率是不吸烟者的2～6倍，且与每日吸烟支数呈正比。 7、避免过度紧张：情绪紧张、过度兴奋，可以引起血中胆固醇及甘油三酯含量增高。凡有这种情况，可以应用小剂量的镇静剂(遵医嘱)。
8、药物治疗：通过上述方法仍不能控制的高脂血症患者应加用药物治疗。药物的选择请在咨询专业医生之后，由医生根据具体病因，病情做出选择。

H. 三酰甘油

三酰甘油可看作是一分子甘油与三分子高级脂肪酸酯化所生成的酯。医学上称作甘油三酯，俗称油脂。常温下呈固态或半固态的油脂称为脂肪(fat)，如牛油、猪油；常温下呈液态的油脂称为油(oil)，如豆油、花生油、菜子油

I. 甘油三酯的测定实验中皂化目的是什么

为了检验HPLC方法的可行性及准确性 对标准甘油三酯进行分析 首先对标准甘油三酯进行皂化反应 使其形成游离脂肪酸后 再进行衍生化反应 生成苯乙酰甲酯 通过HPLC分析就 可以测出SPS中所有脂肪酸的组成 由表1可以看出。实验值与理论值非常一致。两次平行结果之间的标准误差非常的低 重复性比较好 说明一分析技术可以用来检测不同油脂中脂肪酸的总组成 如果所分析样品是脂肪酸和甘油三酯的混合物 需同时进行两个衍生化反应 即 对样品直接进行衍生化反应 可以测出混合物中游离脂肪酸组成 对样品进行皂化 衍生化反应 所测结果减去游离脂肪酸值 就可以计算出甘油三酯的脂肪酸组成

J. 测定血清三酰甘油的参考方法是

正确答案:B
解析：考察三酰甘油的检测方法，测定血清三酰甘油的参考方法是二氯甲烷/硅酸/变色酸法
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