規模化培養細菌常用什麼方法

1. 細菌分離培養的基本要領和常用方法有哪些

一、基本要領

菌種分離主要在培養皿上進行，常用的方法是稀釋法和劃線法。

菌種分離的目的是是微生物的一個個體通過繁殖，在固體培養基上長出肉眼能見的群體，然後根據培養特徵，用接種針調取所需菌種並在顯微鏡下檢查，證明為單一形狀的菌體。

改變培養基條件也有助於菌種分離。沒有一種培養基或一種培養條件能夠滿足一切微生物生長的需要，在一定程度上所有的培養基都是選擇性的。

如果某種微生物的生長需要是已知的，也可以設計特定環境使之適合這種微生物的生長，因而能夠從混雜的微生物群體中把這種微生物選擇培養出來，盡管在混雜的微生物群體中這種微生物可能只佔少數。

二、方法

1、稀釋倒平板法

首先把微生物懸液作一系列的稀釋（如1:10、1:100、1:1000、1:10000），然後分別取不同稀釋液少許，與已熔化並冷卻至50℃左右的瓊脂培養基混合，搖勻後，傾入滅過菌的培養皿中，待瓊脂凝固後，製成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養一定時間即可出現菌落。

如果稀釋得當，在平板表面或瓊脂培養基中就可出現分散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨後挑取該單個菌落，或重復以上操作數次，便可得到純培養。

2、塗布平板法

因為將微生物懸液先加到較燙的培養基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡，且採用稀釋倒平板法也會使一些嚴格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長，因此在微生物學研究中常用的純種分離方法是塗布平板法。

其做法是先將已熔化的培養基倒入無菌平皿，製成無菌平板，冷卻凝固後，將一定量的微生物懸液滴加在平板表面，再用無菌玻璃塗棒將菌液均勻分散至整個平板表面，經培養後挑取單個菌落。

3、平板劃線法

最簡單的分離微生物的方法是平板劃線法，即用接種環以無菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，並逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經培養後，可在平板表面得到單菌落。

有時這種單菌落並非都由單個細胞繁殖而來的，故必須反復分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養基表面多次作「由點到線」稀釋而達到分離目的的。劃線的方法很多，常見的比較容易出現單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、放射法、四格法等。

4、 稀釋搖管法

用固體培養基分離嚴格厭氧菌有特殊性，如果該微生物暴露於空氣中不立即死亡，可以採用通常的方法制備平板，然後置放在封閉的容器中培養，容器中的氧氣可採用化學、物理或生物的方法清除。

對於那些對氧氣更為敏感的厭氧性微生物，純培養的分離則可採用稀釋搖管培養法進行，它是稀釋倒平板法的一種變通形式。

先將一系列盛無菌瓊脂培養基的試管加熱使瓊脂熔化後冷卻並保持在50℃左右，將待分離的材料用這些試管進行梯度稀釋，試管迅速搖動均勻，冷凝後，在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物，將培養基和空氣隔開。

培養後，菌落形成在瓊脂柱的中間。進行單菌落的挑取和移植，需先用一隻滅菌針將液體石蠟--石蠟蓋取出，再用一隻毛細管插入瓊脂和管壁之間，吹入無菌無氧氣體，將瓊脂柱吸出，置放在培養皿中，用無菌刀將瓊脂柱切成薄片進行觀察和菌落的移植。

(1)規模化培養細菌常用什麼方法擴展閱讀

在以上介紹的幾種方法中，平板分離法普遍用於實驗室微生物的分離與純化，稀釋法是液體培養基分離純化常用的方法。

一般情況下可以通過適當改善培養基的條件來培養特點菌種。

如為了得到嗜熱微生物，可在50℃~60℃下進行培養。有時投加相應的抑制劑也能提高菌種分離效果，如在土壤樣品的懸浮液中投加10%的苯酚數滴，可以抑制黴菌和細菌的生長，而有利於放線菌的分離。在培養基中投加一定量的青黴素或鏈黴素能抑制細菌的生長，而有利於黴菌的分離。

2. 培養細菌和真菌的一般方法及各方法的目的

細菌、真菌培養的一般方法：首先要配製含有營養物質的培養基，可以用牛肉汁加瓊脂熬制，然後把培養基和所有用具進行高溫滅菌，以防雜菌對實驗的干擾，為防止高溫殺死細菌、真菌，要等冷卻後，在進行接種，接種後放在溫暖的地方進行恆溫培養．注意：定期觀察並詳細記錄實驗現象．故細菌、真菌培養的一般方法：（1）配置培養基一（2）高溫滅菌一（3）接種一（4）培養．
故答案為：（1）配置培養基；
（2）高溫滅菌；以防雜菌對實驗的干擾；
（3）接種培養
（4）培養

3. 細菌培養一般使用什麼樣的方法

細菌分離培養的方法有哪些如果是液體培養基，那分離起來就比較困難，要用到專門的凍干設備，還要加很多柔和的保護性物質。 所以在一般的情況下最好的辦法是把細菌接種到固體培養基上，這樣長出來的菌落或菌苔就是你所要分離出的細菌了。原理：通過在平板上劃線，將混雜的細菌在瓊脂平板表面充分的分散開，使單個細菌能固定在一點上生長繁殖，形成單個菌落，以達到分離純種的目的。若需從平板上獲取純種，則挑取一個單個菌落作純培養。

4. 動物細胞大規模培養的方法有哪些

動物細胞大規模培養常用方法
根據動物細胞的類型，可採用貼壁培養、懸浮培養和固定化培養等三種培養方法進行大規模培養。

一、動物細胞生長特性及培養溫度
1、細胞生長緩慢，易污染，培養需用抗生素
2、細胞大，無細胞壁，機械強度低，環境適應性差
3、需氧少，不耐受強力通風與攪拌
4、群體生長效應，貼壁生長（錨地依賴性）
5、培養過程產品分布細胞內外，成本高
6、原代培養細胞一般繁殖50代即退化死亡
依據在體外培養時對生長基質依賴性差異，動物細胞可分為兩類：
貼壁依賴型細胞：需要附著於帶適量電荷的固體或半固體表面才能生長，大多數動物細胞，包括非淋巴組織細胞和許多異倍體細胞均屬於這一類。
非貼壁依賴型細胞：無需附著於固相表面即可生長，包括血液、淋巴組織細胞、許多腫瘤細胞及某些轉化細胞。
培養細胞的最適溫度相當於各種細胞或組織取材機體的正常溫度。人和哺乳動物細胞培養的最適溫度為35~37℃。偏離這一溫度，細胞正常的代謝和生長將會受到影響，甚至死亡。總的來說，培養細胞對低溫的耐力比高溫高。溫度不超過39℃時，細胞代謝強度與溫度成正比；細胞培養置於39~40℃環境中1h，即受到一定損傷，但仍能恢復；當溫度達43℃以上時，許多細胞將死亡。當溫度下降到30~20℃時，細胞代謝降低，因而與培養基之間物質交換減少。首先看到的是細胞形態學的改變以及細胞從基質上脫落下來。當培養物恢復到初始的培養溫度時，它們原有的形態和代謝也隨之恢復到原有水平。

二、貼壁培養（attachment culture）
是指細胞貼附在一定的固相表面進行的培養。
1、生長特性：貼壁依賴型細胞在培養時要貼附於培養（瓶）器皿壁上，細胞一經貼壁就迅速鋪展，然後開始有絲分裂，並很快進入對數生長期。一般數天後就鋪滿培養表面，並形成緻密的細胞單層。
2、貼壁培養的優點：
容易更換培養液；細胞緊密黏附於固相表面，可直接傾去舊培養液，清洗後直接加入新培養液。
容易採用灌注培養，從而達到提高細胞密度的目的；因細胞固定表面，不需過濾系統。
當細胞貼壁於生長基質時，很多細胞將更有效的表達一種產品。
同一設備可採用不同的培養液/細胞的比例。
適用於所有類型細胞。
3、貼壁培養的缺點：與懸浮培養法相比
擴大培養比較困難，投資大；
佔地面積大；
不能有效監測細胞的生長；
4、細胞貼壁的表面：要求具有凈陽電荷和高度表面活性。對微載體而言還要求具一定電荷密度；若為有機物表面，必須具有親水性，並帶陽電荷。
5、貼壁培養系統：主要有轉瓶、中空纖維（後面專題介紹）、玻璃珠、微載體系統（後面介紹）等。
轉瓶培養系統：培養貼壁依賴型細胞最初採用轉瓶系統培養。轉瓶培養一般用於小量培養到大規模培養的過渡階段，或作為生物反應器接種細胞准備的一條途徑。細胞接種在旋轉的圓筒形培養器-轉瓶中，培養過程中轉瓶不斷旋轉，使細胞交替接觸培養液和空氣，從而提供較好的傳質和傳熱條件。
轉瓶培養具有結構簡單，投資少，技術成熟，重復性好，放大隻需簡單的增加轉瓶數量等優點。 但也有其缺點：勞動強度大，佔地空間大，單位體積提供細胞生長的表面積小，細胞生長密度低，培養時監測和控制環境條件受到限制等。 現在使用的轉瓶培養系統包括二氧化碳培養箱和轉瓶機兩類。
反應器貼壁培養 此種培養方式中，細胞貼附於固定的表面生長，不因為攪拌而跟隨培養液一起流動，因此比較容易更換培養液，不需要特殊的分離細胞和培養液的設備，可以採用灌流培養獲得高細胞密度，能有效地獲得一種產品；但擴大規模較難，不能直接監控細胞的生長情況，故多用於制備用量較小、價值高的生物葯品。
CelliGen、CelliGen PlusTM和Bioflo3000反應器是常用的貼壁培養式生物反應器，用於細胞貼壁培養時可用籃式攪拌系統和圓盤狀載體。此載體是直徑6毫米無紡聚酯纖維圓片，具很高表面積與體積比（1200cm2/g），利於獲得高細胞密度。籃式攪拌系統和載體培養是目前貼壁細胞培養使用最多方式，用於雜交瘤細胞、Hela細胞、293細胞、CHO細胞及其它細胞培養。此種方式培養細胞，細胞接種後貼壁快。

三、懸浮培養（suspension culture）
是指細胞在反應器中自由懸浮生長的過程。主要用於非貼壁依賴型細胞培養，如雜交瘤細胞等；是在微生物發酵的基礎上發通起來的。
無血清懸浮培養是用已知人源或動物來源的蛋白或激素代替動物血清的一種細胞培養方式，它能減少後期純化工作，提高產品質量，正逐漸成為動物細胞大規模培養的研究新方向。

四、固定化培養（immobilization culture）
是將動物細胞與水不溶性載體結合起來，再進行培養。上述兩大類細胞都適用，具有細胞生長密度高，抗剪切力和抗污染能力強等優點，細胞易於產物分開，有利於產物分離純化。制備方法很多，包括吸附法、共價貼附法、離子/共價交聯法、包埋法、微囊法等。
1、吸附法:用固體吸附劑將細胞吸附在其表面而使細胞固定化的方法稱為吸附法（adhesion）。操作操簡便、條件溫和、是動物細胞固定化中最早研究使用的方法。缺點是：載體的負荷能力低，細胞易脫落。微載體培養和中空纖維培養是該方法的代表，稍後專門介紹。
2、共價貼附法:利用共價鍵將動物細胞與固相載體結合的固定化方法稱為共價貼附法（attachment by covalent bonding）。此法可減少細胞的泄漏，但須引入化學試劑，對細胞活性有影響，且因貼附而導致擴散限制小，細胞得不到保護。
3、離子/共價交聯法:雙功能試劑處理細胞懸浮液，會在細胞間形成橋而絮結產生交交聯作用，此固定化細胞方法稱為離子/共價交聯法（cross-linking by covalent bonding）。交聯試劑會使一些細胞死亡，也會產生擴散限制。
4、包埋法:將細胞包埋在多孔載體內部製成固定化細胞的方法稱為包埋法（entrapment）。優點是：步驟簡便、條件溫和、負荷量大、細胞泄漏少，抗機械剪切。缺點是：擴散限制，並非所有細胞都處於最佳基質濃度，且大分子基質不能滲透到高聚物網路內部。一般適用於非貼壁依賴型細胞的固定化，常用載體為多孔凝膠，如瓊脂糖凝膠、海藻酸鈣凝膠和血纖維蛋白。
5、微囊法（microencapsulation）:是用一層親水的半透膜將細胞包圍在珠狀的微囊里，細胞不能逸出，但小分子物質及營養物質可自由出入半透膜；囊內是種微小培養環境，與液體培養相似，能保護細胞少受損傷，故細胞生長好、密度高。微囊直徑控制在200-400μm為宜。制備中應注意：
溫和、快速、不損傷細胞，盡量在液體和生理條件下操作；
所用試劑和膜材料對細胞無毒害；
膜的孔徑可控制，必須使營養物和代謝物自由通過；
膜應有足夠機械強度抵抗培養中攪拌。

5. 學校要給細菌培養、復壯、增菌，用中海普通肉湯培養基夠實驗室使用的嗎

給細菌培養、復壯、增菌可以用普通肉湯培養基。
配置方法：
1.將新鮮牛肉（去除結締組織和脂肪）400g絞碎加水，4℃過夜。
2.加熱100℃1h，用數層紗布或濾紙過濾，加水補充至1000ml。
3.再加入蛋白腖10g和NaCl5g，加熱熔解，冷至40~50℃，校正pH至7.4~7.6，分裝於錐形瓶或試管內，加塞後103.43kPa 20min高壓蒸汽滅菌。
4.冷後放陰暗處或4℃備用。
培養基按其物理狀態可分為固體培養基、液體培養基和半固體培養基三類。
(1)固體培養基。是在培養基中加入凝固劑，有瓊脂、明膠、硅膠等。固體培養基常用於微生物分離、鑒定、計數和菌種保存等方面。
(2)液體培養基。液體培養基中不加任何凝固劑。這種培養基的成分均勻，微生物能充分接觸和利用培養基中的養料，適於作生理等研究，由於發酵率高，操作方便，也常用於發酵工業。
(3)半固體培養基。是在液體培養基中加入少量凝固劑而呈半固體狀態。可用於觀察細菌的運動、鑒定菌種和測定噬菌體的效價等方面。
近年來，在政策的支持下，我國生物製品產業發展勢頭強勁，資本投入持續增加，在部分產品領域逐漸實現進口替代。作為生物製品的關鍵原材料，受生物製品產業快速發展的推動，細胞培養基行業規模持續擴大。根據新思界發布的《2021-2025年中國細胞培養基行業市場行情監測及未來發展前景研究報告》，2020年，中國細胞培養基市場規模達到了40億元以上。但是，中國細胞培養基產品絕大部分依賴進口，對我國生物製品行業的健康發展造成了不利影響。
細胞培養基產品對外依賴度高主要是由於該產品技術壁壘高，國內起步晚，研發經驗積累不足，導致產品開發進程緩慢。細胞培養基制備與應用涉及生物、化學、物理、醫學等多門學科知識與前沿技術，配方一般包含70-100種不同化學成分（包括糖類、氨基酸、維生素、無機鹽、微量元素、促進生長的因子等），需要通過分析細胞特性和工藝試驗確定適合細胞生長的配方組份，往往需要反復、大量的實驗論證及科學分析。
且不同應用領域的用戶對細胞培養基的配方有著非常強烈的個性化需求，這就導致細胞培養基產品的研發需要投入大量的人力、物力、財力以及時間，因此雖然近年來進入該領域的企業及研究機構數量持續增長，但是實現規模化生產的極少

6. 細菌培養的方法有哪些

根據培養細菌的目的和培養物的特性培養方法分為一般培養法、二氧化碳培養法和厭氧培養法三種。

1、一般培養法：將已接種過的培養基,置37℃培養箱內18－24小時,需氧菌和兼性厭氧菌即可於培養基上生長。少數生長緩慢的細菌，需培養3－7天直至一個月才能生長。

為使培養箱內保持一定濕度，可在其內放置一杯水。培養時間較長的培養基，接種後應將試管口塞棉塞後用石臘凡士林封固，以防培養基乾裂。

2、二氧化碳培養法：某些細菌，如牛流產布氏桿菌和胎兒弧菌等需要在含有10％二氧化碳的空氣中才能生長，尤其是初代分離培養要求更為嚴格。將已接種的培養基置於二氧化碳環境中進行培養的方法即二氧化碳培養法，

3、厭氧培養法：常用的厭氧培養方法有厭氧罐法、氣袋法及厭氧箱三種。

(6)規模化培養細菌常用什麼方法擴展閱讀：

培養時應根據細菌種類和目的等選擇培養方法、培養基，制定培養條件（溫度、pH值、時間，對氧的需求與否等）。

一般操作步驟為先將標本接種於固體培養基上，做分離培養。再進一步對所得單個菌落進行形態、生化及血清學反應鑒定。培養基常用牛肉湯、蛋白腖、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細菌所需的特殊物質配製成液體、半固體、固體等。

一般細菌可在有氧條件下，37℃中放18～24小時生長。厭氧菌則需在無氧環境中放2～3天後生長。個別細菌如結核菌要培養1個月之久。

通過日常管理、檢測、檢查，了解光合細菌的生長情況，就可以結合當時環境條件的變化進行分析，找出影響光合細菌生長繁殖的原因，採取相應的措施。影響光合細菌生長的原因很多，內因是菌種是否優良，外因是光照、溫度、營養、敵害和厭氣程度等。

溫度、光照和pH值都能影響著光合細菌的生長，而且溫度、光照和pH值之間是互相制約的，溫度與光照的強弱是對立統一的，所以光合細菌生長的最適條件應是互應的，即溫度高，光照應弱；溫度低，光照應強。

如果是溫度高，光照強，pH值就會迅速升高，培養基產生沉澱，抑制光台細菌的生長；如果溫度低，光照弱，光合細菌得不到最佳能源，生長速度也慢。經試驗得出光合細菌生長的最適條件是：

①溫度15～20℃時，光照30000～50000lx，培養基pH值為7.0；

②溫度25～30℃時，光照為3000～5000lx，培養基的pH值為7.0。

7. 簡述細菌的人工培養程序並列舉常用的人工培養方法

細菌的人工培養程序為:
1、標本(估計菌量少的標本,先增菌培養)
2、根據培養目的,接種於適當的培養基
3、適宜的培養環境,35℃-37℃,18-24h
4、觀察細菌的生長情況,選擇可疑菌落進行分離、鑒定。

根據對氣體的需求,細菌的人工培養方法可分為:
1、需氧培養(需氧菌與兼性厭氧菌):置於空氣中即可,適於大多數細菌;
2、厭氧培養(專性厭氧菌):需在無游離氧的環境中培養;
3、二氧化碳培養(少數細菌如腦膜炎奈瑟菌、布魯菌、空腸彎麴菌等):需在含5%-10%C02環境中培養;4微需氧環境(僅在5%左右的低氧壓環境中才能生長的細菌的培養)。

8. 微生物大規模工業生產常用的培養的方法有哪些

深層液體發酵攪拌罐； 固態發酵培養；

9. 微生物的培養方法有哪些

微生物培養法是在人為條件下繁殖微生物的方法。根據微生物的種類以及對養料、溫度、氧氣、水分、酸鹼度等環境條件的要求不同，並聯系生產和實驗上的具體要求，可有不同的培養方法。可分好氣培養法和厭氣培養法兩類。中海生物技術的培養基一是好氣微生物培養法，常用：
①搖床培養法，即將微生物接種於盛有液體培養基的三角瓶後，放在恆溫培養室中的搖床上作有節奏的振盪，使空氣不斷進入培養液中，促其良好生長;
②淺盤培養法，又稱表面培養法，在盤內放一淺層培養基，使微生物能夠充分接觸空氣，而有利於生長繁殖，但此法所需空間大，並且容易污染雜菌;
③深層培養法，適用於好氣微生物的大規模發酵培養，在大容積的液體培養基中，通入無菌空氣，並不斷攪拌，可使微生物充分接觸空氣，迅速繁殖並積累代謝產物。二是厭氣微生物培養法，實驗室常用化學還原劑或抽氣機吸除培養基中的分子氧，也有用靜止狀態的深層培養法。在生產中常用密封式發酵罐或不通風的固體發酵法。