微量進樣器的使用方法

① 液相氣相色譜的操作步驟

氣相色譜操作規程及注意事項：
1.氣相色譜儀簡單操作流程
1.1 反時針方向開啟載氣鋼瓶閥門，減壓閥上高壓壓力表指示出高壓鋼瓶內貯氣壓力。
1.2.順時針方向旋轉減壓調節螺桿，使低壓壓力表指示到要求的壓力數。
1.3開啟主機電源總開關，主機的觸摸式熒光屏顯示儀器正在自檢，柱室內鼓風馬達運轉。
1.4打開與氣相色譜儀連接的電腦，並運行氣相色譜儀工作軟體，待軟體與儀器連接成功後，即可進行實驗。
1.5在氣相色譜儀工作軟體里分別設定載氣流量、檢測器溫度、進樣口的溫度，柱箱的初始溫度及升溫程序等。設定完後，各區溫度開始朝設定值上升，當溫度達到設定值時，READY燈亮。
1.6查看儀器基線是否平穩，待基線平直後，即可進樣測試。
1.7實驗完畢後，先關閉檢測器電源，再停止加熱，待色譜柱、進樣口的溫度降至80℃以下時，依次關閉色譜儀電源開關，計算機電源，最後關閉載氣減壓閥及總閥。
1.8登記儀器使用情況，做好實驗室的整理和清潔工作，並檢查好安全後，方可離開
2 測試條件的設定：
色譜條件的設定要根據不同化合物的不同性質選擇柱子，一般情況極性化合物選擇極性柱。非極性化合物選擇非極性柱。色譜柱柱溫的確定主要由樣品的復雜程度決定。對於混合物一般採用程序升溫法。柱溫的設定要同時兼顧高低沸點或溶點化合物.可根據不同的化合物任意改動，其目的要達到在最短的時間里，使每個化合物的組份完全分離。
3 注意事項：
3.1操作過程中，一定要先通載氣再加熱，以防損壞檢測器。
3.2在使用微量進樣器取樣時要注意不可將進樣器的針芯完全拔出，以防壞進樣器。
3.3檢測器溫度不能低於進樣口溫度，否則會污染檢測器 進樣口溫度應高於柱溫的最高值，同時化合物在此溫度下不分解
3.4含酸、鹼、鹽、水、金屬離子的化合物不能分析,要經過處理方可進行。
3.5進樣器所取樣品要避免帶有氣泡以保證進樣重現性。
3.6取樣前用溶劑反復洗針，再用要分析的樣品至少洗2-5次
液相色譜操作規程及注意事項：
一、打開電腦
二、打開主機、預熱
三、進入儀器工作站，聯機並設定儀器使用方法及儀器參數
四、啟動泵的動力系統預處理（排氣等）
五、檢查是否漏夜、柱壓是否正常
六、設置儀器方法，包括儀器的使用條件等
七、激活操作方法，等待儀器平衡、基線平直
八、儀器出現「Ready」後可進行樣品分析
九、操作測試結束後，清理所有實驗材料，做好清潔衛生
十、記錄儀器使用日誌，並與管理員辦理交接手續
注意事項
一、高效液相色譜的流動相應採用色譜純溶劑，以滿足儀器要求、避免損壞色譜柱；
二、嚴禁使用有污染的水等沖洗色譜柱，避免將互不相溶的溶劑一同進入泵內；
三、流動相需經過濾、除氣後方可使用；
四、待分析的樣品必須徹底溶解澄清、過濾，以避免堵塞、損壞色譜柱；
五、分析完成後，須注意及時清洗色譜柱和檢測器的比色池。
以具體儀器的舉例：

島津LC-10AD型高效液相色譜儀操作規程

1．目的

規范島津LC-10AD型高效液相色譜儀的使用。

2．范圍

適用於島津LC-10AD型高效液相色譜儀的使用。

3．職責

質檢員對本規程的實施負責。

4．規程

4.1 系統組成

本系統由1個LC-10ADvp溶劑輸送泵、FCV-10AL低壓梯度混合器、在線脫氣機、Rheodyne 7725i手動進樣閥、SPD-10Avp紫外-可見檢測器、N2000色譜數據工作站和電腦等組成，另外還包括列印機、不間斷電源等輔助設備。

4.2 准備

4.2.1 准備所需的流動相，用合適的0.45μm濾膜過濾，超聲脫氣20min。

4.2.2 根據待檢樣品的需要更換合適的洗脫柱（注意方向）和定量環。

4.2.3 配製樣品和標准溶液（也可在平衡系統時配製），用合適的0.45μm濾膜過濾。

4.2.4 檢查儀器各部件的電源線、數據線和輸液管道是否連接正常。

4.3 開機

接通電源，依次打開FCV-10AL低壓梯度混合器、脫氣機、LC-10ADVP輸液泵、AT-130柱溫箱，SPD-10Avp紫外檢測器，待檢測器自檢結束顯示測量狀態時，打開列印機、電腦顯示器、主機，最後打開色譜工作站。

4.4 參數設定

4.4.1 波長設定：在檢測器顯示初始屏幕時，按[func]鍵，用數字鍵輸入所需波長值，按[Enter]鍵確認。按[CE]鍵退出到初始屏幕。

4.4.2 流速設定：在輸送泵顯示初始屏幕時，按[func]鍵，用數字鍵輸入所需的流速（柱在線時流速一般不超過1ml/min），按[Enter]鍵確認。按[CE]鍵退出。

4.4.3 流動相比例設定：在輸送泵顯示初始屏幕時，按[conc]鍵，用數字鍵輸入流動相B的濃度百分數，用數字鍵輸入流動相C的濃度百分數，用數字鍵輸入流動相D的濃度百分數，按[Enter]鍵確認。按[CE]鍵退出。

4.5 更換流動相並排氣泡

4.5.1將管路的吸濾器放入裝有準備好的流動相的儲液瓶中；

4.5.2 逆時針轉動泵的排液閥180°，打開排液閥；

4.5.3 按輸送泵的[purge]鍵，pump指示燈亮，泵大約以5.0ml/min的流速沖洗，3min後停止；

4.5.4 將排液閥順時針旋轉到底，關閉排液閥。

4.5.5 如管路中仍有氣泡，則重復以上操作直至氣泡排盡。

4.5.6 如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下連接管，放入廢液瓶中，設流速為5ml/min，按[pump]鍵，沖洗3min後再按[pump]鍵停泵，重新接上柱並將流速重設為規定值

4.6 平衡系統

4.6.1 按《N2000色譜數據工作站操作規程》打開「在線色譜工作站」軟體，輸入實驗信息並設定各項方法參數後，按下「數據收集」頁的[查看基線] 按鈕。

4.6.2洗脫方式

4.6.2.1 按泵的[pump]鍵， pump指示燈亮。用檢驗方法規定的流動相沖洗系統，一般最少需6倍柱體積的流動相。

4.6.2.2 檢查各管路連接處是否漏液，如漏液應予以排除。

4.6.2.3 觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動應不超過1MPa。如超過則可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，按4.5.6操作。

4.6.2.4 觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移<0.01mV/min，雜訊為<0.001mV時，可認為系統已達到平衡狀態，可以進樣。

4.7 進樣

4.7.1 進樣前按檢測器[zero]鍵調零，按軟體中 [零點校正] 按鈕校正基線零點，再按一下 [查看基線] 按鈕使其彈起。

4.7.2 用試樣溶液清洗注射器，並排除氣泡後抽取適量。

簡單故障排除
障常發生於泵和紫外檢測器。

一、泵的故障及排除方法

1、泵壓力變化較大或沒有流動相流出，又無壓力指示

（1）原因是泵內有大量氣體。可打開排放閥，使泵在較大流量下運轉，將氣泡排盡；也可以用一個50ml
針筒在泵出口處幫助抽出氣體。

（2）原因是高壓密封環變形，產生漏液。必須更換密封環；平時注意不要超出規定的最高壓力。

2、泵流量或壓力不穩

（1）原因是砂濾棒內有氣泡或被鹽的微晶粒或溢生的微生物部分堵塞。可卸下砂濾棒浸入10%硝酸內超
聲除去微生物或鹽溶解，或浸入流動相內超聲除氣泡。再用蒸餾水立即清洗。

（2）原因是系統內有氣泡。可加大流量排出氣泡。

（3）原因是單向閥有異物。可卸下單向閥，放入燒杯中，加10%稀硝酸，用超聲波清洗20分鍾後，再用
干凈蒸餾水清洗。

3、泵壓力過高

原因是管路被堵塞，需要卸下管道清除和清洗；壓力過低的原因是管路滴漏，可扳緊各介面和更換損壞
的管道。

4、鍵開關按下，泵不運行，只有嗡嗡電流聲

此故障原因是電機缺相，電機線圈被燒壞一組或活塞被生銹卡住，應視情況給予排除。

二、SPD-10A紫外檢測器的故障及排除方法

1、系統內有氣泡

（1）如果氣泡連續不斷地通過流動池，將使雜訊增大。必須對流動相進行充分除氣。

檢查系統各條導管是否漏氣。如果導管損壞，必須更換並固緊各介面，加大系統流量驅除氣泡。有條件
的葯廠可配備一部脫氣機。

（2）如果氣泡流在檢測器的流動池內，也可使噪音增大。

用手指壓緊流動池出口，使池內增壓，再快速放出流動相。反復操作數次，但注意不要使壓力增加太大
，以免流動池破裂或色譜柱沖壞。

2、流動相被污染

當流動池被污染時，可能產生噪音或基線漂移。可用水或甲醇等溶劑沖洗檢測池（要注意溶劑的互溶性
）。如果污染嚴重，就需要依次使用1mol/L硝酸、水和新鮮溶劑沖洗，或取出池體清洗，更換窗口。

3、光源燈出現故障

當氘燈使用到極限或者不能正常工作時，可能產生嚴重噪音，基線漂移，出現平頭峰或齒形等異常峰，
甚至基線不能回零。這時必須更換氘燈（一般氘燈壽命1000～2000小時）。

4、倒峰

（1）倒峰的出現，可能是檢測器的極性接反。更正後即可將其轉復為正峰。

（2）如果流動相中含有紫外吸收的雜質時，無吸收的組分就會產生倒峰。對此，改為高純度的溶劑為流
動相。

（3）在死時間附近的尖銳峰，往往是由進樣時的壓力變化或者由於樣品溶劑與流動相不同所引起的

② 液相進樣針位置設置

液相微量進樣針是將針頭用粘合劑粘在玻璃的注射器管中，加熱溫度能超過50°C，不能高壓滅菌，不能使用鹵族溶劑如二氯甲烷。在使用液相色譜進行化學分析實驗的過程中，例如農葯中有效成分含量的測量，經常會用到進樣針，其作用是注射樣品到儀器中以待檢測。

液相色譜儀器的介紹

然而，由於液相色譜儀器自身結構限制，沒有提供專門用來放置進樣針的位置，一般進完樣品後進樣針就隨手放置在桌面上，或者是放置在進樣針本身的包裝盒裡，以至於進樣針容易受到污染，也容易跌落，降低了工作效率，增加了工作難度。

進樣的方法有環路全量進樣和部分進樣兩種。標准附屬的定量環為20µl或10µl，如果用約50到100 µl的微量注射器注入全量的話，則環路被清洗，並且環路被樣品完全充滿。

如果用此方法進樣，則屬於環路進樣能保證有20µl樣品量注入，這樣做重現性較好。這就是全量進樣的方法，一般定量分析均採用此方法進樣。