常用大腸桿菌細胞固定方法

⑴ 大腸桿菌的革蘭氏染色是什麼顏色

大腸桿菌的形態是桿狀的，經革蘭氏染色菌體顏色變成紅色，說明大腸桿菌是革蘭氏陰性（G-）細菌。

金黃色葡萄球菌的形態是球狀的，經革蘭氏染色菌體顏色變成藍紫色，說明金黃色葡萄球菌是革蘭氏陽性（G+）細菌。

革蘭氏染色法之所以能將細菌分為G+菌和G-菌，是因為一般認為革蘭氏染色是基於細菌細胞壁特殊化學組分進行染色的。

(1)常用大腸桿菌細胞固定方法擴展閱讀

革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是：

（1）塗片固定。

（2）草酸銨結晶紫染1分鍾。

（3）蒸餾水沖洗。

（4）加碘液覆蓋塗面染約1分鍾。

（5）水洗，用吸水紙吸去水分。

（6）加95%酒精數滴，並輕輕搖動進行脫色，20秒後水洗，吸去水分。

（7）蕃紅染色液（稀）染1分鍾後，蒸餾水沖洗，乾燥，鏡檢。

⑵ 大腸桿菌的轉化原理及方法

大腸桿菌的轉化原理及方法
大腸桿菌轉化可以：（1）將重組DNA分子導入大腸桿菌受體細胞進行復制，增殖和表達，以獲得目的基因；（2）驗證大腸桿菌感受態細胞效果；（3）用於分子生物學其他研究。
實驗方法原理：質粒DNA或重組DNA粘附在細菌細胞表面，經過42°C短時間的熱擊處理，促進吸收DNA.然後在非選擇培養基中培養一代，待質粒上所帶的抗菌素基因表達，就可以在含抗菌素的培養基中生長。
實驗步驟
一、實驗材料准備
1. 器材
旋渦混合器，微量移液取樣器，移液器吸頭，1.5 ml 微量離心管，雙面微量離心管架，乾式恆溫氣浴（或恆溫水浴鍋），製冰機，恆溫搖床，培養皿（已鋪好固體LB-Amp），超凈工作台，酒精燈，玻璃塗棒，恆溫培養箱。
2. 試劑
培養基（不加抗菌素），LB培養基（加抗菌素），無菌ddH2O，IPTG，X-gal。
3. 材料處理
無菌ddH2O，1.5 ml 離心管裝入鋁制飯盒（滅菌）、移液器吸頭裝入相應的吸頭盒（滅菌），20%IPTG（M/V），2% X-gal（M/V，用N,N-二甲基甲醯胺配）。
二、操作步驟
1. 事先將恆溫水浴的溫度調到42℃。
2. 從-70℃ 超低溫冰櫃中取出一管（100 μl）感受態菌，立即用手指加溫融化後插入冰上，冰浴5~10 min。
3. 加入5 μl 連接好的質粒混合液（DNA含量不超過100 ng），輕輕震盪後放置冰上20 min。
4. 輕輕搖勻後插入42℃水浴中1~2 min進行熱休克，然後迅速放回冰中，靜置3~5 min。
5. 在超凈工作台中向上述各管中分別加入500 μl LB培養基（不含抗菌素）輕輕混勻，然後固定到搖床的彈簧架上37℃震盪1 h。
6. 在超凈工作台中取上述轉化混合液100-300 μl，分別滴到含合適抗菌素的固體LB平板培養皿中，用酒精燈燒過的玻璃塗布棒塗布均勻。
7. 如果載體和宿主菌適合藍白斑篩選的話，滴完菌液後再在平板上滴加40 μl 2% X-gal，8 μl 20% IPTG，用酒精燈燒過的玻璃塗布棒塗布均勻。
8. 在塗好的培養皿上做上標記，先放置在37℃恆溫培養箱中30~60 min 直到表面的液體都滲透到培養基里後，再倒置過來放入37℃恆溫培養箱過夜。
9. 在被細菌污染的桌面上噴灑70%乙醇，擦乾桌面，寫實驗報告。
10. 觀察平板上長出的菌落克隆，以菌落之間能互相分開為好。注意白色菌斑。
注意事項
1. 玻璃塗布棒上的酒精熄滅後稍等片刻，待其冷卻後再塗。

⑶ 實驗筆記丨大腸桿菌轉化實驗（熱擊法）

大腸桿菌轉化實驗（熱擊法）是一個用於分子生物學研究的核心技術，其主要目的是將重組DNA分子導入大腸桿菌受體細胞，實現復制、增殖和表達，從而獲得目的基因。此技術還用於驗證大腸桿菌感受態細胞的效果，並在分子生物學的其他研究中發揮重要作用。

實驗的原理基於質粒DNA粘附在細菌細胞表面，通過42°C短時間的熱擊處理，促進DNA吸收。隨後，細胞在非選擇性培養基中培養一代，待質粒上的抗菌素基因表達，細胞便能夠在含抗菌素的培養基中生長。

實驗所需的器材和試劑包括旋渦混合器、微量移液取樣器、移液器吸頭、1.5ml微量離心管、雙面微量離心管架、乾式恆溫氣浴或恆溫水浴鍋、製冰機、恆溫搖床、培養皿（已鋪好固體LB-Amp）、超凈工作台、酒精燈、玻璃塗棒和恆溫培養箱。此外，還需要准備質粒DNA、重組DNA、無菌ddH2O、IPTG（M/V）和X-gal（M/V，用N,N-二甲基甲醯胺配製）。

實驗准備包括准備無菌ddH2O、滅菌的1.5ml離心管、滅菌的移液器吸頭、20%IPTG（M/V）和2%X-gal（M/V，用N,N-二甲基甲醯胺配製）。

實驗操作步驟包括：提前將恆溫水浴溫度調至42°C；從-70°C超低溫冰櫃中取出感受態菌管，立即融化後冰浴5-10分鍾；加入連接好的質粒混合液（DNA含量不超過100ng），輕輕震盪後冰浴20分鍾；輕輕搖勻後進行42°C水浴熱休克1-2分鍾，然後迅速放回冰中靜置3-5分鍾；向各管中加入500μl不含抗菌素的LB培養基，輕輕混勻後固定至搖床的彈簧架上，37°C震盪1小時；在超凈工作台中，將轉化混合液100~300μl分別滴入含合適抗菌素的固體LB平板培養皿中，用酒精燈燒過的玻璃塗布棒均勻塗布；若適合藍白斑篩選，還需在平板上滴加40μl 2%X-gal和8μl 20%IPTG，均勻塗布；在平板上做好標記，放置30-60分鍾直至液體滲透到培養基內，再倒置放入37°C恆溫培養箱過夜；實驗結束後，對被細菌污染的桌面噴灑70%乙醇，擦乾後完成實驗報告。

實驗筆記還包括對其他實驗技能的分享，如大腸桿菌感受態細胞制備、免疫細胞的分離、純化和鑒定、CAR T細胞活化水平檢測、Native PAGE步驟詳解、病毒感染細胞實驗步驟、B淋巴細胞分離技術、貼壁細胞培養和轉染、蛋白質表達分離純化實驗、siRNA表達載體構建、Transwell實驗、SSR分子標記實驗、分子標記技術AFLP、熒光原位雜交實驗、流式細胞儀樣品制備、Southern和Northern blot實驗、重組質粒連接、轉化及篩選、2D電泳、ChIP實驗、Far western blotting實驗、圓二色光譜實驗、ELISA實驗、病毒滴度及生長曲線測定、蛋白質分子對接在線工具、蛋白質序列分析在線工具、DNA定點突變方法、Western Blotting實驗中的常見問題及解決方案、轉膜、樣品制備、免疫檢測、電泳等。

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⑷ 大腸桿菌如何進行塗片染色

革蘭氏染色法具體操作步驟：

1. 塗片固定。

2. 草酸銨結晶紫染1分鍾。

3. 純化水沖洗。

4. 加碘液覆蓋塗面染1分鍾。

5. 水洗，用吸水紙吸去水分。

6. 加95%酒精數滴，並輕輕搖動進行脫色，30秒後水洗，吸去水分。

7. 番紅染色液（稀）染10秒鍾後，純化水沖洗。乾燥，鏡檢。