常用的分離dna方法

❶ 純化dna的方法有哪些

DNA純化

首先利用瓊膠電泳將不同分子量的DNA片段分開,將某一特定分子量區域的瓊膠切下,利用DNA extraction kit將DNA從瓊膠中溶出並濃縮.

實驗材料

( 6X gel-loading dye:15% Ficoll 400, 0.25% bromophenol blue,
0.25% xylene cyanol
( 紫外光箱
( 下列試劑來自GeneAid公司所售的Gel/PCR Fragment Extraction Kit:
* DF Buffer
* Wash Buffer
* Elution Buffer:10mM Tris-HCl(pH8.5)
* DF Column
* 2ml Collection Tube

實驗步驟

A.將欲分離之DNA混合物以0.7%瓊膠電泳分離.
B.電泳後,將瓊膠置於紫外光箱上觀察,把含有欲純化之DNA片段的瓊膠部位切下.
C.將步驟B的瓊膠以藍色微量吸管盡可能戳碎.
D.加入500ml DF buffer,55oC作用10分鍾,每2-3分鍾搖晃數次,直至瓊膠完全溶解.
E.將步驟D瓊膠溶液全部吸入DF Column,並套上Collection Tube(收集過濾液).
F.8000rpm離心1分鍾,將過濾液倒掉.
G.加入500ml Wash Buffer,8000rpm離心1分鍾,過濾液倒掉.
H.14000rpm離心2分鍾.
I.將DF Column轉移至上另一乾凈的微量離心管.加入15ml Elution Buffer,室溫靜置2分鍾.
J.14000rpm離心2分鍾,微量離心管內之液體即為純化的DNA片段.
K.取0.5ml純化的DNA加入4.5mlDDW及1ml 6x DNA loading dye,跑0.7%瓊膠電泳,與marker比較,估計DNA的濃度.

❷ 分離DNA和RNA主要方法有哪些

鹽析法 DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同 利用這一特點 選擇適當的鹽濃度就能使DNA充分溶解 而使雜質沉澱 或者相反 以達到分離目的 DNA在NaCl溶液中的溶解度先增大後減小 在DNA溶解度最低時 DNA從溶液中析出 而其他雜質還留在溶液中 達到粗提取的目的
酶水解法 採用RNase（可以買）水解雜質RNA如果混入DNase酶可以採用100度加熱15min使其失活 RNase不會失活 反之採用DNase可以提取RNA 混了RNase、時加入蛋白酶K或加碘乙酸鈉

❸ DNA怎麼提取

DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。化學方式如異硫氰酸胍法、鹼裂解法。生物方式：酶法。根據核酸分離純化方式的不同有；硅質材料、陰離子交換樹脂等。

提取DNA總的原則:

1.保證核酸一級結構的完整性；

2.核酸樣品中不應存在對酶有抑製作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子；

3.其他生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的污染應降低到最低程度；

4.其他核酸分子，如RNA，也應盡量去除。

例如 : 用酶法提取

DNA提取分為三個基本步驟，每個步驟的具體方法可根據樣品種類、影響提取的物質以及後續步驟的不同而有區別。

工具/原料: 研磨棒、研磨儀或者組織破碎儀 , 氯仿：異戊醇（24:1）或者蛋白酶 , RNA酶 , 酒精 , 冰箱

方法/步驟 :

1. 使用研磨儀、研磨棒或者使用超聲破碎細胞的方法破碎細胞，加入去污劑，如sds等，除去膜脂。

2. 去除細胞內的蛋白質，包括與DNA結合的組蛋白，通過加入蛋白酶，醋酸鹽沉澱，或者酚／氯仿抽提等方法去除。

3. 加入RNA酶去除RNA，如實驗不嚴密，可省略此步。

4. 沉澱DNA，需在冷乙醇或異丙醇中沉澱，放在冰箱-20℃沉澱30分鍾以上，原理是DNA在醇中不可溶而黏在一起發生沉澱。

總結: DNA提取方法有下面⑦種

一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細胞，消化蛋白，然後用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb

二.甲醯胺解聚法：破碎細胞同上，然後用高濃度甲醯胺解聚蛋白質與DNA的結合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。

三.玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細胞，將裂解物鋪於乙醇上，然後用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DNA沉澱液繞於玻棒。生成DNA約80kb。

四.異丙醇沉澱法：基本同1法，僅用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在異丙醇中可溶狀態）

五.表面活性劑快速制備法：用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細胞，然後用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉澱或透析。

六.加熱法快速制備：加熱96℃-100℃，五分鍾，然後離心後取上清，可用於PCR反應。

七.鹼變性快速制備：先用NaOH作用20分鍾，再加HCI中和，離心後取上清，含少量DNA。

❹ 分離DNA和RNA主要方法有哪些

[思路分析]：①取雞血細胞液（其紅細胞橢圓具核,除駱駝外,豬、羊、狗等哺乳動物紅細胞無核）,或取新鮮豬肝、菜花、洋蔥等材料.雖然在細菌的轉化實驗中提取的是無核細胞中的DNA,但一般而言,均是從具核的生物材料中提取DNA.當然,在提取出的DNA中也含有一定量的胞質DNA,即線粒體DNA和葉綠體DNA.值得推介的材料是洋蔥,取材容易,操作簡便,效果明顯.將家用加鹽洗潔精與洋蔥碎屑混合研磨並過濾後,再加酒精,微搖後即出現白色的毛絮狀DNA混合物.②使紅細胞溶血破膜以及化學葯劑十二烷基磺酸鈉 SDS（洗潔精的主要成分）或三氯乙酸溶膜.在低滲溶液中,如加蒸餾水使血細胞過度滲透吸水直至破裂,同時用玻棒加速血細胞及核破裂,經一級過濾後濾出液為DNA核蛋白和RNA核蛋白.對於菜花、洋蔥等植物材料,在研磨破壞其細胞壁的同時,可考慮適量加入乙二胺四乙酸EDTA以防止DNA酶解.③利用DNA和RNA溶解度的不同析出DNA.在濃氯化鈉溶液（2 mol/L）中,DNA核蛋白的溶解度很大,而RNA核蛋白的溶解度很小.在稀氯化鈉溶液（0.14mol／L）中DNA的溶解度最低,蛋白質的溶解度很高而出現鹽溶現象,經二級過濾後濾出液主要為DNA粗製品.④DNA不溶於酒精,經三級過濾後,再利用乙醇沉澱法使其他物質溶於酒精而進一步純化DNA.⑤二苯胺或甲基綠鑒定法即DNA遇二苯胺（沸水浴）被染成藍色,遇甲基綠被染成藍綠色,且顏色的深淺與DNA純化程度有關.在此過程中設計對照實驗,以增強實驗中二苯胺對DNA專一性顯色結果的可信度.分離DNA和RNA主要方法有哪些

❺ 分離DNA和RNA的方法有哪些

鹽析法 DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同 利用這一特點 選擇適當的鹽濃度就能使DNA充分溶解 而使雜質沉澱 或者相反 以達到分離目的 DNA在NaCl溶液中的溶解度先增大後減小 在DNA溶解度最低時 DNA從溶液中析出 而其他雜質還留在溶液中 達到粗提取的目的
酶水解法 採用RNase（可以買）水解雜質RNA如果混入DNase酶可以採用100度加熱15min使其失活 RNase不會失活 反之採用DNase可以提取RNA 混了RNase、時加入蛋白酶K或加碘乙酸鈉

❻ 目的基因的分離方法主要有哪些

直接分離基因最常用的方法是「鳥槍法」，又叫「散彈射擊法」。這種方法有如用獵槍發射的散彈打鳥，無論哪一顆彈粒擊中目標，都能把鳥打下來。鳥槍法的具體做法是：用限制酶（即限制性內切酶）將供體細胞中的DNA切成許多片段，將這些片段分別載入運載體，然後通過運載體分別轉入不同的受體細胞，讓供體細胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分別在受體細胞中大量復制（在遺傳學中叫做擴增），從中找出含有目的基因的細胞，再用一定的方法吧帶有目的基因的DNA片段分離出來。如許多抗蟲，抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。

用「鳥槍法」獲取目的基因的優點是操作簡便，缺點是工作量大，具有一定的盲目性。

❼ 提取基因組DNA的方法有哪些各有何優缺點

1、苯酚氯仿抽提法

優點是採用了實驗室常見的試劑和葯品，做起來成本比較低廉。

缺點是由於使用了苯酚、氯仿等試劑，毒性較大，長時間操作對人員健康有較大影響，而且核酸的回收率較低，損失量較大，由於操作體系大，不同實驗人員操作重復性差，不利於保護RNA，很難進行微量化的操作。

2、離心柱法

離心柱法DNA提取它的優點是比傳統的酚氯法提取的純度高，有利於RNA保護，而且能進行微量操作，以其低廉的價格和相對便捷的操作，漸逐取代了傳統DNA提取方法，被高校科研所等市場普遍接受。

離心柱法DNA提取的缺點是需要較多的樣本，耗材多，對於珍稀樣本無能為力，特別是在法醫、考古等領域顯得力不從心。

同時離心柱法DNA提取需要反復離心，不便於高通量、自動化操作，與現代生物學實驗的高通量、自動化要求格格不入，特別是在基因診斷、疾病檢測、轉基因檢測等領域，離心柱法DNA提取需要大量的操作人員及儀器設備。

當面對突發疫情時，更是需要有高通量的DNA提取設備與方法才能更有效准確的監測疫情、控制疫情。

3、磁珠法

磁珠法是納米科技與生物技術的完美結合，具有其他DNA提取方法無法比擬的優勢，主要體現在：

（1）能夠實現自動化、高通量操作，配合96孔的核酸自動提取儀，在以往做一個樣品的提取時間內可同時實現對96個樣品的處理，效率直接提高96倍，滿足了當前生物學高通量操作的要求，使得在大規模疫情爆發時能夠進行快速篩查原因，這個優點是其他方法難以趕超的。

（2）操作簡單、用時短，整個提取流程只有裂解、結合、洗滌、洗脫四步短時間內即可完成。

（3）安全無毒，不使用傳統方法中的苯、氯仿等有毒試劑，對實驗操作人員的傷害少，保護了實驗人員的身體健康。

（4）磁珠與核酸的特異性結合使得提取的核酸純度高、濃度大。

（5）靈敏度高，適合法醫樣本等痕量DNA提取。

(7)常用的分離dna方法擴展閱讀：

磁珠法的原理是在磁珠表面修飾有對核酸有吸附作用的特定活性官能基團，通過不同的裂解液結合液洗滌液在特定的條件下能夠與目的物質進行特異性結合，同時利用磁珠自身的磁性，在外磁場的作用下可以方便地實現定向移動與富集，從而達到核酸與雜質分離的目的，進而實現對目標物質的分離純化，獲得純化核酸。

❽ DNA的提取方法有多少種

dna提取的幾種方法 
(1).濃鹽法 
利用rnp和dnp在電解溶液中溶解度不同,將二者分離,常用的方法是用1m
氯
納提取化鈉抽提,得到的dnp粘液與含有少量辛醇的
氯仿一起搖盪,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間,而dna位於上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將dna
鈉鹽沉澱出來.
也可用0.15
mnacl液反復洗滌細胞破碎液除去rnp,再以1mnacl提取脫氧核糖蛋白,再按氯仿---異醇法除去蛋白. 
兩種方法比較,後種方法使核酸降解可能少一些. 
以稀鹽酸溶液提取dna
時,加入適量去污劑,如sds可有助於蛋白質與dna
的分離.在提取過程中為抑制組織中的dnase對dna
的降解作用,在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15mnacl,0.015m檸檬鈉,並稱ssc溶液,提取dna. 
（2）.陰離子去污劑法: 
用sds或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性,可以直接從生物材料中提取dna
.由於細胞中dna與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取dna. 
（3）.苯酚抽提法: 
苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了dnase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由於蛋白與dna
聯結鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶.蛋白分子溶於酚相,而dna溶於水相.離心分層後取出水層,多次重復操作,再合並含dna
的水相,利用核酸不溶於醇的性質,用乙醇沉澱dna
.此時dna是十分粘稠的物質,可用玻璃漫漫繞成一團,取出.此法的特點是使提取的dna保持天然狀態
. 
（
4）.水抽提法:
利用核酸溶解於水的性質,將組織細胞破碎後,用低鹽溶液除去rna,然後將沉澱溶於水中,使dna充分溶解於水中,離心後收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6m.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然後分別用66%
٠80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最後在空氣中乾燥,既得dna樣品.此法提取的dna中蛋白質含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入sds.

❾ 提取基因組dna的方法有哪些

DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。化學方式如異硫氰酸胍法、鹼裂解法。生物方式：酶法。根據核酸分離純化方式的不同有；硅質材料、陰離子交換樹脂等。