食用菌菌種分離方法

⑴ 常用的食用菌菌種分離方法有哪幾種各有何優缺點

1. 組織分離法：簡便、易成功，保持原菌種性狀，重復易退化，不適於耳類。

2. 孢子分離法：菌齡小，生命力強，變異率高。

3. 基內菌絲分離法

⑵ 怎樣分離特定菌種

菌種分離就是用無菌操作技術將所需的食用菌與其他雜菌分開，讓其在適宜的條件下生長繁殖而得到純種。分離通常是在無菌條件下經分離技術進行的，是菌種製作程序中的一個非常重要的技術環節，其菌種質量的好壞，菌性的優劣與它有直接關系。菌種分離一般有孢子分離法、組織分離法和菇（耳）木分離法3種，其中組織分離法操作簡便，能保持菇種特有的優良性狀，一般不必做出菇實驗，所以採用較多。

⑶ 採用組織分離法培育菌種要經過哪些步驟

蘑菇、香菇、平菇、金針菇、猴頭菇、竹蓀等栽培食用菌，以及松乳菇、松茸等純化中的食用菌，均可採用組織分離法獲得菌種。現以香菇為例說明組織分離法的主要步驟。
（1）選擇種菇按上述標准挑選種菇，採收後裝入無菌紙袋內（忌用塑料袋）。（2）組織分離在無菌條件下，先用酒精棉球對菇體進行表面消毒，然後手持菌柄，將香菇撕成兩半，取手術刀經火焰滅菌、冷卻後，在菌蓋、菌柄交界處或菌柄的上部挑取一小塊（米粒般大小）菌肉，移植到PDA斜面上（事先配製並滅菌備用），即可轉入培養觀察階段。（3）培養觀察上述組織分離物在25℃條件下，經過3～5天即可看到分離物表面長出白色絨毛狀菌絲，呈星芒狀在培養基上生長。培養期間，應每隔1～2天檢查1次，隨時淘汰黴菌或細菌污染的培養物。培養10～15天後，再作1次轉管培養，即可得到香菇母種。然後經栽培試驗，確認其可以正常出菇後方可用於菌種生產和栽培。

⑷ 如何從自然界分離得到酵母菌，並准備實驗樣品

1 食用菌母種的分離,可分為孢子分離法、組織分離法以及基內菌絲分離等 2 孢子分離法,是用食用菌的有性孢子或無性孢子萌發成菌絲,培養成菌種的方法.這種菌種生活力較強,但孢子個體之間有差異,且自然分化現象較嚴重,變異大,需經出菇試驗才能在生產上應用. （l）單孢分離法：是每次或每支試管只取一個擔孢子, 讓它萌發成菌絲體來獲得純菌種的方法.蘑菇和草菇用單孢分離得到的菌絲,有結實能力,可採用此法分離生產純菌種.單孢分離生產上較少採用,而且技術復雜,一般採用多孢分離法. 孢子分離法,是用食用菌的有性孢子或無性孢子萌發成菌絲,培養成菌種的方法.這種菌種生活力較強,但孢子個體之間有差異,且自然分化現象較嚴重,變異大,需經出菇試驗才能在生產上應用. （l）單孢分離法：是每次或每支試管只取一個擔孢子, 讓它萌發成菌絲體來獲得純菌種的方法.蘑菇和草菇用單孢分離得到的菌絲,有結實能力,可採用此法分離生產純菌種.單孢分離生產上較少採用,而且技術復雜,一般採用多孢分離法. （2）多孢分離法：就是把許多孢子接種在同一培養基上,讓它們萌發、自由交配來獲得食用菌純菌種的一種方法.具體操作方法,有以下幾種：①種菇孢子彈射法：選擇個體健壯、朵形圓正,無病蟲害、出菇均勻、高產穩產,適應性強的八九分成熟的種菇,切去大部分,菌柄用無菌水沖洗數遍後再用已滅菌的紗布或脫脂棉、濾紙吸干表面水分.在接種箱或無菌室內,把種菇的菌褶朝下用鐵絲倒掛在玻璃漏斗下面,漏鬥倒蓋在培養皿上面；上端小孔用棉花塞住.培養皿放在一個鋪有紗布的搪瓷盤上,靜置12～20小時,菌褶上的孢子就會散落在培養皿內.形成一層粉末狀孢子印（平菇極淡紫色,蘑菇、草菇 為褐色,香菇、金針菇孢子印白色）.用接種針沾取少量孢子在試管中的瓊脂外面或培養皿上劃線接種.待孢子萌發,生成菌落時,選孢子萌發早、長勢好的菌落進行試管培養. 還可用孢子採集器收集孢子.方法是選好種菇後,按上述程序,輕輕掀開玻璃鍾罩,將種菇柄朝下插在孢子採收器的鋼絲架上,放在培養皿正中央.隨即蓋好玻璃罩,用紗布將鍾掌周圍塞好.並在紗布上倒少許升汞或無菌水.移入 20℃左右恆溫箱培養.

⑸ 食用菌菌種的基本要求是什麼

使優良菌種的性狀保持穩定，人為地創造條件，使菌種的新陳代謝活動處於不活潑狀態。

食用菌菌種為食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料，菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。使優良菌種的性狀保持穩定，人為地創造條件，使菌種的新陳代謝活動處於不活潑狀態即選取優良菌種的休眠體或富有生命力的懸浮液在低溫或脫水狀態下保存。

通過切取菌索、子實體、菌核的新鮮幼嫩的組織進行分離，以獲取純菌絲的方法，是最常用的菌種分離法之一 。子實體、菌索等實際就是雙核菌絲的紐結物，具有很強的再生能力。因分離時所 選擇的材料不同 ，該方法又可分為菌索組織分離法、子實體組織分離法及菌核組織分離法。

(5)食用菌菌種分離方法擴展閱讀：

食用菌菌種的相關要求規定：

1、菌種經營單位和個人應當建立菌種經營檔案，載明菌種來源、貯存時間和條件、銷售去向、運輸、經辦人等內容。經營檔案應當保存至菌種銷售後2年。

2、菌種生產單位和個人應當按照農業部《食用菌菌種生產技術規程》生產，並建立菌種生產檔案，載明生產地點、時間、數量、培養基配方、培養條件、菌種來源、操作人、技術負責人、檢驗記錄、菌種流向等內容。生產檔案應當保存至菌種售出後2年。

⑹ 食用菌制種技術的分離與培養

食用菌菌種分離方法有四種，即組織分離法、孢子分離法、耳木分離法和土中菌絲分離法。
（一）組織分離法
組織分離法是利用子實體內部組織來獲得純菌種的方法，根據不同的分離材料大體可分為三種。
1、子實體組織分離
①、種菇的選擇 從優良的品系中選取優良的個體作種菇，以單生菇、菇形圓整、無病蟲害菇作分離材料。
②分離 把種菇帶入接種箱內，用75%酒精表面消毒，用解剖刀在菌柄中部縱切一刀，然後撕開，挑取菌蓋與菌柄交界處的一小塊組織，接種到PDA培養基上，數天後就可看到組織塊及培養基上有白色菌絲，即表明分離成功。
2、菌核組織分離 茯苓、豬苓、雷丸等葯用菌，常利用菌核分離得到菌種。分離方法是將菌核表面消毒後，用解剖刀切開，取中間組織1小塊，接入PDA培養基上，20℃—25℃培養。
3、菌索分離 密環菌，假密環菌常用菌索來分離。方法是將菌索表面消毒後，去掉菌鞘，把白色菌髓部分用無菌剪刀剪成小段。移接在PDA培養基上，20℃—25℃培養，有白色菌絲長出且無污染，即表明分離成功。
（二）孢子分離法
孢子分離法是利用菌類的成熟孢子能自動彈射的原理，在無菌操作條件下，使孢子在適宜的培養基上萌發長成菌絲體而獲得菌種。
1、種菇的選擇 孢子分離用的形態不同，孢子分離的方法也不同。
①整菇插種法：是將整隻成熟度適當的種菇，經表面消毒後，插入孢子採集器內，放在適當的溫度下，讓其彈射孢子的方法。蘑菇、香菇、草菇等食用菌常用此法採集孢子。
②鉤懸法：將新鮮的成熟度適當的耳片用無菌水沖洗後懸掛在無菌的三角瓶內或有孔鍾罩內，在一定溫度下讓其彈射孢子。木耳、銀耳常用此法採收孢子。
（三）、耳木（菇木）分離法
耳木（菇木）分離法是利用耳木或菇木中的菌絲體得到菌種的方法。
1、耳木的採集與選擇 一般在該菌的生長季節里，選取生長的子實體大、肉質厚、成熟度適當、無雜菌感染的耳木或菇木進行分離。
2、分離方法 在所選耳棒長有子實體的部位，橫斷面鋸下鋸成1cm厚薄的木片，帶入已經消毒的接種箱（或接種室）內。將上述木片浸入0.1%升汞溶液中30s—60s，用無菌水沖洗數次，以沖去殘留的升汞液，放在無菌紗布上吸干水分，多面手用滅過菌的榔頭，解剖刀切去樹皮部分，把木片劈成小塊，隨後用鑷子將小木塊放入PDA培養基上，每管放一塊，放適宜溫度下培養。
（四）土中菌絲分離法
它是利用菌類地下的菌絲體來分離得到菌種的一種方法。主要用於腐殖質腐生菌的分離，用前述三種方法能分離得到菌種，一般不採用這一方法。但在野外採集時，菇類子實體已腐爛，而又十分需要該菌種時，就要用此法分離。具體操作如下：
①取菇體下與菇根相連的菌絲體，盡可能取較清潔的菌絲束。
②由於土壤中含有各種微生物，如細菌、放線菌、黴菌等，因此分離時要用無菌水反復沖洗菌絲束，把附著的泥土等雜物沖洗干凈，把無菌棉花或紗布吸干水分。
③取菌絲束尖端部分，接入有細菌抑制劑的培養基中，25℃左右培養，無雜菌污染即分離成功。
④菌絲的鑒定。在土中獲得的菌絲，其可靠性較小，必須經過出菇鑒定，才能確認是該菌的菌種。 接種後的原種或栽培種全部拿出培養箱或培養室，根據不同食用菌菌絲發育最適溫 度進行培養。培養2～3天後，菌絲開始生長時，要每天定期檢查，如發現黃、綠、橘紅、黑色雜菌時，要及時揀出清理。尤其是塑料袋菌種，檢查工作到菌絲長滿為止。培養室切忌陽光直射，但也不要完全黑暗；注意通風換氣，室內保持清潔，空氣相對濕度不要超過65%；同時菌種瓶、袋不要堆疊過高，瓶間要有空隙，以防溫度過高造成菌絲衰老，生活力降低。特別是對加溫的培養室要注意：一要保持室內溫度的穩定，因在溫差較大的情況(特別是母種培養)會形成冷凝水，而使菌絲倒伏變黃。有條件的話，可根據菇類的菌絲生長對溫度的要求，按品種分開放在不同溫度的培養室(箱)內培養。同時要注意經常調換原種、栽培種排放的位置以使同一批菌種菌絲生長一致。二要注意通風換氣，以免室內二氧化碳濃度過高而影響菌絲生長。

⑺ 單菌種的分離是消除污染雜菌的一種方法嗎

在自然界里,食用菌都不是單獨存在的,而是和許多細菌、放射菌、黴菌等生活在一起的.所謂菌種分離,就是把這些和食用菌一起生活的雜菌分離出來,通過培養,獲得純的優良菌種.菌種分母種、原種、栽培種. (一）母種的分離培養 食用菌母種的分離,可分為孢子分離法、組織分離法以及基內菌絲分離等. 1.孢子分離法 孢子分離法,是用食用菌的有性孢子或無性孢子萌發成菌絲,培養成菌種的方法.這種菌種生活力較強,但孢子個體之間有差異,且自然分化現象較嚴重,變異大,需經出菇試驗才能在生產上應用. （l）單孢分離法：是每次或每支試管只取一個擔孢子, 讓它萌發成菌絲體來獲得純菌種的方法.蘑菇和草菇用單孢分離得到的菌絲,有結實能力,可採用此法分離生產純菌種.單孢分離生產上較少採用,而且技術復雜,一般採用多孢分離法. （2）多孢分離法：就是把許多孢子接種在同一培養基上,讓它們萌發、自由交配來獲得食用菌純菌種的一種方法.具體操作方法,有以下幾種： ①種菇孢子彈射法：選擇個體健壯、朵形圓正,無病蟲害、出菇均勻、高產穩產,適應性強的八九分成熟的種菇,切去大部分,菌柄用無菌水沖洗數遍後再用已滅菌的紗布或脫脂棉、濾紙吸干表面水分.在接種箱或無菌室內,把種菇的菌褶朝下用鐵絲倒掛在玻璃漏斗下面,漏鬥倒蓋在培養皿上面；上端小孔用棉花塞住.培養皿放在一個鋪有紗布的搪瓷盤上,靜置12～20小時,菌褶上的孢子就會散落在培養皿內.形成一層粉末狀孢子印（平菇極淡紫色,蘑菇、草菇 為褐色,香菇、金針菇孢子印白色）.用接種針沾取少量孢子在試管中的瓊脂外面或培養皿上劃線接種.待孢子萌發,生成菌落時,選孢子萌發早、長勢好的菌落進行試管培養. 還可用孢子採集器收集孢子.方法是選好種菇後,按上述程序,輕輕掀開玻璃鍾罩,將種菇柄朝下插在孢子採收器的鋼絲架上,放在培養皿正中央.隨即蓋好玻璃罩,用紗布將鍾掌周圍塞好.並在紗布上倒少許升汞或無菌水.移入 20℃左右恆溫箱培養. ②褶上塗抹法：按無菌操作分離時；應選擇成熟的種菇,用接種針直接插入褶片之間,輕輕抹取褶片表面子實體尚未彈射的孢子,再在培養基上劃線接種. ③鉤懸法：取成熟菌蓋的幾片菌褶或一小塊耳片（黑木耳、毛木耳、白木耳〕,用無菌不銹鋼絲（或鐵絲、棉線等其他懸掛材料）懸掛於三角瓶內的培養基的上方,勿使接觸到培養基或四周瓶壁.置適宜溫度下培養、轉接即可. ④貼附法：按無菌操作將成熟的菌褶或耳片取一小塊, 用溶化的瓊脂培養基或阿拉伯膠、漿糊等貼附在配管斜面培養基正上方的試管壁上.經6～12小時的培養,待孢子落在斜面上,立即把孢子連同部分瓊脂培養基移植到新的試管中培養即可. 孢子分離得到的母種、必須進一步提純復壯,當母種定植一星期左右,菌絲布滿斜面時,選擇菌絲健壯、生長旺盛無老化、無感染雜茵的母種試管,進而轉管擴大,一般到栽培種,轉管不宜超過5次. 孢子分離得到的母種,必須通過出菇試驗,鑒定為優質菌種後,才可供生產使用. 一般菌類如蘑菇、平菇、鳳尾菇、香菇、冬菇和草菇等,都可用多孢分離法獲得母種. 現就銀耳孢子分離略述於下： 按無菌操作獲取種耳後,懸掛種耳的三角瓶經12小時培養後,瓶底培養基表面就有"孢子印".取出種耳,置 20℃—25℃溫箱培養2～3天,培養基表面會出現乳白色透明的糊狀小菌落,就是銀耳的酵母狀分生孢子形成的少量銀耳菌絲.此時移接入試管斜面培養基上,待長滿斜面後,再移接入營養豐富,且表面比較乾燥的培養基上.經30天左右,菌落長出白色菌絲. 銀耳的酵母狀分生孢子、菌絲只有與羽毛狀菌絲的子囊菌（香灰菌絲）混合培養時,由後者幫助分解木材及其他一些纖維物質,提供營養,才能利於銀耳孢子萌發,菌絲的定植和子實體的形成. 在兩種菌絲交會時,先選出兩種純菌絲. 羽毛狀菌絲要純化選育,一般要選取生長迅速,爬壁力強的試管斜面或種瓶,取先端菌絲,轉管移接,置25℃—28℃上培養,重復轉管幾次即可得到優良純種. 銀耳菌絲的特點,菌絲生長緩慢,擔孢子也不易萌發.在進行兩菌混合時,先取經8～IO天培養的銀耳菌絲斜面,按無菌操作方法在該斜面上距銀耳菌絲約0.5厘米處接入一 小塊羽毛狀菌絲.置25℃下培養1周即得到混合好的銀耳母種. 2．組織分離培養法 利用子實體內部組織,進行無性繁殖而獲得母種的簡便方法,即組織分離.該法操作簡便,菌絲生長發育快,品種特性易保存下來,特別是雜交育種後,優良菌株用組織分離法能使遺傳特性穩定下來.常採用以下分離方法. （l）子實體分離：種菇要選朵大蓋厚,柄短,八九分成熟的優良品種.切去菇兩基部,在無菌箱內以0.1％的升汞水浸幾分鍾,再用無菌水沖洗並揩乾或用75％酒精棉球擦拭菌蓋與菌柄2次,進行表面消毒.接種時,只要將種菇撕開,在萌蓋和菌柄交界處或菌褶處,挑取一小塊組織；移接 到PDA培養基上.置25℃左右溫度下培養3-5天,就可以看到組織上產生白色絨毛狀菌絲,轉管擴大即得到菌種.如香菇、平菇等可以用此方法. （2）菌核分離：茯苓、豬苓、雷丸等菌的子實體不易採集.而常見的是它貯藏營養的菌核.用菌核分離,同樣可以獲得菌種.方法是將菌核表面洗凈,用酒精或升汞消毒後,切開菌核,取中間組織一小塊,約黃豆大小,接種在PDA 培養基斜面上,保溫培養.應注意的是,菌核是貯藏器官,大部分是多糖類物質,只含有少量的菌絲,因此挑取的組織塊要大一些,如果組織塊過小,則不易分出菌種. （3）菌素分離：有一部分子實體不易找到,也沒有菌核,可以用菌素進行分離.如蜜環菌、假蜜環菌.其操作方法是先用酒精或升汞將菌素表面黑色皮層輕輕擦拭2～3次, 然後去掉黑色外皮層（菌鞘）,抽出白色菌髓部分；用無菌剪刀將菌髓剪一小段,接種在培養基上,保溫培養,即得該菌菌種. 菌素分離要注意：因菌素比較細小,分離素也比較細小,分離時極易污染雜菌,所以要嚴格操作. 3．基內菌絲分離培養法 利用食用菌生育的基質作為分離材料,來得到純菌種的一種方法,叫基內菌絲分離法. 此種分離方法是適宜只有在特定的季節才出現,而且是朝生暮死,不易採得的子實體.基內分離法與組織分離法不同之點是,乾燥的菇木或耳木中的菌絲常呈休眠狀態.接種後有時並不立刻恢復生長.因此,有必要保留較長的時間（約1個月）,以斷定菌絲是否能成活.基內菌絲分離法又可分為,材中菌絲分離（即菇木或耳木分離法）及土中菌絲分離法等. （1）材中菌絲分離法：就是菇木或耳木分離法,為了減少雜菌的感染,菇（耳）木在分離之前,必須進行無菌處理.可以把菇（耳）水表面用酒精燈火焰輕輕燒過,以燒死黴菌的孢子,或再用0.1％的升汞水浸孢幾分鍾,然後用無菌水沖洗後用無菌濾紙吸干.接種塊切取時應注意.接種塊必須在該菌菌絲分布的范圍內切取.所以,菌絲生長緩慢的種類應淺取；菌種生長快的種類可以深取.同時.還應根據菇菌的種類、木材質地、菇（耳）木粗細、發育時間的長短來確定菌絲分布的范圍.然後用一把利刀進行切取.接種塊應盡量小些,以減少雜菌感染機會,提離菌種的純度.接種塊移到培養基上,就應該放到適合菌絲生長的22℃～26℃ 的溫室或溫箱中培養,使菌絲恢復生長. （2）土中菌絲分離：食用菌種類很多,許多土生的食用菌；孢子不易萌發.組織分離也不易成功,用土中菌絲分離獲得純種的方法,叫土中菌絲分離. 土中菌絲分離時要注意,由於土中菌絲體的周圍生活著多種多樣的土壤微生物,因此分離時必須盡可能避開這些微生物的干擾,盡可能批取清潔菌絲素的尖端、不帶雜物的菌絲接種,反復用無菌水沖洗,在培養基中加入一些抑制細菌 生長的葯物,如 40微克／升的鏈黴素或金黴素.如發現感染細菌,可以把菌落邊緣的菌絲挑出來,接種到木屑培養基中.因細菌沒有分解木質素的能力,因此在木屑培養基中不易擴展；只局限於接種處.待菌絲長出感染區後,就可以再進行擴大提純了. （3）子實體基部分離：從瓶栽、袋栽或大床栽培的子實體基部分離出新菌絲的方法,叫子實體基部分離,現以袋栽銀耳為例說明： 從出耳早、出耳率離、無病蟲害的栽培室中；選擇生活力最強的幼耳5袋,移到氣候溫和,有散射光的野外場所進行後期培養,以增強菌絲體的生活力.經培養7～10天後,待子實體直徑達4～5厘米時便可取回,作為分離的母體.再從中篩選最理想的一朵,用利刀割掉銀耳子實體,放置於 0℃的冰箱或有敵敵畏的容器中過夜,以便殺死瓶中的害蟲.然後用75％酒精或升汞擦洗耳基和袋子外邊的雜質,連同接種工具、接種培養基等移進無菌室.經滅菌後,用接種刀把袋口上部約15毫米厚的老菌根挖除,並進行培養.待袋口露出白色菌絲時,用接種針挑取一塊半粒米大的白色菌結體,迅速移入母種試管培養基的中央,輕輕地脫去接種針, 塞上棉塞. 為了能夠獲得較多的母種,一次接種量要有100—200支試管,以便從中選擇.分離後應及時移入22℃—24℃恆溫箱或溫室中培養.由於培養基內水分較多,菌絲恢復要比耳木分離得快.經2-3天後,分離物的邊緣就可看 到白色菌絲.每天要至少觀察兩次,以便提純.觀察、提純方法與耳木分離法擔同.經適溫培養10-15天後,當接種塊扭結團出現紅、黃色水珠時,即可擴大原種. （二）原種和栽培種的接種培養 母種獲得以後,為了滿足菌種生產的需要.應選出優良、純度高的母種進一步擴大為原種. 原種培養基一般採用棉籽殼、木屑、草類等培養基. 瓶裝或袋裝的原種培養基滅菌後,可送入滅過菌的接種箱內,待瓶中的培養基冷至30℃以下,可按照無菌操作程序進行接種. 菌種瓶（袋）放入培養室時,要經常進行檢查,一經發現雜菌污染,立即取出.培養成的原種,菌絲體必須健壯有力,緊貼瓶壁而不幹縮,顏色純正,具有一定清香味,生活力強,擴製成栽培種時吃料快. 栽培種就是將原種進一步擴大培養成三級種,它和原種的接種及培養相同.一般香菇、平菇、冬菇、猴頭、木耳、銀耳的栽培種多用鋸木、棉皮作培養基.蘑菇多用糞草做培養料. 栽培種要求料塊不脫水干縮.菌絲體健壯有力、顏色純正,有清香味,無老化現象,無雜菌污染,有的種許可有少量原基,接入栽培料後,發菌快,長勢好,生活力強. 原種在接栽培種時,原種瓶口的一層菌絲體應挖去不用. （三）液體種的簡單培養 目前,用液體深層發酵法生產菌種,具有生產量大、周期短、菌齡整齊、成本低廉、接種方便等特點,是實現食用菌工廠化生產的目標.現將液體種培育過程簡述於後,供參考. 簡言之就是將純正優良的菌種,接入液體培養基（固體培養基不加凝固劑）,使菌絲繁殖形成大量小菌球,然後將這種培養基拌入木屑或棉籽皮料內,製成菌塊、培養其形成子實體.還可用於制原種、栽培種. 培養液體菌種,可將培養液裝入三角瓶中,約占空瓶的五分之一重量.用搖瓶機（也稱搖床）來培養.搖瓶機有旋轉式和往復式兩種,一般多用往復式.液體培養基可用馬鈴薯汁（加糖）,麥芽汁配製,也可用玉米粉、豆餅粉、糖、無機鹽等配製.可以混合培養基,因適用於多種食用菌和葯用菌的培養,均有好效果.組分：豆餅粉2％,玉米粉1％, 葡萄糖3％,酵母粉0.5％,磷酸二氫鉀0.1％,碳酸鈣 0.2％, pH自然, 12℃滅菌半小時.然後接種培養. 如果生產量較大,在三角瓶的基礎上,再逐級擴大種子缸,發酵罐中進行液體深層通氣發酵,產生大量菌種.但由於生產中要求設備繁多,技術性強,我們還應創造條件；實現食用菌栽培的現代化. （四）菌種質量的鑒定 菌種質量鑒定最好的方法是,做出菇試驗.但是時間比較長.在購置菌種時,或在菌種生產中,如何能知菌絲生長情況,快速判斷菌種質量?我們介紹幾種方法： 1.肉眼觀察：優良菌種菌絲濃白,絨狀,粗壯密集,生長整齊,速度快,香味濃厚. 2.優良菌種標准可歸納為："純、香、正、壯、潤"五個字.檢查時,打開瓶塞,從菌種瓶中部取出小塊菌絲體,觀察色澤,聞其氣味,手捏料塊檢查其含水量,看是否符合上述要求標准. 3.顯微鏡檢查：挑取少量菌絲,置顯微鏡上觀察其形態,菌絲分枝,分隔情況,鎖狀聯合,細胞膜的厚薄. 培養觀察：從菌種瓶中挑取小塊菌絲體,接種斜面試管培養基上,置23℃～25℃恆溫中培養,經五周後檢查菌種生活力.如果菌絲生長快,旺盛純一,健壯濃厚,長且整齊,則表示菌種的生活力強. 4.分塊法：在桌上放一張白紙,把菌齡相同的菌種從瓶內取出一大塊,用手分成2塊,再把2塊分成4塊,4塊 分成8塊,依次進行.優良菌種整塊多,碎渣少.劣次菌整塊少,碎渣多. 5.液體菌種鑒別：當三角瓶或發酵缸培養3-7天後,如液面出現氣泡,產生"油皮"、混濁等現象,說明菌種本 身帶有雜菌.如菌塊上浮,或遲遲長出很薄的菌絲層,則說明菌種生活力弱.白塊四周的菌絲生長快、濃白、棉絮狀,表明菌種生命力強. （五）菌種生產過程中的雜茵防治 在生產菌種時,要時刻注意雜菌污染,以防為主,一旦發生,根治很不容易.所以整個制種過程都必須在無菌條件下進行.接種箱及所有分離、接種的用具、器皿,都要進行嚴格的消毒滅菌.工作人員的雙手要用消毒劑清洗,並穿戴消過毒的工作服、帽和口罩,動作要敏捷、准確,盡量不要講話走動,以防空氣中的雜菌感染. 分離母種時,選擇出菇早、生活力強,第一潮菇是關鍵,因它生活力強,接種後迅速佔領陣地,無雜菌侵入的機會. 被污染的菌種,原因是多方面的,一般是滅菌不徹底所致,或因接種時無菌操作不嚴、瓶蓋不合適造成的.所以滅菌一定要徹底,最好在接種萌將培養基置25℃左右溫箱中做效果檢查,經2天不長雜菌,說明徹底,可以使用,接種過程中一定要嚴格無菌操作. 污染雜菌另一個原因可能是分離母種時感染雜菌,因種菇表面帶菌,消毒不徹底,通過組織塊將雜菌帶入培養基. 總之,污染機會很多,要注意環境消毒,按無菌操作規程徹底滅菌,層層把關,環環抓緊,嚴加註意；提離菌種質量.

⑻ 什麼叫菌種分離

菌種分離就是用無菌操作技術將所需的食用菌與其他雜菌分開，讓其在適宜的條件下生長繁殖而得到純種。分離通常是在無菌條件下經分離技術進行的，是菌種製作程序中的一個非常重要的技術環節，其菌種質量的好壞，菌性的優劣與它有直接關系。菌種分離一般有孢子分離法、組織分離法和菇（耳）木分離法3種，其中組織分離法操作簡便，能保持菇種特有的優良性狀，一般不必做出菇實驗，所以採用較多。

⑼ 菌種鑒定常用的分離方法有哪些

菌種質量檢測的目標包括菌絲形態、菌落特徵以及子實體形態等方面。質量檢測常用方法如下：

（1）建立標準的培養和觀察方法

對於一個栽培品種各菌種的質量檢測，實際上是以該品種典型的生物學特性（包括形態特徵、生理生態特性、栽培習性）為參照標准進行比較，以檢驗菌種是否存在品種退化、菌種老化、病菌侵染、雜菌污染和品種混雜等質量問題。同時，菌種質量檢測不僅要考慮從哪些方面來評價一個菌種的質量優劣，也要考慮用怎樣的標准方法對菌種質量進行評價的問題。因為一定的結果來源於一定的方法和一定的條件。方法和條件不同，結果就失去了可比性，也就無法鑒別，因此，需要建立標准。這些標准包括：培養基、培養條件（溫度、濕度、pH、光照等）、菌種的菌齡等。

（2）連續觀察

在菌種生長過程中，要連續觀察，一切不正常的現象只有在生長過程中才能表現出來。而當菌種長滿培養基表面後，其不正常現象往往會被菌種的過齡而掩蓋。

（3）宏觀檢查

對食用菌母種、原種及栽培種的宏觀檢查要根據其培養特徵來進行（參見前述有關內容），這是菌種生產者及使用者普遍使用的方法，簡單易行，但需要有多年的從業經驗與技術沉澱。如被檢菌種表現出菌落生長速度不一致、氣生菌絲變稀疏或出現扇變菌落、菌落上過早出現色素、或不同特徵的菌落混雜共存、或菌落上出現黑褐色、青灰色、黃褐色或紅色的孢子堆，均可以確定該菌種存在質量問題。優質菌種外觀菌絲潔白、密集粗壯，生長速度一致，齊發並進。

在生產實踐中，廣大菇農和專業工作人員總結出「純、正、壯、潤、香」的質量檢查方法。這種應用感官識別菌種優劣，是經驗的總結，能大致、快速地鑒定出菌種的優劣。具體方法是：

「純」指菌種的純度高，無雜菌感染，無斑塊、無抑制線，無「退菌」、「斷菌」現象等。

「正」指菌絲無異常，具有親本正宗的特徵，如菌絲純白、有光澤，生長整齊，連結成塊，具彈性等。

「壯」指菌絲發育粗壯，長勢旺盛，分枝多而密，在培養基上恢復、定植、蔓延速度快。

「潤」指菌種含水量適中，基質濕潤，與瓶壁緊貼，瓶頸略有水珠，無干縮、鬆散現象。

「香」指具該品種特有的香味，無霉變、腥臭、酸敗氣味。

通過檢測各種食用菌菌絲生長的色澤、速度、均勻度等特徵是否正常，來判斷菌種生長是否正常、是否可用，但辨別不了是否優質高產。

（4）顯微鏡檢查

對菌絲體進行顯微觀察，可以確定菌絲粗細、分枝、隔膜、鎖狀聯合等特性是否均一，是否與該栽培品種的典型特徵一致（參見前述相關內容）。具有不同形態特徵的菌絲體存在於同一菌種體中，表明該菌種存在質量問題；如果出現菌絲體重寄生現象，常表現出不同特徵的菌絲體相互纏繞，或菌絲體中空變細，或在寄生點出現吸器等不正常現象。

鏡檢的方法是：挑取少量菌絲，置載玻片中央的水滴上，用解剖針或接種針撥散，蓋上蓋玻片，也可加碘酒或美藍等染色後進行鏡檢。正常的菌絲一般透明、分枝狀，有橫隔和明顯的鎖狀聯合；異宗結合的食用菌，如僅有單核菌絲，不具結實性，不宜作菌種用；雙核菌絲中，鎖狀聯合多而密，則結菇力強，一般可認為是好菌種。如：

①雙孢菇 觀察雙孢菇單孢子萌發後的菌絲生長形態。凡菌絲潔白、健壯，保存時間較長時菌絲顏色不變，較耐28℃以上氣溫，生長在基質上平貼培養基表面，氣生菌絲不多的，為同化能力較強，產量較高的菌株。相反，菌絲生長初期好，很快變黃變稀，如蜘蛛絲一樣，長出培養基表面菌絲較多的菌株產量較低。

②香菇 觀察香菇的雙核菌絲，在斜面培養基上生長速度達到1.2厘米/天以上的，菌絲不十分粗壯和潔白，鎖狀連合頻繁，鎖狀連合在菌絲間相距較近，且在觀察面上分布均勻，一般均是高產和抗雜能力較強的菌株。香菇出菇的密度與鎖狀連合有一定關系。

③草菇 觀察草菇菌絲，發現菌絲分枝角度大的，出菇率高，產量高。菌絲分枝角度小、平行排列的，產量低。

各種食用菌的菌絲生長是否正常、是否可用，一般都以色澤、速度、均勻度等特徵加以檢測，但這並不能說明其是否優質高產。

（5）拮抗試驗

也稱對峙反應。同一種食用菌，經分離或雜交，將選育出許多不同的菌株，這些菌株的菌絲在形態上很難區別。如不同編號的香菇菌種，都是白色絨毛狀菌絲，鏡檢時均具有鎖狀聯合等。在當前菌種管理工作尚不十分健全的情況下，「同名異種」、「同種異名」的現象普遍發生，要識別異同，可採用「拮抗試驗」加以區別。具體方法是：

用1支20毫米×200毫米的無底試管，中央部位裝入長 5～7厘米的木屑麩糠培養基，兩端壓平並蓋棉塞，滅菌後，兩端各接入兩株受檢的菌種 1小塊，25℃左右條件下培養，當兩端菌絲往中央生長並相互接觸後，把試管移至20℃、約300勒克斯的漫射光下繼續培養，觀察菌絲接觸區有無對峙反應。若無褐色的帶線出現，表示兩個受檢菌株的基因極相似或相同，是相同的菌株，僅編號不同，即同種異名。如果受檢菌株間形成帶線，則表示是不同的菌株。

用平板進行拮抗試驗測試，方法是在無菌的PDA培養基平板上各接入2個或多個被檢菌株的菌種，在上述條件下培養，觀察菌絲相接觸部分有無帶線，以區別相同或不同的菌株。也可用菌種瓶（袋）進行拮抗測試（圖2-11）。

圖2-11 拮抗現象

（6）菌絲長速測定

在適宜的條件下，若菌絲生長迅速、粗壯有力、濃密整齊，一般為優質菌種。若菌絲生長緩慢、中斷或長速極快、稀疏無力、參差不齊和易枯黃萎縮，則為不良菌種。菌絲生長速度測定，可在PDA平板中心接種培養，測量菌落兩個直交直徑，取其平均值。同理，還可在原種、栽培種瓶（袋）壁上劃線測定。

（7）菌絲生長量測定

將等面積的菌苔接入無菌的液體培養基內，在相同的條件下，進行搖床振動培養，經過一定時間後，過濾收集菌絲，反復沖洗干凈後置容器內，80～100℃烘箱中烘乾至恆重後稱重。凡菌絲增殖快、重量重的為優質菌株，而增殖慢、重量輕的為不良菌株。

（8）耐高溫測定

以雙孢菇為例，把菌種置於20～22℃下培養，待菌絲長到1/2試管斜面時，每一菌株取出2～3支試管，置於35℃溫度下，經24小時作抗熱性試驗，然後放到22～23℃下培養，觀察菌絲恢復情況。若菌絲恢復萌發快，仍健壯、旺盛生長，則表明該菌株具有耐較高溫的優良性狀；如果菌絲生長緩慢，出現發黃倒伏，萎縮無力，則為不良菌株。

（9）均一性測定

將母種接種於標准培養基的平板上，並置於標準的環境條件下，每批做30～50個重復，進行長勢和長速的連續觀察記錄。均一性好的品種，每個重復之間長勢和長速幾乎沒有肉眼可見的差異。如果長勢和長速不一，則表明原始的母種的遺傳均一性不良，不宜作生產用種。

（10）純度測定

菌種純度高低是鑒定菌種質量好壞的關鍵環節。優質菌種要求同一管、瓶或袋內只含有所需要的菌種菌絲體，而不能含有其他種類的雜菌。這里所說的雜菌包括細菌、放線菌、酵母菌和各種黴菌，以及含有兩種食用菌菌絲體或同一種食用菌的兩個品種菌絲。凡是被雜菌污染的菌種都是不純菌種，必須予以淘汰。在三角瓶內裝入淺層液體培養基，滅菌後接入經搗散的菌種，25℃條件下培養，約1周觀察，若有氣泡和菌膜發生，並具酸敗味，說明菌種不純，混有雜菌；如果無上述現象則菌種純正無雜。

（11）長勢測定

菌絲長勢包括菌絲生長的狀態和速度。凡是菌絲生長迅速、整齊濃密、健壯有力的菌種為優良菌種。如果菌絲生長緩慢，或長速特快、稀疏無力、參差不齊、易於衰老，則表明是劣質菌種。在鑒別菌絲長勢時，必須注意，在不同培養基上、不同培養條件下，同一種食用菌菌絲的長勢不同，因此，判斷食用菌的菌種長勢，應採用相同的培養基，這樣，結果就可靠一些。在外界環境條件相同的情況下，菌絲生長旺盛、生長量多、生長速度快的要好於菌絲生長弱、生長量少、生長速度慢的菌種。還有一種方法是在三角瓶內裝入淺層液體培養基，滅菌後接入經搗散的菌種，25℃條件下培養，約1周觀察浮在液面的菌種。如果菌絲向旁邊迅速生長、健壯有力、邊緣整齊，且不斷增厚，說明該菌株生長勢強；若表面生長慢、稀疏、菌絲層薄，說明長勢弱，不宜用於生產。

（12）抗霉性測定

以木耳為例：制備平板，在平板的一邊分別接入不同的木耳菌株，每一菌株3個重復，在26～28℃下培養。待木耳菌絲長到平板一半左右時，在平板的另一邊接上木黴菌絲，繼續培養。之後注意觀察木黴菌絲與木耳菌絲的交界處，出現拮抗線的表示木耳菌株抗霉能力強，木黴菌絲無法長過去，為抗霉能力強的菌株。如果木黴菌絲很快蓋過木耳菌絲，說明這個木耳菌株的抗霉能力差或沒有抗霉力。

（13）出菇試驗

對引進或分離的同一品種的若干菌株進行出菇對比試驗，必須是在各級菌種的培養基成分、培養溫度、培養時間及栽培條件基本一致的情況下進行。出菇試驗可按菇類的常規栽培方法進行，數量可少些。為使試驗准確，每一菌株設3～4個重復，以避免試驗的偶然性。在位置排放上盡可能按菌名拉丁文排列，以相同的措施管理，在管理過程中對環境因子的變化、管理措施及生長歷程、品種本身性狀等要詳細全面記錄。以香菇為例記載內容如下：

①母種菌絲生長情況，如菌絲濃淡、生長快慢、菌苔韌性等。

②原種、栽培種中菌絲生長情況，如菌絲萌動、吃料、生長快慢；菌種表面有無菌皮或菌皮厚薄，白色顆粒狀物有無或多少；培養基轉色情況等。

③栽培階段應記載：菇木轉色快慢、顏色深淺；出菇快慢、菇生長密度；子實體經濟性狀，包括菇的大小、厚度、色澤、圓整程度、菌柄長度、粗細等；轉潮快慢；對水分的敏感程度；產量及產量分布；出口菇比例等。

通過對記載資料分析，選出綜合性狀符合要求的菌株，供大面積生產或出售。

出菇試驗因季節推遲或其他原因，可採用一種較簡單的方法來彌補，即直接將接有各菌株並已發好菌的瓶（袋）裝菌種，小心地敲破瓶頸或打開塑料袋口，使培養料外露（如果是雙孢菇，則要覆土調好土粒的濕度），置最適宜的溫、濕度條件下進行出菇（耳）管理，觀察記載各項指標，最後進行評比。但這種方法的結果只能提供參考。

（14）栽培指標

採用一定的栽培規模，通過不同地區、不同原料、不同栽培方式，進行多次反復栽培觀察，詳細記錄、評比後，具有優質、高產、高抗、高效和遺傳性、穩定性強的菌株，才是優質和可推廣的品種。其鑒定的內容、方法和指標有：

①吃料能力鑒定 將菌種接入最佳配方的原種培養料中，置適宜的溫、濕度條件下培養，1周後觀察種菇（耳）菌絲的生長情況。如果菌種塊能很快萌發，並迅速向四周和培養料中生長伸展，則說明該品種的吃料能力強；反之，菌種塊萌發後生長緩慢，遲遲不向四周的料層深處伸展，則表明該品種對培養料的適應能力差。對菌種吃料能力的測定，不僅用於對菌種本身的考核，同時還可以作為對培養料選擇的一種手段。

②成活率 將菌種接在適宜的培養基上，若菌絲能很快恢復、定植和蔓延生長，成活率很高，是質量好的菌種；反之，接種後恢復慢，成活率不高是質量差的菌種。

③出菇快慢 一般說，高溫型的出菇快，低溫型的出菇慢，中溫型的介於兩者之間。而以菇的質量來說，高溫型的質量差，低溫型的質量好。但同一溫型食用菌品種的不同菌株，其菌種接種後若菌絲分解培養料能力強，培養前後培養料失重大，出菇快而多，總產高，即是好菌種；否則為劣質菌種。

④菇峰間隔 在一個生產周期中，子實體發生可分數潮次，產菇最多時稱菇峰，最低時稱菇谷，每個菇峰和菇谷構成一潮菇。凡菇潮多，間隔時間短，說明菌絲分解能力強，供子實體發生的養分積累多，因此轉潮快，是好的菌種；反之，菇潮間隔時間長，或不明顯，零星出菇，產量低，即為劣質菌種。

⑤乾燥率 鮮菇經干制後乾燥率高，說明轉化率高，子實體含水分低，為優質菌種。

⑥生物學效率 生物學效率，指每100千克乾料可產多少千克鮮菇。生物學效率高，則菌種質量好，反之為劣質菌種。

（15）經濟指標

高產不一定高效、豐產不等於豐收，要佔領市場，獲得較高利潤，還必須具備商品的要求，如產品的色、香、味、形，檔次，上市時間，貨架期和保質期等。凡是鮮菇上市時間早，產量高、品質好、檔次高、含水量低，不易變色、變質、破碎、失重，無農葯殘毒、殘臭，符合食品衛生標准和得到的利潤高等，均表示經濟指標高，則為優質菌株；而上市有效時間短，易變色、變味、變質，含水量高，失水嚴重，易破碎，利潤低的菌種均為劣質菌種。如香菇以大小適中、肉厚、色深、邊緣內卷，柄短細為優良；雙孢菇以色白、子實體大小適中，菌柄短，不易開傘等為優良；銀耳以色白、開片好、蒂頭小、松泡率高為優良等。

⑽ 食用菌栽培有哪幾種方法

微生物的培養方法有三種，即純培養法、選擇性培養法和優勢培養法。
一、 菌種製作的基本設備
1、 食用菌菌種製作的工藝流程 培養料的貯備和預處理------- 容器、工具的洗滌------ 配料、培養基製作------ 滅菌------ 冷卻------ 接種------ 培養------- 貯存 2、 基本設施 ① 廠房：② 原料庫③原料預處理場地④ 洗滌室：5配料室⑥ 滅菌室⑦ 接種室⑧ 化驗室 ⑨ 培養室⑩貯存室 二、 純種分離 菌種的分離方法主要有：孢子分離法、組織分離法、基內菌絲分離法和土中菌絲分離法。
1、 孢子分離法：屬有性繁殖。對於香菇、平菇異宗結合的菇類，為避免產生單孢不孕現象，必須採用多孢分離法。單孢分離法主要用於雜交育種的研究。
⑴ 種菇的選擇和處理 種菇選擇的標准：必須純正，具有本菌株性狀，發育健壯，無病蟲害，成熟度適當。種菇選定後，首先除去附著在菇體表面的雜物，如蘑菇、草菇可用0.1%升汞浸泡消毒2-3分鍾，然後用無菌水漂洗3次，以洗除表面附著的葯物，最後用無菌紗布吸干水分。香菇、平菇可用75%酒精進行表面消毒。
（2）多孢分離法 ① 整菇播種法② 鉤懸法③ 貼附法 4菌褶上抹取孢子法⑤ 孢子印分離法 ⑥ 空中孢子捕捉法
（3）單孢子分離法 一般採用方法：平板稀釋法、連續稀釋法、毛細管法等。
2、 組織分離法
（1） 子實體分離法
（2）菌核分離法
（3）菌索分離法：對一些不易找到子實體及菌核的菌類
3、基內菌絲分離法 對於子實體只有在特定的季節下出現，平時不易採到，或子實體小而薄或呈膠質狀態
（1）菇木（或耳木）分離法 在食用菌繁殖旺盛期
（2） 代料基質分離法 分離前，選擇一批子實體發生早、產量高、菇體尚幼嫩且生活力強而無病蟲害的栽培袋，待子實體將近成熟時，去掉子實體，然後用75%酒精將培養袋進行消毒後，在培養料下1.5cm處挑取0.3cm的培養料小方塊組織，接入試管培養基的中央，置於恆溫下培養。
3、 土中菌絲分離法： 用於採集生長在土中的菇類菌絲體
三、制種技術 採用孢子分離、組織分離和基內菌絲分離等方法分離培養而獲得的純菌絲，經過原種的擴大培養和母種、栽培種的製作，即可作為食用菌生產用的菌種。
1、 菌種的類型 母種、原種、生產種
2、 培養基的種類 天然培養基、合成培養基、半合成培養基
3、 原種製作 從擔孢子或菇體組織直接分離培養獲得的原種或引進的原種
4、 母種及生產種製作 將原種菌絲體移植到由糞、草、木屑、棉籽殼或麥粒等原料配製成的培養基上，而製成的菌種稱母種。將母種再擴大繁殖製成的菌種，稱栽培種或生產種。
5、 培養基滅菌
（1）高壓蒸汽滅菌法 瓊脂培養基採用1.05kg/cm2 壓力，溫度121℃ ，滅菌45-60分鍾；母種和栽培種固體培養基採用1.2-1.5kg/cm2 壓力，溫度123-129℃ ，滅菌1-1.5 小時。 （2） 常壓蒸汽滅菌
6、 接種室消毒滅菌 熏蒸消毒法：甲醛與高錳酸鉀混合熏蒸法
（2）紫外線消毒：（3）石碳
酸滅菌
7、 接種 在無菌條件下，將原種或母種菌種移接到經過嚴格滅菌的培養基上，稱為接種。 8、 菌種培養
四、菌種保藏方法及復壯技術
1、 菌種保藏方法 菌種保藏的基本手段是採用低溫、冷凍、乾燥、減少供氧量等方法，終止其繁殖，降低其代謝強度，使之處於休眠狀態。